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1、2022高中生物 專題2 課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)教學(xué)案（含解析）新人教版選修1 一、培養(yǎng)基 1．概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。 2．種類：(按物理性質(zhì)分) 3．營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。 二、無(wú)菌技術(shù) 1．獲取純凈培養(yǎng)物的方法 獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵，具體操作如下： (1)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。 (2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。 (3)為避免周圍環(huán)

2、境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。 (4)實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。 2．消毒和滅菌 (1)概念：[填表] 比較項(xiàng)目 理化因素的作用強(qiáng)度 消滅微生物的數(shù)量 芽孢和孢子能否被消滅 消毒 較為溫和 物體表面或內(nèi)部的部分微生物 不能 滅菌 強(qiáng)烈 物體內(nèi)外所有的微生物 能 (2)常用方法：[連線] 三、大腸桿菌的純化培養(yǎng) 1．制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 (1)操作步驟： →→→→ (2)倒平板的方法及注意事項(xiàng)： ①請(qǐng)用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。 ②甲、乙、丙中的滅菌方法是

3、灼燒滅菌。 ③丁中的操作需要等待平板冷卻凝固才能進(jìn)行。 2．純化大腸桿菌 (1)純化原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞，使其長(zhǎng)成單個(gè)的菌落，這個(gè)菌落就是一個(gè)純化的細(xì)菌菌落。 (2)接種方法： ①平板劃線法：通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。 ②稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。 (3)培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37_℃恒溫箱中，培養(yǎng)12 h和24 h后，分別觀察、記錄。 四、菌種的保存[連線] 1．不同培養(yǎng)基的具

4、體配方不同，但一般都含(　　) A．碳源、磷酸鹽和維生素 B．氮源和維生素 C．水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽 D．碳元素、氧元素、氫元素、氮元素 解析：選C　培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，此外還應(yīng)考慮pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及O2等條件。 2．獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是(　　) A．將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌 B．接種純種細(xì)菌 C.適宜環(huán)境條件下培養(yǎng) D．防止外來(lái)雜菌的入侵 解析：選D　獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)微生物的污染。 3．下列關(guān)于消毒和滅菌方法的選擇，對(duì)應(yīng)錯(cuò)誤的是(　　) A．培養(yǎng)基——高壓蒸汽滅菌 B．牛奶——煮沸消毒 C．接種

5、環(huán)——灼燒滅菌 D．實(shí)驗(yàn)者雙手——化學(xué)消毒 解析：選B　對(duì)牛奶應(yīng)采用巴氏消毒法進(jìn)行消毒。 4．下列敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞，為避免污染需放在酒精燈火焰附近 B．倒平板整個(gè)過(guò)程應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行 C．打開(kāi)培養(yǎng)皿的皿蓋，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋 D．為避免水滴滴入培養(yǎng)基，平板應(yīng)倒過(guò)來(lái)放置 解析：選C　C項(xiàng)應(yīng)是用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，而不是完全打開(kāi)，以防雜菌污染。 5．下列有關(guān)稀釋涂布平板法的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．首先將菌懸液進(jìn)行一系列的梯度稀釋 B．然后將不同稀釋度的

6、菌懸液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面 C．在適宜條件下培養(yǎng) D．結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落 解析：選D　稀釋涂布平板法是將菌懸液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌懸液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，在適宜條件下培養(yǎng)。只有在稀釋度足夠高的菌懸液里，聚集在一起的微生物才能被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。 1．培養(yǎng)基配制的原則 (1)目的要明確：不同的微生物需求不同，根據(jù)培養(yǎng)目的進(jìn)行配制。 (2)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度過(guò)低不能滿足微生物營(yíng)養(yǎng)需要，過(guò)高對(duì)微生物的生長(zhǎng)有抑制作用。 (3)pH要適宜：各種微生物適宜生長(zhǎng)的

7、pH范圍不同，如細(xì)菌的適宜pH約為6.5～7.5、放線菌的適宜pH約為7.5～8.5、真菌的適宜pH約為5.0～6.0。為維持pH的相對(duì)恒定，可在培養(yǎng)基中加入緩沖劑，常用的緩沖劑是磷酸氫二鉀—磷酸二氫鉀。 2．培養(yǎng)基的成分 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 定義 作用 主要來(lái)源 碳源 凡能提供碳元素的物質(zhì) 構(gòu)成生物體細(xì)胞的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些也是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì) 無(wú)機(jī)碳源：CO2、NaHCO3等；有機(jī)碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等 氮源 凡能提供氮元素的物質(zhì) 合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物 無(wú)機(jī)氮源：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機(jī)氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等 生長(zhǎng)因子

