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1、灰樹(shù)花工廠化栽培和開(kāi)發(fā)研究技術(shù)總結(jié),A前言B材料與方法C結(jié)果與討論,前言,灰樹(shù)花（Crifolafrondosa）是經(jīng)常發(fā)生于我國(guó)東北地區(qū)、高寒地帶的一種優(yōu)質(zhì)食用菌，有獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)和風(fēng)味?；覙?shù)花子實(shí)體形似盛開(kāi)的蓮花，扇形菌蓋重重疊，又名舞茸、粟子蘑、蓮花菇。鮮嫩的子實(shí)體香味濃郁，味道鮮美，口感極佳，其營(yíng)養(yǎng)豐富，富含灰樹(shù)花多糖、維生素、多種必需氨基酸和微量元素，經(jīng)常食用可預(yù)防和治療肝臟系統(tǒng)及胃腸道疾病。同時(shí)在日本從子實(shí)體提取的灰樹(shù)花多糖用作抗癌藥品。,所以灰樹(shù)花是一種具有很高開(kāi)發(fā)價(jià)值的珍稀食藥用菌。日本料理盛行此菇?；覙?shù)花野生量極少，幾乎不能形成商品。1974年日本進(jìn)行人工栽培獲得成功，80年代研

2、究成功了工廠化周年性栽培。我國(guó)最早于1983年由浙江慶元引種栽培，目前仍保留在依靠自然條件栽培，一年一次的手工操作家庭作坊式生產(chǎn)水平。由于受氣溫影響，產(chǎn)量不穩(wěn)定，雜菌污染，嚴(yán)重導(dǎo)致成品率低、品質(zhì)差，無(wú)法同國(guó)際的同行業(yè)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)。,目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)工廠化栽培灰樹(shù)花的先例。本項(xiàng)目旨在開(kāi)發(fā)研究灰樹(shù)花在食用菌新品種，通過(guò)引種和DNA種性鑒定及生物育種技術(shù)，選育出適于工廠化栽培的灰樹(shù)花品種，研究制訂安全、衛(wèi)生的標(biāo)準(zhǔn)化工廠化生產(chǎn)工藝。通過(guò)對(duì)鮮菇保鮮技術(shù)的研究、延長(zhǎng)鮮菇的貯藏時(shí)間，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。同時(shí)進(jìn)行灰樹(shù)花在品種生產(chǎn)示新，實(shí)現(xiàn)新時(shí)期農(nóng)民增收。,材料與方法,一、供試灰樹(shù)花品種資源二、灰樹(shù)花品種DNA提取及RAP

3、D反應(yīng)三、培養(yǎng)料配方四、栽培容器五、灰樹(shù)花菇生育條件六、原材料、產(chǎn)品的重金屬和農(nóng)藥殘留測(cè)定,供試灰樹(shù)花品種資源,供試杏鮑菇品種資源分別從日本、韓國(guó)、美國(guó)、臺(tái)灣、福建、等國(guó)家及地區(qū)收集、引進(jìn)，共11個(gè)品種，編號(hào)為“灰1號(hào)”至“灰11號(hào)”。保藏培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200克，葡萄糖20克，瓊脂19-20克，水1000毫升，磷酸二氫鉀或磷酸氫二鉀2克。,灰樹(shù)花品種DNA提取及RAPD反應(yīng),選擇“灰2號(hào)”、“灰3號(hào)”、“灰4號(hào)”、“灰9號(hào)”、“灰14號(hào)”菌種，編號(hào)依次為1,2,3,4,5。菌株經(jīng)PDY液體培養(yǎng)后，過(guò)濾收集各個(gè)菌株的菌絲體，采用CTAB方法提取各菌株的DNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定，稀釋后

