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1、微生物實驗技術(shù),第一章,實驗室建設(shè)及設(shè)備儀器,實驗室建設(shè)及設(shè)備儀器,1.1 實驗室建設(shè) 1.2 實驗環(huán)境控制 1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng) 1.4 常用器皿 1.5 型微生物廠主要儀器及設(shè)備,1.1 實驗室建設(shè),1.1.1 微生物實驗室設(shè)計 微生物實驗室由準(zhǔn)備室、洗滌室、滅菌室、無菌室、恒溫培養(yǎng)室和普通實驗室六部分組成。這些房間的共同特點是地板和墻壁的質(zhì)地光滑堅硬，儀器和設(shè)備的陳設(shè)簡潔，便于打掃衛(wèi)生。,1.1 實驗室建設(shè),1.1.2 微生物實驗室基本要求 （一）準(zhǔn)備室 準(zhǔn)備室用于配制培養(yǎng)基和樣品處理等。室內(nèi)設(shè)有試劑柜、存放器具或材料的專柜、實驗臺、電爐、冰箱和上下水道、電源等。 （二）洗滌室

2、洗滌室用于洗刷器皿等。由于使用過的器皿已被微生物污染，有時還會存在病原微生物。因此，在條件允許的情況下，最好設(shè)置洗滌室。室內(nèi)應(yīng)備有加熱器、蒸鍋，洗刷器皿用的盆、桶等，還應(yīng)有各種瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。,1.1 實驗室建設(shè),（三）滅菌室 滅菌室主要用于培養(yǎng)基的滅菌和各種器具的滅菌，室內(nèi)應(yīng)備有高壓蒸汽滅菌器、烘箱等滅菌設(shè)備及設(shè)施。 （四）無菌室 無菌室也稱接種室，是系統(tǒng)接種、純化菌種等無菌操作的專用實驗室。在微生物工作中，菌種的接種移植是一項主要操作，這項操作的特點就是要保證菌種純種，防止雜菌的污染。在一般環(huán)境的空氣中，由于存在許多塵埃和雜菌，很易造成污染，對接種工作干擾很大。,1.1 實驗

3、室建設(shè),1. 無菌室的設(shè)置 無菌室應(yīng)根據(jù)既經(jīng)濟又科學(xué)的原則來設(shè)置。其基本要求有以下幾點： （1）無菌室應(yīng)有內(nèi)、外兩間，內(nèi)間是無菌室，外間是緩沖室。房間容積不宜過大，以便于空氣滅菌。內(nèi)間面積22.55m2，外間面積122m2，高以2.5m以下為宜，都應(yīng)有天花板。 （2）內(nèi)間應(yīng)當(dāng)設(shè)拉門，以減少空氣的波動，門應(yīng)設(shè)在離工作臺最遠(yuǎn)的位置上；外間的門最好也用拉門，要設(shè)在距內(nèi)間最遠(yuǎn)的位置上。,1.1 實驗室建設(shè),（3）在分隔內(nèi)間與外間的墻壁或“隔扇”上，應(yīng)開一個小窗，作接種過程中必要的內(nèi)外傳遞物品的通道，以減少人員進(jìn)出內(nèi)間的次數(shù)，降低污染程度。小窗寬60cm、高40cm、厚30cm，內(nèi)外都掛對拉的窗扇。 （

4、4）無菌室容積小而嚴(yán)密，使用一段時間后，室內(nèi)溫度很高，故應(yīng)設(shè)置通氣窗。通氣窗應(yīng)設(shè)在內(nèi)室進(jìn)門處的頂棚上（即離工作臺最遠(yuǎn)的位置），最好為雙層結(jié)構(gòu)，外層為百葉窗，內(nèi)層可用抽板式窗扇。通氣窗可在內(nèi)室使用后、滅菌前開啟，以流通空氣。有條件可安裝恒溫恒濕機。,1.1 實驗室建設(shè),2. 無菌室內(nèi)設(shè)備和用具 （1）無菌室內(nèi)的工作臺，不論是什么材質(zhì)、用途的，都要求表面光滑和臺面水平。 （2）在內(nèi)室和外室各安裝一個紫外燈（多為30W）。內(nèi)室的紫外線燈應(yīng)安裝在經(jīng)常工作的座位正上方，離地面2m，外室的紫外線燈可安裝在外室中央。 （3）外室應(yīng)有專用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有來蘇兒水的瓷盆和毛巾、手持噴霧器和5%石炭酸

5、溶液等。 （4）內(nèi)室應(yīng)有酒精燈、常用接種工具、不銹鋼制的刀、剪、鑷子、70%的酒精棉球、工業(yè)酒精、載玻璃片、特種蠟筆、記錄本、鉛筆、標(biāo)簽紙、膠水、廢物筐等。,1.1 實驗室建設(shè),3. 無菌室的滅菌消毒 （1）薰蒸：這是無菌室徹底滅菌的措施。無菌室使用了較長時間，污染比較嚴(yán)重時，應(yīng)進(jìn)行薰蒸滅菌?？捎眉兹⑷樗峄蛄蚧寝拐?。 （2）噴霧：在每次使用無菌室前進(jìn)行。噴霧可促使空氣中微粒及微生物沉降，防止桌面、地面上的微塵飛場，并有殺菌作用。可用5%石炭酸噴霧。 （3）紫外線照射：在每次使用無菌室前進(jìn)行。紫外線有較好的殺菌效果。通常應(yīng)開啟紫外線燈照射3060min。,1.1 實驗室建設(shè),4. 無菌室工作規(guī)