8、 生長(zhǎng)必不可少的微量有機(jī)物 是酶和核酸的組成成分 維生素、氨基酸、堿基等 水 — 不僅是優(yōu)良的溶劑，而且可維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定 培養(yǎng)基、空氣、代謝產(chǎn)物 無(wú)機(jī)鹽 為微生物提供除碳、氮以外的各種重要元素，包括大量元素和微量元素 是細(xì)胞的組成成分、生理調(diào)節(jié)物質(zhì)、某些化能自養(yǎng)菌的能源，酶的激活劑等 無(wú)機(jī)化合物 [名師點(diǎn)撥]　幾種微生物的營(yíng)養(yǎng)和能量來(lái)源 微生物 碳源 氮源 能源 藍(lán)藻 CO2 NH、NO等 光能 硝化細(xì)菌 CO2 NH3 NH3的氧化 根瘤菌 糖類等有機(jī)物 N2 有機(jī)物 大腸桿菌 糖類、蛋白質(zhì)等有機(jī)物 蛋白質(zhì)等 有機(jī)物

9、 3．幾種常用滅菌和消毒方法的比較 滅菌和消毒種類 主要方法 應(yīng)用范圍 灼燒滅菌 酒精燈火焰灼燒 微生物接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬用具等，接種過(guò)程中的試管口或瓶口等 干熱滅菌 干熱滅菌箱160～170 ℃加熱1～2 h 玻璃器皿(如吸管、培養(yǎng)皿等)、金屬用具等凡不適宜用其他方法滅菌而又能耐高溫的物品 高壓蒸汽滅菌 100 kPa、121 ℃維持15～30 min 培養(yǎng)基及多種器材、物品 煮沸消毒法 100 ℃煮沸5～6 min 家庭餐具等生活用品的消毒 巴氏消毒法 70～75 ℃煮30 min或80 ℃煮15 min 牛奶、啤酒、果酒和醬油等

10、不宜進(jìn)行高溫滅菌的液體 紫外線消毒 30 W紫外燈照射30 min 接種室、接種箱、超凈工作臺(tái) 化學(xué)藥物消毒 用體積分?jǐn)?shù)為70%～75%的酒精、碘酒涂抹，來(lái)蘇爾噴灑等 用于皮膚、傷口、動(dòng)植物組織表面消毒和空氣、手術(shù)器械、塑料或玻璃器皿等的消毒 [題組沖關(guān)] 1．下列對(duì)滅菌和消毒的理解，錯(cuò)誤的是(　　) A．滅菌是指殺滅環(huán)境中的一切微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子 B．消毒和滅菌實(shí)質(zhì)上是完全相同的 C．接種環(huán)用灼燒法滅菌 D．常用滅菌方法有灼燒滅菌法、干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法 解析：選B　消毒是使用較為溫和的物理或化學(xué)方法，僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物，不包括芽孢和孢

11、子。滅菌則是使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 2．下表是某微生物培養(yǎng)基的配方。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題： 編號(hào) ① ② ③ ④ ⑤ 成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O 含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL (1)從培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分看，此培養(yǎng)基可用來(lái)培養(yǎng)的微生物其同化作用類型是________________。利用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時(shí)，微生物所需要的碳源來(lái)自____________。 (2)此表中含有的微生物的營(yíng)養(yǎng)成分包括____________。 (3)若除去該培

12、養(yǎng)基中的①后再加入不含氮元素的有機(jī)物，則此培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物種類是__________________________。 (4)培養(yǎng)基若加入氨基酸，則它可充當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)成分是_______________________________。 (5)若要觀察微生物的菌落特點(diǎn)，培養(yǎng)基中還應(yīng)添加的成分是____________________。 解析：(1)從培養(yǎng)基的成分看，該培養(yǎng)基無(wú)有機(jī)物，因此可以培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物，微生物所需的碳源只能由空氣中的CO2提供。(2)培養(yǎng)基中的成分包括微生物需要的氮源、無(wú)機(jī)鹽和H2O。(3)培養(yǎng)基中的①是該培養(yǎng)基中唯一的氮源，去掉后則成為無(wú)氮培養(yǎng)基，可用于培養(yǎng)自生固

