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1、單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),人教版高中生物,選擇性必修三全冊(cè)教學(xué)課件,1,第1節(jié) 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用,第,1,章 發(fā)酵工程,1.,果酒制作原理：,一,.,果酒和果醋的制作原理,酵母菌的呼吸作用,呼吸反應(yīng)式：,有氧條件：,無(wú)氧條件,:,C,6,H,12,O,6,+6O,2,+6H,2,O 6CO,2,+12H,2,O+,能量,酶,C,6,H,12,O,6,2C,2,H,5,OH+2CO,2,+,能量,酶,制作,條件：,溫度,：,氣體條件,：,時(shí)間,：,。,18,30,無(wú)氧,10,12d,2.,果醋的制作原理：,（,1,）,糖源充足條件時(shí),，

2、將,；,（,2,）,糖源不足條件,，先將,。,醋酸菌的有氧呼吸,制作,條件：,溫度,：,pH,值,：,氣體,：,時(shí)間,：,。,30,35,酸性,充足的氧氣,7,8d,C,6,H,12,O,6,2O,2,2CH,3,COOH,2CO,2,2H,2,O+,能量,酶,C,2,H,5,OH+O,2,CH,3,COOH+H,2,O+,能量,酶,二,.,果酒和果醋的制作過(guò)程：,小組討論：,以葡萄為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行果酒和果醋的制作。,討論內(nèi)容：,1.,實(shí)驗(yàn)材料的任何處理？,2.,為防止發(fā)酵液污染應(yīng)如何操作；,3.,發(fā)酵條件應(yīng)該如何控制？,挑選葡萄 沖洗 榨汁 酒精發(fā)酵 醋酸發(fā)酵,果酒,果醋,清洗用具及消毒,（一

3、）操作過(guò)程注意事項(xiàng)：,1.,材料的處理：,，,原因：,。,先將葡萄沖洗，再去枝梗,避免除去枝梗時(shí)引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機(jī)會(huì),（,1,）榨汁機(jī)、發(fā)酵瓶要清洗干凈，并用,70的酒精,消毒，并晾干。,（,2,）沖洗葡萄時(shí)應(yīng)先沖洗再除去枝梗,（,3,）排氣時(shí)只需擰松瓶蓋，不要完全揭開(kāi)瓶蓋，防止雜菌污染。,2.,防止發(fā)酵液被污染：,3.,控制好發(fā)酵條件：,將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶，要留大約13的空間，,原因,。,先讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，快速繁殖，耗盡,O,2,后，再進(jìn)行酒精發(fā)酵；,防止發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的,CO,2,造成發(fā)酵液溢出,。,沖洗,葡萄 榨汁裝瓶 酒精發(fā)酵 醋酸發(fā)酵,果酒,果醋,清洗用具及消毒,

4、當(dāng)葡萄酒制作完成后，,打開(kāi)瓶蓋,，,蓋上一層紗布,，進(jìn)行葡萄醋的發(fā)酵。,發(fā)酵溫度為,30-35,，時(shí)間為,7-8d,。,醋酸發(fā)酵,空氣中的醋酸菌會(huì)進(jìn)入果酒發(fā)酵液中大量繁殖,1.,充氣口,：,；,2.,排氣口：,；,3.,出料,口,：,。,用于醋酸發(fā)酵時(shí)充氣,排出發(fā)酵初期產(chǎn)生的二氧化碳和殘留空氣,防止空氣中微生物的污染,用于取樣檢測(cè),排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身連接的目的是：,5.,結(jié)果分析與評(píng)價(jià),（1）在制作果酒和果醋的過(guò)程中，發(fā)酵液分別有哪些變化？,其中最明顯的變化發(fā)生在發(fā)酵后多少天？引起變化的原因是什么？,在葡萄酒的制作過(guò)程中，發(fā)酵液會(huì),產(chǎn)生氣泡,，這是因?yàn)榻湍妇l(fā)酵產(chǎn)生CO,2,

5、；,開(kāi)始發(fā)酵后，CO,2,產(chǎn)生越來(lái)越多，會(huì)使發(fā)酵液出現(xiàn)“沸騰”現(xiàn)象，在發(fā)酵的,10天后，這種現(xiàn)象最明顯,。,發(fā)酵過(guò)程,產(chǎn)熱,，會(huì)使發(fā)酵液溫度上升，應(yīng)注意控溫；,隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，由果皮進(jìn)入發(fā)酵液的花青素會(huì)越來(lái)越多，因而,發(fā)酵液的顏色會(huì)逐漸加深,變成深紅色。,果醋發(fā)酵完成時(shí)，在發(fā)酵液的液面上會(huì),出現(xiàn)一層菌膜,，這是醋酸菌膜。,5.,結(jié)果分析與評(píng)價(jià),（2）在制作果酒的過(guò)程中，除了酵母菌，是否還有其他微生物生長(zhǎng)？,它們會(huì)對(duì)果酒發(fā)酵產(chǎn)生影響嗎？如果有，如何避免這種影響？,還有,乳酸菌,、,醋酸菌,等微生物。,可以通過(guò),減少O,2,含量,、,調(diào)節(jié)發(fā)酵溫度,、,pH,來(lái)控制醋酸菌含量。,可以通過(guò)調(diào)節(jié)發(fā)酵

6、的溫度、pH等來(lái)控制乳酸菌含量；,在有氧的情況下，醋酸菌能把糖分解成醋酸或者把乙醇轉(zhuǎn)化為乙醛進(jìn)而,轉(zhuǎn)化為醋酸,。,乳酸菌能將糖分解為甘油、酒石酸等，從而,使果酒變質(zhì),。,5.,結(jié)果分析與評(píng)價(jià),（3）在制作果醋的過(guò)程中，酵母菌是否還會(huì)繼續(xù)發(fā)酵？,醋酸菌從何而來(lái)？采用什么措施可以加快果醋的制作？,隨著醋酸發(fā)酵的進(jìn)行，發(fā)酵液的,pH、發(fā)酵溫度等均不利,于酵母菌的生長(zhǎng)繁殖，因此酵母菌活性很低，,不會(huì)繼續(xù)發(fā)酵,。,在工業(yè)上，后期醋的發(fā)酵需要,人工接種醋酸菌,?；蛘哔I(mǎi)一瓶醋，將其打開(kāi)暴露于空氣中，一段時(shí)間后在醋的表面會(huì)有一層薄膜（即醋酸菌膜），用這層薄膜進(jìn)行接種亦可。,在我們的實(shí)驗(yàn)條件下，當(dāng),打開(kāi)瓶蓋后，

7、空氣中的醋酸菌會(huì)進(jìn)入發(fā)酵液中大量繁殖,，其他的菌因不適應(yīng)環(huán)境條件而不能繁殖。,5.,結(jié)果分析與評(píng)價(jià),（,4,）如何檢測(cè)果酒、果醋的發(fā)酵情況（檢測(cè)是否產(chǎn)生酒精、醋酸）？,a.聞,b.品嘗,c.用酸性條件下的,重鉻酸鉀溶液,檢測(cè)（,橙色灰綠色,）,a.聞；,b.品嘗；,c.使用,pH試紙檢測(cè),和比較發(fā)酵前后的pH值；,d.觀察醋酸,菌膜,是否形成；,到社會(huì)中去,查閱關(guān)于果酒和果醋工業(yè)化生產(chǎn)的工藝流程，比較自己制作果酒和果醋的方法與這些流程有哪些異同。在此基礎(chǔ)上，請(qǐng)思考：當(dāng)把少量制作轉(zhuǎn)化為大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)，需要解決哪些實(shí)際問(wèn)題？你能從中體會(huì)到技術(shù)與工程的區(qū)別的和聯(lián)系嗎？,在大規(guī)模生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)品時(shí)，需要進(jìn)行

