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1、河南工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 畢業(yè)論文 題目：凱氏定氮法在測量大豆蛋白的不確定度分析 摘 要  目 錄 摘 要 1 緒 論 1.1 本課題的來源、目的及意義 1.2 課題背景及國內(nèi)外研究現(xiàn)狀 2 凱氏定氮法 2.1 概述 2.2 凱氏定氮法的特點(diǎn) 3 凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)的幾個問題 3.1凱氏定氮法的原理和過程 3.2 凱氏定氮法測定的蛋白質(zhì)—粗蛋白 3.3 蒸餾時堿的用量及溶液顏色的變化 3.3.1堿的用量 3.3.2溶液顏色的變化 3.4 硼酸吸收液顏色的變化 3.5討論

2、 4 凱氏定氮法中各試劑對消化時間的影響 4.1 概述 4.2 儀器與試劑 4.3試驗(yàn)方法 4.4 結(jié)果與討論 5 凱氏定氮法消化裝置的改進(jìn) 5.1 概述 5.2消化的原裝置 5.3 改進(jìn)后的新裝置 6 凱氏定氮法測定大豆中粗蛋白不確定分析 6.1 原理和方法 6.2 不確定度分量及計算 6.3 討論 7 凱氏定氮法測定大豆蛋白質(zhì)的不確定度分析 7.1 原理 7.2 蛋白質(zhì)計算數(shù)學(xué)模型 7.3擴(kuò)展不確定度分析 7.4最后結(jié)果表示 8 凱氏定氮法測定大豆蛋白質(zhì)含量的方法 8.1 概述 8.2 試劑與儀器 8

3、.3操作方法 8.4方法與討論 9 大豆中蛋白質(zhì)測定應(yīng)注意的事項(xiàng)探討 9.1 取樣 9.2 消化 9.3蒸餾 9.4滴定 9.5結(jié)果計算 10 結(jié)束語 10.1 本文總結(jié) 10.2 展望未來 致 謝 參考文獻(xiàn) 畢業(yè)設(shè)計任務(wù)書 1 緒 論 1.1 本課題的來源、目的及意義 蛋白質(zhì)在生物體內(nèi)占有特殊的地位，它和核酸是構(gòu)成原生質(zhì)的主要成分，是生命現(xiàn)象的物質(zhì)基礎(chǔ)。食物中的蛋白質(zhì)是人體中氮的唯一來源。具有糖類和脂肪不可替代的作用。作為生命的物質(zhì)基礎(chǔ)之一，蛋白質(zhì)在催化生命體內(nèi)各種反應(yīng)進(jìn)行、調(diào)節(jié)代謝、抵御外來物質(zhì)入侵及控制遺傳信息

4、等方面都起著至關(guān)重要的作用。蛋白質(zhì)的分離與定性、定量分析是生物化學(xué)和其他生物學(xué)科、食品檢驗(yàn)、臨床檢驗(yàn)、疾病診斷、生物藥物分離提純和質(zhì)量檢驗(yàn)中最重要的工作。蛋白質(zhì)是由a一氨基酸以酰胺鍵(肽鍵)相結(jié)合形成的結(jié)構(gòu)極其復(fù)雜的高分子化合物，是生物體中的主要含氮物質(zhì)。蛋白質(zhì)與細(xì)胞結(jié)構(gòu)、酶、激素、病毒、免疫、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和遺傳等密切相關(guān)，蛋白質(zhì)測定方法一般可分為間接方法和直接方法。間接方法是通過測定樣品中蛋白質(zhì)的含氮量進(jìn)行推算蛋白質(zhì)含量的方法。直接方法則是根據(jù)蛋白質(zhì)的物理和化學(xué)性質(zhì)，直接測定蛋白質(zhì)含量的方法。蛋白質(zhì)是生物體中含量最高，功能最重要的生物大分子，與生命的起源和進(jìn)化都密切相關(guān)，因此蛋白質(zhì)也是生命科學(xué)中

