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1、自身抗體的檢測及應(yīng)用,,一、自身免疫,【概念】 當(dāng)機體免疫系統(tǒng)受某種因素作用使自身免疫 耐受削弱或破壞時，免疫系統(tǒng)會對自身成份包括 正?；蜃冃缘慕M織、器官、細胞、蛋白質(zhì)或酶類 等自身抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，出現(xiàn)自身抗體或 致敏淋巴細胞的這種現(xiàn)象稱為自身免疫 。,一、自身免疫,自身免疫可以是正常生理性的，例如： 針對衰老或死亡的自體細胞。 自身免疫也可以是病理性的，引起自身免疫病。,二、自身免疫性疾病,【概念】 在內(nèi)因與外因的共同作用下，機體的自身免 疫應(yīng)答失控，反應(yīng)過度，直接或間接破壞自身組 織，并引起相應(yīng)器官病變，導(dǎo)致臨床癥狀，則為 自身免疫性疾病 。 分為器官特異性和全身性。,二、自身

2、免疫性疾病,自身免疫性疾病的特點： （1）多數(shù)自身免疫性疾病是自發(fā)或特發(fā)性的，感染，藥物等外因可能有一定的影響。 （2）患者血清中存在有高水平的球蛋白。 （3）患者血清中有高效價的自身抗體或出現(xiàn)與自身抗原反應(yīng)的致敏淋巴細胞。 （4）病損部位有變性的免疫球蛋白沉積，呈現(xiàn)以大量淋巴細胞和漿細胞浸潤為主的慢性炎癥。,二、自身免疫性疾病,自身免疫性疾病的特點： （5）病程一般較長，發(fā)作與緩解交替出現(xiàn)，僅有少數(shù)為自限性。 （6）女性多男性，老年多于青少年。 （7）有遺傳傾向。 （8）應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑有效。 （9）常有其它自身免疫病同時存在。 （10）可復(fù)制出相似的動物疾病模型 。,三、自身

3、抗體,【概念】 由各種原因造成的機體B細胞產(chǎn)生針 對自身組織成分的抗體，稱為自身抗體。 自身抗體是自身免疫性疾病的重要標志，每 種自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗體譜。,RA自身抗體譜及臨床意義,RF60RA中出現(xiàn)，量與RA活 動性及嚴重性呈正相關(guān)。亦在其它CTD出現(xiàn) 抗CCP在50RA中出現(xiàn) （抗環(huán)瓜氨酸肽抗體） 特異性較高 AKA（抗角蛋白抗體）在40RA陽性 APF（抗核周因子）在52RA陽性 抗RA33RA陽性率為35 抗Sa在部分RA陽性,,以上抗體陽性有助于早期RA及不典型RA的診斷和早期開展 治療，改善預(yù)后,自身抗體與疾病的關(guān)系,某些自身抗體對某種疾病的診斷具有高度特 異

4、性，已經(jīng)成為該病的血清標記抗體或特異性抗 體 。 某些自身抗體與疾病的活動性有相關(guān)性，少數(shù)自身抗體參與了免疫病病理性損傷 。,特異性較強的自身抗體,抗Sm系統(tǒng)性紅斑狼瘡 抗Scl-70系統(tǒng)性硬化癥 抗SSA/SSB干燥綜合征 抗CCP類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎,抗體滴度的高低可判斷疾病的活動性,抗雙鏈DNASLE aCLSLE、磷脂抗體綜合征 RF類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎,預(yù)測疾病的預(yù)后及臨床亞型,抗Jo-1皮肌炎合并肺間質(zhì)病變 抗Scl-70彌漫性系統(tǒng)性硬化 抗rRNP狼瘡腦病,自身抗體的意義,自身免疫性疾病的診斷； 疾病活動性的判斷； 療效的觀察及預(yù)后； 指導(dǎo)臨床用藥等； 進行不同疾病的鑒別診斷。,自身抗體常用檢測

5、方法,自身抗體的檢測方法：,（1）酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）：該法檢測自身抗體快速、敏感及特異性高，但對抗原的要求很高，必須使用高質(zhì)量的純化抗原，由于一種抗原只能檢測一種抗體，多種抗體的檢測就必須多種單獨的抗原，因此該法在臨床免疫實驗室的應(yīng)用受到一定限制 。,,（2）酶免疫斑點(條帶)實驗 【優(yōu)點】將經(jīng)親和層析純化的抗原包被在固定的位置，每一種抗原只對應(yīng)一條條帶，不會產(chǎn)生非特異性反應(yīng)條帶，結(jié)果靈敏度高、特異好，判斷實驗結(jié)果簡單，每個反應(yīng)區(qū)均有質(zhì)控帶，可以顯示操作是正確，陰性與陽性的結(jié)果明顯，容易判斷，條帶顯色與抗體滴度相關(guān) 。,,(3)間接免疫熒光法(IFT): 檢測ANA的金標準，

