《西北農(nóng)林科技大學(xué)夏效東修改課件》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《西北農(nóng)林科技大學(xué)夏效東修改課件（29頁珍藏版）》請?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、匯報(bào)人：夏效東 西北農(nóng)林科技大學(xué) 教授 2016.8.17尿石素A對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂的影響及機(jī)制 3214目錄Contents 研究內(nèi)容研究背景研究結(jié)論研究結(jié)果 12 43 5癱瘓中風(fēng) 死亡 據(jù)統(tǒng)計(jì)：我國每5個成人中有1人患有心血管疾病動脈粥樣硬化是誘發(fā)心血管疾病的主要病理基礎(chǔ) 1.1 動脈粥樣硬化發(fā)病率高一、研究背景1 動脈粥樣硬化研究概況 巨噬-泡沫細(xì)胞形成-關(guān)鍵環(huán)節(jié)在胞內(nèi)膽固醇合成過多或者攝入過多的情況下，促進(jìn)巨噬細(xì)胞膽固醇外流對抑制泡沫細(xì)胞形成和防治動脈粥樣硬化起到關(guān)鍵作用。內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂啟動環(huán)節(jié)動脈硬化發(fā)展的重要表征。體現(xiàn)出促炎、促血小板聚集、促血管收縮、促凝等機(jī)

2、能轉(zhuǎn)變。 microRNA新型藥物靶點(diǎn)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控。參與動脈粥樣硬化進(jìn)程的種類繁多，主要調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、脂質(zhì)代謝、細(xì)胞增殖等。1.2 動脈粥樣硬化分子機(jī)制1 動脈粥樣硬化研究概況 一、研究背景 尿石素A(Urolithin A, Uro-A)是石榴、草莓、花生等富含鞣花單寧的食物經(jīng)腸道微生物代謝生成的。尿石素A在血漿中的濃度可達(dá)1425 M。 圖 1-2. 尿 石 素 在 腸 道 中 的 代 謝 過 程2.1 尿石素的形成2 尿石素A研究概況一、研究背景 抗癌活性抗氧化活性抗炎活性抗瘧疾活性 抗菌活性2.2 尿石素生物活性一、研究背景2 尿石素A研究概況 在人動脈內(nèi)皮細(xì)胞、THP-1源性巨

3、噬細(xì)胞、LPS誘導(dǎo)的RAW264.7中，尿石素A可以顯著抑制促炎因子表達(dá)上調(diào)，表現(xiàn)出強(qiáng)于其他種類尿石素的抗炎作用(Gimenez-Bastida et al. 2012，Piwowarski et al. 2014)。尿石素A能夠顯著減弱人肝細(xì)胞和脂肪細(xì)胞中甘油三酯的累積并有效抑制THP-1/巨噬細(xì)胞中膽固醇的募集(Mele L et al. 2016, Kang I et al. 2016)。因此推測尿石素A在小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞中具有潛在的抑制膽固醇攝入和合成的作用。2.3 尿石素A研究進(jìn)展一、研究背景2 尿石素A研究概況 第二部分研究內(nèi)容 人動脈內(nèi)皮細(xì)胞 尿石素A 細(xì)胞活性NO釋

4、放單核-內(nèi)皮黏附和黏附因子表達(dá)分析炎癥因子表達(dá)分析 炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑分析細(xì)胞結(jié)構(gòu)（LDH）相關(guān)基因表達(dá)分析從細(xì)胞水平闡明尿石素A防治動脈粥樣硬化的機(jī)制 二、研究內(nèi)容 二、研究內(nèi)容 內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附尿石素A對動脈內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響MTT毒性 乳酸脫氫酶含量及一氧化氮含量及表 達(dá)分析 單核-內(nèi)皮黏附和黏附因子表達(dá)分析 炎癥因子表達(dá)分析 炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑分析分子機(jī)制尿石素A抗動脈粥樣硬化形成的作用機(jī)制研究技術(shù)路線 第三部分研究結(jié)果 圖1-1. Uro-A對HAEC細(xì)胞存活率的影響內(nèi)皮細(xì)胞存活率工作濃度： 0.5 2.5 5 孵育時間： 24 h 1.1 低濃度尿石素A促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞存

5、活率1 尿石素A對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響三、研究結(jié)果 1 尿石素A對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響三、研究結(jié)果 1.3 尿石素A提高一氧化氮（NO）含量 圖1-3. Uro-A對NO含量的影響一氧化氮含量 1.2 尿石素A抑制乳酸脫氫酶（LDH）漏出率 圖1-2. Uro-A對LDH漏出率的影響乳酸脫氫酶漏出率 細(xì)胞完整性氧化應(yīng)激信號分子 1 尿石素A對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響三、研究結(jié)果 圖1-4. Uro-A對eNOS和ET-1基因表達(dá)量的影響NO血管舒張ET-1血管收縮細(xì)胞增殖結(jié)構(gòu)完整氧化應(yīng)激功能紊亂基因相對表達(dá) 1.4 尿石

6、素A對內(nèi)皮一氧化氮合成酶（eNOS）和內(nèi)皮素1（ET-1）表達(dá)量的影響 1.5 尿石素A減少單核-內(nèi)皮粘附細(xì)胞總數(shù) 圖1-5,6 孟加拉紅染色法檢測Uro-A對單核-內(nèi)皮粘附細(xì)胞總數(shù)的影響。(A)對照組；(B) ox-LDL組；(C)ox-LDL+0.5 M Uro-A組；(D)ox-LDL+2.5 M Uro-A組；(E) ox-LDL+5 M Uro-A組細(xì)胞總數(shù)比值 1 尿石素A對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響三、研究結(jié)果 1.6 尿石素A對單核細(xì)胞粘附內(nèi)皮細(xì)胞的影響 圖1-7. pH熒光探針法檢測Uro-A對單核細(xì)胞粘附內(nèi)皮細(xì)胞的影響。(A)對照組；(B) ox-LDL

