《微生物學(xué)-病毒的感染與免疫課件》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《微生物學(xué)-病毒的感染與免疫課件（78頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

1、,*,,,,,,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,,,單擊此處編輯母版文本樣式,,第二級,,第三級,,第四級,,第五級,,病毒的感染與免疫,,,2,一、病毒感染,（一）病毒的傳播途徑,,,水平傳播,：在人群不同個體間的傳播，是大多數(shù)病毒的傳播方式。,,,垂直傳播,：由宿主的親代傳給子代的傳播方式。主要通過胎盤或產(chǎn)道，如風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、人類免疫缺陷病毒（,HIV,）及乙型肝炎病毒等。,3,,產(chǎn)前,,,,胎盤,,風(fēng)疹、巨細(xì)胞病毒,、,,,梅毒螺旋體、弓形體、,,,淋病奈,瑟,菌,,,,圍產(chǎn)期,,已感染的產(chǎn)道,,衣原體,,產(chǎn)后,,,,哺乳,,直接接觸巨細(xì)胞病毒、,,,乙型肝炎病毒,,,生殖細(xì)胞 人基

2、因組含病毒DNA,,多種反轉(zhuǎn)錄病毒,垂直傳播方式及常見微生物性疾病,類型,,途徑,,微生物性疾病,4,細(xì)胞水平的病毒感染,,細(xì)胞外：病毒裂解細(xì)胞后感染其他細(xì)胞,,細(xì)胞間：病毒通過細(xì)胞間橋或細(xì)胞融合感染,,細(xì)胞核：病毒核酸整合到細(xì)胞染色體上并傳到子代病毒,,,整體水平的病毒感染,,局部感染：傳播只在局部靶細(xì)胞中,,播散性感染：病毒通過體液傳播引起全身感染,5,,人類病毒的感染途徑,主要感染途徑,傳播方式及途徑,病毒種類,呼吸道,空氣、飛沫或皮屑,流感病毒、鼻病毒等,消化道,污染水或食品,脊髓灰質(zhì)炎病毒、其他腸道病毒等,輸血、注射或器官移植,污染血或血制品污染注射器,HIV,、乙型肝炎病毒等,眼或

3、泌尿生殖道,接觸、游泳池、性傳播,HIV,、皰疹病毒,1,、,2,型等,經(jīng)胎盤、圍產(chǎn)期,宮內(nèi)、分娩產(chǎn)道、哺乳等,乙肝病毒、,HIV,等,破損皮膚,昆蟲叮咬、狂犬、鼠類,腦炎病毒、出血熱病毒等,6,（二）病毒感染的致病機制,對宿主細(xì)胞的,影響,,溶細(xì)胞效應(yīng)：產(chǎn)生細(xì)胞病變，形成病毒空斑,,改變細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)：細(xì)胞融合、產(chǎn)生新抗原,,包涵體形成,：大小、數(shù)目、分布等有病毒特異性,,細(xì)胞增生與轉(zhuǎn)化：促進,DNA,合成，轉(zhuǎn)化形成腫瘤,,細(xì)胞凋亡,,基因整合與細(xì)胞轉(zhuǎn)化,7,1,）細(xì)胞病變作用（,cytopathic effect, CPE,）,,,,,,病毒在大量復(fù)制過程中損傷細(xì)胞核、細(xì)胞膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體，

4、導(dǎo)致細(xì)胞裂解死亡。在體外實驗中，通過細(xì)胞培養(yǎng)和接種殺細(xì)胞性病毒后，可用顯微鏡觀察到細(xì)胞變圓、壞死，從瓶壁脫落等現(xiàn)象。,8,9,CPE,10,噬菌斑和蝕斑（空斑）,將噬菌體標(biāo)本經(jīng)過適當(dāng)稀釋再接種細(xì)菌平板，經(jīng)過一定時間培養(yǎng)，在細(xì)菌菌苔上可形成圓形局部透明區(qū)域，即為噬菌斑。,,,若動物病毒標(biāo)本經(jīng)過適當(dāng)稀釋進行接種并輔以染色處理，病毒可在培養(yǎng)的細(xì)胞單層上形成肉眼可見的局部病損區(qū)，即蝕斑（空斑）。,11,噬菌斑,(plaque),12,1,、,HSV-1 standard strain,,2,、,HSV-2 standard strain,,3,、,CPE of HSV in Vero cells,,4