6、具有很高的敏感性和特異性。,間接免疫熒光法原理,將稀釋的血清與生物載片（反應(yīng)區(qū)內(nèi)固定有包被基質(zhì)的生物薄片）溫育，如果樣本是陽性的，特異性IgG、IgA和 IgM抗體與相應(yīng)的核抗原結(jié)合。在第二次溫育時，熒光素標記的抗人抗體與結(jié)合在生物基質(zhì)上的抗體反應(yīng)，形成熒光顯微鏡下所觀察到的特異性熒光模式。,抗核抗體(ANA)是以自身真核細胞成分作為 靶抗原的一組自身抗體的總稱，泛指各種核 成分的抗體，是一種廣泛存在的自身抗體。,,抗核抗體(ANA),均質(zhì)型 與AHA（抗組蛋白抗體）、抗DNA有關(guān)，引起LE形成主要見于SLE、藥物性狼瘡,核膜型 與抗ds-DNA有關(guān)， 多見于SLE，特別是有腎炎者,抗核抗

7、體(ANA),斑點型 與抗ENA有關(guān)，應(yīng)進一步查特異性抗體,核仁型 多見于系統(tǒng)性硬皮病,常見的自身抗體及其檢測方法,(1),,,,,(2),,,,常見的自身抗體及其檢測方法,,ds-DNA 判斷疾病活動性---ELISA 診斷疾病-----IFT,,,自身抗體檢測結(jié)果正確解讀,檢測方法局限性：假陽性，假陰性,臨床意義局限性：非特異性，生理性，疾病前期,臨床表現(xiàn)陽性，實驗室檢查陰性 實驗室檢查陽性，臨床表現(xiàn)陰性,自身免疫病自身抗體非常復(fù)雜,SLE患者中存在100多種自身抗體,Semin Arthritis Rheum. 2004 Oct;34(2):501-37.,自

8、身免疫病自身抗體非常復(fù)雜,APS患者中存在30種自身抗體,J Autoimmun, 2008. 30(1-2): p. 74-83.,N Engl J Med 2003;349:1526-33.,疾病預(yù)警,自身抗體在SLE發(fā)病前9.4年出現(xiàn),疾病預(yù)警,AMA在PBC發(fā)病前10年出現(xiàn),,,,,臨床復(fù)雜性,急性肝衰患者出現(xiàn)2和PBC特異性抗體,,,,,臨床復(fù)雜性,抗CCP抗體在丙肝中8.5,,指標陰性是否意味著疾病的排除？ 指標陽性意味著什么？,特異性的局限,各指標與對應(yīng)疾病之間： 如 SLE 抗Sm抗體特異性99% 敏感性僅為25% RA RF陽性可出現(xiàn)在SLE, pSS, SS

9、c, 慢性肺結(jié)核，高球蛋白血癥等，5%正常人可出現(xiàn)低滴度的RF 。,“自相矛盾”的結(jié)果,ANA (間接免疫熒光法)陽性，靶抗原陰性 ANA (間接免疫熒光法)陰性，靶抗原陽性 （膜條法），占10%，為客觀存在 ANCA：熒光法陰性，但靶抗原陽性（5%）,特異性指標陽性，人無相應(yīng)癥狀,健康人 --- 一過性陽性（感染、焦慮、疲勞等），2月后 復(fù)查可能轉(zhuǎn)陰或者下降。 貌似健康人--- 檢測自身抗體（微觀） 影像---組織 表現(xiàn)---器官（最晚） 患者 --- 但不是自身免疫性疾病，如傳染病，觀察滴 度變化，一般會下降 自身免

10、疫性疾病---但不是指標對應(yīng)的疾病,自身抗體檢測結(jié)果的解釋 疾病標記（志）性自身抗體 疾病特異性自身抗體 疾病相關(guān)性自身抗體 疾病非特異性自身抗體 生理性自身抗體,疾病前期存在 檢測方法及檢測程序局限性 檢測質(zhì)量:假陰性假陽性,解讀困難,四、常見自身抗體的檢測及應(yīng)用,自身抗體種類很多，這里只是簡單介紹幾種 常見的自身抗體的檢測 ： （1）類風(fēng)濕因子（RF） （2）抗ENA抗體譜,類風(fēng)濕因子（RF）的檢測及應(yīng)用,RF是一種抗人或動物IgG分子Fc片段抗原決 定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗 體，可與人或動物的變性IgG結(jié)合，而不與正常 IgG發(fā)生凝集，最多見于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者，