8、更為全面周詳?shù)目紤]，如考慮原料的來(lái)源與選樣、菌種的選育與培養(yǎng)、發(fā)酵設(shè)備的選擇、發(fā)酵條件的自動(dòng)化控制、發(fā)酵產(chǎn)品的質(zhì)量控制、成本價(jià)格等。,工程、技術(shù)與科學(xué)的不同,科學(xué)以“發(fā)現(xiàn)”為核心，技術(shù)以“發(fā)明”為核心，工程以“建造”和“產(chǎn)品”為核心。技術(shù)要通過(guò)工程設(shè)計(jì)等環(huán)節(jié)，將一系列相關(guān)技術(shù)體系化地組合起來(lái)，才能轉(zhuǎn)化應(yīng)用在工程中，大規(guī)模生產(chǎn)人們需要的產(chǎn)品。,1.,蘋(píng)果醋是以蘋(píng)果汁為原料經(jīng)發(fā)酵而成的，回答下列為題：,（1）酵母菌的呼吸代謝途徑如圖所示。圖中過(guò)程和是蘋(píng)果醋生產(chǎn)的第一階段，在酵母菌細(xì)胞的_中進(jìn)行，其產(chǎn)物乙醇與_試劑反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色，這一反應(yīng)可用于乙醇的檢驗(yàn)；過(guò)程在酵母菌細(xì)胞的_中進(jìn)行，與無(wú)氧條件相比，

9、在有氧條件下，酵母菌的增值速度_。,細(xì)胞質(zhì)基質(zhì),（酸性）重鉻酸鉀,線粒體,快,當(dāng)堂檢測(cè),（2）第二階段是在醋酸桿菌的作用下將第一階段產(chǎn)生的乙醇轉(zhuǎn)變?yōu)榇姿岬倪^(guò)程，根據(jù)醋酸桿菌的呼吸作用類型，該過(guò)程需要在_條件下才能完成。,（3）在生產(chǎn)過(guò)程中，第一階段和第二階段的發(fā)酵溫度不同，第一階段的溫度_（填“低于”或“高于”）第二階段。,（4）醋酸桿菌屬于_核生物，其細(xì)胞結(jié)構(gòu) 中,（填“含有”或“不含有”）線粒體。,有氧,低于,原核,不含有,2.,葡萄酒是葡萄汁經(jīng)酵母菌發(fā)酵而成的，釀制葡萄酒的兩個(gè)簡(jiǎn)易裝置如圖所示。,回答下列問(wèn)題：,（,1,）試管中的,X,溶液有助于維持甲裝置的瓶中氣壓相對(duì)穩(wěn)定，與乙裝置相比

10、，用甲裝置制葡萄酒的優(yōu)點(diǎn)是,、,（答出兩點(diǎn)即可）。,（,2,）葡萄汁裝入甲裝置時(shí)，要留有約,1/3,的空間，這種做法的目的是,、,（答出兩點(diǎn)即可）。,不需要開(kāi)蓋放氣,避免了因開(kāi)蓋引起的雜菌污染,為酵母菌大量繁殖提供適量的氧氣,防止發(fā)酵旺盛時(shí)汁液溢出,乙,甲,X,溶液,物,質(zhì),含,量,丙,t,物,質(zhì),含,量,丙,t,（,3,）某同學(xué)若用乙裝置進(jìn)行發(fā)酵，設(shè)置兩個(gè)不同處理組（,A,和,B,），,A,裝置中保留一定量的氧氣，,B,裝置中沒(méi)有氧氣。在其他條件相同且適宜的情況下，測(cè)得一段時(shí)間內(nèi),A,和,B,中酒精含量的變化趨勢(shì)及,A,中氧氣含量的變化趨勢(shì)如曲線圖丙所示。圖中曲線,、,、,依次表示,、,、,

11、含量的變化趨勢(shì)。,（,4,）從細(xì)胞呼吸類型看，酵母菌屬于,生物；從同化作用的類型看，酵母菌屬于,（填“自養(yǎng)”或“異養(yǎng)”） 生物。,A,中的氧氣,B,中的酒精,A,中的酒精,兼性厭氧,異養(yǎng),乙,甲,X,溶液,第,2,節(jié) 微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用(第1課時(shí)),第,1,章 發(fā)酵工程,從社會(huì)中來(lái),酸奶的制作及安全性,向,經(jīng)過(guò)殺菌處理的牛奶中添加某些對(duì)人體有益的細(xì)菌，再經(jīng)過(guò)發(fā)酵就可以制成酸奶。自制酸奶雖然方便，但是食用自制酸奶導(dǎo)致腸胃不適的事例屢見(jiàn)不鮮，主要原因是在制作過(guò)程中有雜菌混入,。,那么,？怎樣才能保證無(wú)處不在的雜菌不混入發(fā)酵物中呢,？,一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù),相關(guān)信息,微生物,是難以用肉眼觀察

12、的微小生物的統(tǒng)稱，包括細(xì)菌、真菌、病毒及一些原生生物等。發(fā)酵工程提及的微生物主要指用于發(fā)酵的細(xì)菌和真菌,。,研究和應(yīng)用微生物的,前提,是,防止雜菌污染,，,獲得純凈的微生物培養(yǎng)物,，也是發(fā)酵工程的重要,基礎(chǔ),。,在,實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物，一方面要為人們需要的微生物提供合適的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件；另一方面確保其他微生物無(wú)法混入，并將需要的微生物分離出來(lái)。,一,、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù),（一）培養(yǎng)基的配制,1,概念人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng),繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。,2,用途：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。,3,種類：,不,含凝固劑（如瓊脂）、呈液體狀態(tài)的培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，

13、呈固體狀態(tài)的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基。,（一）培養(yǎng)基的配制,4,成分 結(jié)合右圖分析,碳源：提供碳元素的物質(zhì)；,氮源：提供氮元素的物質(zhì)；,水；,無(wú)機(jī)鹽：磷酸鹽、,NaCl,；,生長(zhǎng)因子：維生素,不同微生物培養(yǎng)基的配方各不相同，在提供上述幾種主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì),pH,、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及,O,2,的需求。當(dāng)然合適的培養(yǎng)溫度也是必不可少的。,特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：,又,稱作生長(zhǎng)因子，是一類微生物正常生長(zhǎng)代謝所必需的，而且微生物不能用碳源、氮源自行合成的有機(jī)物。廣義的生長(zhǎng)因子除了,維生素,外，還包括,堿基,、,生物素,和,煙酸,等，有時(shí)還包括,氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷,突變株所需要的氨基酸,。,

14、組分,含量,提供的主要營(yíng)養(yǎng),牛肉膏,5g,碳源、磷酸鹽和維生素等,蛋白胨,10g,氮源和維生素等,NaCl,5g,無(wú)機(jī)鹽,H,2,O,定容至,1000mL,水,1000mL,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成,在,實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物，一方面要為人們需要的微生物提供合適的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件；另一方面確保其他微生物無(wú)法混入，并將需要的微生物分離出來(lái)。,（二）無(wú)菌技術(shù),獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染。,/,無(wú)菌技術(shù)除用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么作用？,/,1,無(wú)菌技術(shù)的措施,消毒 指使用,較為溫和,的,_,、,_,或,_,等方法殺死物體,_,或,_,一部分微生物。,滅菌 指

15、使用,強(qiáng)烈,的,_,方法殺死物體,_,的微生物，包括,_,和,_,。,物理,化學(xué),生物,表面,內(nèi)部,？,能有效避免操作者被微生物感染。,內(nèi)外所有,理化,芽孢,孢,子,（二）無(wú)菌技術(shù),2,無(wú)菌技術(shù)的操作內(nèi)容,對(duì)操作的,_,、操作者的,_,和,_,進(jìn)行,清潔和消毒,；將用于微生物培養(yǎng)的,_,_,、,_,和,_,等進(jìn)行,滅菌,。,3,無(wú)菌技術(shù),的操作方法,常用的消毒方法有,_,消毒、,_,消毒等；滅菌方法有,_,滅菌、,_,滅菌和,_,滅菌等。,空間,衣著,手,器皿,接種用具,培養(yǎng)基,煮沸,巴氏,濕熱,干熱,灼燒,種類,常用方法,應(yīng)用范圍,消毒,煮沸,100,煮沸,56min,家庭餐具等生活用品，可