6、程 （1）無菌室滅菌。每次使用前開啟紫外線燈照射30min以上，或在使用前30min，對內(nèi)外室用5%石炭酸噴霧。 （2）用肥皂洗手后，把所需器材搬入外室；在外室換上已滅菌的工作服、工作帽和工作鞋，戴好口罩，然后用2%煤酚皂液將手浸洗2分鐘。 （3）將各種需用物品搬進(jìn)內(nèi)室清點、就位，用5%石炭酸在工作臺面上方和操作員站位空間噴霧，返回外室，510min后再進(jìn)內(nèi)室工作。,1.1 實驗室建設(shè),（4）接種操作前，用70%酒精棉球擦手；進(jìn)行無菌操作時，動作要輕緩，盡量減少空氣波動和地面揚塵。 （5）工作中應(yīng)注意安全。如遇棉塞著火，用手緊握或用濕布包裹熄滅，切勿用嘴吹，以免擴大燃燒；如遇有菌培養(yǎng)物灑落或打

7、碎有菌容器時，應(yīng)用浸潤5%石炭酸的抹布包裹后，并用浸潤5%石炭酸的抹布擦拭臺面或地面，用酒精棉球擦手后再繼續(xù)操作。 （6）工作結(jié)束，立即將臺面收拾干凈，將不應(yīng)在無菌室存放的物品和廢棄物全部拿出無菌室后，對無菌室用5%石炭酸噴霧，或開紫外線燈照射30min。,1.1 實驗室建設(shè),（五）恒溫培養(yǎng)室 1. 培養(yǎng)室的設(shè)置 （1）培養(yǎng)室應(yīng)有內(nèi)、外兩間，內(nèi)室是培養(yǎng)室，外室是緩沖室。房間容積不宜大，以利于空氣滅菌，內(nèi)室面積在3.24.414m2左右，外室面積在3.21.86m2左右，高以2.5m左右為宜，都應(yīng)有天花板。 （2）分隔內(nèi)室與外室的墻壁上部應(yīng)設(shè)帶空氣過濾裝置的通風(fēng)口。 （3）為滿足微生物對溫度的需

8、要，需安裝恒溫恒濕機。 （4）內(nèi)外室都應(yīng)在室中央安裝紫外線燈，以供滅菌用。,1.1 實驗室建設(shè),2. 培養(yǎng)室內(nèi)設(shè)備及用具 （1）內(nèi)室通常配備培養(yǎng)架和搖瓶機（搖床）。常用的搖瓶機有旋轉(zhuǎn)式、往復(fù)式兩種。 （2）外室應(yīng)有專用的工作服、鞋、帽、口罩、手持噴霧器和5%石炭酸溶液、70%酒精棉球等。 3. 培養(yǎng)室的滅菌、消毒 同無菌室的滅菌、消毒措施。 小規(guī)模的培養(yǎng)可不啟用恒溫培養(yǎng)室，而在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行。,1.1 實驗室建設(shè),（六）普通實驗室 進(jìn)行微生物的觀察、計數(shù)和生理生化測定工作的場所。室內(nèi)的陳設(shè)因工作側(cè)重點不同而有很大的差異。一般均配備實驗臺、顯微鏡、柜子及凳子。實驗臺要求平整、光滑，實驗柜要足以

9、容納日常使用的用具及藥品等。 （七）實驗室其他要求 水、電、氣等的容量、布設(shè)、性能均應(yīng)滿足實驗室工作的需要。,返回,1.2 實驗環(huán)境控制,1.2.1 檢驗的方法 （一）平板檢驗法 用培養(yǎng)微生物主要類群的常規(guī)培養(yǎng)基，如牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、高氏1號培養(yǎng)基、馬丁氏培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，分別倒成平板，每種兩個，都放入無菌室內(nèi)。檢驗時，按無菌操作各將其中一個平板的蓋子打開，經(jīng)過預(yù)定時間后再行蓋好；另外一個不開蓋子的作為對照，一起放入30環(huán)境培養(yǎng)，48小時后檢驗有無菌落生長。,1.2 實驗環(huán)境控制,（二）斜面檢驗法 將常用的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面(與上相同)各取2管，放入無菌室。按無菌操作各將其

10、中的一管打開棉塞，將棉塞放入滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)。經(jīng)過預(yù)定時間后，再將棉塞通過火焰塞好試管。連同對照一起培養(yǎng)，48小時后檢驗有無雜菌生長。,1.2 實驗環(huán)境控制,1.2.2 檢驗時間 （一）空氣滅菌后的檢驗 無菌室用甲醛或其它藥劑熏蒸后，在開始使用前30min或1小時打開培養(yǎng)皿蓋子，至使用無菌室時蓋好，其目的是為了檢驗無菌室內(nèi)空氣滅菌的效果。 （二）紫外線滅菌效果的檢驗 無菌室用紫外線燈照射后，可在不同高度和不同位置用瓊脂平板檢驗空氣中的雜菌，以判斷紫外線的滅菌效果。必要時應(yīng)調(diào)整照射時間或紫外線燈的高度。,1.2 實驗環(huán)境控制,（三）操作過程中空氣污染情況的檢驗 為了檢驗在使用無菌室的過程中，由于人