11、RF有IgM、IgG、IgA和IgE型，IgM型為主要類型。,類風(fēng)濕因子（RF）,檢測方法： a.膠乳凝集試驗：只能定性或定量，靈敏度及特異性不變，只能檢測IgM型RF。 b.速率散射比濁法：定量檢測，準確、快速，準確性和敏感性高于膠乳凝集試驗，也只能檢測IgM型RF。 c.ELISA法：可檢出不同Ig類型的RF。,類風(fēng)濕因子（RF）,臨床應(yīng)用 RF在RA中的陽性率為70%，是診斷RA的重要標準之一。 RF含量與病情的活動性和嚴重性成正比，持續(xù)高滴度的RF常提示RA病情活動，骨侵蝕發(fā)生率高，?？砂橛衅は陆Y(jié)節(jié)或血管炎等關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，提示預(yù)后不良。,,RF并非RA獨有的特異性抗體，對RA的診斷不具特

12、異性 SLE 30% SS 70%90% SSc 20%30% MCTD 50%60% 5%以下的正常人 RF陽性不等于一定就是RA RF陰性也不等于一定就不是RA,抗ENA抗體譜,是以核內(nèi)可提取核抗原為靶抗原的自身抗體 的總稱，它主要包括抗Sm、抗RNP、抗SSA、抗 SSB、抗Jo-1、抗Scl-70、抗組蛋白抗體、抗核 小體抗體、抗核糖體P-蛋白抗體、抗著絲點抗體, 抗dsDNA。 不同的自身免疫性疾病可以產(chǎn)生不同的抗 ENA抗體，ENA抗體的檢測對自身免疫性疾病的診 斷和鑒別具有重要意義。,抗ENA抗體譜,檢測方法 免疫印跡法（IBT）、ELISA法、

13、雙擴散法 對流免疫電流、金標法等。 免疫印跡技術(shù)不需要純化抗原，靈敏度高、 特異性強、操作簡單，是廣泛采用檢測抗ENA抗體的技術(shù)。,臨床意義,nRNP Sm SS-A SS-B Scl-70 Jo-1 CENP B dsDNA 核小體 組蛋白 核糖體P蛋白,nRNP,高滴度的抗U1-nRNP抗體是混合性結(jié)締組織病（MCTD，夏普綜合征）的標志，陽性率為95-100，抗體滴度與疾病活動性相關(guān)。在30-40的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中也可檢出抗U1-nRNP抗體，但幾乎總伴有抗Sm抗體。,Sm,抗Sm抗體是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性標志，與抗dsDNA抗體一起，是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷指標，但陽性率僅為5

14、-10。 抗Sm抗體的檢測對早期,不典型的SLE或治療后的回顧性診斷具有很大幫助。,SS-A,抗SS-A抗體與各類自身免疫性疾病相關(guān)，最常見于干燥綜合征（40-80）、也見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡（30-40）和原發(fā)性膽汁性肝硬化（20）中，偶見于慢性活動性肝炎。此外，在100的新生兒紅斑狼瘡中可出現(xiàn)抗SS-A抗體。該抗體可經(jīng)胎盤傳給胎兒引起炎癥反應(yīng)和新生兒先天性心臟傳導(dǎo)阻滯。,SS-B,抗SS-B抗體幾乎僅見于干燥綜合征（40-80）和系統(tǒng)性紅斑狼瘡（10-20）的女性患者中，男女比例為29:1。在干燥綜合征中抗SS-A抗體和抗SS-B抗體常同時出現(xiàn)。,Scl-70,抗Scl-70抗體見于25-75的進行性系統(tǒng)性硬化癥（彌散型）患者中，因?qū)嶒灧椒ê图膊』顒有远悾⊿cl=硬化癥）。在局限型硬化癥中不出現(xiàn)。,Jo-1,抗Jo-1抗體見于多肌炎，陽性率為25-35。常與合并肺間質(zhì)纖維化相關(guān)。,dsDNA,抗dsDNA抗體對系統(tǒng)性紅斑狼瘡具有很高的特異性。除抗Sm抗體外，抗dsDNA抗體也可作為該病的一個血清學(xué)指標，陽性率為40-90%。,,1. 簡述免疫熒光法的原理 2. 抗核抗體的定義及臨床意義,,謝謝大家,