16、殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢,巴氏,6265,消毒,30min,或,8090,處理,30s1min,一些不耐高溫的液體，如牛奶、啤酒，可以殺死絕大多數(shù)微生物，并且基本不破壞其營(yíng)養(yǎng)成分,化學(xué)藥物,體積分?jǐn)?shù)為,70%75%,的酒精擦拭、碘酒涂抹、氯氣噴灑等,用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等,紫外線,30W,紫外線照射,30min,接種室、接種箱、超凈工作臺(tái)等,滅菌,濕熱,100kPa,、,121,維持,1530min,培養(yǎng)基及多種容器,干熱,干熱滅菌箱,160170,加熱,23h,玻璃器皿、金屬用具等耐高溫、需干燥的物品,灼燒,酒精燈火焰灼燒,接種環(huán)、接種針或其他金屬用具等，試管口或瓶口,（,

17、三,）微生物的純培養(yǎng),1,幾個(gè)基本概念,培養(yǎng)物 接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含,特定種類微生物的群體,。,純培養(yǎng)物 由,單一個(gè)體,繁殖所獲得的微生物群體。,純培養(yǎng) 獲得純培養(yǎng)物的過(guò)程。包括,配制培養(yǎng)基,、,滅菌,、,接種,、,分離,和,培養(yǎng),等步驟。,探究,實(shí)踐,酵母菌的純培養(yǎng),分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖成肉眼可見(jiàn)的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，這就是,菌落,。采用,_,和,_,能將單個(gè)微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個(gè)微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。,平板劃線法,稀釋涂布平板法,探究,實(shí)踐,酵母菌的純培養(yǎng),目的要求,1,學(xué)會(huì)配制培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)

18、基并倒平板,2,學(xué)會(huì)進(jìn)行無(wú)菌操作,3,嘗試通過(guò)平板劃線操作來(lái)獲得純化的酵母菌菌落,材料用具（略）,方法步驟,1,制備培養(yǎng)基,配制培養(yǎng)基 去皮馬鈴薯,200g,，切成小塊，加水,1000mL,，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過(guò)濾。向?yàn)V液中加入,20g,葡萄糖（也可用蔗糖代替）、,1520g,瓊脂，用蒸餾水定容至,1000mL,。,？,酵母菌的純培養(yǎng),方法步驟,1,制備培養(yǎng)基,滅菌 將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上,牛皮紙,，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為,100kPa,、溫度為,121,的條件下，滅菌,1530min,。將,58,套培養(yǎng)皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入

19、高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，本實(shí)驗(yàn)所用器具也一并放入滅菌。,思考,1,牛皮紙有何作用？,在滅菌時(shí)能避免因水蒸汽凝結(jié)而浸濕棉塞；在取出盛有培養(yǎng)基的錐形瓶時(shí)也能起到隔絕空氣中雜菌的作用。,探究,實(shí)踐,探究,實(shí)踐,？,酵母菌的純培養(yǎng),方法步驟,1,制備培養(yǎng)基,倒平板 待培養(yǎng)基冷卻至,50,左右時(shí)，在酒精燈,火焰附近,倒平板。,思考,2,為什么培養(yǎng)基滅菌后要冷卻到,50,左右時(shí)開(kāi)始倒平板？,瓊脂是一種多糖，在,98,以上熔化，在,44,以下凝固，倒平板時(shí)高于,50,會(huì)燙手，低于,50,時(shí)，若不及時(shí)操作，瓊脂會(huì)凝固。,思考,3,倒平板的過(guò)程中，若不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎

20、？為什么？,不能，因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。,思考,4,平板冷凝后，為什么要將平板倒置？,防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染，又可以使培養(yǎng)基中的水分較快地蒸發(fā)。,？,酵母菌的純培養(yǎng),方法步驟,2,接種和分離酵母菌,通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。,思考,5,接種前灼燒接種環(huán)的目的是什么？以后為什么每次劃線前都要灼燒接種環(huán)？,接種前灼燒接種環(huán)的目的是避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物。以后每次劃線前都要灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)接種環(huán)

21、上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端。,思考,6,為什么每次劃線操作總是從上一次劃線的末端開(kāi)始？,劃線后末端含有的微生物數(shù)目較少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線能夠使微生物的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而減少，最終分散成單個(gè)細(xì)胞。,探究,實(shí)踐,？,？,酵母菌的純培養(yǎng),方法步驟,2,接種和分離酵母菌,思考,7,為什么最后一次劃線與第一次劃線不能相連？,最后一次劃線通常已經(jīng)將微生物稀釋成單個(gè)的細(xì)胞，如果與第一次劃線相連則增加了微生物的數(shù)目，得不到純化的效果。,3,培養(yǎng)酵母菌,完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置，放入,28,左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),2448h,。,思考,8,

22、為什么要將一個(gè)未接種的平板倒置？,未接種的平板作為對(duì)照組，若其上有菌落生長(zhǎng)，則說(shuō)明培養(yǎng)基被污染或滅菌不徹底。,探究,實(shí)踐,警示,：在實(shí)驗(yàn)室中，切記不可吃東西、喝水，離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室時(shí)一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境。,練一練,1,下列關(guān)于微生物培養(yǎng)基的說(shuō)法，正確的是（ ）,A,同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源,B,除水以外的無(wú)機(jī)物僅提供無(wú)機(jī)鹽,C,凡是碳源都能提供能量,D,無(wú)機(jī)氮源也能提供能量,【,解析,】,對(duì)異養(yǎng)型微生物來(lái)說(shuō)，含,C,、,H,、,O,、,N,的化合物既是碳源，又是氮源，如蛋白胨既是碳源又是氮源和能源，,A,錯(cuò)誤；除水以外的無(wú)機(jī)物

23、種類繁多，如,CO,2,和,N,2,是無(wú)機(jī)物，分別可以作為某些微生物的碳源和氮源，,B,錯(cuò)誤；,CO,2,是自養(yǎng)型微生物的碳源，但不能提供能量，,C,錯(cuò)誤；硝化細(xì)菌所利用的氮源是氨，同時(shí)氨也為硝化細(xì)菌提供用于化能合成作用的能量，,D,正確。,D,練一練,2,防止外來(lái)雜菌的入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物，是研究和應(yīng)用微生物的前提。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）,A,實(shí)驗(yàn)室里可以用紫外線或化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒,B,接種環(huán)、接種針等金屬用具，直接在酒精燈火焰的內(nèi)焰部位灼燒滅菌,C,在實(shí)驗(yàn)室中，切不可吃東西、喝水，離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室時(shí)一定要洗手，防止被微生物感染,D,使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境,【,解析

24、,】,灼燒滅菌應(yīng)該在酒精燈火焰的外焰部位灼燒，,B,項(xiàng)錯(cuò)誤。,B,練一練,3,下圖為實(shí)驗(yàn)室中酵母菌純培養(yǎng)過(guò)程的部分操作步驟，下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）,A,步驟使用的是已經(jīng)調(diào)節(jié)過(guò),pH,并滅菌的培養(yǎng)基,B,步驟操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁時(shí)行,C,到,的過(guò)程中，接種環(huán)共灼燒了,5,次,D,步驟操作時(shí)，不能將第,1,區(qū)和第,5,區(qū)的劃線相連,C,第,2,節(jié) 微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用(第,2,課時(shí)),第,1,章 發(fā)酵工程,自然界中微生物數(shù)量繁多，種類龐雜，要想從中分離出需要的特定微生物并不容易，尤其當(dāng)要分離的微生物在混合的菌群中不是優(yōu)勢(shì)種群時(shí)，僅通過(guò)一般的平板劃線法或稀釋涂布平板法很難實(shí)現(xiàn)。,資料,1973