11、員的進(jìn)出、器材的搬放、接種操作的動作等原因造成的空氣污染的情況，可在準(zhǔn)備工作結(jié)束后接種操作開始時打開蓋子，經(jīng)5min、30min或直到工作結(jié)束時再蓋好，以檢驗在不同的使用時間內(nèi)空氣污染的程度。,1.2 實驗環(huán)境控制,1.2.3 檢驗結(jié)果分析 檢驗用的平板或斜面，在30培養(yǎng)48小時后，檢驗是否長有菌落、菌落的數(shù)量，并由菌落形態(tài)判斷雜菌的種類。一般要求平板開蓋5min者應(yīng)不超過3個菌落；斜面開塞30min者應(yīng)不長菌落為合格。從空氣中雜菌的種類可以考慮采取有效措施，增進(jìn)滅菌效果。如霉菌較多，可先用5%石炭酸滅菌后，再用甲醛熏蒸；如細(xì)菌較多時，可采用乳酸與甲醛交替熏蒸的辦法。,返回,1.3 常用儀器及

12、其使用要領(lǐng),1.3.1 顯微鏡 （一）顯微鏡的基本結(jié)構(gòu) 普通光學(xué)顯微鏡由機械和光學(xué)兩大部分組成。機械部分包括鏡座、鏡臂、載物臺、物鏡轉(zhuǎn)換器、鏡筒和調(diào)節(jié)器等；光學(xué)部分包括目鏡、物鏡、聚光器、虹彩光圈及反光鏡。顯微鏡結(jié)構(gòu)的各部分見圖1-1。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-1 顯微鏡構(gòu)造示意圖,1.物鏡轉(zhuǎn)換器；2.物鏡；3.游標(biāo)卡尺；4.載物臺；5.聚光器；6.虹彩光圈 7.光源；8.鏡座；9.點源開關(guān)；10.光源滑動變阻器；11.粗調(diào)螺旋； 12.微調(diào)螺旋；13.鏡臂；14.鏡筒；15.目鏡；16.標(biāo)本移動螺旋,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1. 鏡筒 鏡筒上端裝目鏡，下端接轉(zhuǎn)換器。鏡筒有單

13、筒和雙筒兩種。單筒有直立式和后傾式兩種。雙筒全是傾斜式的，其中一個筒有屈光度調(diào)節(jié)裝置，以備兩眼視力不同者調(diào)節(jié)使用。兩筒之間可調(diào)距離，以適應(yīng)兩眼寬度不同者調(diào)節(jié)使用。 2. 物鏡轉(zhuǎn)換器 轉(zhuǎn)換器裝在鏡筒的下方，其上有3個孔，有的有4個或5個孔，用于安裝不同規(guī)格的物鏡。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),3. 載物臺 又稱鏡臺，是放置標(biāo)本的地方，多數(shù)為方形和圓形的平臺，中央有一通光孔；載物臺上有移動器，作用是夾住和移動標(biāo)本，轉(zhuǎn)動螺旋可使標(biāo)本前后和左右移動，其上的刻度標(biāo)尺可指明標(biāo)本所在位置。 4. 鏡臂 鏡臂支撐鏡筒、載物臺、聚光器和調(diào)節(jié)器。鏡臂有固定式和活動式（可改變傾斜度）兩種。,1.3 常用儀器及其使

14、用要領(lǐng),5. 鏡座 鏡座連接鏡臂，支撐整臺顯微鏡，其上有反光鏡。 6. 調(diào)焦裝置 調(diào)節(jié)物鏡和被觀察物體之間距離的機件。有鏡臂調(diào)節(jié)器和鏡臺調(diào)節(jié)器兩種，前者通過升降鏡臂來調(diào)焦距，后者通過升降載物臺來調(diào)焦距。包括大、小螺旋調(diào)節(jié)器各一個，前者又稱粗調(diào)節(jié)器，后者也叫微調(diào)節(jié)器，通過調(diào)節(jié)器調(diào)焦，可清晰地觀察到標(biāo)本。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),7. 物鏡 是接近被觀察物品（標(biāo)本）的鏡頭，亦稱接物鏡。根據(jù)物鏡的放大倍數(shù)和使用方法的不同，分為低倍物鏡、高倍物鏡和油鏡三種，低倍物鏡有4、10、20；高倍物鏡有40和45；油鏡有90、95和100等。數(shù)字越大，放大倍數(shù)越高。 8. 目鏡 是接近觀察者的眼睛的鏡頭，

15、亦稱接目鏡。把經(jīng)物鏡放大的實像再放大一次，并映入觀察者的眼中。通常有5、10、16等規(guī)格。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),9. 聚光器 安裝在載物臺下，能將平行的光線聚焦于標(biāo)本，增強照明度。聚光器可以升降。 10. 反光鏡 是普通光學(xué)顯微鏡的取光設(shè)備，使光線射向聚光鏡，分平、凹兩面。 11. 內(nèi)光源 是較好的光學(xué)顯微鏡自身帶有的照明裝置，安裝在鏡座內(nèi)部，由強光燈泡發(fā)出光線，通過安裝在鏡座的集光鏡射入聚光鏡。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),（二） 顯微鏡的使用方法 1. 顯微鏡的放置 從顯微鏡箱或柜內(nèi)取出或放入顯微鏡時，應(yīng)一手提鏡臂，另一手托鏡座，讓顯微鏡直立，防止目鏡從鏡筒中脫落。顯微鏡應(yīng)直立