5、,、,Vero cells,4,13,麻疹病毒感染細(xì)胞,呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞,2,）改變細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，形成融合細(xì)胞,14,CPE of RSV on HEp2 cells,Plaque of RSV,15,包涵體：在病毒感染寄主細(xì)胞時，對被感染細(xì)胞進行染色，則可觀察到細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核內(nèi)有明顯區(qū)別的大小不等的顆粒狀結(jié)構(gòu)體，這些結(jié)構(gòu)體總稱為包涵體。,,,分為兩類,,,在細(xì)胞內(nèi)增殖的病毒顆粒及集落，如腹股溝淋巴肉芽病毒和天花病毒的包涵體。,,,由于病毒感染后，在細(xì)胞產(chǎn)生的一種反應(yīng)生成物，例如由狂犬病病毒而引起狗腦神經(jīng)細(xì)胞中的包涵體。,3,）形成包涵體,(,inclusion body,),,16,狂犬

6、病毒包涵體,17,包涵體的性質(zhì),病毒引起的細(xì)胞病變,,蛋白質(zhì)，圓形、卵圓形或不定形,,大小、數(shù)目隨病毒不同而不同,,可位于細(xì)胞質(zhì)（痘類病毒）、　　　　　　　　　　　　　　　　細(xì)胞核（皰疹病毒）或都有（麻疹病毒）,,由完整的病毒顆?；蛏形囱b配的病毒亞基聚集而成,,用于病毒鑒別、病毒病的輔助診斷,,具感染性,18,包涵體,,是病毒的聚集體,,是病毒的合成部位,,是病毒蛋白和病毒感染有關(guān)的蛋白質(zhì),19,4,）誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,細(xì)胞凋亡是由基因控制的程序性死亡，屬正常的生物學(xué)現(xiàn)象,,,多種病毒感染可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，也限制了子代病毒體產(chǎn)生的數(shù)量,,,但有些病毒如皰疹病毒、腺病毒、丙型肝炎病毒可能過抑制磷酸化酶

7、抑制細(xì)胞凋亡通路,20,5,）基因整合與細(xì)胞轉(zhuǎn)化,,某些,DNA,病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒在感染中可將基因整合于宿主細(xì)胞基因組中，即,整合感染,,雙鏈,DNA,整合入細(xì)胞,DNA,,失常整合：病毒基因片段與宿主,DNA,隨機重組,,影響宿主細(xì)胞基因組的表達，增殖變快，失去細(xì)胞間接觸抑制,,或者也可由病毒蛋白誘導(dǎo)導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化,,基因整合或其他機制引起的細(xì)胞轉(zhuǎn)化與腫瘤形成密切相關(guān),21,病毒感染引起的免疫病理損傷,,,病毒對免疫系統(tǒng)的損傷,,感染淋巴細(xì)胞，直接影響免疫功能，誘發(fā)疾病或腫瘤,,病毒抑制宿主的免疫應(yīng)答，如導(dǎo)致高親和力,T,細(xì)胞的刪除，誘導(dǎo)部分耐受，抑制效應(yīng)細(xì)胞等,,麻疹病毒、流感病毒、艾滋病病

8、毒、巨細(xì)胞病毒、,EB,病毒等,,,免疫復(fù)合物引起的損傷,,病毒抗原與抗體形成的復(fù)合物出現(xiàn)于血液循環(huán)，沉積在任何部位均可導(dǎo)致?lián)p傷，引起,Ⅲ,型超敏反應(yīng),,腎小球腎炎，關(guān)節(jié)炎，合胞病毒引起的嬰幼兒阻塞性毛細(xì)支氣管炎,22,抗體增強病毒感染作用,,某些病毒產(chǎn)生的抗體不能完全中和病毒時，其,Fab,段與病毒結(jié)合形成有感染性復(fù)合物，,Fc,段與具有,Fc,受體的單核吞噬細(xì)胞結(jié)合，有利于增加病毒感染單核吞噬細(xì)胞的機會，使受感染的細(xì)胞數(shù)量增加，細(xì)胞膜表面出現(xiàn)大量病毒抗原，激發(fā)機體免疫應(yīng)答，細(xì)胞釋放多種酶類，激活補體和凝血系統(tǒng)釋放血管通透因子，從而引起一系列相應(yīng)病毒反應(yīng)，出現(xiàn)出血和休克等癥狀。,,,引起免疫