25、,年，科學(xué)家從美國(guó)黃石國(guó)家公園的熱泉中篩選出水生棲熱菌，進(jìn)而從這種菌中提取出耐高溫的,DNA,聚合酶。這種酶目前已被廣泛用于體外擴(kuò)增,DNA,片段的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),(,PCR,),。,思考：篩選水生棲熱菌的條件是什么？為什么這個(gè)條件能讓水生棲熱菌“脫穎而出”？,7080,的高溫條件。水生棲熱菌能,適應(yīng),高溫環(huán)境，而絕大多數(shù)微生物在此條件下不能生存，因此水生棲熱菌被篩選出來(lái)。,二,、微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù),1,選擇,培養(yǎng)基 在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。,思考,討論,？,選擇培養(yǎng)基配方的設(shè)計(jì),尿素,CO(NH,2,),2,含氮量高，化學(xué)性質(zhì)相

26、對(duì)穩(wěn)定，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一種重要的氮肥。尿素施入土壤后，會(huì)被土壤中的某些細(xì)菌分解成,NH,3,，,NH,3,再轉(zhuǎn)化為,NO,3,-,、,NH,4,+,等被植物吸收。而這些細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕?，脲酶催化尿素分解產(chǎn)生,NH,3,，,NH,3,可作為細(xì)菌生長(zhǎng)的氮源。,討論,1,如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)？,培養(yǎng)基的配方中應(yīng)含有微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)要素,碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽等。由于絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，分解尿素的細(xì)菌也能利用葡萄糖，可以用葡萄糖作為碳源，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，在培養(yǎng)基中加入尿

27、素提供氮源，使培養(yǎng)基具有了選擇作用。該培養(yǎng)基以尿素作為唯一氮源，只允許以尿素作為氮源的微生物生長(zhǎng)。,討論,2,該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點(diǎn)和不同點(diǎn)？,該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基相比較，共同點(diǎn)是都以有機(jī)碳（如葡萄糖）作為碳源，都有水和無(wú)機(jī)鹽；不同點(diǎn)是該培養(yǎng)基以尿素作為唯一氮源，使只有能以尿素作為氮源的微生物生長(zhǎng)。,拓展應(yīng)用,1,反芻動(dòng)物，如牛和羊，具有特殊的器官,瘤胃。在瘤胃中生活著多種微生物，其中許多微生物能分解尿素。請(qǐng)你設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)，從瘤胃中分離出能夠分解尿素的微生物。,提示：反芻動(dòng)物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。瘤胃中的微生物多為,厭氧,微生物，接觸空氣后會(huì)死亡，因此

28、分離其中能分解尿素的微生物除了需要準(zhǔn)備選擇培養(yǎng)基外，還應(yīng)參照厭氧微生物的培養(yǎng)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。,拓展應(yīng)用,2,地球上的植物每年產(chǎn)生的纖維素超過(guò),70,億噸，其中,40%60%,能被土壤中某些微生物分解利用，這是因它們能夠產(chǎn)生纖維素酶。已知?jiǎng)偣t是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不與水解后的纖維二糖、葡萄糖等發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們?cè)诤欣w維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物；而當(dāng)纖維素,被纖維素分解菌分解后，復(fù)合物無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以這,些菌為中心的透明圈。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。,（,1,）現(xiàn)在要從土壤中分離纖維素分解菌，請(qǐng)你給出詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案。,在

29、富含纖維素的環(huán)境中進(jìn)行土壤取樣,用梯度稀釋法制備一系列稀釋液,制備剛果紅選擇培養(yǎng)基（纖維素為唯一碳源、含有剛果紅）,用稀釋涂布平板法接種稀釋后的菌液,適宜條件下培養(yǎng),挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。,（,2,）你打算到什么環(huán)境中去尋找纖維素分解菌？為什么？,打算到富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌。因?yàn)楦鶕?jù)生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的概率要高于普通環(huán)境。,（,3,）有同學(xué)說(shuō)，可以把濾紙埋在土壤中，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，再?gòu)囊迅癄€的濾紙上篩選纖維素分解菌。請(qǐng)你評(píng)價(jià)這一做法。,這一做法可行，通過(guò)人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境，使纖

30、維素分解菌聚集。濾紙富含纖維素，將濾紙埋在土壤中，纖維素分解菌就會(huì)在濾紙上聚集分解纖維素，可以從腐爛的濾紙上篩選纖維素分解菌。,鑒別培養(yǎng)基,思維拓展,選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基,選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基是按培養(yǎng)基用途區(qū)分的，兩者在很多方面具有不同的特點(diǎn)，兩者比較如下表：,項(xiàng)目,選擇培養(yǎng)基,鑒別培養(yǎng)基,特殊,成分,添加（或缺少）某種化學(xué)成分,加入某種指示劑或化學(xué)藥品（不影響微生物正常生長(zhǎng)）,機(jī)理,抵制其他微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)目標(biāo)微生物的生長(zhǎng),微生物的某種代謝物與培養(yǎng)基中的特定指示劑或化學(xué)藥品發(fā)生反應(yīng)，使目標(biāo)菌落出現(xiàn)特定的特征,平板的菌落,只出現(xiàn)目標(biāo)菌落（其他微生物被抑制）,出現(xiàn)多種菌落，但目標(biāo)菌落出現(xiàn)特

31、定的特征,用途,培養(yǎng)、分離出目標(biāo)微生物,鑒別出目標(biāo)微生物,舉例,不加氮源，可分離固氮微生物；不加碳源，可分離自養(yǎng)微生物；加青霉素，可分離酵母菌等真菌。,用伊紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基鑒定飲用水或乳制品中是否含有大腸桿菌（若有，則菌落呈深紫色，并有金屬光澤）；在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基上加入剛果紅可鑒別纖維素分解菌（有透明圈的菌落即為纖維素分解菌菌落）,如果想知道,1g,土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌，僅有選擇培養(yǎng)基是不夠的，還需要對(duì)土樣進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚硪约翱茖W(xué)的測(cè)定微生物數(shù)量的方法。,二、微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù),2,微生物的選擇培養(yǎng)（分離）,稀釋涂布平板法,由于土壤中細(xì)菌的數(shù)量龐大，要想得到能分解尿素的

32、細(xì)菌的純培養(yǎng)物，必須要對(duì)土樣進(jìn)行充分稀釋，然后再將菌液涂布到制備好的選擇培養(yǎng)基上，也就是要采用稀釋涂布平板法。,稀釋涂布平板法的操作步驟：土壤取樣,梯度稀釋,取菌液滴加到培養(yǎng)基表面,涂布器消毒、滅菌,涂布平板。,待,涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將,平板倒置,，放,3037,的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),12d,。在涂布有合適濃度菌液的平板上就可以觀察到分離的單菌落。,二、微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù),3,微生物的數(shù)量測(cè)定,稀釋涂布平板法,稀釋涂布平板法除可以用于分離微生物外，也常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中,活菌,的數(shù)目。,稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)原理,當(dāng)樣品中稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活

33、菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。,稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)原則,為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為,30300,的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。樣品的稀釋度將直接影響平板上的菌落數(shù)目。在同一稀釋度下，應(yīng)至少對(duì),3,個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值。,若其中,1,個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另外,2,個(gè)相差較大，說(shuō)明在操作過(guò)程中出現(xiàn)了錯(cuò)誤，在求平均值時(shí)該數(shù)據(jù)應(yīng)舍去,。,？,二、微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù),3,微生物的數(shù)量測(cè)定,稀釋涂布平板法,思考：稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)與實(shí)際有何偏差？為什么？,稀釋,涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落,數(shù)往往,比活菌的實(shí)際數(shù)目少,，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀

34、察到的只是一個(gè)菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來(lái)表示。,微生物的數(shù)量測(cè)定的其他方法,顯微鏡直接計(jì)數(shù)法,顯微鏡直接計(jì)數(shù)，是一種常用的、,快速直觀,的測(cè)定微生物數(shù)量的方法。該方法利用特定的,細(xì)菌計(jì)數(shù)板,或,血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,，在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)，然后再計(jì)算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是,活菌數(shù),和,死菌數(shù),的總和。此方法計(jì)數(shù)時(shí)包括了死細(xì)胞，因此計(jì)數(shù)的結(jié)果,比實(shí)際值大,，通過(guò)輔助處理，在計(jì)數(shù)前用,臺(tái)盼藍(lán),對(duì)菌液進(jìn)行染色，通過(guò),統(tǒng)計(jì)無(wú)色細(xì)胞,的個(gè)數(shù)得到活菌數(shù)。,探究,實(shí)踐,土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù),一、分離原理,絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生

35、物才能分解尿素。利用以,尿素,作為,唯一氮源,的,選擇培養(yǎng)基,，可以從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌，該選擇培養(yǎng)基的配方見(jiàn)下表。,組分,含量,KH,2,PO,4,1.4g,Na,2,HPO,4,2.1g,MgSO47H2O,0.2g,葡萄糖,10.0g,尿素,1.0g,瓊脂,15.0g,H,2,O,定容至,1000mL,二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),1,土壤取樣 細(xì)菌適宜在酸堿度接近,中性,的,潮濕,土壤中生長(zhǎng)，絕大多數(shù)分布在,距地表,38cm,的土壤層。,2,制備培養(yǎng)基 用,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,作為,對(duì)照組,，用以,尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基,作為,實(shí)驗(yàn)組,，用來(lái)判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用。,探究,實(shí)踐,土壤中

36、分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù),二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),3,樣品的,稀釋,在酒精燈火焰旁稱取,10g,土壤，放入盛有,90mL,無(wú)菌水的錐形瓶中，振蕩使土壤與水充分混合，將細(xì)菌分散，制成,10,1,倍土壤稀釋液。用,1,支,1mL,無(wú)菌吸管從中吸取,1mL,土壤懸液注入盛有,9mL,無(wú)菌水的試管中，吹吸,3,次，充分混勻，制成,10,2,倍的土壤稀釋液，,依此類推制成,10,3,、,10,4,、,10,5,、,10,6,、,10,7,倍的土壤稀釋液（如下圖）。,4,涂布平板,測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用,110,4,、,110,5,、,110,6,倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)。第一次做該實(shí)驗(yàn)時(shí)，可以將稀釋范

37、圍放寬一點(diǎn)。如將,110,3,110,7,倍,稀釋的稀釋,液分別涂布到平板上培養(yǎng)。,探究,實(shí)踐,土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù),思考：結(jié)合下圖分析，為了確認(rèn)培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出一些菌落，該如何設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)？,二,、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),5,培養(yǎng)與觀察 將平板倒置于,3037,的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),12,天，每隔,24h,統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。,圖,中的,1,、,2,、,3,平板是選擇培養(yǎng)基，,4,平板為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，以判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用；另外，還要有兩個(gè)對(duì)照，即不涂布稀釋的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，以驗(yàn)證培養(yǎng)基中是否含有雜菌,。,探究,實(shí)踐,土壤中分解尿素的細(xì)菌的

38、分離與計(jì)數(shù),二,、,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),6,菌落計(jì)數(shù) 當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在,30300,的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，同一稀釋度下至少計(jì)數(shù),3,個(gè)平板，求出平均值，并根據(jù)所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目（如下表）。,7,結(jié)果分析與評(píng)價(jià),稀釋度,10,4,10,5,10,6,10,7,1,2,3,平均值,1,2,3,平均值,1,2,3,平均值,1,2,3,平均值,每個(gè)平板的菌落數(shù),內(nèi)容,現(xiàn)象,結(jié)論,有無(wú)雜菌污染的判斷,空白對(duì)照的培養(yǎng)基中無(wú)菌落生長(zhǎng),未被雜菌污染,選擇培養(yǎng)基中菌落數(shù)偏高,被雜菌污染,菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高,培養(yǎng)基中混入其他氮源,選擇培養(yǎng)基的篩選作用,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目多于選擇培

39、養(yǎng)基上的數(shù)目,選擇培養(yǎng)基具有篩選作用,樣品的稀釋操作,得到,2,個(gè)或,2,個(gè)以上菌落數(shù)在,30300,的平板,操作成功,練一練,1,培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒方法依次是（ ）,化學(xué)消毒法,灼燒滅菌法,干熱滅菌法,紫外線消毒法,高壓蒸汽滅菌法,巴氏消毒法,A B,C D,2,下列培養(yǎng)基配方中，能作為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基的依次是（ ）,A B C D,A,原料,蛋白胨,乳糖,蔗糖,K,2,HPO,4,伊紅,亞甲藍(lán),瓊脂,NaCl,蒸餾水,10g,5g,5g,2g,0.4g,0.065g,10g,-,1000mL,10g,5g,5g,2g,-,-,20g

40、,-,1000mL,10g,5g,5g,2g,-,-,-,20g,1000mL,10g,5g,5g,2g,-,-,-,-,1000mL,B,練一練,3,幽門(mén)螺桿菌（,Hp,）感染是急、慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：,（,1,）圖中,4,支試管分別代表,4,種微生物在半固體培養(yǎng)基（瓊脂含量為,3.5g/L,）中的生長(zhǎng)狀態(tài)，其中,號(hào)試管代表,Hp,的生長(zhǎng)狀態(tài)，由圖判斷，,Hp,在,_,條件下不能生長(zhǎng)。,（,2,）下表所示是某種培養(yǎng)基的配方。,將,Hp,接種到,pH,適宜的該培養(yǎng)基中，置于,37,下培養(yǎng)一段時(shí)間后，該培養(yǎng)基中,Hp,的數(shù)目比剛接種時(shí),_,，主要原因是,_,。

41、,成分,葡萄糖,KH,2,PO,4,MgSO,4,NaCl,CaSO,4,CaCO,3,瓊脂,蒸餾水,含量,10g,0.2g,0.2g,0.2g,0.2g,5g,3.5g,定容至,1L,氧氣濃度過(guò)高或過(guò)低,少,缺少氮源,練一練,3,幽門(mén)螺桿菌（,Hp,）感染是急、慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：,（,3,）研究人在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進(jìn)行分離培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下：,配制培養(yǎng)基,滅菌、倒平板,X,培養(yǎng),觀察,在配制培養(yǎng)基時(shí)，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)?Hp,能合成,_,，它能以尿素作為氮源；若有,Hp,，則菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn),_,色環(huán)帶。,步驟,X,表示,_

42、,。在無(wú)菌條件下操作時(shí)，先將菌液稀釋，然后將菌液,_,到培養(yǎng)基表面上。稀釋菌液的目的是獲得,_,菌落。,在培養(yǎng)時(shí)，需將培養(yǎng)皿倒置并放在,_,中。若不倒置培養(yǎng)，將導(dǎo)致,_,。,臨床上用,14,C,標(biāo)記的,_,分解為,NH,3,和,14,CO,2,。,接種,尿酶,紅,單,涂布,恒溫培養(yǎng)箱,尿素,無(wú)法形成單菌落或污染,第,3,節(jié) 發(fā)酵工程及其應(yīng)用,第,1,章 發(fā)酵工程,從社會(huì)中來(lái),青霉素,青霉素是世界上第一個(gè)應(yīng)用于臨床的抗生素。,隨著人們對(duì)發(fā)酵原理的認(rèn)識(shí)，微生物純培養(yǎng)技術(shù)的建立，以及密閉式發(fā)酵罐的成功設(shè)計(jì)，人們能夠在嚴(yán)格控制的環(huán)境條件下大規(guī)模生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)品，發(fā)酵工程逐步形成。,一、發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié),