16、放置在桌上。離桌緣3cm，檢查各部件是否完好，鏡身、鏡頭必須清潔。 2 .標(biāo)本放置 下降載物臺或升高鏡筒，使物鏡遠(yuǎn)離載物臺，將標(biāo)本玻片置于載物臺上，用標(biāo)本夾夾住，移動推進(jìn)器使觀察對象處在物鏡的正下方。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),3 .低倍鏡觀察 將低倍鏡對正下方，側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)上升載物臺或下降鏡筒，使物鏡與玻片接近，距離約0.5cm處，開放光圈，下降聚光器。如有內(nèi)置光源燈可通過調(diào)節(jié)電壓以獲取適當(dāng)?shù)恼彰髁炼?；如使用反光鏡采集自然光或燈光作為照明光源時，應(yīng)根據(jù)光源的強度及所用物鏡的放大倍數(shù)，選用凹面或平面反光鏡并調(diào)節(jié)其角度。 再由目鏡觀察，同時轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器下降載物臺或升高鏡筒使物鏡緩

17、緩遠(yuǎn)離玻片，標(biāo)本在視野中顯現(xiàn)后，再使用微調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)至圖像清晰。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),4 .高倍鏡觀察 在低倍鏡下找到合適的目標(biāo)并將其移至視野中心后，側(cè)面注視，輕輕轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將高倍鏡移至正下方。對聚光器光圈及視野亮度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)后，用微調(diào)節(jié)器使物像清晰，利用推進(jìn)器移動標(biāo)本仔細(xì)觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。 在一般情況下，當(dāng)物像在一種物鏡中已清晰聚焦后，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置進(jìn)行觀察時，物像將保持基本準(zhǔn)焦?fàn)顟B(tài)，這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),5 .油鏡觀察 使用同焦顯微鏡時，在高倍鏡或低倍鏡下找到要觀察的區(qū)域后，移開鏡頭，在待觀察的區(qū)域滴加12鏡油，

18、將油鏡轉(zhuǎn)至油中，調(diào)節(jié)光強，使視野的亮度合適，用微調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)物像清晰為止。 對于不等焦的顯微鏡，用粗調(diào)節(jié)器下降載物臺或升高鏡筒使物鏡逐漸遠(yuǎn)離玻片，在標(biāo)本觀察區(qū)滴加鏡油，然后將油鏡轉(zhuǎn)至鏡筒下方，須在側(cè)面注視下，用粗調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)上升載物臺或下降鏡筒，使物鏡與玻片接近，將油鏡前端浸入鏡油中，并幾乎與標(biāo)本相接,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),6 .顯微鏡用畢后的處理 用粗調(diào)節(jié)器使物鏡遠(yuǎn)離玻片，取下載玻片。 用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡紙蘸少許鏡頭清洗液擦去鏡頭上殘留的油跡，最后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的鏡頭清洗液。 切忌用手或其它紙擦拭鏡頭，以免使鏡頭沾上污漬或產(chǎn)生劃痕，影響觀察。 用擦鏡紙清潔其它

19、物鏡及目鏡；用綢布清潔顯微鏡的金屬部件。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),（三）顯微鏡的維護(hù)和保養(yǎng) 顯微鏡是貴重精密的光學(xué)儀器，正確的使用、維護(hù)與保養(yǎng)，不但觀察物體清晰，而且延長顯微鏡的使用壽命。 1 .顯微鏡應(yīng)放置在通風(fēng)干燥，灰塵少，不受陽光直接曝曬的地方。不使用時，用有機玻璃或塑料布防塵罩罩起來。也可套上布罩后放入顯微鏡箱內(nèi)或顯微鏡柜內(nèi)，并在箱或柜內(nèi)放置干燥劑。 2 .顯微鏡要避免與酸、堿及易揮發(fā)具腐蝕性的化學(xué)物品放在一起，以免顯微鏡受損。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),3 .顯微鏡應(yīng)防止震動和暴力。粗、微調(diào)節(jié)螺旋、聚光器螺旋和標(biāo)本移動器等機械部分要靈活而不松動，如不靈活可在滑動部位滴加少許

20、潤滑油。 4 .透鏡表面有污垢時，可用清潔的脫脂紗布或擦鏡紙，沾上少許鏡頭清洗液（二甲苯或石油精）揩拭，切忌用酒精，否則透鏡上的膠將被溶解，而使透鏡脫落。 5 .用油鏡觀察后，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后用擦鏡紙沾少許鏡頭清洗液擦拭，最后用干凈的擦鏡紙擦干。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),6 .當(dāng)顯微鏡以燈泡為光源，且需要更換時，可將儀器底部翻轉(zhuǎn)，抓住燈座反時針轉(zhuǎn)90取下燈座，拔下燈泡換上新的燈泡，然后把接插件卡腳對準(zhǔn)底座上兩槽口，順時針轉(zhuǎn)90即可。 7.換保險絲時，握住保險絲座，反時針旋下保險絲座，換上好的保險絲，順時針旋上保險絲座即可。 8.儀器長期使用后應(yīng)注意在各轉(zhuǎn)動部分加些潤滑脂，所