13、氮微生物，因?yàn)樽陨痰⑸锟梢岳么髿庵械腘2作為氮源。(4)在培養(yǎng)基中加入氨基酸，可以為微生物提供碳源、氮源和特殊營(yíng)養(yǎng)。(5)微生物的菌落需要在固體培養(yǎng)基的表面生長(zhǎng)，因此培養(yǎng)基中需要添加凝固劑(瓊脂)，使液體培養(yǎng)基凝固成固體培養(yǎng)基。 答案：(1)自養(yǎng)型　空氣中的CO2　(2)H2O、無(wú)機(jī)鹽、氮源　(3)自生固氮微生物　(4)碳源、氮源和特殊營(yíng)養(yǎng)　(5)凝固劑(瓊脂) 1．操作步驟 2．倒平板操作的注意事項(xiàng) (1)培養(yǎng)基要冷卻到50 ℃左右時(shí)開(kāi)始倒平板。溫度過(guò)高會(huì)燙手，過(guò)低培養(yǎng)基又會(huì)凝固。 (2)要使錐形瓶的瓶口通過(guò)酒精燈火焰。通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。

14、(3)倒平板時(shí)，要用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開(kāi)，以免雜菌污染培養(yǎng)基。 (4)平板冷凝后，要將平板倒置。因?yàn)槠桨謇淠?，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，培養(yǎng)基表面的溫度也較高，平板倒置后，既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 (5)在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，那么這個(gè)平板不能用來(lái)培養(yǎng)微生物，因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。 (6)整個(gè)操作過(guò)程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避免雜菌污染。 [題組沖關(guān)] 3．下列關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．操作順序

15、為計(jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌 B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯 C．加熱溶化瓊脂時(shí)應(yīng)不斷用玻璃棒攪拌 D．待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右時(shí)倒平板 解析：選A　制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，其順序不能顛倒。牛肉膏容易吸潮，所以稱好后需將稱量紙一同放入燒杯，當(dāng)牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙。在溶化時(shí)，加入瓊脂后應(yīng)不斷用玻璃棒攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右，并且培養(yǎng)基處于溶化狀態(tài)時(shí)開(kāi)始倒平板。 4．下列有關(guān)倒平板操作的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上 B．使打開(kāi)的錐形

16、瓶瓶口迅速通過(guò)火焰 C．將培養(yǎng)皿打開(kāi)，培養(yǎng)皿蓋倒放在桌面上 D．等待平板冷卻凝固后需要倒過(guò)來(lái)放置 解析：選C　整個(gè)倒平板過(guò)程要防止外來(lái)雜菌的入侵，因此滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿應(yīng)放在火焰旁，打開(kāi)的錐形瓶瓶口應(yīng)迅速通過(guò)火焰，培養(yǎng)皿應(yīng)打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，而不能將培養(yǎng)皿蓋完全打開(kāi)，等待平板冷卻凝固后需要倒過(guò)來(lái)放置。 1．平板劃線法 (1)操作步驟 (2)注意事項(xiàng) ①第一次劃線及每次劃線之前都需灼燒接種環(huán)滅菌，劃線操作結(jié)束仍需灼燒接種環(huán)。 ②灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。 ③在做第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線，這樣才能使

17、細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。 ④劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。 ⑤劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。 (3)平板劃線操作中幾次灼燒接種環(huán)的目的 項(xiàng)目 第一次劃線前灼燒 每次劃線前灼燒 劃線結(jié)束灼燒 目的 避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種均來(lái)自上次劃線的末端 殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者 2．稀釋涂布平板法 (1)操作步驟 ①系列稀釋操作： a．將分別盛有9 mL水的6支試管滅菌，并按101～106的順序編號(hào)。

18、 b．用移液管吸取1 mL培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸3次，使菌液與水充分混勻。 c．從101倍稀釋的試管中吸取1 mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，重復(fù)b步的混勻操作。依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋。 ②涂布平板操作： (2)注意事項(xiàng) ①每支試管及其中的9 mL水、移液管等均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離酒精燈火焰1～2 cm處。 ②涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒，取出時(shí)，讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃。 ③不要將過(guò)熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。 ④

19、酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不要接觸任何物體。 [名師點(diǎn)撥]　平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較 (1)單細(xì)胞菌落的獲得：利用平板劃線法接種時(shí)，單細(xì)胞菌落從后劃線的區(qū)域挑??；利用稀釋涂布平板法接種時(shí)，只有合適的稀釋度才能得到單細(xì)胞菌落。 (2)兩種接種方法的應(yīng)用：兩種方法都能將微生物分散到固體培養(yǎng)基表面，以獲得單細(xì)胞菌落，達(dá)到分離純化微生物的目的；稀釋涂布平板法還能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，而平板劃線法不能用于微生物的計(jì)數(shù)。 3．實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià) (1)未接種的培養(yǎng)基表面若有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基被污染；若無(wú)，則說(shuō)明未被污染。 (2)在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上可觀察到獨(dú)立的菌落。有光