43、發(fā)酵工程一般包括菌種的選育，擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)基的配制、滅菌，接種，發(fā)酵，產(chǎn)品的分離、提純等方面。,早期科學(xué)家只能從青霉菌中提取少量青霉素，它的價(jià)格貴如金。隨著高產(chǎn)菌種的選育、發(fā)酵技術(shù)的發(fā)展等，青霉素步入了產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的道路。,一、發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié),發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,分離、提純產(chǎn)物,獲得產(chǎn)品,選育菌種,擴(kuò)大培養(yǎng),接種,滅菌,配制培養(yǎng)基,性狀優(yōu)良的菌種可以從,自然界中篩選,出來(lái)，也可以通過(guò),誘變育種,或,基因工程育種,獲得。,工業(yè)發(fā)酵罐體積大，接入的菌種多，所以在發(fā)酵之前還需要對(duì)菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。,發(fā)酵工程中所用的菌種大多是單一菌種。一旦有雜菌污染，可能導(dǎo)致產(chǎn)量大大下降。,在菌種確定之后，要選擇原料制備

44、培養(yǎng)基。在生產(chǎn)實(shí)踐中，培養(yǎng)基的配方要經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)才能確定。,這是發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)。在發(fā)酵過(guò)程中，要隨時(shí)檢測(cè)培養(yǎng)液中的微生物數(shù)量、產(chǎn)物濃度等，以了解發(fā)酵進(jìn)程。還要及時(shí)添加必需的營(yíng)養(yǎng)組分，要嚴(yán)格控制溫度、,pH,和溶解氧等發(fā)酵條件。,現(xiàn)代發(fā)酵工程使用的大型發(fā)酵罐均有計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)，能對(duì)發(fā)酵過(guò)程中的溫度、,pH,、溶解氧、罐壓、通氣量、攪拌、泡沫和營(yíng)養(yǎng)等進(jìn)行監(jiān)測(cè)和控制；還可以進(jìn)行反饋控制，使發(fā)酵全過(guò)程處于,最佳,狀態(tài)。,如果發(fā)酵產(chǎn)品是微生物細(xì)胞本身，可在發(fā)酵結(jié)束后，采用過(guò)濾、沉淀等方法將菌體分離和干燥，即可得到產(chǎn)品。如果產(chǎn)品是代謝物，可根據(jù)產(chǎn)物的性質(zhì)采取適當(dāng)?shù)奶崛　⒎蛛x和純化措施來(lái)獲得產(chǎn)品。,發(fā)酵

45、工程的基本環(huán)節(jié)和發(fā)酵罐示意圖,一、發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié),發(fā)酵工程基本環(huán)節(jié)分析,結(jié)合教材圖,1,9,，分析和討論以下問(wèn)題。,1,微生物菌種資源豐富，選擇發(fā)酵工程用的菌種時(shí)需要考慮哪些因素？,需要考慮的因素包括：在低成本的培養(yǎng)基上能迅速生長(zhǎng)繁殖；生產(chǎn)所需代謝物的產(chǎn)量高；發(fā)酵條件容易控制；菌種不易變異、退化等。,2,怎樣對(duì)發(fā)酵條件進(jìn)行調(diào)控以滿足微生物的生長(zhǎng)需要？,要對(duì)溫度、,pH,、溶解氧等發(fā)酵條件進(jìn)行嚴(yán)格控制，使其最適合微生物的生長(zhǎng)繁殖，同時(shí)及時(shí)添加必要的營(yíng)養(yǎng)組分。,思考,討論,？,一、發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié),發(fā)酵工程基本環(huán)節(jié)分析,結(jié)合教材圖,1,9,，分析和討論以下問(wèn)題。,3,在產(chǎn)物分離和提純方面，發(fā)

46、酵工程與傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)相比有哪些改進(jìn)之處。,傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)獲得的產(chǎn)物一般不是單一的組分，而是成分復(fù)雜的混合物，很多時(shí)候不會(huì)再對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分離和提純處理，或者僅采用簡(jiǎn)單的沉淀、過(guò)濾等方法來(lái)分離和提純產(chǎn)物。在發(fā)酵工程中使用的分離和提純產(chǎn)物的方法較多。在產(chǎn)物的,初分離,階段，常采用,沉淀,、,萃取,、,膜分離,、,吸附,和,離子交換,等方法；在進(jìn)一步,純化,階段，會(huì)采用,液相層析法,、,結(jié)晶法,等方法。發(fā)酵工程產(chǎn)物無(wú)論是代謝物還是菌體本身，都需要進(jìn)行質(zhì)量檢查，合格后才能成為正式產(chǎn)品。,思考,討論,？,一、發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié),發(fā)酵工程基本環(huán)節(jié)分析,結(jié)合教材圖,1,9,，分析和討論以下問(wèn)題。,4,在進(jìn)行發(fā)酵生

47、產(chǎn)時(shí)，排出的氣體和廢棄培養(yǎng)液等能直接排放到外界環(huán)境中嗎？為什么？,不能。因?yàn)樵谶M(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)時(shí)，微生物及其代謝物中都可能含有危害環(huán)境的物質(zhì)。為了減少或避免污染物的產(chǎn)生和排放，實(shí)現(xiàn)清潔生產(chǎn)時(shí)，應(yīng)該對(duì)排出的氣體和廢棄培養(yǎng)液進(jìn)行二次清潔或滅菌處理。,二、發(fā)酵工程的應(yīng)用,發(fā)酵工程以其生產(chǎn)條件溫和、原料來(lái)源豐富且價(jià)格低廉、產(chǎn)物專一、廢棄物對(duì)環(huán)境的污染小和容易處理等,特點(diǎn),，在食品工業(yè)、醫(yī)藥工業(yè)和農(nóng)牧業(yè)等許多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用，形成了規(guī)模龐大的發(fā)酵工業(yè)。,思考,討論,？,二、發(fā)酵工程的應(yīng)用,1,在食品工業(yè)上的應(yīng)用,生產(chǎn)傳統(tǒng)的發(fā)酵產(chǎn)品,醬油的發(fā)酵：,啤酒的工業(yè)化生產(chǎn)流程,啤酒是以大麥為主要原料經(jīng)酵母菌發(fā)酵制

48、成的，其中發(fā)酵過(guò)程分,為主發(fā)酵,和,后發(fā)酵,兩個(gè)階段。酵母菌的,繁殖,、,大部分糖的分解,和,代謝物的生成,都在,主發(fā)酵,階段完成。主發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液還不適合飲用，要在,低溫,、,密閉,的環(huán)境下儲(chǔ)存一段時(shí)間進(jìn)行,后發(fā)酵,，這樣才能形成澄清、成熟的啤酒。發(fā)酵的溫度和發(fā)酵的時(shí)間隨啤酒品種和品味要求的不同而有所差異。,大豆蛋白質(zhì) 小分子的肽和氨基酸 醬油,霉菌,蛋白酶,淋洗,調(diào)制,二、發(fā)酵工程的應(yīng)用,啤酒的工業(yè)化生產(chǎn)流程及操作目的分析,生產(chǎn)流程,圖示,操作目的,發(fā)芽,產(chǎn)生淀粉酶分解淀粉,焙烤,加熱殺死胚，終止麥芽生長(zhǎng)，減少有機(jī)物消耗，保留營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，但不使淀粉酶失活,碾磨,將干燥的麥芽碾磨成麥芽粉，