5、極為重要的研究對象。關(guān)于蛋白質(zhì)的分析研究，一直是化學(xué)家及生物學(xué)家極為關(guān)注的問題，其含量的測定在生化分析和臨床分析中具有重要意義，研究和開發(fā)新的、高靈敏度的蛋白質(zhì)測定方法是生物化學(xué)研究的一個活躍領(lǐng)域。測定蛋白質(zhì)的方法不斷發(fā)展，主要有凱氏定氮法(國際經(jīng)典測定方法)、分光光度法、電化學(xué)法、滴定法、高壓液相色譜法、電泳法、免疫法等。了解各種蛋白質(zhì)測定方法的原理和技術(shù)特點(diǎn)，對在實(shí)際工作中選擇適宜的分析方法具有重要的指導(dǎo)意義。 1.2 課題背景及國內(nèi)外研究現(xiàn)狀 蛋白質(zhì)是食品檢驗(yàn)中經(jīng)常進(jìn)行檢測的項(xiàng)目。測定食品中蛋白質(zhì)的含量，了解食品的質(zhì)量，為合理配膳提供數(shù)據(jù)，保證不同人群對蛋白質(zhì)的需要，掌握食品的營養(yǎng)

6、價值和品質(zhì)的變化，以達(dá)到合理利用食品資源。近年來，人們發(fā)展了許多測定蛋白質(zhì)的方法，如雙縮脲法、分光光度法、凱氏定氮法、紫外吸收法、染料結(jié)合法、質(zhì)譜分析法等，質(zhì)譜分析是測定結(jié)果最準(zhǔn)確的測定方法；凱氏定氮法適用范圍最廣泛，分光光度法是最為簡便快速的測定方法，但就方法的準(zhǔn)確性、精密度以及應(yīng)用程度而言，國際經(jīng)典測定方法一凱氏定氮法為首選 ，該法也是相關(guān)專業(yè)學(xué)生必須掌握的經(jīng)典試驗(yàn)方法之一?，F(xiàn)在盡管有很多先進(jìn)的自動或半自動凱氏定氮儀，但這些儀器不僅價格昂貴，且需專門試劑，目前尚難普及，而對大批量的學(xué)生試驗(yàn)更不適合，所以凱氏定氮法適用范圍是目前分析含氮化合物最常 用的方法。 2 凱氏定氮法 2.1概述

7、 將蛋白質(zhì)樣品在硫酸銅的催化下，用氧化性試劑消化分解轉(zhuǎn)化為銨離子，然后將含有銨試液置于蒸餾瓶中，加高濃度堿使銨離子轉(zhuǎn)化為氨，然后與硫酸結(jié)合生成硫酸銨，再加熱蒸餾，用過是的標(biāo)準(zhǔn)硼酸溶液吸收氨氣，再用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定H2B03，以甲基紅作為指示劑，測出含氮量，將結(jié)果乘以換算系數(shù)，計算出粗蛋白質(zhì)含量。 2.2凱氏定氮法的特點(diǎn) 測定蛋白質(zhì)最常用的方法是凱氏定氮法，它是測定試樣中總有機(jī)氮最準(zhǔn)確和最簡單的方法之一，被國際國內(nèi)作為法定的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法。該法關(guān)鍵環(huán)節(jié)有濃硫酸用量、催化劑選擇、消化時間、氫氧化鈉用量和硼酸吸收液指示劑選擇等。樣品在消化時加入濃硫酸的量必須過量，一是脫水作用，將樣品中有機(jī)物

8、脫水然后碳化成c；二是氧化作用，濃硫酸和硫酸鉀、硫酸銅一同加熱使溫度達(dá)到400℃ 以上，碳還原硫酸生成SO3，而碳本身被氧化成CO2；三是分解作用，將蛋白質(zhì)分解，SO2還原N生成NH4 ，本身被氧化成SO3；四是吸收作用，生成的NH4 與濃硫酸反應(yīng)生成(NH4)2SO4 ；五是生成的(NH4)2SO4保存在濃硫酸溶液中不至于損失 。 樣品消化過程要加入催化劑，加入硫酸鉀能夠提高分解時溶液的溫度，使溶液沸點(diǎn)由290℃提高到400℃ ，加入硫酸銅、氧化汞和硒粉則能促進(jìn)試樣的分解，縮短消化時間。有試驗(yàn)證明，用硒粉作催化劑可加快消化速率，縮短試樣消化時間，其測定結(jié)果與硫酸銅作為催化劑的傳統(tǒng)方法