9、應(yīng)答的功能紊亂,,表現(xiàn)為失去對自身抗原和非自身抗原的識別功能，發(fā)展為自身免疫疾病,23,病毒的免疫逃逸（Viral mechanisms of escape of immune responses）是,反映,病毒毒力的另一重要因素,,,病毒通過逃避免疫監(jiān)視、防止免疫激活或阻止免疫反應(yīng)發(fā)生等方式來逃脫免疫應(yīng)答,,,有些病毒通過編碼特異性抑制免疫反應(yīng)蛋白質(zhì)實現(xiàn)免疫逃逸,,,有些病毒形成合胞體讓病毒在細(xì)胞間傳播逃避抗體作用,病毒的免疫逃逸機制,24,病毒逃逸免疫應(yīng)答舉例,,免疫逃逸機制,病毒舉例及作用方式,細(xì)胞內(nèi)寄生,所有病毒皆為嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生，通過逃避抗體、補體及藥物作用而發(fā)揮逃避免疫機制的作用,

10、抗原變異,HIV,、甲型流感病毒高頻率的抗原變異使得免疫應(yīng)答滯后,抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜,鼻病毒、柯薩奇病毒、,ECHO,病毒等型別多，抗原多態(tài)性致使免疫應(yīng)答不利,損傷免疫細(xì)胞,HIV,、,EB,病毒、麻疹病毒等可在,T,或,B,細(xì)胞內(nèi)寄生并導(dǎo)致宿主細(xì)胞死亡,降低抗原表達,腺病毒、巨細(xì)胞病毒可抑制,MHC-Ⅰ,轉(zhuǎn)錄、表達,,病毒的免疫增強作用,登革病毒以及其他黃病毒再次感染，因機體內(nèi)預(yù)先存在或經(jīng)胎盤獲得中和抗體能促進游離的病毒進入單核細(xì)胞內(nèi)，并大量增殖，導(dǎo)致病毒血癥及病毒,-,抗體復(fù)合物形成，繼之大量細(xì)胞因子及血管活性因子釋放，導(dǎo)致登革熱休克綜合征,25,（三）病毒感染的類型,根據(jù)有無臨床癥狀,：,隱性

11、感染,和,顯性感染,,根據(jù)病毒在體內(nèi)感染的過程、滯留的時間,,急性感染,：潛伏期短、發(fā)病急、癥狀明顯，病程短，又分,局部感染,和,全身感染,,持續(xù)感染,：病毒可在體內(nèi)數(shù)月、數(shù)年甚至終身,,形成原因,,機體免疫功能弱，不能完全清除病毒,,病毒存在于受保護部位而產(chǎn)生免疫逃避,,病毒的抗原性弱，不能激發(fā)機體的免疫應(yīng)答,,干擾缺陷顆粒影響病毒增殖，改變感染過程,,病毒基因整合而與宿主細(xì)胞共存,26,持續(xù)感染,的類型,,,潛伏感染,：皰疹病毒,,,慢性感染,：乙型肝炎,,,慢發(fā)病毒感染,：,慢性發(fā)展的進行性加重的病毒感染，較少見但后果嚴(yán)重，潛伏期長達數(shù)年甚至數(shù)十年，如麻疹病毒、狂犬病毒、,HIV,等。,