20、滑型菌落，菌落邊緣整齊，表面有光澤，濕潤(rùn)、光滑、呈灰色；也有粗糙型菌落，菌落扁平，干澀、邊緣不整齊；還有黏液型菌落，為含莢膜菌的菌落。 (3)培養(yǎng)12 h和24 h，菌落大小不同，培養(yǎng)24 h，菌落大，灰色深，光澤度強(qiáng)。 (4)若在培養(yǎng)基中觀察到不同形態(tài)的菌落，原因可能是菌液不純、混入其他雜菌或在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中被雜菌污染。 [題組沖關(guān)] 5．下列關(guān)于平板劃線操作的敘述，正確的是(　　) A．使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，在操作過(guò)程中不需要再滅菌 B．打開(kāi)含菌種的試管，需通過(guò)酒精燈火焰滅菌，取出菌種后需馬上塞上棉塞 C．將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線即可 D．最

21、后將平板倒置，放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 解析：選D　在平板劃線時(shí)，已滅過(guò)菌的接種環(huán)在每次劃線后，必須用灼燒滅菌法滅菌，以殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種；盛有菌種的試管在打開(kāi)或重新塞棉塞前，都需將試管口通過(guò)酒精燈火焰灼燒滅菌；在平板內(nèi)劃三至五條平行線后應(yīng)蓋上皿蓋，并灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開(kāi)始往第二區(qū)域劃線，并按此操作繼續(xù)往三、四、五區(qū)域劃線；接種完成后，需將平板倒置放入培養(yǎng)箱，以防培養(yǎng)皿皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 6．(全國(guó)卷Ⅲ)某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；?/p>

22、答下列問(wèn)題： (1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用________對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋，進(jìn)行梯度稀釋的理由是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (2)推測(cè)在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有____________________和_________________________________________________

23、_______________________。 分離純化時(shí)應(yīng)挑選出________________的菌落作為候選菌。 (3)乳酸菌在－20 ℃長(zhǎng)期保存時(shí)，菌液中常需要加入一定量的____________(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。 解析：(1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用無(wú)菌水對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋，這樣既可避免雜菌污染，又可將乳酸菌分散成單個(gè)細(xì)胞，以便在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。(2)乳酸的積累影響乳酸菌的增殖，加入碳酸鈣可以中和乳酸菌代謝(無(wú)氧呼吸)過(guò)程中產(chǎn)生的乳酸，另外，乳酸和碳酸鈣反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致碳酸鈣分解形成透明圈，有利于乳酸菌的鑒別和分離。(3)對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種

24、，可以采用甘油管藏的方法。在3 mL的甘油瓶中，裝入1 mL甘油后滅菌。將1 mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20 ℃的冷凍箱中保存。 答案：(1)無(wú)菌水　泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落　(2)鑒別乳酸菌　中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)　具有透明圈　(3)甘油 [隨堂基礎(chǔ)鞏固]　 1．下列關(guān)于培養(yǎng)基的說(shuō)法，正確的是(　　) A．任何培養(yǎng)基都必須含有碳源、氮源、礦質(zhì)元素、水及生長(zhǎng)因子 B．培養(yǎng)基只有兩類：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基 C．固體培養(yǎng)基中加入少量水即可制成液體培養(yǎng)基 D．配制培養(yǎng)基時(shí)要注意各種養(yǎng)分的濃度和比例 解析：選D　不同微生物對(duì)

25、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求不同，如自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基不需要加碳源，自生固氮菌的培養(yǎng)基不需要加氮源。按不同的分類標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)基可有不同的種類和作用，其中固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基里加入瓊脂等凝固劑配制而成的。配制培養(yǎng)基時(shí)要注意各種養(yǎng)分的濃度和比例。 2．下列操作與消毒滅菌無(wú)關(guān)的是(　　) A．接種前用酒精燈火焰灼燒接種環(huán) B．接種前用酒精擦拭雙手 C．將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng) D．接種在酒精燈的火焰旁完成 解析：選C　接種用具、器皿、空氣中都存在大量微生物，必須嚴(yán)格地消毒滅菌。A、B、D三項(xiàng)都是實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中消毒或滅菌的措施。將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)與滅菌無(wú)關(guān)。 3．采用干熱滅菌、灼燒滅菌

