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1、基 因 工 程 乙 肝 疫 苗生 物 技 術(shù) 及 應(yīng) 用 什么是基因工程乙肝疫苗？ 基 因 工 程 乙 肝 疫 苗 （ 酵 母 重 組 ） 是 一 種 乙 肝 表 面 抗 原（ HbsAg） 亞 單 位 疫 苗 ， 它 是 采 用 現(xiàn) 代 生 物 技 術(shù) 將 乙 肝 病 毒表 達(dá) 表 面 抗 原 的 基 因 進(jìn) 行 質(zhì) 粒 構(gòu) 建 ， 克 隆 進(jìn) 入 酵 母 菌 中 ，通 過 培 養(yǎng) 這 種 重 組 酵 母 菌 來 表 達(dá) 乙 肝 表 面 抗 原 亞 單 位 。 這種 乙 肝 表 面 抗 原 亞 單 位 具 有 原 料 易 得 、 產(chǎn) 量 大 、 安 全 、 高效 等 特 點 。 美 國 默

2、克 公 司 研 究 的 此 產(chǎn) 品 最 早 獲 美 國 FDA批 準(zhǔn) 。國 內(nèi) 生 產(chǎn) 此 產(chǎn) 品 技 術(shù) 均 從 其 引 進(jìn) 。 用 途 乙 肝 疫 苗 是 用 于 預(yù) 防 乙 肝 的 特 殊 藥 物 。疫 苗 接 種 后 ， 可 刺 激 免 疫 系 統(tǒng) 產(chǎn) 生 保 護 性 抗 體 ，這 種 抗 體 存 在 于 人 的 體 液 之 中 ， 乙 肝 病 毒 一 旦出 現(xiàn) ， 抗 體 會 立 即 作 用 ， 將 其 清 除 ， 阻 止 感 染 ，并 不 會 傷 害 肝 臟 ， 從 而 使 人 體 具 有 了 預(yù) 防 乙 肝的 免 疫 力 ， 從 而 達(dá) 到 預(yù) 防 乙 肝 感 染 的 目 的 。

3、 接種 乙 肝 疫 苗 是 預(yù) 防 乙 肝 病 毒 感 染 的 最 有 效 方 法 。 應(yīng) 用 學(xué) 科 免 疫 學(xué) （ 一 級 學(xué) 科 ） ； 應(yīng) 用 免 疫 （ 二 級 學(xué)科 ） ； 免 疫 預(yù) 防 （ 三 級 學(xué) 科 ） 發(fā) 展 概 況 重 組 酵 母 乙 肝 疫 苗 首 先 在 美 國 默 克 公 司 研 制 成 功 ， 并于 1986年 被 美 國 FDA批 準(zhǔn) 通 過 。 1991年 ， 我 國 自 行 研 制 的第 一 個 基 因 工 程 疫 苗 哺 乳 動 物 細(xì) 胞 生 產(chǎn) 乙 肝 疫 苗 獲 準(zhǔn) 生產(chǎn) 。 我 國 當(dāng) 前 已 能 大 規(guī) 模 生 產(chǎn) 乙 型 肝 炎 表 面 抗

4、 原 重 組 疫 苗 ，分 別 稱 酵 母 重 組 和 CHO（ 中 國 倉 鼠 卵 巢 細(xì) 胞 ） 重 組 疫 苗 ，免 疫 效 果 比 同 劑 量 的 血 源 疫 苗 優(yōu) 良 ， 并 且 十 分 安 全 ， 可 以放 心 使 用 。 應(yīng)用前景 基 因 工 程 乙 肝 疫 苗 較 之 于 血 液 乙 肝 疫 苗 主 要 區(qū) 別 之 一 在 于 它 生 產(chǎn) 來 源不 同 。 它 有 著 許 多 血 源 乙 肝 疫 苗 不 可 比 擬 的 優(yōu) 勢 。 自 1985年 以 來 ， 我 國 一 直 采 用 接 種 血 源 乙 肝 疫 苗 預(yù) 防 乙 肝 ， 血 源乙 肝 疫 苗 對 控 制 我 國