9、相當(dāng)吻合I5]，但硒粉使用量過多或與硫酸作用時間過久會使銨態(tài)氮成為分子氮而損失I6]。雖然加入氧化汞能夠節(jié)省消化時間，但由于污染較重，多用于仲裁檢驗(yàn)I7]。目前包括國標(biāo)方法大多加入硫酸鉀和硫酸銅混合催化劑，但眾多文獻(xiàn)中二者用量的比例有所不同，硫酸鉀：硫酸銅比例主要有15：1、10：1、10：0．9和9：1等，國標(biāo)方法采用10：1比例，硫酸銅用量是影響消化時間的主要因素l9]。 樣品消化過程中，消化液經(jīng)過一系列改變最終轉(zhuǎn)變?yōu)榫G色透明狀態(tài)，這種過程是碳化的有機(jī)物完全被氧化的，但決不表示樣品中的氮素全部轉(zhuǎn)變?yōu)镹H4 。蘇軍等研究結(jié)果表明，消化液澄清后繼續(xù)消化30 min為宜。 蒸餾過程中加入40

10、％ 氫氧化鈉溶液，用于中和樣品消化后剩余的濃硫酸，并使(NH4)2SO4 轉(zhuǎn)化為NH4 OH，經(jīng)加熱生成NH3逸出，被硼酸吸收。為使樣品消化液中的(NH4)2SO4 全部轉(zhuǎn)化為NH4OH，40％氫氧化鈉溶液必須過量加入，用量不夠會造成測定結(jié)果偏低，用量過多則浪費(fèi)試劑I4]。 硼酸吸收液中混合指示劑的組成和配方有數(shù)種，如溴甲酚綠一甲基紅、甲基紅一甲基藍(lán)、甲烯藍(lán)一甲基紅等，但以0.5 ％溴甲酚綠乙醇溶液和0.1％ 甲基紅乙醇溶液混合而成的混合指示劑變色比較敏感。指示劑與硼酸吸收液的比例通常使用1：100或2：100 3 凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)的幾個問題 3.1凱氏定氮法的原理和過程 利用硫酸

11、及催化劑與樣品加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，其中C、H形成CO2 和H2O逸出，而蛋白質(zhì)中的氮則轉(zhuǎn)化成(NH4)2SO4，在強(qiáng)堿條件下加熱蒸餾，其中NH3被硼酸吸收為(NH4)2B4O7，然后用標(biāo)準(zhǔn)的鹽酸溶液滴定，根據(jù)鹽酸的消耗量和濃度計算出氮的含量，乘以蛋白質(zhì)系數(shù)，即為蛋白質(zhì)含量。 反應(yīng)式如下： 2CH3 —CH一C00H+13H2SO4= (NH4)2SO4+6CO2↑+12SOz↑+16H2O | NH2 (NH4)2SO4+2NaOH=2NH3↑+NazSO4+2H20 2NH3 +4H3BO3 = (NH4)2B4O7+5H2O (NH4)zB4O7+2

12、HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3 根據(jù)原理測定過程可分為消化、蒸餾吸收、滴定三個過程。 3.2凱氏定氮法測定的蛋白質(zhì)——粗蛋白 用濃硫酸對大豆進(jìn)行消化，破壞有機(jī)物．使含氮物轉(zhuǎn)化成硫酸銨，加入強(qiáng)堿進(jìn)行蒸餾使氨逸出，用硼酸溶液吸收氨．吸收液用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，測出氮含量。根據(jù)測定原理，在消化過程中除蛋白質(zhì)中的氮轉(zhuǎn)化成(NI-h)2SO4外，樣品中非蛋白質(zhì)中的氮也能轉(zhuǎn)化成(NH4)2SOs，計算氮的含量時，認(rèn)為所有的氮都來源于蛋白質(zhì)，因此，測定結(jié)果比實(shí)際值偏高。所以，用凱氏定氮法測定的蛋白質(zhì)為粗蛋白。 3.3蒸餾時堿的用量及溶液的變化 3.3.1堿的用量 蒸餾時必須加堿(