21、用油脂宜應(yīng)黏度適當(dāng)，避免酸性。 9.顯微鏡結(jié)構(gòu)精密，零件不宜隨意拆卸。遇故障可送廠家或有關(guān)儀器廠修理。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.2 恒溫培養(yǎng)箱 恒溫培養(yǎng)箱可分為兩大類：即直熱式恒溫培養(yǎng)箱和隔水式恒溫培養(yǎng)箱。 （一）直熱式恒溫培養(yǎng)箱 為直接加熱空氣方式的培養(yǎng)箱，采用“繼電器控溫電加熱空氣”技術(shù)，結(jié)構(gòu)為：保溫板材箱內(nèi)裝繼電器控溫電加熱器。這種培養(yǎng)箱造價低，制造工藝簡單，但恒溫效果較差，溫度波動大。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),（二）隔水式恒溫培養(yǎng)箱 為間接加熱空氣方式的培養(yǎng)箱，采用“繼電器控溫電加熱水控制空氣溫度”技術(shù)，結(jié)構(gòu)為：簿鋼板外殼內(nèi)襯玻璃棉，內(nèi)置紫銅板水箱，水箱內(nèi)裝繼電器控

22、溫電加熱器，設(shè)雙層門。這種培養(yǎng)箱制造工藝復(fù)雜，造價高，但由于先用電加熱水層，再由水傳熱至箱內(nèi)空氣，因而溫度上升和下降緩慢，加之可通過雙層門的玻璃內(nèi)門觀察，對箱內(nèi)溫度影響小，故恒溫效果好，調(diào)溫為20600.5，很適于微生物培養(yǎng)之用。見圖1-2。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-2 培養(yǎng)箱,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),使用注意事項： 1. 箱內(nèi)不應(yīng)放入過熱過冷的東西，以免箱內(nèi)溫度急劇變化，阻礙培養(yǎng)物的生長。 2. 箱內(nèi)應(yīng)放入水容器一只，以維持培養(yǎng)箱內(nèi)濕度或減少培養(yǎng)物中水分的大量蒸發(fā)。 3. 培養(yǎng)箱底部因接近電源，溫度較高，故培養(yǎng)物不宜放在底層。 4. 箱內(nèi)培養(yǎng)物不宜太擠，以免溫空氣不能流通，

23、而使箱內(nèi)溫度不勻。 5. 箱內(nèi)要保持清潔，并經(jīng)常用3%來蘇兒液消毒，再用清潔抹布擦凈。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.3 滅菌器 （一）干熱滅菌箱 滅菌箱正面的側(cè)邊，裝有溫度指針，用于定溫；溫度指針下面有指示燈，用于指示是否達(dá)到定溫；箱內(nèi)有感溫探頭，用于探測溫度。指針、指示燈、探頭、電加熱器均連接于“溫度調(diào)節(jié)器”，通過溫度調(diào)節(jié)器使箱內(nèi)保持一定溫度。如溫度未達(dá)定溫，電加熱器工作，箱內(nèi)溫度上升，如溫度超過定溫，“溫度調(diào)節(jié)器”自動切斷電加熱器的電源，停止加熱，箱內(nèi)溫度即可下降。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-3 干熱滅菌箱,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),使用方法： 1. 適宜用干熱滅菌

24、箱滅菌的物品是玻璃器皿和金屬器皿，而塑料制品、橡皮制品、天然和化學(xué)纖維制品、培養(yǎng)基等，均不適用干熱滅菌。 2進(jìn)箱，物品放在干熱滅菌箱中的鐵擱板上，關(guān)箱門。 3. 定溫，常用滅菌溫度為160或170。 4. 滅菌，接通電源，干熱滅菌箱升溫至定溫滅菌，160維持2h，170維持11.5h。 5. 出箱，關(guān)斷電源，待溫度下降至50左右，開箱門取出被滅菌的物品。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),注意： 1、滅菌時，溫度不宜超過170，以免易燃物，如棉塞、包扎紙等被燒焦。 2、高溫時，切勿開箱門，以免冷空氣驟然進(jìn)入使滅菌的玻璃器皿炸裂。 3、絕不允許先將溫度上升到100以上再放器皿，以免玻璃器皿驟然在高溫

25、下炸裂。 干熱滅菌箱用于烘干玻璃器皿時，定溫120，持續(xù)30min即可。須打開頂部氣孔，以利水蒸氣散出?？蓡酉鋬?nèi)鼓風(fēng)設(shè)備，加速干燥。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),（二）高壓蒸汽滅菌器 高壓蒸汽滅菌器的滅菌效果比干熱滅菌箱好，適用所有物品滅菌，通常用于培養(yǎng)基、生理鹽水、廢棄培養(yǎng)物、耐高熱高壓的藥品、紗布等滅菌。高壓蒸汽滅菌器有手提式、直立式和橫臥式幾種，它們的構(gòu)造和滅菌原理是一樣的，僅是容量不同而已。手提式高壓蒸汽滅菌器容積最小，業(yè)務(wù)小的實驗室大多使用它；橫臥式高壓蒸汽滅菌器容積大，只有大型實驗室或生產(chǎn)上使用。一般實驗室常使用直立式高壓蒸汽滅菌器。直立式高壓蒸汽滅菌器見圖1-4。,1.3 常

