《病毒學(xué)第四、五章課件》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《病毒學(xué)第四、五章課件（25頁珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),*,病 毒 學(xué),病 毒 學(xué),1,第四章 理化因子對(duì)病毒的作用,適度的理化因子作用：有助于保持病毒的感染性,在“質(zhì)”和“量”上控制理化因子：可導(dǎo)致病毒發(fā)生變異，獲得病毒的突變體,劇烈的理化因子作用：病毒失去感染力，被滅活,不同病毒因其結(jié)構(gòu)和組成不同，對(duì)理化因子的作用可呈現(xiàn)不同的反應(yīng)（敏感或有抗性）,病毒的特征性表現(xiàn)，是病毒鑒定的一個(gè)重要依據(jù),對(duì)選擇有效消毒方法、病毒材料或毒種的保存、篩選疫苗、病毒提純均有意義。,第四章 理化因子對(duì)病毒的作用適度的理化因子作用：有助于保,2,1.溫度（T）,（1）病毒耐冷怕熱,大

2、多數(shù)病毒55-60幾分鐘到幾十分鐘滅活；0 下可保持穩(wěn)定，特別是干冰溫度和液氮溫度下能長期保持感染性。,不同溫度下，病毒感染的半衰期不同：,60 以秒計(jì)，37 以分計(jì)，20 以小時(shí)計(jì)，4 以天計(jì)，-70 以月計(jì)，-196 以年計(jì),不同病毒對(duì)熱的抵抗力不同，甚至有明顯差別，有包膜病毒對(duì)熱的抵抗力較裸露的二十面體病毒差。,1.溫度（T）（1）病毒耐冷怕熱,3,（2）熱對(duì)病毒的作用機(jī)理,主要使病毒蛋白質(zhì)，特別是病毒的表面蛋白質(zhì)變性，結(jié)果導(dǎo)致病毒體不能吸附于細(xì)胞受體，或病毒不能脫殼，或病毒體中所攜帶的酶失活，從而影響核酸的正常逸出，失去感染性。,包膜在高溫條件下可能發(fā)生降解。,（2）熱對(duì)病毒的作用機(jī)理

3、主要使病毒蛋白質(zhì)，特別是病毒的表面蛋,4,一般來說，蛋白質(zhì)比核酸容易因熱變性。核酸位于病毒體內(nèi)部，熱的作用已被蛋白質(zhì)外殼緩沖；但在70以上溫度可使雙鏈核酸發(fā)生鏈性分離，隨后在核酸的糖-磷酸骨架的某處斷裂。,輕度加熱（40-50 ）：蛋白質(zhì)的完整性發(fā)生破壞，喪失感染性，但常繼續(xù)保持免疫原性。,更高溫加熱（60 以上）：蛋白質(zhì)發(fā)生凝固，感染性和免疫原性均喪失。,一般來說，蛋白質(zhì)比核酸容易因熱變性。,5,（3）溫度對(duì)病毒的滅活作用受周圍環(huán)境的影響,蛋白質(zhì)、Ca,2+,、Mg,2+,存在可提高某些病毒的熱穩(wěn)定性；它們?cè)?M濃度的鹽類溶液中，甚至50加熱1h也不滅活。,蛋白酶和核酸酶存在可提高熱對(duì)病毒的

4、滅活作用,凍融，特別是反復(fù)凍融，?？墒乖S多病毒發(fā)生較大程度的滅活。,（3）溫度對(duì)病毒的滅活作用受周圍環(huán)境的影響蛋白質(zhì)、Ca2+、,6,（4）病毒的保存方法,快速低溫冷凍,病毒懸液中+滅活的正常動(dòng)物血清或其它蛋白保護(hù)劑，迅速冷凍到-70,或-196,。,含病毒的組織材料（病料）,直接低溫冷凍,+50%甘油緩沖鹽水，迅速冷凍到-70,或-196,。,含病毒的細(xì)菌材料+30%甘油緩沖鹽水，迅速冷凍到-70,或-196,。,（4）病毒的保存方法快速低溫冷凍,7,真空冷凍干燥,在真空條件下，使冰凍的病毒懸液脫水。通常是用低溫脫水法，并以干燥劑或冷凝法除去冷凝器內(nèi)尚未凝結(jié)的多余水汽。,常用干燥劑：P,2,