4、進(jìn)行RAPD。,DNAmarker選用上海鼎國(guó)生物技術(shù)發(fā)展中心DGL2000，共采用32個(gè)上海生工生物技術(shù)公司的RAPD隨機(jī)引物進(jìn)行RAPD擴(kuò)增，其中共有21個(gè)引物有擴(kuò)增條帶。以其中的18個(gè)隨機(jī)擴(kuò)增引物擴(kuò)增的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)片段的有無(wú)，用NT-SYS程序中的Simqual軟件算出菌株間遺傳相關(guān)性；用平均連鎖聚類分析方法(UnweightedPairGroupMethodArithmeticClusteringUPGMA)進(jìn)行聚類分析，構(gòu)建樹(shù)狀圖譜。,培養(yǎng)料配方試驗(yàn),一、木屑32.5%;棉籽殼32.5%;麩皮15%;玉米粉10%;泥土10%二、木屑37.5%棉籽殼37.5%;麩皮15%;玉米粉10%;保

5、水劑適量三、玉米芯25%;棉籽殼25%;木屑25%;麩皮15%;玉米粉10%;保水劑適量,栽培容器試驗(yàn),大袋：4132cm中袋：4124cm小袋：4817cm大瓶：1100毫升小瓶：850毫升,灰樹(shù)花菇生育條件試驗(yàn)培養(yǎng)條件生育條件,溫度：22-23C濕度：70-75%CO2：2500ppm光照：無(wú)培養(yǎng)時(shí)間：3035天,溫度：22-23C濕度：85-90%CO2：1500ppm光照：300LUX左右培養(yǎng)時(shí)間：1520天,原材料、產(chǎn)品的重金屬和農(nóng)藥殘留測(cè)定結(jié)果,隨機(jī)抽取灰樹(shù)花栽培的主要原材料玉米芯、棉籽殼、米糠、木屑送上海市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所測(cè)重金屬鉛、汞、砷及農(nóng)藥殘留六六六、滴滴涕含量，同時(shí)跟蹤

6、檢測(cè)用上述原料栽培的灰樹(shù)花產(chǎn)品的重金屬鉛、汞、砷及農(nóng)藥殘留六六六、滴滴涕含量。,結(jié)果與分析,一、灰樹(shù)花品種資源的收集、選育二、灰樹(shù)花工廠化栽培生產(chǎn)培養(yǎng)料配方研究三、灰樹(shù)花工廠化栽培容器研究四、灰樹(shù)花生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中所需的生活條件五、灰樹(shù)花工廠化生產(chǎn)病蟲(chóng)害防治技術(shù)研究六、灰樹(shù)花產(chǎn)品安全衛(wèi)生質(zhì)量及保鮮技術(shù)七、灰樹(shù)花品種生產(chǎn)示范,灰樹(shù)花品種資源的收集、選育,表1：不同灰樹(shù)花品種栽培比較,圖一：隨機(jī)引物7擴(kuò)增的灰樹(shù)花不同品種的DNA指紋圖譜,從左到右依次DNAmarker，菌株1,菌株2,菌株3,菌株4,菌株5分子量標(biāo)記依次為2kb，1600bp，1000bp，750bp,500bp，250bp,100

7、bp,圖二：隨機(jī)引物8擴(kuò)增的灰樹(shù)花不同品種的DNA指紋圖譜,從左到右依次DNAmarker，菌株5,菌株4,菌株3,菌株2,菌株1分子量標(biāo)記依次為2kb，1600bp，1000bp，750bp,500bp，250bp,100bp,圖三：隨機(jī)引物42擴(kuò)增的灰樹(shù)花不同品種的DNA指紋圖譜,從左到右依次DNAmarker，菌株1,菌株2,菌株3,菌株4,菌株5分子量標(biāo)記依次為2kb，1600bp，1000bp，750bp,500bp，250bp,100bp,圖四：不同灰樹(shù)花品種DNA遺傳相關(guān)性聚類樹(shù)狀圖譜,灰樹(shù)花工廠化栽培生產(chǎn)培養(yǎng)料配方研究,表2：不同培養(yǎng)料配方的灰樹(shù)花產(chǎn)質(zhì)量,灰樹(shù)花工廠化栽培容器研