13、可加入NaOH)，加入堿的作用一是中和硫酸，二是使溶液處于強(qiáng)堿性，這樣才能使(NH4)2SO4變成NH3被蒸餾吸收。那么堿的用量為多少合適呢?堿的用量取決于消化時H2SO4的用量和堿的濃度，一般經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為堿的用量為中和硫酸后再加40％。例如：消化時加入濃H2SO410mL，NaOH的濃渡為40％，則NaOH的用量為首先計算中和10mL濃H2SO4需要40％NaOH的量： H2SO4的摩爾濃渡為18．4mol／L，40％NaOH摩爾濃度為10mol／L?；瘜W(xué)反應(yīng)式如下： 2NaOH+H2SO4=Na2SO4+2HzO 假如濃硫酸在消化時沒有消耗，兩者反應(yīng)時2摩爾NaOH和1摩爾H2SO4反應(yīng)

14、，設(shè)需要NaOH的量為xml，則2／10x=1／18．410 x=36．8mL 再計算使溶液為強(qiáng)堿性時需要NaOH的量: 36.840％ =14．72mL 最后計算蒸餾時加入堿的量： 36．8+14.72=51．52mL 3.3.2溶液顏色的變化 消化后溶液的顏色為藍(lán)綠色，這是催化劑中硫酸銅的顏色。當(dāng)加入氫氧化鈉后溶液為淺藍(lán)色，這是硫酸銅與氫氧化鈉反應(yīng)后生成氫氧化銅淺藍(lán)色沉淀的緣故。當(dāng)加熱蒸餾不久，溶液開始變?yōu)楹诤稚?，這是因?yàn)樵诩訜釛l件下氫氧化銅分解生成氧化銅黑褐色沉淀的緣故。反應(yīng)式如下： 2NaOH+CuSO4=Cu(OH)2↓ +Na2SO4 Cu(OH)2=CuO↓++

15、H2O 3.4硼酸吸收液顏色的變化 蒸餾吸收時的吸收液為硼酸，濃度為2％～4％。硼酸是一種弱酸，Ka=5．81010。蒸餾吸收時所用指示劑是甲基紅—謨甲酚綠，其變色范圍是：pH<4．0 橙色；pH=5．1 灰色；pH>6．2 藍(lán)色。正常情況下，當(dāng)加入該指示劑后硼酸溶液顯橙色，蒸餾時氨氣被硼酸吸收變成硼酸銨，溶液變成藍(lán)色。但實(shí)驗(yàn)中常常會出現(xiàn)加入指示劑后硼酸溶液就變藍(lán)色，是因?yàn)榕渲婆鹚崛芤簳r混入堿性物質(zhì)或蒸餾水偏堿性。測定中應(yīng)該注意。 3.5討論 3.5．1 凱氏定氮法測定的蛋白質(zhì)雖然是粗蛋白，但所有樣品中蛋白質(zhì)的測定都采用此法，因此，同樣具有真實(shí)性和可比性。 3.5．2 蒸餾時堿的用量

16、經(jīng)計算后準(zhǔn)確加人，即會避免因加人量過少影響蒸餾，也會避免因加人量過多而浪費(fèi)試劑。 3.5．3 硼酸吸收液配制時應(yīng)用中性蒸餾水，避免堿性物質(zhì)的混入，盛裝硼酸吸收液的容器應(yīng)刷洗干凈。 4 凱氏定氮法中各試劑對消化時間的影響 4.1概述 經(jīng)典的凱氏定氮法試樣消化階段必須有定氮催化劑與硫酸(比重1．84，無氮)參與，催化劑一般用CuSO5H2O、K2SO 。但由于CuSO45H O、K2SO4 和濃H2SO4 的用量不合適，一方面導(dǎo)致消化時間過長，降低了分析化驗(yàn)人員的工作效率，使教學(xué)試驗(yàn)不能在規(guī)定的時間內(nèi)完成凱氏定氮的整個過程。另一方面，過量的催化劑與硫酸造成資源浪費(fèi)及環(huán)境污染。在研究經(jīng)典的凱