26、、高壓蒸汽滅菌、紫外線照射等幾種方法，可分別殺死哪些部位的雜菌(　　) A．接種環(huán)、吸管、培養(yǎng)基、接種室 B．吸管、接種環(huán)、培養(yǎng)基、接種箱 C．培養(yǎng)基、吸管、接種環(huán)、接種箱 D．培養(yǎng)皿、吸管、培養(yǎng)基、雙手 解析：選B　干熱滅菌是將滅菌物品放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170 ℃下加熱1～2 h，適用于耐高溫且需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等；灼燒滅菌是利用酒精燈火焰的充分燃燒層滅菌，如接種針、接種環(huán)等；高壓蒸汽滅菌用高壓蒸汽滅菌鍋，一般在壓力為100 kPa，溫度為121 ℃的條件下，維持15～30 min，主要用于培養(yǎng)基滅菌；紫外線照射適用于物體表面滅菌和空

27、氣滅菌，如接種室、接種箱、超凈工作臺(tái)等，使用前用紫外線照射約30 min。 4．不同的微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需要各不相同。下列有關(guān)一種以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物營(yíng)養(yǎng)的描述，錯(cuò)誤的是(　　) A．氮源物質(zhì)為該微生物提供必要的氮元素 B．碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì) C．無(wú)機(jī)鹽是該微生物不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) D．水是該微生物的營(yíng)養(yǎng)要素之一 解析：選B　由題干以CO2為唯一碳源可知，該微生物可以利用CO2合成有機(jī)物，CO2不能為微生物提供能量，其能源來(lái)自光能或氧化無(wú)機(jī)物釋放出的化學(xué)能。 5．將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37 ℃恒溫箱的目的是(　　) A．對(duì)比觀察培養(yǎng)基有

28、沒(méi)有被微生物利用 B．對(duì)比分析培養(yǎng)基是否被雜菌污染 C．沒(méi)必要放入未接種的培養(yǎng)基 D．為了下次接種時(shí)再使用 解析：選B　對(duì)未接種的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，起到對(duì)照作用，可確定培養(yǎng)基是否被雜菌污染。 6．下列有關(guān)平板劃線操作的描述，錯(cuò)誤的是(　　) A．將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅 B．接種環(huán)在平板上劃線的位置是隨機(jī)的 C．在挑取菌種前和接種完畢后均要將試管口通過(guò)酒精燈火焰 D．最后一區(qū)的劃線不能與第一區(qū)相連 解析：選B　接種環(huán)在平板上劃線的位置并不是隨機(jī)的：將沾有菌種的接種環(huán)伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線后應(yīng)蓋上皿蓋，并灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開(kāi)始

29、往第二區(qū)域內(nèi)劃線，重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。 7．圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，回答相關(guān)問(wèn)題： (1)圖甲是利用____________法進(jìn)行微生物接種，圖乙是利用____________法進(jìn)行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是________和________；對(duì)這兩種接種工具進(jìn)行滅菌和消毒的方法依次是____________和酒精消毒。 (2)平板劃線時(shí)，為保證微生物的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐步減少，每次劃線都要從______________________開(kāi)始，平板劃線結(jié)束后，最后一次劃的線不能與第一次劃的線________。 (3)接種操作為什么一

30、定要在火焰附近進(jìn)行？_______________________________________________________。 (4)下圖是接種后培養(yǎng)的效果圖解，其接種方法是______(填“圖甲”或“圖乙”)。 (5)假設(shè)用圖乙所示方法接種培養(yǎng)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落連成一片，可能的原因是什么？________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________

31、__。 解析：(1)圖甲和圖乙分別是平板劃線法和稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物接種，這兩種方法所用的接種工具分別是接種環(huán)和涂布器。(2)平板劃線時(shí)，每次劃線前都要從上一次劃線的末端開(kāi)始，最后一次劃線不能與第一次劃線相連。(3)由于在酒精燈火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域，因此接種常在火焰附近進(jìn)行。(4)培養(yǎng)基上的菌落分布均勻，接種方法為稀釋涂布平板法。(5)采用稀釋涂布平板法進(jìn)行菌種分離時(shí)，稀釋度要足夠高，否則會(huì)使微生物不能分散成單個(gè)細(xì)胞。 答案：(1)平板劃線　稀釋涂布平板　接種環(huán)　涂布器　灼燒滅菌　(2)上一次劃線的末端　相連(或相接、相交、交叉等)　(3)火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域　(4)圖乙　 (5