5、乙 肝 大 面 積 流 行 曾 起 了 很 大 作 用 ， 但 是 ， 由 于 血源 乙 肝 疫 苗 需 用 乙 肝 病 毒 表 面 抗 原 攜 帶 者 的 血 漿 為 原 料 ， 它 具 有 一 些自 身 無 法 克 服 的 缺 點 ： 其 一 ， 乙 肝 表 面 抗 原 攜 帶 者 由 于 已 感 染 乙 肝 病 毒 ， 在 此 情 況 下 ，再 抽 取 其 血 漿 作 為 乙 肝 疫 苗 原 料 ， 對 攜 帶 者 的 身 體 健 康 有 損 害 ； 其 二 ， 疫 苗 的 生 產(chǎn) 受 到 乙 肝 病 毒 表 面 抗 原 攜 帶 者 血 漿 來 源 和 質(zhì) 量限 制 ， 無 法 大 規(guī)

6、模 穩(wěn) 定 生 產(chǎn) ； 其 三 ， 在 表 面 抗 原 陽 性 血 漿 的 采 集 、 運 輸 和 加 工 過 程 中 ， 存 在 著引 發(fā) 血 源 性 傳 染 病 流 行 的 可 能 性 ； 其 四 ， 在 血 源 乙 肝 疫 苗 的 生 產(chǎn) 過 程 中 ， 雖 采 用 三 步 滅 活 工 藝 ， 但三 步 滅 活 不 足 以 將 血 源 中 所 有 已 知 和 未 知 的 潛 在 致 病 因 子 全 部 滅 活 ，難 以 最 大 限 度 地 保 證 血 源 乙 肝 疫 苗 受 種 者 絕 對 安 全 ； 其 五 ， 如 上 所 述 ， 為 了 滅 活 乙 肝 病 毒 ， 需 采 用 三 步

7、 滅 活 工 藝 ， 但三 步 滅 活 對 疫 苗 的 免 疫 原 性 有 影 響 。 因 此 ， 由 于 血 源 乙 肝 疫 苗 的 內(nèi) 部矛 盾 性 ， 決 定 了 血 源 乙 肝 疫 苗 只 能 作 為 一 種 過 渡 性 疫 苗 ， 1997年 衛(wèi) 生部 專 門 下 發(fā) 57號 文 件 ， 具 體 部 署 用 基 因 工 程 乙 肝 疫 苗 取 代 血 源 乙 肝 疫苗 事 宜 。 乙肝疫苗的制備 目 的 基 因 的 獲 取 編 碼 乙 型 肝 炎 表 面 抗 原 的 基 因 的 獲 取 一 般 的 目 的 基 因 的 獲 取 方 法 有 ： 反 轉(zhuǎn) 錄 法 化 學(xué) 合 成 法 反 轉(zhuǎn)

8、 錄 聚 合 酶 鏈 反 應(yīng) 法 工 程 菌 的 構(gòu) 建 CHO(中 國 倉 鼠 卵 巢 ） 細(xì) 胞 的 特 點 具 有 準(zhǔn) 確 的 轉(zhuǎn) 錄 后 修 飾 功 能 ,表 達(dá) 的 糖 基 化 藥 物 蛋 白 在 分 子 結(jié)構(gòu) 、 理 化 特 性 和 生 物 學(xué) 功 能 方 面 最 接 近 于 天 然 蛋 白 分 子 具 有 產(chǎn) 物 胞 外 分 泌 功 能 ,便 于 下 游 產(chǎn) 物 分 離 純 化 ; 具 有 重 組 基 因 的 高 效 擴 增 和 表 達(dá) 能 力 ; 具 有 貼 壁 生 長 特 性 ,且 有 較 高 的 耐 受 剪 切 力 和 滲 透 壓 能 力 ,可以 進(jìn) 行 懸 浮 培 養(yǎng) ,

9、表 達(dá) 水 平 較 高 ; CHO 細(xì) 胞 屬 于 成 纖 維 細(xì) 胞 (fibrob2last) ,很 少 分 泌 自 身 的 內(nèi)源 蛋 白 ,利 于 外 源 蛋 白 的 后 分 離 目 的 基 因 的 表 達(dá) 蛋 白 質(zhì) 的 分 離 純 化 細(xì) 胞 破 碎 固 液 分 離 濃 縮 與 初 步 純 化 高 度 純 化 成 品 加 工 生產(chǎn)工藝控制 生 產(chǎn) 工 藝 基 因 工 程 乙 肝 疫 苗 （ 酵 母 重 組 ） 的 生 產(chǎn) 工 藝 包 括發(fā) 酵 、 提 取 、 純 化 、 吸 附 、 配 制 、 分 裝 等 工 序 。 生 產(chǎn) 工 藝中 采 用 世 界 一 流 的 發(fā) 酵 罐 ， 通