12、,,急性病毒感染的遲發(fā)并發(fā)癥,：急性感染后一年或數(shù)年，發(fā)生致死性并發(fā)癥，如亞急性硬化性全腦炎（,SSPE),27,埃博拉病毒（,Ebola,）,,世界上最致命的病毒性出血熱，人群普遍易感，死亡率,50~90%,,絲狀病毒，,1976,年在剛果埃博拉河地區(qū)發(fā)現(xiàn)而得名,,通過體液如汗液、唾液、血液傳染，甚至握手傳染,,潛伏期,2-21,天左右，后突然出現(xiàn)高燒、頭痛、咽喉疼、虛弱、肌肉疼痛，然后嘔吐、腹痛、腹瀉。,,發(fā)病后兩星期內(nèi)病毒外溢，導(dǎo)致人體內(nèi)外出血、凝血阻塞血管，壞死的血液會很快傳及全身各器官，最終出現(xiàn)口腔、備受、肛門出血，患者可在,24,小時內(nèi)死亡。,28,潛伏感染：單純皰疹病毒,Ⅰ,型引

13、發(fā)唇皰疹,29,潛伏性病毒感染：水痘病毒引發(fā)帶狀皰疹,30,慢發(fā)病毒感染：庫魯病,最早被研究的人類朊病毒病,,,曾見于巴布亞,-,新幾內(nèi)亞東部有食用已幫親人臟器習(xí)俗的土著部落,,,潛伏期長，,4-30,年,,,起病隱匿，前期僅頭痛、關(guān)節(jié)疼，繼之出現(xiàn)震顫、不自主運動，晚期進行性加重的癡呆，神經(jīng)異常,,,患者多在起病,3,到,6,個月內(nèi)死亡,31,病毒與腫瘤,許多病毒與人類腫瘤密切相關(guān),,,病毒與腫瘤的關(guān)系可分為兩種,,,一種是肯定的，即腫瘤由病毒感染所致，如人乳頭瘤病毒引起的人疣，為良性腫瘤，及人類嗜,T,細(xì)胞病毒所致的人,T,細(xì)胞白血病，為惡性腫瘤,,,另一種是密切相關(guān)，但尚未獲肯定，如乙型肝

14、炎病毒、丙型肝炎病毒與原發(fā)性肝癌，,EB,病毒與鼻咽癌和淋巴瘤，人乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒,-2,型與宮頸癌，以及人皰疹病毒,-8,與卡波洛肉瘤等,32,與人類腫瘤相關(guān)的病毒,病毒科別,/,名稱,腫瘤類型,皰疹病毒科,,EBV,鼻咽癌、,Burkitt,淋巴瘤,HHV-8,Kaposi,肉瘤,嗜肝,DNA,病毒科,,HBV,肝細(xì)胞癌,乳多空病毒科,,HPV,乳頭狀瘤,HPV-16,、,18,宮頸癌,逆轉(zhuǎn)錄病毒科,,HTLV,成人,T,細(xì)胞白血病,33,二、抗病毒免疫,非特異性免疫,,干擾素,(interferon, IFN),：分,α,、,β,、,γ,三種,,NK,細(xì)胞,,,特異性免疫,,體液

15、免疫,,病毒中和抗體、血凝抑制抗體、補體結(jié)合抗體,,細(xì)胞免疫,,細(xì)胞毒性,T,細(xì)胞、,CD4+Th1,34,1,、干擾素（,Interferon,,,IFN）,,是由病毒或其他,干擾素,誘生劑誘使人或動物細(xì)胞產(chǎn)生的一類糖蛋白,,,作用于機體細(xì)胞,，可,表現(xiàn)出抗病毒、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)等多方面的生物活性,,,性質(zhì),,分泌性蛋白質(zhì)，種屬特異性,,具有廣譜抗病毒活性其他活性如免疫調(diào)節(jié)、抗細(xì)胞分裂、抗腫瘤等,,不直接滅活病毒，通過誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白等效應(yīng)物質(zhì)發(fā)揮抑制病毒的作用,35,天然干擾素,α,、,β,、,γ,三型的特性比較,型別,誘生劑,產(chǎn)生細(xì)胞,編碼的基因,,位于,pH 2.0, 56℃,種