5、O,5,、CaSO,4,、CaCl,2,、硅膠,病毒冷凍保護(hù)劑：脫脂牛乳（最常用）、滅活正常動(dòng)物血清、飽和蔗糖溶液等。,真空冷凍干燥,8,（1）一般病毒耐pH以5-9為標(biāo)準(zhǔn)，5以下9以上大多迅速滅活；大多數(shù)在pH6-8保持穩(wěn)定。,（2）不同種類病毒對(duì)pH變化穩(wěn)定性不同（保持感染性的pH值不同）病毒鑒定指標(biāo),有的病毒耐酸，是否耐酸以pH3為標(biāo)準(zhǔn)。,（3）應(yīng)用,實(shí)踐中，用酸、堿溶液作消毒劑。,病毒保存中，以中性或稍偏堿為宜。,2.pH,（1）一般病毒耐pH以5-9為標(biāo)準(zhǔn)，5以下9以上大多迅速滅活,9,3.輻射,（1）種類 電離輻射 X射線,射線 很易滅活病毒,非電離輻射,3.輻射（1）種類 電離輻

6、射 X射線,10,（2）機(jī)理,電離輻射,病毒核酸鏈共價(jià)鍵發(fā)生斷裂,單鏈核酸對(duì)電離輻射的作用更為敏感,對(duì)病毒蛋白質(zhì)也有破壞作用,引起液體介質(zhì)電離所產(chǎn)生的H,+,、OH,-,和過氧化物等，起間接滅活作用。,紫外線,使核酸發(fā)生多種結(jié)構(gòu)形式的變化，其中以形成嘧啶二聚體為主。,（2）機(jī)理,11,4.干燥,干燥效果與使用方法和病毒種類有關(guān)系。,有包膜病毒對(duì)干燥抵抗力更弱。,4.干燥 干燥效果與使用方法和病毒種類有關(guān)系。,12,5.染料的光動(dòng)力作用,（1）概念：某些病毒在可見光存在的條件下，經(jīng)中性紅、美藍(lán)、臺(tái)酚藍(lán)和甲苯胺藍(lán)等染料處理就可能迅速失去感染性。,（2）機(jī)理,由于這些染料易于滲透病毒體的蛋白質(zhì)外殼而

7、與核酸結(jié)合，造成核酸結(jié)構(gòu)的破壞，喪失感染性；而對(duì)蛋白質(zhì)無嚴(yán)重?fù)p害，一般能保持免疫原性。,必須在有氧的條件下進(jìn)行,應(yīng)置于暗處培養(yǎng)。,5.染料的光動(dòng)力作用（1）概念：某些病毒在可見光存在的條件,13,6.化學(xué)物質(zhì),（1）脂溶劑：乙醚、氯仿和丙酮以及其它可以脫脂的化學(xué)劑,有包膜病毒因包膜上含較多脂類物質(zhì)，表現(xiàn)對(duì)脂溶劑敏感，但對(duì)不同脂溶劑敏感程度不同,無包膜病毒（包括少數(shù)含脂質(zhì)成分的無包膜病毒）對(duì)脂溶劑不敏感,乙醚滅活試驗(yàn)鑒別病毒有無包膜,6.化學(xué)物質(zhì)（1）脂溶劑：乙醚、氯仿和丙酮以及其它可以脫脂的,14,（2）蛋白變性劑,種類：石炭酸、陰離子去污劑、非離子去污劑及尿素、胍等蛋白變性劑,機(jī)理：,SDS

8、：解離殼體蛋白，釋放出核酸，并使病毒蛋白質(zhì)降解為多肽，還能溶解包膜。,吐溫、脫氧膽酸鈉：破壞包膜結(jié)構(gòu)，保存蛋白結(jié)構(gòu)和抗原性,高濃度的尿素和鹽酸胍：破壞氫鍵和氨基酸殘基的非極性側(cè)鏈之間的疏水鍵，使病毒蛋白質(zhì)變性，甚至降解為多肽。,（2）蛋白變性劑,15,（3）酶,不同的酶作用于病毒的方式不同,蛋白酶可降解包膜的糖蛋白突起及殼體蛋白,磷脂酶能降解包膜中的磷脂而破壞病毒的包膜結(jié)構(gòu),如殼體或包膜受到損傷，核酸易被核酸酶所降解,不同病毒對(duì)酶的敏感性亦有區(qū)別,大多數(shù)病毒因有殼體或/和包膜的保護(hù)，使核酸可不被核酸酶降解,病毒感染方式與病毒對(duì)酶的敏感性存在一定的聯(lián)系。,（3）酶,16,（4）甲醛,機(jī)理：對(duì)核酸