10、過 全 自 動 控 制 ， 提 供 酵 母 菌最 優(yōu) 生 長 條 件 ， 發(fā) 酵 后 經(jīng) 過 細(xì) 胞 破 碎 和 一 系 列 微 濾 、 超 濾 、硅 膠 吸 附 、 洗 脫 等 工 序 ， 再 經(jīng) 過 疏 水 層 析 ， 可 使 產(chǎn) 品 抗 原蛋 白 純 度 達(dá) 99%以 上 。 所 有 工 藝 設(shè) 備 可 自 動 清 洗 、 自 動 滅 菌 ，有 效 地 減 少 了 種 種 人 為 因 素 的 干 擾 ， 確 保 生 產(chǎn) 穩(wěn) 定 和 質(zhì) 量一 致 性 。 質(zhì) 量 控 制 基 因 工 程 乙 肝 疫 苗 （ 酵 母 重 組 ） 嚴(yán) 格 按 照 美 國 默克 公 司 質(zhì) 量 標(biāo) 準(zhǔn) 進(jìn) 行 質(zhì)

11、 量 控 制 ， 生 產(chǎn) 單 位 建 立 了 全 面 質(zhì) 量管 理 體 系 ， 產(chǎn) 品 原 輔 材 料 、 半 成 品 、 成 品 檢 測 和 環(huán) 境 檢 測等 方 面 均 有 嚴(yán) 格 質(zhì) 控 標(biāo) 準(zhǔn) 和 檢 定 程 序 。 基因工程乙肝疫苗的安全性 基 因 工 程 乙 肝 疫 苗 （ 酵 母 重 組 ） 的 有 效 成 分 來 自能 表 達(dá) 乙 肝 表 面 抗 原 的 酵 母 工 程 菌 ， 之 所 以 選 擇酵 母 這 種 宿 主 是 因 為 酵 母 菌 較 其 他 宿 主 有 更 高 的安 全 性 和 穩(wěn) 定 性 。 這 種 酵 母 工 程 菌 源 自 于 啤 酒 酵母 菌 ， 幾 千

12、年 來 ， 人 類 利 用 啤 酒 酵 母 生 產(chǎn) 啤 酒 的歷 史 表 明 啤 酒 酵 母 是 非 常 安 全 的 。 基 因 工 程 乙 肝 疫 苗 （ 酵 母 重 組 ） 的 安 全 性 還取 決 于 最 后 產(chǎn) 物 的 純 度 ， 即 取 決 于 來 自 宿 主 細(xì) 胞或 生 產(chǎn) 過 程 中 所 使 用 的 原 輔 材 料 中 殘 余 污 染 物 ，該 疫 苗 生 產(chǎn) 中 所 用 的 原 輔 材 料 對 人 體 無 害 ， 由 于采 用 了 先 進(jìn) 的 純 化 技 術(shù) ， 按 默 克 工 藝 生 產(chǎn) 的 基 因工 程 乙 肝 疫 苗 抗 原 蛋 白 的 純 度 在 99%以 上 ， 基

13、 因 工程 乙 肝 疫 苗 （ 酵 母 重 組 ） 中 酵 母 DNA含 量 極 低 ， 并且 該 DNA無 法 在 浦 乳 細(xì) 胞 中 整 合 表 達(dá) 。 乙肝疫苗的使用 基 因 工 程 乙 肝 疫 苗 (酵 母 重 組 )的 使 用 ： 基 因 工 程 乙 肝疫 苗 (酵 母 重 組 )的 接 種 對 象 、 用 法 、 貯 存 條 件 和 有 效 期 等方 面 均 同 于 血 源 乙 肝 疫 苗 ， 但 其 規(guī) 格 則 不 同 于 血 源 乙 肝 疫苗 。 基 因 工 程 乙 肝 疫 苗 (酵 母 重 組 )規(guī) 格 為 5 g/0.5ml。 之 所以 采 用 此 規(guī) 格 的 主 要 原