49、便于糖化,糖化,淀粉酶將淀粉分解，形成糖漿,蒸煮,產(chǎn)生風(fēng)味組分；使酶失活；滅菌,發(fā)酵,酵母菌將糖轉(zhuǎn)化為酒精,和,CO,2,消毒,殺死啤酒中的大多數(shù)微生物，延長(zhǎng)保存期,終止,過(guò)濾、調(diào)節(jié)、分裝、出售,二、發(fā)酵工程的應(yīng)用,啤酒的工業(yè)化生產(chǎn)流程及操作目的分析,討論,1,與傳統(tǒng)的手工發(fā)酵相比，在啤酒的發(fā)酵生產(chǎn)過(guò)程中，哪些工程手段使啤酒的產(chǎn)量和質(zhì)量明顯提高？,菌種的選育、對(duì)原材料的處理、發(fā)酵過(guò)程的控制、產(chǎn)品的消毒等，都有助于提高啤酒的產(chǎn)量和品質(zhì)。,討論,2,“精釀”啤酒一般不添加食品添加劑、不進(jìn)行過(guò)濾和消毒處理等。有人認(rèn)為飲用“精釀”啤酒比飲用“工業(yè)”啤酒更健康，你怎么看待這個(gè)問(wèn)題？“精釀”啤酒是小規(guī)模釀

50、造產(chǎn)品，發(fā)酵時(shí)間長(zhǎng)、產(chǎn)量低和價(jià)格高，卻依然有著市場(chǎng)需求，我們?nèi)绾无q證地看待大規(guī)模生產(chǎn)與小規(guī)模制作？,應(yīng)該辯證地看待這一產(chǎn)品。一方面，這類產(chǎn)品具有多樣化的特點(diǎn)，能夠滿足一些人對(duì)獨(dú)特口感的需求，或者滿足一些人的時(shí)尚追求。另一方面，這類產(chǎn)品是手工作坊式生產(chǎn)的，存在啤酒品質(zhì)不穩(wěn)定、價(jià)格昂貴的問(wèn)題。,二、發(fā)酵工程的應(yīng)用,1,在食品工業(yè)上的應(yīng)用,生產(chǎn)各種各樣的食品添加劑,食品添加劑的作用,增加食品的營(yíng)養(yǎng)，改善食品的口味、色澤和品質(zhì)，有時(shí)還可以延長(zhǎng)食品的保存期。,通過(guò)發(fā)酵工程生產(chǎn)的常見(jiàn)食品添加劑,添加劑類型,舉例,酸度調(diào)節(jié)劑,L-,蘋(píng)果酸、檸檬酸、乳酸,增味劑,5,-,肌苷酸二鈉、谷氨酸鈉,著色劑,-,胡蘿

51、卜素、紅曲黃色素,增稠劑,黃原膠、,-,環(huán)狀糊精、結(jié)冷膠,防腐劑,乳酸鏈球菌素、溶菌酶,二、發(fā)酵工程的應(yīng)用,1,在食品工業(yè)上的應(yīng)用,生產(chǎn)各種各樣的食品添加劑,生產(chǎn)食品添加劑的實(shí)例,實(shí)例,1,：檸檬酸的發(fā)酵,實(shí)例,2,：味精的生產(chǎn),黑,曲霉,淀粉酶,檸檬酸合成酶,淀粉 葡萄糖 檸檬酸,發(fā)酵,氧氣,處理,谷氨酸棒狀桿菌 谷氨酸 味精,二、發(fā)酵工程的應(yīng)用,1,在食品工業(yè)上的應(yīng)用,生產(chǎn)酶制劑,目前，已有,50,多種酶制劑成功用于食品的直接生產(chǎn)、改進(jìn)生產(chǎn)工藝、簡(jiǎn)化生產(chǎn)過(guò)程、改善產(chǎn)品的品質(zhì)和口味、延長(zhǎng)食品儲(chǔ)存期和提高產(chǎn)品產(chǎn)量等方面。這些酶制劑除少數(shù)由動(dòng)植物生產(chǎn)外，絕大多數(shù)也是通過(guò)發(fā)酵工程生產(chǎn)的。,/,請(qǐng)你

52、回憶一下自己做過(guò)的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，想一想曾經(jīng)使用過(guò)哪些酶制劑。,/,探究溫度對(duì)酶活性的影響實(shí)驗(yàn)中的淀粉酶；探究,pH,對(duì)酶活性的影響實(shí)驗(yàn)中的過(guò)氧化氫酶等。,？,二、發(fā)酵工程的應(yīng)用,2,在,醫(yī)藥,工業(yè)上的應(yīng)用,青霉素的發(fā)現(xiàn)和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)推動(dòng)了發(fā)酵工程在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用和發(fā)展。之后，發(fā)酵工程逐步擴(kuò)展到了其他抗生素、多種氨基酸、激素和免疫調(diào)節(jié)劑等的生產(chǎn)領(lǐng)域。,利用基因工程，將植物或動(dòng)物的基因轉(zhuǎn)移到微生物中，獲得具有某種藥物生產(chǎn)能力的微生物，再通過(guò)發(fā)酵技術(shù)大,量生產(chǎn)所需要的產(chǎn)品。,直接對(duì)菌種進(jìn)行改造，再通過(guò)發(fā)酵技術(shù),大量生產(chǎn)所需要的產(chǎn)品。,利用基因工程，將病原體的某個(gè)或某幾,個(gè)抗原基因轉(zhuǎn)入適當(dāng)?shù)奈⑸锛?xì)胞，再

53、通過(guò)發(fā),酵技術(shù)大量獲得疫苗。,二、發(fā)酵工程的應(yīng)用,3,在農(nóng)牧業(yè)上的應(yīng)用,從自然界選育出優(yōu)良菌株，再通過(guò)發(fā)酵工程大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)制成的活菌或其代謝物產(chǎn)品等正在用于現(xiàn)代農(nóng)牧業(yè)的很多方面。,生產(chǎn)微生物肥料,利用微生物在代謝過(guò)程中產(chǎn)生的有機(jī)酸、生物活性物質(zhì)等來(lái)增進(jìn)土壤肥力，改良土壤結(jié)構(gòu)，促進(jìn)植物生長(zhǎng)。,利用微生物代謝物抑制土壤中病原微生物的生長(zhǎng)，從而減少病害的發(fā)生。,生產(chǎn)微生物農(nóng)藥,利用微生物或其代謝物來(lái)防治病蟲(chóng)害。,二、發(fā)酵工程的應(yīng)用,3,在農(nóng)牧業(yè)上的應(yīng)用,生產(chǎn)微生物飼料,研究表明，微生物含有豐富的蛋白質(zhì)，而且細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖速度很快。以淀粉或纖維素的水解液、制糖工業(yè)的廢液等為原料，通過(guò)發(fā)酵獲得大量的,微

54、生物菌體,，即,單細(xì)胞蛋白,。,用酵母菌等生產(chǎn)的單細(xì)胞蛋白可以作為,食品添加劑,；用單細(xì)胞蛋白制成的,微生物飼料,，能使家畜、家禽增重快，產(chǎn)奶或產(chǎn)蛋量顯著提高。,在,青貯飼料,中添加乳酸菌，可以提高飼料的品質(zhì)，使飼料保鮮，動(dòng)物食用后還能提高免疫力。,4,在其他方面的應(yīng)用,對(duì)解決,資源短缺,與,環(huán)境污染,問(wèn)題具有重要意義。,第,1,節(jié) 植物細(xì)胞工程,第,2,章 細(xì)胞工程,從社會(huì)中來(lái),蘭花,“其茅葺，其葉青青，猶綠衣郎，挺節(jié)獨(dú)立，可敬可慕。迨夫開(kāi)也，凝情瀼,(,rng,),露，萬(wàn)態(tài)千妍，薰風(fēng)自來(lái)，四坐芬郁，豈非真蘭室乎！豈非有國(guó)香乎！”從古至今，我國(guó)人民都把蘭花看作高潔、典雅的象征，很多人喜歡養(yǎng)蘭