16、特異性,IFN-,α,病毒,主要為白細(xì)胞在誘生劑刺激下產(chǎn)生,第,9,號染色體,穩(wěn)定,低,IFN-,β,有機聚合物,主要為成纖維細(xì)胞在誘生劑刺激下產(chǎn)生,第,9,號染色體,穩(wěn)定,強,IFN-,γ,T,細(xì)胞促分裂劑，抗原,主要為致敏淋巴細(xì)胞在誘生劑刺激下產(chǎn)生,第,12,號染色體,不穩(wěn)定,強,36,干擾素抑制病毒蛋白翻譯的兩種途徑示意圖,37,干擾素的作用特點,,發(fā)揮作用迅速，感染幾小時內(nèi)起作用且持續(xù),2~3,天。,,,感染起始階段、細(xì)胞免疫發(fā)生前發(fā)揮重要的作用。,,,合成后很快釋放并擴散至鄰近細(xì)胞發(fā)揮抗病毒作用，因此能中斷受感染細(xì)胞的病毒感染，也能限制病毒擴散。,,,具有廣譜性。,38,2,、,NK

17、,細(xì)胞,殺傷受感染的細(xì)胞,,可被干擾素活化，釋放,NK,細(xì)胞毒因子,,或改變環(huán)核苷酸水平，影響溶酶體分泌，并釋放蛋白酶和中性絲氨酸蛋白酶,,影響靶細(xì)胞膜直接破壞或融合靶細(xì)胞,,在病毒感染早期發(fā)揮作用,39,3,、補體,增強抗體對病毒的中和和溶解作用,,,協(xié)同抗體溶解靶細(xì)胞,40,特異性免疫,1,、體液免疫,,,病毒感染可刺激機體產(chǎn)生特異性抗體,,中和抗體、補體結(jié)合抗體,,抗體可與病毒結(jié)合，阻止病毒吸附和穿入細(xì)胞,,或改變病毒表面蛋白構(gòu)型，導(dǎo)致病毒轉(zhuǎn)錄酶失活,41,中和抗體：,針對病毒某些表面抗原的抗體,,,能與細(xì)胞外游離的病毒結(jié)合而消除病毒的感染能力,,,主要是直接封閉與細(xì)胞受體結(jié)合的病毒抗原

18、表位，或改變病毒表面構(gòu)型，阻止病毒吸附、侵入易感細(xì)胞,,,中和抗體不能直接滅活病毒，形成的免疫復(fù)合物可被吞噬清除,,,有包膜的病毒與中和抗體結(jié)合后，可通過激活補體導(dǎo)致病毒裂解,,,中和抗體對溶細(xì)胞型病毒作用顯著，防止隨血液擴散，但對已進入細(xì)胞內(nèi)的病毒無作用,,,分為三類：,IgM,、,IgG,、,IgA,42,IgG、IgM、IgA,三類免疫球蛋白都有中和抗體的活性，但特性不同,,,IgG是,唯一,能通過胎盤的抗體,，出生后,6個月的嬰兒較少患病毒性傳染病,；作用較強，是主要的病毒中和抗體。,,,IgM,是感染或疫苗接種后最早出現(xiàn)的抗體，,可作早期診斷,。固定補體能力強?？梢灾泻脱貉h(huán)中的病

19、毒顆粒,。如在新生兒血中測得提示有宮內(nèi)感染。,,,IgA存在于黏膜分泌液中，可阻止病毒的局部入侵,。,43,2,、細(xì)胞免疫,,,病毒進入宿主后細(xì)胞免疫發(fā)揮主要作用,,,細(xì)胞毒性,T,細(xì)胞（,T,c,）：可通過其抗原受體識別病毒感染的靶細(xì)胞，裂解和細(xì)胞凋亡靶細(xì)胞，達到清除或釋放在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的病毒體，從而在抗體的配合下清除病毒，被認(rèn)為是終止病毒感染的主要機制。,,,活化的,Th1,：,可通過分泌,IFN,-,γ、TNF,多種細(xì)胞因子發(fā)揮抗病毒作用,。,44,抗病毒免疫持續(xù)時間,抗病毒免疫持續(xù)時間的長短因病毒種類而不同，具有以下特點：,,,型別單一、可產(chǎn)生病毒血癥的病毒，,產(chǎn)生的免疫力較為牢固，且持