7、組；(C)ox-LDL+0.5 M Uro-A組；(D)ox-LDL+2.5 M Uro-A組；(E) ox-LDL+5 M Uro-A組圖1-8. 定量分析Uro-A對單核細(xì)胞粘附內(nèi)皮細(xì)胞的影響熒光強(qiáng)度 1 尿石素A對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響三、研究結(jié)果 圖1-9. Uro-A對粘附因子表達(dá)量的影響1.7 尿石素A抑制粘附因子表達(dá)基因相對表達(dá) 1 尿石素A對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響三、研究結(jié)果 尿石素A可降低由氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的黏附因子的表達(dá) 下調(diào)細(xì)胞間粘附因子ICAM-1和單核細(xì)胞趨化蛋白MCP-1的基因表達(dá)對單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附進(jìn)行調(diào)控。維持

8、內(nèi)皮細(xì)胞完整性和一氧化氮/內(nèi)皮素含量平衡，從而改善內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂的作用。1.8 小結(jié)人動脈內(nèi)皮細(xì)胞尿石素A1 尿石素A對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響 三、研究結(jié)果 2.1 尿石素A降低ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥因子含量 圖2-1. Uro-A對IL-6濃度的影響圖2-2. Uro-A對TNF-濃度的影響圖2-3. Uro-A對IFN-濃度的影響白介素6 含量干擾素含量腫瘤壞死因子含量 2 尿石素A通過調(diào)控MAPK信號通路對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響三、研究結(jié)果 ox-LDL可誘導(dǎo)IL-6、TNF-產(chǎn)生誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，Uro-A可有效改善這種作用；ox-LDL

9、不能直接通過IFN-對HEAC造成炎癥反應(yīng)，且Uro-A不是通過響IFN-相關(guān)基因或蛋白的表達(dá)對炎癥反應(yīng)進(jìn)行調(diào)控。 圖2-4. Uro-A對PPAR-基因表達(dá)的影響PPAR-基因相對表達(dá) 2.2 尿石素A通過調(diào)控miRNA-27促進(jìn)過氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR-）基因表達(dá)2 尿石素A通過調(diào)控MAPK信號通路對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響三、研究結(jié)果 Uro-A改善經(jīng)氧化低密度脂蛋白對PPAR-基因表達(dá)的抑制作用 圖2-5. Uro-A對miRNA-27基因表達(dá)的影響抑制表達(dá) miR-27基因相對表達(dá)圖2-6. miR-27過表達(dá)和抑制表達(dá)的情況下2.5 M Uro-A對PP

10、AR-基因表達(dá)的影響 PPAR-基因相對表達(dá)尿石素A通過抑制miR-27表達(dá)提高PPAR-轉(zhuǎn)錄水平2.2 尿石素A通過調(diào)控miRNA-27促進(jìn)過氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR-）基因表達(dá)2 尿石素A通過調(diào)控MAPK信號通路對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響三、研究結(jié)果 Thanks2.2 尿石素A抑制ERK 1/2、SAPK/JNK和p38信號通路關(guān)鍵蛋白的表達(dá)2 尿石素A通過調(diào)控MAPK信號通路對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響 三、研究結(jié)果 圖2-7. U0126和Uro-A對ERK 1/2、P-ERK 1/2蛋白表達(dá)的影響圖2-8. SP600126和Uro-A對SA

11、PK/JNK、P-SAPK/JNK蛋白表達(dá)的影響 Thanks圖2-9. Uro-A對p38和p-p38蛋白表達(dá)的影響2.2 尿石素A抑制ERK 1/2、SAPK/JNK和p38信號通路關(guān)鍵蛋白的表達(dá)2 尿石素A通過調(diào)控MAPK信號通路對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響 三、研究結(jié)果 Uro-A能夠明顯抑制50 g/m L ox-LDL激活的ERK 1/2、SAPK/JNK和p38磷酸化，并且和通路抑制劑U0126 及SP600125具有一定的協(xié)同作用。 2.3 尿石素A通過調(diào)控ERK/PPAR-信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制ICAM-1表達(dá) 圖2-10. U0126和2.5 M Uro-A對PPA

12、R-蛋白表達(dá)的影響圖2-11. PPAR- siRNA和2.5 M Uro-A對ICAM-1 mRNA表達(dá)的影響 尿 石 素 A 調(diào) 控ERK/PPAR/ICAM-1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑2 尿石素A通過調(diào)控MAPK信號通路對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響三、研究結(jié)果 降低炎癥因子含量通過miR-27途徑調(diào)控PPAR-抑制ox-LDL誘導(dǎo)的MAPK通路激活通過ERK/PPAR途徑調(diào)控ICAM-1表達(dá)2.4 小結(jié)2 尿石素A通過調(diào)控MAPK信號通路對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響三、研究結(jié)果人動脈內(nèi)皮細(xì)胞尿石素A 第四部分研究結(jié)論 Thanks人動脈內(nèi)皮細(xì)胞尿石素A 尿石素A通過下調(diào)細(xì)胞間粘附因子1和單核趨化蛋白1的基因表達(dá)抑制氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的作用。通過調(diào)控MAPK信號通路抑制ox-LDL誘導(dǎo)的人動脈內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)進(jìn)而維持內(nèi)皮細(xì)胞功能穩(wěn)定。 四、研究結(jié)論 致 謝 感 謝 聆 聽歡 迎 批 評 指 正！