14、因 是 基 因 工 程 乙 肝 疫 苗 的 免 疫 原 性優(yōu) 于 血 源 乙 肝 疫 苗 的 免 疫 原 性 。 接種乙肝疫苗 接 種 程 序 ： 共 3 針 ， 按 照 0、 1、6 個 月 程 序 ， 即 接 種 第 1 針 疫 苗后 ， 間 隔 1 或 6 個 月 注 射 第 2 及第 3 針 疫 苗 。 新 生 兒 接 種 乙 型 肝炎 疫 苗 越 早 越 好 ， 要 求 在 出 生 后24 h 內(nèi) 接 種 。 接 種 部 位 新 生 兒為 大 腿 前 部 外 側(cè) 肌 肉 內(nèi) ， 兒 童 和成 人 為 上 臂 三 角 肌 中 部 肌 肉 內(nèi) 注射 由 于 嬰 幼 兒 和 成 人 的 免

15、 疫 應(yīng)答 敏 感 性 不 同 ， 所 以 有 的 人 打 疫苗 容 易 產(chǎn) 生 抗 體 ， 而 部 分 人 不 會產(chǎn) 生 抗 體 。 乙 肝 疫 苗 第 一 針 后 大概 有 30%左 右 的 人 產(chǎn) 生 抗 體 ， 而第 二 針 后 有 50% 70%左 右 ， 第 三 針 后 90%左 右 產(chǎn) 生 抗 體 。 打乙肝疫苗前的注意事項有以下幾點 1、 有 支 氣 管 哮 喘 和 血 清 病 的 人 、 對 青 霉 素 等 藥 物 過 敏 者 和 過 敏 性 蕁 麻 疹患 者 不 能 接 種 乙 肝 疫 苗 2、 成 年 人 接 種 乙 肝 疫 苗 最 好 注 射 在 上 臂 三 角 肌 處

16、 ， 此 處 的 接 種 成 功 率 最高 3、 乙 肝 患 者 和 乙 肝 病 毒 攜 帶 者 不 需 要 接 種 乙 肝 疫 苗 4、 非 正 常 出 生 的 嬰 兒 (包 括 剖 腹 產(chǎn) )和 出 生 后 體 質(zhì) 較 差 的 嬰 兒 最 好 推 遲 接種 時 間 5、 發(fā) 燒 患 者 和 先 天 性 免 疫 疾 病 患 者 或 某 些 重 癥 患 者 ， 應(yīng) 根 據(jù) 醫(yī) 院 判 斷 是否 接 種 乙 肝 疫 苗 6、 新 生 兒 第 一 針 必 須 在 出 生 后 24小 時 以 內(nèi) 接 種 ， 越 早 越 好 ； 除 新 生 兒 外 ，打 乙 肝 疫 苗 需 先 做 乙 肝 五 項 檢

17、 查 ， 根 據(jù) 檢 查 結(jié) 果 確 定 是 否 需 要 注 射 乙 肝 疫 苗 。 7、 打 乙 肝 疫 苗 時 ， 應(yīng) 做 好 登 記 ， 因 乙 肝 疫 苗 需 按 接 種 程 序 注 射 。 8、 乙 肝 疫 苗 注 射 時 一 定 要 放 松 心 情 和 保 持 肌 肉 不 緊 張 ， 否 則 可 能 會 導(dǎo) 致注 射 不 順 暢 ， 吸 收 不 好 等 問 題 ， 以 及 藥 物 進(jìn) 入 體 內(nèi) 不 適 應(yīng) 而 產(chǎn) 生 眩 暈 ， 臉 色 蒼白 ， 也 就 是 俗 稱 的 暈 針 。 9、 注 射 后 局 部 應(yīng) 保 持 衛(wèi) 生 ， 最 好 三 天 內(nèi) 不 要 擦 洗 ， 以 免