9、和蛋白質(zhì)都有破壞，主要是使核酸滅活,能與A、G、C等含有胺基的堿基結(jié)合，使核酸變性。,較高濃度的甲醛對(duì)病毒體進(jìn)行較長時(shí)間的處理，可與蛋白質(zhì)的胺基結(jié)合，導(dǎo)致蛋白質(zhì)硬變，同時(shí)也防礙了核酸的逸出。,應(yīng)用：制備滅活疫苗,（4）甲醛,17,（5）羥胺、-丙內(nèi)酯、乙基乙烯亞胺和乙酰乙烯亞胺,其高稀釋液可使病毒核酸的嘌呤和嘧啶堿基發(fā)生改變，從而破壞核酸，但一般不會(huì)損傷蛋白質(zhì)。,用于制備滅活疫苗,不同病毒對(duì)這些化學(xué)物質(zhì)的敏感性也不同,（5）羥胺、-丙內(nèi)酯、乙基乙烯亞胺和乙酰乙烯亞胺,18,（6）氧化乙烯（氣體消毒劑）,一般 有包膜病毒對(duì)消毒劑抵抗力弱,無包膜病毒對(duì)消毒劑抵抗力更強(qiáng),應(yīng)用,10%氧化乙烯：消毒不

10、耐熱的橡膠和塑料制品,3-5%氧化乙烯：消毒實(shí)驗(yàn)室，處理一夜或一晝夜,（6）氧化乙烯（氣體消毒劑）,19,（7）抗菌素,通常各種抗菌素和抗菌藥物對(duì)病毒無作用，但有一些能不同程度地抑制病毒復(fù)制：利福霉素、放射菌素b,中草藥對(duì)病毒有不同程度地抑制作用,（8）甘油,病毒保護(hù)劑；但少數(shù)病毒（如牛瘟病毒）不能在甘油鹽水中長期存活。,（7）抗菌素,20,第五章 病毒的血清學(xué)性質(zhì),完整病毒體及其各種蛋白質(zhì)組分,復(fù)制過程中產(chǎn)生的非結(jié)構(gòu)蛋白,具有免疫原性和免疫,反應(yīng)性的有效抗原,第五章 病毒的血清學(xué)性質(zhì)完整病毒體及其各種蛋白質(zhì)組分具有免,21,1.病毒特異性抗體的類型,（1）不同類型病毒誘生不同種類抗體,用不能

11、在宿主體內(nèi)繁殖的病毒體抗病毒體表面抗原的抗體,用能在宿主體內(nèi)繁殖的病毒體抗病毒表面抗原抗體、抗內(nèi)部抗原抗體、抗非病毒體抗原抗體,用純化的病毒體內(nèi)部蛋白組分抗這些內(nèi)部抗原的抗體,1.病毒特異性抗體的類型（1）不同類型病毒誘生不同種類抗體,22,（2）中和作用和中和抗體,中和作用：有的特異性抗體與病毒體作用，能夠抑制病毒的繁殖，使其失去感染性，這一現(xiàn)象稱做中和作用。,中和抗體：能夠中和病毒感染性的特異性抗體,非中和抗體：指那些不能引起中和作用的抗體,（2）中和作用和中和抗體中和作用：有的特異性抗體與病毒體作用,23,中和作用機(jī)理,中和抗體與病毒表面的抗體結(jié)合部位（或抗原決定簇）結(jié)合，可以抑制病毒的吸附、侵入、脫殼或轉(zhuǎn)錄等某一感染步驟，從而消除病毒的感染性。,不同病毒的抗體的中和機(jī)理可能不同，同一病毒的不同類型抗體也可有不同的中和機(jī)理。,抗體間可呈現(xiàn)協(xié)同作用，增強(qiáng)中和效應(yīng)，并且補(bǔ)體亦能增進(jìn)特異性抗體所致的病毒中和作用。但中和抗體有時(shí)可使病毒的感染持續(xù)或加重。,中和作用機(jī)理中和抗體與病毒表面的抗體結(jié)合部位（或抗原決定簇）,24,2.病毒的抗原分類,病毒體蛋白質(zhì)的抗原決定簇具有特殊的一級(jí)結(jié)構(gòu)和立體構(gòu)型，從而決定了病毒體的抗原特異性。,2.病毒的抗原分類 病毒體蛋白質(zhì)的抗原決定簇,25,