26、用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-4 高壓蒸汽滅菌器,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),使用方法： 1. 加水 立式鍋可直接加水至鍋內(nèi)底部隔板以下2/3高處；有加水口和水位窗者，由加水口加水至止水線處。 2. 裝鍋 把需滅菌的器物放入鍋內(nèi)（器物不要裝得太滿，以免影響滅菌效果），蓋好鍋蓋，將螺旋柄擰緊（對角式均勻擰緊），打開排氣閥。 3. 點火 啟動開關(guān)，電加熱器工作。 4. 排放冷空氣 鍋內(nèi)水沸騰后，蒸汽逐漸驅(qū)趕鍋內(nèi)冷空氣，當(dāng)溫度計指針指向100時，證明鍋內(nèi)已充滿蒸汽，冷空氣被驅(qū)盡，關(guān)閉排氣閥。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),5. 升壓、保壓與滅菌 關(guān)閉排氣閥以后，鍋內(nèi)成為密閉系統(tǒng)，蒸汽不斷增多，壓力計和

27、溫度計的指針上升，當(dāng)壓力達(dá)到0.1MPa，溫度為121時，開始滅菌計時；控制熱源，維持0.1Mpa、12130min即完成滅菌。 6. 降壓與排氣 完成滅菌后停止加熱，任滅菌鍋自然冷卻降壓。當(dāng)壓力降至0.025MPa以下后，可打開排氣閥排除余汽。 7. 出鍋 待鍋內(nèi)壓力降至大氣壓時揭開鍋蓋，取出器物，排掉鍋內(nèi)剩余水。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.4 冰箱 用于儲存培養(yǎng)基和培養(yǎng)物的設(shè)備，儲存病毒必須使用低溫冰箱，儲存一般培養(yǎng)基和培養(yǎng)物用普通冰箱即可。 低溫冰箱整個箱壁內(nèi)側(cè)圍繞冷卻管，可保持2070左右的低溫。 使用冰箱時，必須注意以下事項： 1.冰箱適用電壓與所供電壓一致。如所供電壓為

28、220V，而冰箱適用110V電壓時，必須用變壓器調(diào)壓。 2.供電線路和保險絲滿足冰箱的工作電流要求。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),3.使用時，應(yīng)將溫度調(diào)節(jié)至所需要的溫度。一般應(yīng)使水在冷卻室中結(jié)冰，使儲藏箱下部溫度為510左右。 4.當(dāng)冰箱冷卻室結(jié)冰太厚時，會導(dǎo)致溫度調(diào)節(jié)器的不靈敏，此時，必須停電融冰后，再投入使用。 5.冰箱門打開時間愈短愈好，打開次數(shù)越少越好。 6. 不宜將溫度過高的物品放入冰箱內(nèi)，以免消耗電能過大、機件工作時間過長，縮短冰箱使用壽命。 7. 冰箱內(nèi)應(yīng)保持整潔，如箱內(nèi)有霉菌生長，應(yīng)清洗并用福爾馬林熏蒸消毒。 8. 保存烈性病菌、病毒的冰箱，要專人保管，并要加鎖。,1.3 常

29、用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.5 水浴鍋 水浴箱也叫水溫箱，用于融化培養(yǎng)基和各種保溫操作。該設(shè)備是金屬制成的長方形箱，箱內(nèi)盛水，箱底裝有電熱絲，并有自動調(diào)節(jié)溫度裝置控制溫度恒定。如圖1-5所示。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-5 水浴箱,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.6 細(xì)菌過濾器 目前常用的濾器有混合材質(zhì)和全玻材質(zhì)。如圖1-6所示。 （一）蔡氏濾器 蔡氏濾器為金屬制成的杯狀漏斗，在杯的底部夾一層石棉濾板，濾板下有一塊金屬篩板，防止抽氣時石棉濾板下陷。 按濾孔的大小，石棉板分為三種： 1. K號，濾孔最大，可濾除一般顆粒物。 2. KK號，濾孔較小，為濾除大多數(shù)細(xì)菌。 3. EKS

30、號，濾孔更小，可濾除較大病毒。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-6 細(xì)菌過濾器,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),（二）玻璃濾器 該器組件全部為玻璃質(zhì)，其中，濾板由玻璃細(xì)紗加熱壓成，分1、2、3、4、5、6共六級。號碼愈大，孔徑愈小，孔徑0.152.0m不等，5和6級可阻止細(xì)菌通過。 玻璃濾器用后要立即處理。過濾病原微生物后的濾器，要先用不凝固蛋白質(zhì)的消毒藥劑浸泡3天，以免堵塞濾孔；消毒后的濾器，用蒸餾水倒抽；再在濾器內(nèi)加入三分之二洗滌液，自然流出氧化殘留物；再先后用自來水、蒸餾水抽吸過濾至濾液呈中性為止。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),如果濾器的濾孔被凝固的蛋白質(zhì)顆粒堵塞，可將濾器浸泡于37