55、花。但是，蘭花種子通常發(fā)育不全，在自然條件下萌發(fā)率極低；傳統(tǒng)分株繁殖的方法又存在繁殖周期長(zhǎng)、繁殖率低等問(wèn)題。如何讓名貴的蘭花大量、快速地繁殖從而走了尋常百姓家呢？,植物細(xì)胞工程展身手！,一、植物細(xì)胞工程的基本技術(shù),理論基礎(chǔ)：,細(xì)胞全能性 細(xì)胞經(jīng)分裂和分化后，仍然具有產(chǎn)生完整生物體或分化成其他各種細(xì)胞的潛能。這種潛能只有在特定的時(shí)間和空間條件下，細(xì)胞中的基因會(huì)選擇性地表達(dá)。,1,植物組織培養(yǎng)技術(shù),植物組織培養(yǎng) 將,離體,的植物,器官,、,組織,或,細(xì)胞,等，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其形成,完整植株,的技術(shù)。,植物組織培養(yǎng)流程,接種外植體,誘導(dǎo)愈傷組織,誘導(dǎo)生芽,誘導(dǎo)生根

56、,移栽成活,脫分化,再,分化,再,分化,生長(zhǎng)發(fā)育,外植體,愈傷組織,芽、根,完整植株,脫分化,再分化,生長(zhǎng)發(fā)育,練一練,1,植物組織培養(yǎng)過(guò)程可以歸納為, ,，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ ）,A,通常選取根尖、莖尖等誘導(dǎo)形成愈傷組織,B,再分化過(guò)程中，細(xì)胞增殖的方式為有絲分裂,C,培養(yǎng)過(guò)程中，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入水、無(wú)機(jī)鹽、蔗糖、氨基酸、植物激素等物質(zhì),D,將,經(jīng)脫分化培養(yǎng)成,時(shí)，得到胚狀體,脫分化,再,分化,D,一、植物細(xì)胞工程的基本技術(shù),2,植物體細(xì)胞雜交技術(shù),植物體細(xì)胞雜交 將不同來(lái)源的植物體細(xì)胞，在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新植物體的技術(shù),原理 細(xì)胞膜流動(dòng)性（原生質(zhì)體的融合）、

57、植物細(xì)胞的全能性（雜種細(xì)胞培養(yǎng)成雜種植物）。,植物體細(xì)胞雜交過(guò)程（閱讀課文第,36,37,頁(yè)）,思考,1,：植物細(xì)胞外面有一層細(xì)胞壁，這層細(xì)胞壁阻礙著細(xì)胞間的雜交。如何突破這層障礙？,利用纖維素酶和果膠酶去除這層細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體。,思考,2,：要借助什么手段讓原生質(zhì)體融合？,物理法：電融合法、離心法；化學(xué)法：聚乙二醇（,PEG,）融合法、高,Ca,2+,-,高,pH,融合法。,一、植物細(xì)胞工程的基本技術(shù),2,植物體細(xì)胞雜交技術(shù),植物體細(xì)胞雜交過(guò)程,思考,3,：植物體細(xì)胞融合成功的標(biāo)志是什么？,再生出新的細(xì)胞壁。,思考,4,：融合后的細(xì)胞要經(jīng)過(guò)篩選嗎？,如上圖，融合后的細(xì)胞有,3,種：,AA

58、,、,AB,、,BB,，所以要篩選。,A,細(xì)胞,B,細(xì)胞,A,原生質(zhì)體,B,原生質(zhì)體,正在融合的原生質(zhì)體,再生出細(xì)胞壁,愈傷組織,雜種植株,移栽后的植株,纖維素酶,果膠酶,物理法,化學(xué)法,脫分化,再分化,一、植物細(xì)胞工程的基本技術(shù),2,植物體細(xì)胞雜交技術(shù),植物體細(xì)胞雜交育種的優(yōu)點(diǎn)和局限性,優(yōu)點(diǎn)：打破生殖隔離，克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。,拓展應(yīng)用,“番茄馬鈴薯”雜種植株沒(méi)有如科學(xué)家所想象的那樣，地上結(jié)番茄，地下長(zhǎng)馬鈴薯，這是為什么？,生物體內(nèi)基因的表達(dá)不是孤立的，它們之間是相互調(diào)控、相互影響的。,局限性：目前在許多理論和技術(shù)問(wèn)題未解決，還不能讓雜種植株按照人們的需求表現(xiàn)出雙親的雜合性狀。,練一練

59、,2,用植物細(xì)胞工程技術(shù)將天竺葵與香茅草進(jìn)行雜交可產(chǎn)生驅(qū)蚊香草，使有驅(qū)蚊作用的香茅醛隨著植物的蒸騰作用散發(fā)到空氣中，達(dá)到驅(qū)蚊的效果。下列有關(guān)培養(yǎng)過(guò)程的敘述，錯(cuò)誤的是（ ）,A,原生質(zhì)體的融合常用,PEG,作為誘導(dǎo)劑,B,形成的愈傷組織的代謝類型是自養(yǎng)需氧型,C,由雜種細(xì)胞,雜種植株，要經(jīng)過(guò)有絲分裂和細(xì)胞的分化,D,該項(xiàng)技術(shù)可克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙,B,二,、植物細(xì)胞工程的應(yīng)用,1,植物繁殖的新途徑,快速繁殖,用于快速繁殖優(yōu)良品種的植物組織培養(yǎng)技術(shù)，稱為植物的快速繁殖技術(shù)，也叫做微型繁殖技術(shù)。它不僅可以高效、快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖，還可以,保持優(yōu)良品種,的遺傳特性。,作物脫毒,植物頂端,分生

60、區(qū),附近（如莖尖）的病毒極少，甚至無(wú)病毒。因此，切取一定大小的莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng)，再生的植株就有可能不帶病毒，從而獲得脫毒苗。,二,、植物細(xì)胞工程的應(yīng)用,2,作物新品種的培育,單倍體育種,單倍體育種先通過(guò)花藥（或花粉）培養(yǎng)獲得單倍體植株，然后經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)染色體加倍，當(dāng)年就能培育出遺傳性狀相對(duì)穩(wěn)定的純合二倍體植株，這極大地,縮短了育種的年限,，節(jié)約了大量的人力和物力。,大多數(shù)單倍體植株的細(xì)胞中只含有一套染色體，染色體加倍后得到的植株的隱性性狀容易顯現(xiàn)，因此它也是進(jìn)行體細(xì)胞誘變育種和研究遺傳突變的理想材料。,突變體的利用,在植物的組織培養(yǎng)過(guò)程中，由于培養(yǎng)細(xì)胞一直處于不斷增殖的狀態(tài)，因此它們?nèi)菀资艿脚囵B(yǎng)條

61、件和誘變因素的影響而產(chǎn)生突變。,二,、植物細(xì)胞工程的應(yīng)用,3,細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn),植物細(xì)胞產(chǎn)生的,次生代謝物,是一類小分子有機(jī)化合物，在植物抗病、抗蟲(chóng)等方面發(fā)揮作用，也是很多藥物、香料和色素等的重要來(lái)源。,相關(guān)信息,初生代謝,是生物生長(zhǎng)和生存所,必需,的代謝活動(dòng)，在整個(gè)生命過(guò)程中它一直進(jìn)行著。初生代謝物有糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸等。,次生代謝,不是,生物生長(zhǎng)所,必需,的，一般在特定的組織或器官中，并在一定的環(huán)境和時(shí)間條件下才進(jìn)行。,可以利用,植物細(xì)胞培養(yǎng),來(lái)獲得植物細(xì)胞的,次生代謝物,，這個(gè)過(guò)程就是細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。植物細(xì)胞培養(yǎng)是指在離體條件下對(duì)單個(gè)植物細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)使其增殖的技術(shù)。,練一練,