18、抓 破 引 起 局 部 感染 。 10、 目 前 一 般 按 照 0-1-6方 法 注 射 ， 即 第 一 針 后 1個 月 接 種 第 二 針 ， 6個 月后 接 種 第 三 針 。 為 達(dá) 到 最 佳 的 效 果 ， 應(yīng) 按 時 全 程 接 種 。 接種乙肝疫苗的人群 處 于 HBV感 染 高 度 危 險 狀 態(tài) 的 易 感 者（ 未 感 染 過 HBV的 人 ） 應(yīng) 接 種 乙 肝 疫 苗 。主 要 包 括 ： 全 部 新 生 兒 及 幼 兒 園 未接 種 過 乙 肝 疫 苗 的 孩 子 ； 傳 染 科 、口 腔 科 、 血 液 室 、 透 析 室 和 經(jīng) 常 接 觸 血液 的 工 作

19、人 員 ； 新 加 入 某 一 群 體 的人 員 ， 如 新 入 伍 的 戰(zhàn) 士 、 新 入 學(xué) 的 大 學(xué)生 ； 從 事 食 品 服 務(wù) 行 業(yè) 者 及 保 育 工作 人 員 ； 發(fā) 育 障 礙 者 ， 收 容 所 中 的患 者 和 工 作 人 員 ； 血 液 透 析 患 者 ； 使 用 血 液 制 品 者 ； 器 官 移 植 前 的 患 者 ； 需 長 期 應(yīng) 用 免 疫 抑 制 劑 者 ； 乙 肝 病 毒 攜 帶 者 的 家 庭 接 觸 者 ； 注射 毒 品 成 癮 者 ； 長 期 教 養(yǎng) 機 構(gòu) 中 的 犯 人 。 一 般 情 況 下 ， 打 了 乙 肝疫 苗 后 不 會 影 響 日

20、常 工 作和 生 活 ， 至 今 尚 未 見 有 關(guān)于 注 射 后 引 起 嚴(yán) 重 副 作 用的 現(xiàn) 象 ， 只 有 少 數(shù) 人 出 現(xiàn)接 種 部 位 紅 腫 、 硬 結(jié) 、 疼痛 ， 手 臂 酸 重 或 發(fā) 熱 、 惡心 、 嘔 吐 、 乏 力 、 皮 疹 等與 一 般 疫 苗 接 種 大 致 相 仿的 輕 微 反 應(yīng) ， 多 在 1 3天內(nèi) 不 治 自 愈 。 預(yù)防乙肝從新生兒開始 乙 肝 疫 苗 可 以 成 功 預(yù) 防 乙 肝 病 毒的 感 染 ， 新 生 兒 一 出 生 就 接 種 乙肝 疫 苗 ， 基 本 可 以 確 保 將 來 不 得乙 肝 。 不良反應(yīng) 乙 肝 疫 苗 自 197

21、9年 問 世 以 來 ， 經(jīng) 過 20多 年 的 大 規(guī)模 應(yīng) 用 和 觀 察 ， 至 今 尚 未 見 到 有 關(guān) 注 射 后 引 起 嚴(yán)重 不 良 反 應(yīng) 的 報 道 ， 只 有 少 數(shù) 人 出 現(xiàn) 接 種 部 位 紅腫 、 硬 結(jié) 、 疼 痛 、 手 臂 酸 重 或 發(fā) 熱 、 惡 心 、 嘔 吐 、乏 力 、 皮 疹 等 與 一 般 疫 苗 接 種 大 致 相 仿 的 輕 微 反應(yīng) ， 多 于 1-3天 內(nèi) 不 治 自 愈 。 由 于 乙 肝 疫 苗 屬 血源 性 的 ， 在 制 備 過 程 中 純 化 與 滅 活 程 序 十 分 嚴(yán) 密 ，故 不 會 產(chǎn) 生 像 破 傷 風(fēng) 等 動 物 血 清 疫 苗 可 能 造 成 的過 敏 反 應(yīng) ， 也 不 會 感 染 上 乙 肝 、 艾 滋 病 及 其 他 傳染 性 疾 病 。 與 其 他 疫 苗 同 時 接 種 亦 未 出 現(xiàn) 相 互 干擾 作 用 。 因 此 ， 可 以 說 ， 乙 肝 疫 苗 是 安 全 可 靠 的預(yù) 防 疫 苗 ， 注 射 前 也 不 必 皮 試 。 Bye bye