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1、實驗九 玻璃器皿的清洗包扎，培養(yǎng)基的配制及滅菌,一、目的要求,1、明確培養(yǎng)基的配制原理。 2、通過對牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。 3、了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用范圍 4、了解干熱滅菌的原理和應(yīng)用范圍。 5、了解紫外線滅菌的原理和方法。 6、玻璃器皿的清洗包扎要熟練操作。,二、基本原理,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏為微生物提供碳源和能源，磷酸鹽、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供無機鹽。在配制固體培養(yǎng)基時還要加入一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在常用濃度下96時溶化，一般實

2、際應(yīng)用時在沸水浴中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在40時凝固，通常不被微生物分解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同。,由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細菌，因此，要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細菌的生長繁殖。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方如下： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 瓊脂1520g 水 1000ml pH 7476,干熱滅菌是利用高溫使微生物細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的。,紫外線滅菌是用紫外線燈進行的，波長為200300nm的紫外線都有殺菌能力，其中以260nm的殺菌力最強。 為了加強紫外線滅菌效果，在打開紫外線燈

3、以前，可在無菌室內(nèi)（或接種箱內(nèi)）噴灑35的石炭酸溶液，一方面使空氣中附著有微生物的塵埃降落，另一方面也可以殺死一部分細菌。,超凈工作臺內(nèi)紫外燈（線）滅菌,三、器材,牛肉膏，蛋白胨， NaCl，瓊脂； 1mol/L NaOH， 1mol/L HCl； 試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，培養(yǎng)基分裝器，扭力天平，牛角匙，高壓蒸汽滅菌鍋，pH試紙（ pH 5590），棉花，牛皮紙，記號筆，麻繩，紗布等。,培養(yǎng)皿，試管，吸管，電烘箱等。 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿（6套一包），手提式高壓蒸汽菌鍋等。 紫外線燈，35石炭酸或23來蘇爾溶液，牛肉膏蛋白胨平板 。,四、操作步驟,一、稱量 準確、迅速，一種藥品

4、一把藥勺，勿蓋錯藥瓶蓋 二、溶化 水的加法、加熱攪拌 三、調(diào)pH 忌調(diào)過頭后來回調(diào),培養(yǎng)基的制備,四、過濾 五、分裝 1、液體分裝：試管高度的1/4左右 三角瓶容積的1/2 2、固體分裝：試管高度的1/5左右（制斜面） 半固體：1/3左右（垂直穿刺） 馬丁氏培養(yǎng)基定容；瓶口棉塞,培養(yǎng)基的制備,六、加塞 七、包扎 八、滅菌 一般15磅（121）20分鐘 九、擺斜面 溫度、斜面長度（試管的1/2） 十、無菌檢查 37培養(yǎng)2448小時,常用培養(yǎng)基,一、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 應(yīng)用最廣泛的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。 配方： 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 水 1000ml pH 7.4-7

5、.6,常用培養(yǎng)基,二、高氏號培養(yǎng)基 用于培養(yǎng)、觀察放線菌形態(tài)特征； 加入適量的抗菌物質(zhì)（抗生素、酚）用于分離放線菌（選擇性培養(yǎng)基）。,常用培養(yǎng)基,高氏號培養(yǎng)基配方： 可溶性淀粉 20g 按配方順序依次溶解否則 NaCl 0.5g 產(chǎn)生沉淀 KNO3 1.0g K2HPO4.3H2O 0.5g 抗生素現(xiàn)用現(xiàn)加,溫度不宜 MgSO4.7H2O 0.5g 過高否則易分解 FeSO4.7H2O 0.01g 瓊脂 15-25g 水 1000ml pH 7.4-7.6,常用培養(yǎng)基,三、馬丁氏培養(yǎng)基 用于分離真菌的選擇性培養(yǎng)基 配方： KH2PO4 1.0g 另加孟加拉紅和鏈霉素 MgSO4.7H2O 0.

6、5g 抑制細菌、放線菌生長 蛋白胨 5g 葡萄糖 10g 瓊脂 10-20g 水 1000ml pH 自然,試管分裝,擺斜面,擺斜面實物圖,五、實驗報告,結(jié)果 檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹底。試管清潔如何，培養(yǎng)基制備的合不合理。,玻璃器皿的清洗,器皿包扎,器皿包扎,六、思考題,（1）培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應(yīng)具備哪些條件？為什么？ （2）在配制培養(yǎng)基的操作過程中應(yīng)注意些什么問題？為什么？圖5通氣塞 A配制時紗布塞法；B滅菌時包牛皮紙；C培養(yǎng)時紗布翻出 （3）培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的？,（4）干熱滅菌完畢后，在什么情況下才能開箱取物？為什么？ （5）高壓蒸汽滅菌開始之前，為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡？滅菌完畢后，為什么要待壓力降到0時才能打開排氣閥，開蓋取物？ 紫外線殺菌的原理是什么？,全自動高壓蒸汽滅菌鍋,