31、的1%胰蛋白酶溶液（pH7.47.6）中消化24h，再按上法抽洗清潔。 濾器為負(fù)壓過濾，需要連接一抽濾瓶，將濾瓶嘴用橡皮管連接于抽氣機上抽氣過濾。過濾負(fù)壓不宜低于（46.666.6）KPa（350500mmHg），可用水銀真空計指示，也可觀察濾瓶內(nèi)濾出液情況判斷。如濾液出現(xiàn)大量氣泡，說明負(fù)壓過高，宜關(guān)閉抽氣機，停止抽氣，待氣泡消逝后再抽。抽濾瓶的嘴應(yīng)塞入少量棉花，以防放氣時空氣中細(xì)菌沖入瓶內(nèi)。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.7 超凈工作臺 用于創(chuàng)造局部無菌環(huán)境的設(shè)備。超凈工作臺是一個由預(yù)過濾器、高效過濾器、空氣幕風(fēng)機有效排除空氣中的懸浮灰塵、微生物，由紫外燈或噴霧滅菌，裝有照明燈、操作

32、臺面板、配電裝置，并有消音、減震設(shè)備的箱體，如圖1-7所示。超凈工作臺是沒有建設(shè)無菌室的微生物實驗室的必備設(shè)備，也可用于有更嚴(yán)格無菌要求或其他小環(huán)境條件要求的微生物接種、分離和鑒定等操作。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-7 超凈工作臺,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),使用超凈工作臺應(yīng)注意以下幾點： 1清除工作臺內(nèi)的灰塵、雜物。 2在使用超凈工作臺進(jìn)行無菌操作前30min啟動過濾、通風(fēng)裝置，檢測操作區(qū)氣流速度、潔凈度，并滅菌。 3穿緊口工作服，戴緊口帽。 4. 嚴(yán)禁在超凈工作臺前做任何可能增加空氣灰塵量的動作。 5. 必須在超凈工作臺內(nèi)使用的物品要放在下風(fēng)側(cè)。 6. 在超凈工作臺內(nèi)使用的物品

33、必須是不易起纖塵的。 7. 在全部無菌操作結(jié)束后，才能停止工作臺運轉(zhuǎn)。 8. 定期進(jìn)行性能檢測。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.8 電動抽氣機 電動抽氣機又叫真空泵，由電動機轉(zhuǎn)輪、輪帶和偏心輪等組成。通電后，電動機帶動偏心輪，即可將與其相關(guān)的容器內(nèi)的空氣抽出。如圖1-8所示。 電動抽氣機主要供細(xì)菌過濾器、厭氧培養(yǎng)、培養(yǎng)基過濾和真空干燥時抽氣用。使用抽氣機時，應(yīng)注意以下事項： 1. 抽氣機的適用電壓要與所供電壓一致，否則，要經(jīng)變壓器變壓后才能使用。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),2. 要保持機油箱內(nèi)的油量，防止機器損壞。 3. 必須使用硬質(zhì)的連接管，保證氣路暢通以確保器皿內(nèi)抽真空效果。

34、4被抽氣的器皿，必須有良好的抗壓性能，以防內(nèi)部真空后被外部空氣破碎。 5如果在抽濾過程中濾液出現(xiàn)大量氣泡，可以暫時停機，待氣泡消失后，再開機繼續(xù)抽氣。 6如果要作冷凍干燥，則需用精密度高、功率大的抽氣機。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-8 電動抽氣機,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.9 電動離心機 離心機為進(jìn)行病菌病毒檢驗鑒定中不可缺少的工具。離心機的種類很多，實驗室常用小型傾斜電動離心機。小型傾斜電動離心機機頂正中有孔蓋，以便放入和取出離心試管，內(nèi)有離心管座四或六個，均勻地繞離心軸排列，底座上裝有開關(guān)和調(diào)速器。如圖1-9所示。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-9 小型傾斜電動

35、離心器,A-離心機斷面 1.轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)器 2.電動機 3.金屬套管 4.護(hù)蓋 5.玻管； B-離心器全形 6.蓋,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),使用離心機時應(yīng)注意： 1. 應(yīng)放在平穩(wěn)的地方，并保持水平。 2將裝有標(biāo)本的離心試管放入離心管座的金屬套管內(nèi)，兩兩成對，每個重量基本平衡。 3放好試管后，蓋上孔蓋。 4開啟電源開關(guān)，先用最低轉(zhuǎn)速，逐漸調(diào)節(jié)到最高轉(zhuǎn)速。 5. 達(dá)到離心時間后，逐步降低轉(zhuǎn)速，待降到最低轉(zhuǎn)速后，關(guān)閉電源開關(guān)。 6待離心機自然停止轉(zhuǎn)動，打開孔蓋，取出離心試管。 7. 離心試管須加棉塞時，離心前應(yīng)將棉塞上端用橡皮圈扎緊在試管外或用大頭針別住，以免離心時棉塞沉入管內(nèi)。 8. 應(yīng)經(jīng)常保持