8、究,表3:不同大小的聚丙烯塑袋栽培灰樹(shù)花的產(chǎn)量,表4:不同大小的聚丙烯塑瓶栽培灰樹(shù)花的產(chǎn)量,灰樹(shù)花生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中所需的生活條件,溫度：菌絲體生長(zhǎng)：23+1；原基形成子實(shí)體生長(zhǎng)（開(kāi)片）1617濕度：菌絲體生長(zhǎng)：培養(yǎng)料含水量63+2%；空氣相對(duì)濕度70%左右。原基形成：空氣相對(duì)濕度8085%；子實(shí)體生長(zhǎng)（開(kāi)片）：空氣相對(duì)濕度8590%CO2濃度：菌絲體生長(zhǎng)3000ppm以下；原基形成子實(shí)體生長(zhǎng)（開(kāi)片）1000ppm以下，原基形成：子實(shí)體生長(zhǎng)（開(kāi)片）：1000ppm以內(nèi)。CO2濃度過(guò)高，開(kāi)片不良，易造成鹿角狀畸形子實(shí)體。光照：菌絲體生長(zhǎng)不需要光照；菌絲體長(zhǎng)滿容器后50100勒克司，弱光誘導(dǎo)7天左右。

9、原基形成300勒克司左右；子實(shí)體生長(zhǎng)（開(kāi)片）5001000勒克司。光照不足，光照色澤淡，產(chǎn)量低。,灰樹(shù)花工廠化生產(chǎn)病蟲(chóng)害防治技術(shù)研究,通過(guò)采用脈動(dòng)式真空高壓蒸汽滅菌技術(shù)，徹底殺滅培養(yǎng)基質(zhì)中的病原菌，大大改善了固體培養(yǎng)料滅菌的效果使菌種生產(chǎn)成品率大大提高。采用低溫等離子空氣滅菌技術(shù)及空氣層流凈化技術(shù)，在生產(chǎn)工序中主要的場(chǎng)所，科學(xué)合理放置5臺(tái)等離子動(dòng)態(tài)空氣潔凈器，不僅能直接達(dá)到滅菌除塵的目的，并能去除空氣中有害、有毒氣體和異物，在機(jī)器開(kāi)啟的情況下，能夠進(jìn)行正常作業(yè)，無(wú)須采用熏蒸和其他化學(xué)消毒方法。不僅保證了接種的成品率，而且保障操作人員安全衛(wèi)生。,因?yàn)榛覙?shù)花的工廠化生產(chǎn)在國(guó)內(nèi)尚無(wú)先例，我們經(jīng)過(guò)反復(fù)

10、試驗(yàn)證明：在灰樹(shù)花黑色蜂窩狀原基形成之前，是感染空氣中細(xì)菌和綠霉菌污染的關(guān)鍵時(shí)間，為此我們利用灰樹(shù)花生育階段的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)并給以最適應(yīng)灰樹(shù)花生長(zhǎng)發(fā)育的條件，在灰樹(shù)花菌絲體生長(zhǎng)階段完成之后，適時(shí)進(jìn)行弱誘導(dǎo)，使之菌絲墊形成特色并充分扭結(jié)成黑色蜂窩狀原基后，打開(kāi)瓶蓋給予充足的空氣。栽培過(guò)程中,通過(guò)調(diào)節(jié)栽培室空氣濕度控制工藝，有效地降低了10%左右的雜菌侵染率。,灰樹(shù)花產(chǎn)品安全衛(wèi)生質(zhì)量及保鮮技術(shù),表5主要材料及產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果,灰樹(shù)花品種生產(chǎn)示范,選擇上海郊區(qū)的南匯匯侖食用菌公司作為生產(chǎn)示范基地，分別于2003年和2004年進(jìn)行了袋栽灰樹(shù)花工廠化生產(chǎn)技術(shù)示范。生產(chǎn)示范試驗(yàn)基地菇房設(shè)施采用了彩鋼板夾芯保溫菇房，并配備了溫度、濕度、光照、通氣自動(dòng)控制系統(tǒng)，超聲波加濕器，制冷及加熱系統(tǒng)。栽培容器采用透氣聚丙烯塑料袋。進(jìn)行了二次生產(chǎn)示范試驗(yàn)。試驗(yàn)選用“灰3號(hào)”菌種，配方2，生產(chǎn)2760袋。在適宜灰樹(shù)花生長(zhǎng)的溫度、濕度、光照、通氣條件下培養(yǎng)、出菇，示范試驗(yàn)結(jié)果灰樹(shù)花原基分化率為90%，平均每袋產(chǎn)量達(dá)到250克，達(dá)到了預(yù)期目標(biāo)。,