32、)稀釋倍數(shù)不夠，菌液的濃度太高 [課時(shí)跟蹤檢測(cè)]　 一、選擇題 1．下列關(guān)于微生物的營(yíng)養(yǎng)，說(shuō)法正確的是(　　) A．同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源 B．凡是碳源都能提供能量 C．除水以外的無(wú)機(jī)物僅提供無(wú)機(jī)鹽 D．無(wú)機(jī)氮源也可能提供能量 解析：選D　對(duì)一些微生物來(lái)說(shuō)，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。CO2是光能自養(yǎng)細(xì)菌的碳源，但不能提供能量。CO2和N2是無(wú)機(jī)物，也是微生物的碳源和氮源。硝化細(xì)菌所利用的氮源是無(wú)機(jī)氮源氨，同時(shí)氨也為硝化細(xì)菌提供用以化能合成作用的能源。 2．培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒方法依次是(　　) ①

33、化學(xué)消毒?、谧茻郎缇、鄹蔁釡缇、茏贤饩€消毒?、莞邏赫羝麥缇、薨褪舷? A．⑤③②①④⑥　　　　　　B．①②③④⑤⑥ C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤ 解析：選A　培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿耐高溫，需用干熱滅菌；接種環(huán)可用灼燒滅菌達(dá)到迅速?gòu)氐椎販缇男Ч?；?shí)驗(yàn)操作者的雙手可用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒，如用酒精擦拭雙手；空氣可用紫外線消毒；為不破壞牛奶中的營(yíng)養(yǎng)成分，可采用巴氏消毒。 3．(江蘇高考)做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是(　　) A．高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開(kāi)放氣閥使壓力表指針回到零后，開(kāi)啟鍋蓋 B．倒平板時(shí)，應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一邊，以免

34、培養(yǎng)基濺到皿蓋上 C．為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落 D．用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上 解析：選D　在高壓滅菌的操作過(guò)程中，加熱結(jié)束后應(yīng)讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，待壓力表的壓力降到零時(shí)，打開(kāi)放氣閥，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子。倒平板時(shí)，用左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，而不是完全取下放到一邊。接種環(huán)經(jīng)火焰灼燒滅菌后應(yīng)在火焰旁冷卻后，再用其挑取菌落。在微生物的培養(yǎng)中，一般在皿底上用記號(hào)筆做標(biāo)記。 4．下列有關(guān)平板劃線法操作的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 B．每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃

35、線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種 C．在每一區(qū)域內(nèi)劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于菌液 D．劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)能及時(shí)殺死接種環(huán)上的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者 解析：選C　在用平板劃線法分離大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)中，接種環(huán)取菌種前灼燒的目的是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；以后每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線后殘留的菌種；劃線結(jié)束后仍需灼燒接種環(huán)，是為了避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者；從第二次劃線開(kāi)始，每次劃線時(shí)接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端。 5．為了保持菌種的純凈需要進(jìn)行菌種的保藏，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法

36、 B．臨時(shí)保藏的菌種一般是接種到試管的斜面培養(yǎng)基上 C．臨時(shí)保藏菌種容易被污染或產(chǎn)生變異 D．對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用低溫－4 ℃保藏的方法 解析：選D　對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可采用甘油管藏法，即在3 mL甘油瓶中加入1 mL甘油后滅菌，將1 mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20 ℃的冷凍箱中保存。 6．用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)(　　) ①可以用相同的培養(yǎng)基?、诙夹枰褂媒臃N針進(jìn)行接種?、鄱夹枰诰凭珶艋鹧媾赃M(jìn)行接種?、芏伎梢杂脕?lái)計(jì)數(shù)活菌 A．①② B．③④ C．①③ D

37、．②④ 解析：選C　平板劃線法或稀釋涂布平板法都使用固體培養(yǎng)基；平板劃線法采用接種針或接種環(huán)進(jìn)行操作，而稀釋涂布平板法采用涂布器進(jìn)行操作；進(jìn)行接種操作時(shí)，要進(jìn)行無(wú)菌操作，需要在酒精燈火焰旁接種，避免空氣中的微生物污染培養(yǎng)基；平板劃線法一般用于分離菌體而不能計(jì)數(shù)活菌。 7．下表是對(duì)四種生物的能源、碳源、氮源、新陳代謝類型的描述，正確的是(　　) 選項(xiàng) 項(xiàng)目 硝化細(xì)菌 乳酸菌 根瘤菌 衣藻 A 能源 NH3 乳酸 N2 光能 B 碳源 CO2 糖類等 糖類等 CO2 C 氮源 NH3 N2 N2 NO D 代謝類型 自養(yǎng)需氧型 異養(yǎng)厭氧型