17、氏定氮法中，許多人只注重CuSO5H O和K2SO4用量,而忽略濃硫酸的用量對消化時間的影響。本研究對經(jīng)典的凱氏定氮法進(jìn)行了研究，對CuSO5H O、K2 S04、和濃H2SO4 的用量作L9(3)正交試驗(yàn)，選擇出它們的最佳用量，使消化時間大大降低，提高了凱氏定氮的速度。試驗(yàn)證明，該最佳條件對蛋白質(zhì)含量高的樣品還是蛋白質(zhì)含量低的樣品都能完成消化，這對于提高分析化驗(yàn)人員的工作效率和學(xué)生教學(xué)試驗(yàn)及環(huán)境保護(hù)都有很大的益處。 4.2儀器與試劑 (1)儀器。電子天平(AB104-N)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(Gzx-9030MBE)；控溫電爐(北京市永光明醫(yī)療儀器廠1000W 220V)；凱氏燒瓶。

18、(2)試劑。CuS045H O(分析純天津市化學(xué)試劑一廠)；K2SO4 (分析純?nèi)R陽化工實(shí)驗(yàn)廠)；H2S04(分析純?nèi)R陽市新興化工有限公司)。 4.3實(shí)驗(yàn)方法 (1)消化。稱取0．2000 g發(fā)酵馬鈴薯渣(蛋白質(zhì)含量大于10％)置于干燥的100 mL凱氏燒瓶中，加數(shù)粒玻璃珠，按表2添加CuS045H 0、K2S04、濃H S04，搖勻后，在凱氏燒瓶中加一小漏斗于通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行消化，先用小火，然后加大火力。 (2)方法。以CuSO 5H20、K2SO4 和濃H2SO4 的用量為主要考慮因素，采用L9(3)正交試驗(yàn)，試驗(yàn)設(shè)計見表1，試驗(yàn)結(jié)果見表2。 表1 試驗(yàn)因素水平 水平 因素

19、 因素A/KzSO4 因素B/5水CuSO4 因素C/HzSO4 1 3.00 0.13 5.00 2 2.50 0.10 4.00 3 2.00 0.05 3.00 表2正交試驗(yàn)結(jié)果 試驗(yàn)號 因素 A 因素 B 因素 C 消化時間/ min 1 3.00 0.13 5.00 20.00 2 3.00 0.10 4.00 15.00 3 3.00 0.05 3.00 26.00 4 2.50 0.13 4.00 18.67 5 2.50 0.10 3.00 17.00 6

20、2.50 0.05 5.00 18.00 7 2.00 0.13 3.00 17.33 8 2.00 0.10 5.00 19.50 9 2.00 0.05 4.00 18.75 R1 61.00 56.00 57.50 R2 53.67 51.50 52.42 R3 55.58 62.75 60.33 R1/3 20.33 18.67 19.17 R2/3 17.89 17.17 17.47 R3/3 18.67 20.92 20.11 優(yōu)水平 Az Bz Cz R 2

21、.44 3.75 2.64 優(yōu)水平組合 AzBzCz 主次順序 BCA (3)驗(yàn)證試驗(yàn)。以確定的最佳條件作驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果所需消化時間僅為12 min。 另外，以最佳條件在學(xué)生課堂試驗(yàn)中作驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果與本文的結(jié)論完全一致。 (4)對比試驗(yàn)。把本次試驗(yàn)確定的最佳條件與其他資料報道的條件作對比試驗(yàn)，對比結(jié)果如表3。 表3 消化時間對比試驗(yàn) 方法 試樣重/g KzSO4/g CuSO4.5HzO/g HzSO4/g 消化時間/min 1 0.2000 10.00 0.50 20.00 30.00 2 0.2

22、000 3.00 0.20 20.00 45.00 3 0.2000 2.50 0.13 6.00 25.00 4 0.2000 2.50 0.10 4.00 12.00 4.4結(jié)果與討論 (1)由正交試驗(yàn)結(jié)果看出，各因素對消化時間的影響是有差異的。各因素的優(yōu)水平為；CuS045Hz0 2.50 g，KzSO4 0.10 g，濃HzS04 4．00 mL。以最佳條件作驗(yàn)證試驗(yàn)，消化時間僅為12 min。 (2)以消化時間為指標(biāo)對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行正交試驗(yàn)極差分析，可知CuS045Hz0的用量對消化時間的影響為主要因素，濃HzS04和KzS04的用量為第二、第