36、轉(zhuǎn)軸潤滑。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.10 天平 (一)粗天平 粗天平又稱工業(yè)天平或藥物天平，是用于粗略稱量的儀器。常用的有100g、200g、500g、1000g四種，感量為千分之一，供配制普通試劑和粗略稱量之用。 (二)電子天平 這類天平只有一個盤，構(gòu)造比一般天平復(fù)雜，但使用起來卻十分方便。,返回,1.4 常用器皿,1.4.1 常用的玻璃器皿 微生物實驗室常用的玻璃器皿見表1-1所示。,表1-1 常用的玻璃器皿,1.4 常用器皿,1.4.2 常用的玻璃器皿的洗滌與消毒 微生物學(xué)實驗中常用的培養(yǎng)皿、試管和三角瓶等的洗滌、消毒質(zhì)量，直接影響實驗結(jié)果，因此，這項工作不容忽視。 （一）

37、新玻璃器皿的洗滌法 新購置的玻璃器皿含有游離堿，應(yīng)用2%的鹽酸溶液浸泡數(shù)小時，再用水充分沖洗干凈。,1.4 常用器皿,（二）含有瓊脂培養(yǎng)基的玻璃器皿的洗滌法 先用小刀或鐵絲將器皿中的瓊脂培養(yǎng)基刮下。如果瓊脂培養(yǎng)基已經(jīng)干燥，可將器皿放在水中蒸煮，使瓊脂熔化后趁熱倒出，用水洗滌，并用刷子沾肥皂擦洗內(nèi)壁，然后用自來水洗去肥皂。是否已將油垢完全除去，可以這樣檢查：即將瓶子或試管的外壁擦干，如果水在內(nèi)壁是均勻地分布一薄層，可以認(rèn)為是將油垢除去了。如果經(jīng)過這樣洗滌的器皿，油垢還未洗凈，就需用洗滌液來清洗。,1.4 常用器皿,（三）載玻片及蓋玻片的洗滌法 新載玻片和蓋玻片先在2%的鹽酸溶液中浸1h，以后用自

38、來水沖洗23次，最后用蒸餾水換洗23次。也可用1%的洗衣粉洗滌，新載玻片用洗衣粉洗滌時，先將洗衣粉液煮沸，然后將要洗的新載玻片散入煮沸液中，持續(xù)煮沸1520min(注意煮沸液一定要浸沒玻片，否則會使玻片鈣化變質(zhì))，待冷后用自來水沖洗至中性。新蓋玻片用洗衣粉洗滌時，將蓋玻片散入1%的洗衣粉液中，煮沸l(wèi)min，待沸點泡平下后，再煮沸1min，。,1.4 常用器皿,1.4.3 常用的玻璃器皿的包裝 玻璃器皿使用前必須經(jīng)過滅菌，而滅菌前應(yīng)預(yù)先將玻璃器皿包裝好。 （一）棉塞的制作 常見的做法有：將棉花鋪成方形，對角方向不完全對折，垂直于對折線方向卷起來，如圖1-10所示；或?qū)⒚藁ㄤ伋煞叫?，于其中央襯以小

39、塊棉花，再將四邊棉花包攏。制作好的棉塞最好用紗布包好，以利于使用和保存。另外，也可根據(jù)需要，購買市售的泡沫塑料塞。,1.4 常用器皿,圖1-10 棉塞的制作過程,1.4 常用器皿,制作質(zhì)量好的棉塞的形狀、大小、松緊，應(yīng)與試管口(或三角瓶口)完全適合。過緊會妨礙空氣流通，不便塞拔，過松則達(dá)不到濾菌的目的。棉塞過大，塞不進(jìn)試管口(或三角瓶口)，過小則容易掉進(jìn)試管內(nèi)。正確的棉塞，塞頭較大，約占棉塞總長的1/3，留在管外，塞體約占棉塞總長的2/3，塞在管內(nèi)，如圖1-11所示。 棉塞應(yīng)塞在試管內(nèi)，用報紙或牛皮紙包裝后一道滅菌。,1.4 常用器皿,圖1-11 試管帽和棉塞,1.試管帽；2.正確的棉塞；3.

40、4.不正確的棉塞,1.4 常用器皿,（二）吸管的包扎 將非脫脂棉塞入管尾，長度約2cm，后端距尾口1.5cm，松緊要適當(dāng)，以吹氣時通氣流暢而不滑動為度。將吸管尖端以30角放在寬45cm、長55cm的紙條(報紙或牛皮紙)的一端，折返紙頭包住管尖后，以螺旋形式包裹吸管，將包裹卷緊的紙棒在管尾端打一個結(jié)，以防吸管脫出。如圖1-12所示，包好后等待滅菌。,1.4 常用器皿,圖1-12 單支刻度吸管的包扎,1.4 常用器皿,（三）培養(yǎng)皿的包扎 培養(yǎng)皿可按4套或8套為一疊，用紙包扎好，如圖1-13所示，待滅菌。或直接將培養(yǎng)皿裝入金屬筒內(nèi)進(jìn)行干熱殺菌。,圖1-13 培養(yǎng)皿的包扎,返回,1.5 小型微生物廠主要儀器及設(shè)備,小型微生物廠的主要儀器及設(shè)備見表1-2。 表1-2 小型微生物廠的主要儀器及設(shè)備一覽表,1.5 小型微生物廠主要儀器及設(shè)備,表1-2(續(xù))小型微生物廠的主要儀器及設(shè)備一覽表,