38、 自養(yǎng)需氧型 自養(yǎng)需氧型 解析：選B　從能源來(lái)看，硝化細(xì)菌的能源是氧化氨氣為硝酸鹽過(guò)程釋放的能量，乳酸菌和根瘤菌需糖類等有機(jī)物供能；從氮源看，乳酸菌需要NH、NO；從代謝類型看，根瘤菌為異養(yǎng)需氧型；從碳源看，硝化細(xì)菌與衣藻需CO2，乳酸菌和根瘤菌需要糖類等有機(jī)物。 8．下面是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?、2、3、4、5。下列敘述正確的是(　　) A．在五個(gè)區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌 B．劃線操作時(shí)完全打開(kāi)皿蓋，劃完立即蓋上 C．接種時(shí)不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達(dá)到分離單菌落的目的 D．第1區(qū)和第5區(qū)的劃線最終要連接起來(lái)，以便比較前后的菌落數(shù) 解析

39、：選C　在每次劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌；進(jìn)行劃線操作時(shí)，左手將培養(yǎng)皿的皿蓋打開(kāi)一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋；注意接種時(shí)不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達(dá)到分離單菌落的目的；第1區(qū)和第5區(qū)的劃線不能相連。 9．某研究小組從有機(jī)廢水中分離微生物用于廢水處理，下列敘述正確的是(　　) A．培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌 B．轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線 C．接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng) D．培養(yǎng)過(guò)程中每隔一周觀察一次 解析：選B　在配制培養(yǎng)基的過(guò)程中要先滅菌后倒平板；轉(zhuǎn)換劃線角度后要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌，殺滅接種環(huán)上殘留的菌種，再進(jìn)

40、行劃線；接種后的培養(yǎng)皿應(yīng)放置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；微生物生長(zhǎng)、繁殖較快，在培養(yǎng)過(guò)程中一般要隔天觀察一次。 10．科學(xué)家通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了細(xì)菌的快速進(jìn)化過(guò)程。人們發(fā)現(xiàn)，用肉湯培養(yǎng)假單胞桿菌，如果肉湯保持不動(dòng)，不久后，在肉湯的不同部位，如表面、底部或其他部位，細(xì)菌的形態(tài)發(fā)生了如圖所示的變化，出現(xiàn)一定數(shù)量的變異株。下列有關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是(　　) A．這個(gè)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明了細(xì)菌在不同的小環(huán)境中發(fā)生了進(jìn)化 B．細(xì)菌的生命周期短，繁殖速度快，容易受到外界環(huán)境影響而發(fā)生變化 C．用靜置的肉湯培養(yǎng)FS細(xì)菌，其菌落形狀將趨于一致 D．用不斷搖動(dòng)的肉湯培養(yǎng)SM細(xì)菌，不會(huì)出現(xiàn)FS細(xì)菌和WS細(xì)菌 解析：選C　分析題干

41、信息可知，最初的SM細(xì)菌在靜置的肉湯表面繁殖，一段時(shí)間后，有一部分在肉湯底部繁殖，這部分可能向厭氧方向進(jìn)化，故細(xì)菌在不同的小環(huán)境下可發(fā)生進(jìn)化。細(xì)菌生命周期短，繁殖速度快，容易受外界環(huán)境因素(如溫度、氧氣)的影響。用靜置的肉湯培養(yǎng)FS細(xì)菌，該細(xì)菌也有可能向不同方向進(jìn)化，如進(jìn)化成WS細(xì)菌。不斷搖動(dòng)，肉湯中的溶氧會(huì)抑制厭氧型的FS細(xì)菌；不斷搖動(dòng)，容器與肉湯無(wú)固定接觸面，WS細(xì)菌無(wú)法附著生長(zhǎng)繁殖。 二、非選擇題 11．(1)在大腸桿菌培養(yǎng)過(guò)程中，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，還要考慮________、________和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、變異類型容易選擇、________、_____

42、___等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。 (2)在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行________(填“消毒”或“滅菌”)；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和________(填“消毒”或“滅菌”)；空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能________________________________________________________________________。 (3)若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品稀釋的_________________

43、_________________。 (4)通常，對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的________________________________________________________________________。 (5)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是_______________________________。 解析：(1)大腸桿菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、變異類型容易選擇、易培養(yǎng)、生活周期短等優(yōu)點(diǎn)，培養(yǎng)過(guò)程中，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，還要考慮溫度、酸堿度和滲透壓等條件。(2)對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿應(yīng)