23、三主要因素。 (3)由表3可知，樣品用本試驗(yàn)所得結(jié)果進(jìn)行消化，消化時間是方法1[ ] 和方法3[ ] 的1／2多，是方法2[ ] 的約1／4。 (4)用本文所得出的CuS045Hz0、KzS04、濃HzS04用量作消化試驗(yàn)，一方面可大大縮短整個凱氏定氮過程的時間，另一方面試劑用量的減少，可降低試驗(yàn)成本，也降低了對環(huán)境的污染。這樣不僅能使學(xué)生課堂試驗(yàn)?zāi)茉谝?guī)定的時間內(nèi)完成，也適合批量樣品中蛋白質(zhì)含量的消化測定，有一定的應(yīng)用價值。 5 凱氏定氮法消化裝置的改進(jìn) 1概述 凱達(dá)爾法，又稱凱氏定氮法，用來測定有機(jī)物中氮的含量，是一種經(jīng)典方法。由于該法儀器設(shè)備簡單，操作方便，又能同時測定多個試樣，

24、因而得到廣泛應(yīng)用。凱達(dá)爾法配套的儀器為凱氏消化裝置、水蒸氣蒸餾裝置和滴定裝置。這些儀器中，水蒸汽蒸餾裝置、滴定裝置技術(shù)較為成熟，而凱氏消化裝置仍在不斷改進(jìn)中。 普通消化裝置必須在通風(fēng)櫥中進(jìn)行操作，這是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)過程中分解產(chǎn)生的SOz和SO3會造成環(huán)境污染。湖北省輕工業(yè)學(xué)校1995年訂購10套消化裝置。 該裝置中，冷凝水由A到B經(jīng)軟管到C，入水泵E。消化分解的SOz和SO3氣體由水泵E引入水槽，溶于水面避免了環(huán)境污染。但使用過程中發(fā)現(xiàn)了一下兩個新問題。 （1）供水水壓波動時，A、B兩處的連接軟管很容易脹脫，造成冷凝水濺到底瓶D上，致使底瓶急冷炸裂，熱濃硫酸損壞加熱電爐，有時甚至造成實(shí)驗(yàn)人員的

25、灼燙傷。 （2）底瓶D的瓶頸較短，熱濃硫酸冷凝回流時，易在此處導(dǎo)致氣液沖擊現(xiàn)象（上升的SOz、SO3與冷凝的濃硫酸沖擊），使得加熱不能連續(xù)進(jìn)行。 我們對原裝置進(jìn)行了改進(jìn)，克服了上述缺點(diǎn)，新裝置如下，其改進(jìn)之如下： （1） 增大A、B兩處凸出，并適當(dāng)加長，輔以套夾以防連接軟管脹脫。 （2） 使冷凝管同底D的連接方式由垂直變?yōu)樗綇澢?，同時將連接冷凝管和底瓶D的玻璃管加長至30cm，以空氣冷凝為輔助措施提高冷凝效果、消除氣液沖擊現(xiàn)象。 （3） 將普通電爐改為凹形電爐，增加底瓶保溫效果，縮短消化分解時間。 實(shí)驗(yàn)表明該裝置性能良好 畢業(yè)論文成績

26、評定表 專業(yè)班級 化工0801 姓 名 蘇慶豪 論文 題目 凱氏定氮法在測量大豆蛋白的不確定度分析 指導(dǎo)教師初審成績 評定內(nèi)容 論文選題 資料利用 學(xué)術(shù)造詣 知識掌握 科研能力 論文完成情況 寫作能力 寫作規(guī)范 總成績 成績 評分標(biāo)準(zhǔn) 10分 10分 20分 20分 10分 10分 10分 10分 100分 實(shí)際評分 答辯成績 評定內(nèi)容 儀態(tài)儀表 語言 答辯效果 知識掌握 科研能力 論文完成情況 寫作能力 寫作規(guī)范 總成績 評分標(biāo)準(zhǔn) 10分 10分 20分 20分 10分 10分 10分 10分 100分 實(shí)際評分 評語 指導(dǎo)教師評語： 答辯小組評語： 指導(dǎo)教師 __________ 年 月 日 評審教師 __ 年 月 日 答辯負(fù)責(zé)人__________ 年 月 日