44、進(jìn)行滅菌，操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消毒。紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷DNA的結(jié)構(gòu)。(3)稀釋涂布平板法要先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，操作中應(yīng)保證樣品稀釋的比例合適。(4)對(duì)獲得的純菌種可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定。(5)檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染的方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)，觀察是否有菌落形成。 答案：(1)溫度　酸堿度　易培養(yǎng)　生活周期短　(2)滅菌　消毒　損傷DNA的結(jié)構(gòu)　(3)比例合適　(4)鑒定(或分類)　(5)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)

45、生 12．下面為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的成分列表，據(jù)此回答： 成分 牛肉膏 蛋白胨 NaCl H2O 含量 0.5 g 1 g 0.5 g 100 mL (1)蛋白胨在培養(yǎng)基中的作用是_________________________________。 (2)要用此材料配制觀察細(xì)菌菌落狀況的培養(yǎng)基，還需添加的成分是____________。 (3)確定表中各成分含量依據(jù)的原則是_________________________________________。 (4)培養(yǎng)基配制好后，分裝前應(yīng)進(jìn)行的工作是_________________________________

46、__。 (5)從配制培養(yǎng)基直到培養(yǎng)完成，所采用的預(yù)防雜菌污染的方法有_________________________________________________________________________。 (6)在培養(yǎng)基凝固前要擱置斜面，其目的是____________________________________________________________________。 解析：蛋白胨中含有大量的蛋白質(zhì)降解而成的多肽類物質(zhì)等，因而在培養(yǎng)基中提供碳源、氮源和生長(zhǎng)因子。細(xì)菌菌落是在固體培養(yǎng)基上形成的。確定各營(yíng)養(yǎng)成分含量要依據(jù)所培養(yǎng)的微生物的需要。培養(yǎng)基配制好后，首先要調(diào)

47、整pH，然后再分裝，整個(gè)操作過(guò)程都要保證無(wú)雜菌污染。 答案：(1)提供碳源、氮源、生長(zhǎng)因子　(2)瓊脂(凝固劑)　(3)所培養(yǎng)微生物對(duì)各營(yíng)養(yǎng)成分的需要量　(4)調(diào)整pH　(5)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌、灼燒接種環(huán)、酒精棉擦手、在火焰旁接種、在火焰旁迅速用棉塞塞住試管口　(6)擴(kuò)大接種面積 13．在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞，使其長(zhǎng)成單個(gè)的菌落，這個(gè)菌落就是一個(gè)純化的細(xì)菌菌落。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下： ―→―→―→ 請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題： (1)配制培養(yǎng)基時(shí)，各成分含量確定的原則是________________________。不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是__

48、_____________________________。 (2)倒平板的適宜溫度是50 ℃左右，原因是_____________________________。待平板冷凝后，要將平板倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止________________________。 (3)純化菌株時(shí)，若使用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，應(yīng)選擇的涂布工具是圖中的________；若使用平板劃線法進(jìn)行接種，應(yīng)選擇的接種工具是圖中的________。 (4)劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿了菌落，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無(wú)菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無(wú)菌落

49、可能的操作失誤有________________________________________________________________________。 (5)若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過(guò)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò)________處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。 解析：培養(yǎng)基中各成分含量要根據(jù)微生物的生長(zhǎng)需要來(lái)確定。微生物生長(zhǎng)需要一定的pH，所以培養(yǎng)基裝瓶前需要調(diào)節(jié)pH。由圖可知，A為接種環(huán)，B為涂布器，C為膠頭滴管，D為接種針，稀釋涂布平板法應(yīng)選擇的涂布工具是B，平板劃線法應(yīng)選擇的接種工具是A。第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無(wú)菌落，其他劃線上有菌落，造成此現(xiàn)象的原因可能有兩個(gè)：一是接種環(huán)灼燒后未冷卻，菌種接觸到高溫的接種環(huán)而死亡；二是劃第二劃線區(qū)域第一條線時(shí)未從第一區(qū)域末端開(kāi)始。有的大腸桿菌會(huì)釋放一種強(qiáng)烈的毒素，因此，使用過(guò)的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò)滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。 答案：(1)所培養(yǎng)微生物對(duì)各營(yíng)養(yǎng)成分的需要量　調(diào)整pH　(2)溫度過(guò)高會(huì)燙手，過(guò)低培養(yǎng)基又會(huì)凝固　皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染　(3)B　A　(4)①接種環(huán)灼燒后未冷卻　②劃線未從第一區(qū)域末端開(kāi)始　(5)滅菌