20、續(xù)時間較長。如水痘、天花、腮腺炎、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎病毒和乙型腦炎病毒等。,,,無病毒血癥的局部或,粘膜,感染，免疫力短暫，可多次感染。如流感病毒、鼻病毒等。,,,易發(fā)生抗原變異的病毒，免疫力短暫，如流感病毒。,45,思考題,1.,病毒感染的類型？,,,2.,什么是干擾素,?,它有哪些特性，是怎樣產(chǎn)生的，其抗病毒作用機理如何,?,,,3.,試述抗病毒的特異性免疫？,,,4.,試述病毒致病機制與細(xì)菌致病機制有何不同？,病毒感染的檢查方法與防治原則,47,病毒感染的檢查,檢測內(nèi)容,查病毒,查特異性,抗體,病毒顆粒,,病毒抗原,,病毒核酸,,病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶,電鏡直接觀察,,光鏡檢查包涵體,,分

21、離培養(yǎng),,,,48,一、標(biāo)本的采集與送檢,原則基本與細(xì)菌相似：,,,采集標(biāo)本的種類，足夠量的活病毒,,,確定最適采集時間，,血清學(xué)診斷,先后,采雙份血清,,,,低溫保存,，,盡快送檢,,,標(biāo)本用,“,雙抗,”,或兩性霉素B處理,,,標(biāo)本處理后應(yīng)立即接種，數(shù)小時內(nèi)可置,50%,中性甘油內(nèi),4℃,保存，較長時間凍存標(biāo)本最好置,-20℃,以下或干冰保存。,49,二、病毒的分離與鑒定,（一）病毒的分離培養(yǎng),,,細(xì)胞培養(yǎng),（,cell,,culture,）,,,,雞胚接種,（,egg inoculation,）,,,,,動物接種,（,animal inoculation,）,50,一般程序：,標(biāo)本,無菌

22、處理,動物接種,,雞胚培養(yǎng),,細(xì)胞培養(yǎng),指標(biāo)陽性,,,指標(biāo)陰性,,,病毒鑒定,盲傳2,～,3代,指標(biāo)陰性,病毒陰性,51,標(biāo)本接種與感染表現(xiàn),,標(biāo)本接種于何種實驗宿主以及選擇何種接種途徑主要取決于病毒的宿主范圍和組織嗜性，同時應(yīng)考慮操作簡單、易于培養(yǎng)、所產(chǎn)生的感染結(jié)果容易判定等要求。,52,（一）病毒的分離培養(yǎng),,,,1.,細(xì)胞培養(yǎng),,,,,單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayer cell culture）,,,分類,,,,懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspended cell culture）,,,,,原代細(xì)胞,（,primary cell,）,,細(xì)胞種類,,二倍體細(xì)胞（diploid cell）,,,,傳代

23、細(xì)胞系,（,continuous cell line,）,,,53,病毒的細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng)瓶,單層細(xì)胞,54,2.雞胚培養(yǎng),,,,,采用孵化,9～14,天的雞胚,,,,,絨毛尿囊膜,（,allantocherion,）,,,,痘苗病毒、人類皰疹病毒,,,,尿囊腔,（,allantoic cavity,）,,接種部位,,流感病毒、腮腺炎病毒,,,,羊膜腔,（,amniotic cavity,）,,,,流感病毒的初次分離,,,,卵黃囊,（,yolk sac,）,,,嗜神經(jīng)病毒,,55,56,雞胚培養(yǎng),優(yōu)點：,易管理,，,不帶微生物,，,成本較低,,缺點：,操作程序復(fù)雜,,57,58,,3.動物

24、接種,,,應(yīng)用：,尚無敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng),,,動物：,兔、鼠、黑猩猩、猴等,,,優(yōu)點：,結(jié)果易觀察，可建立動物模型,,缺點：,有飼養(yǎng)條件要求，費用高,，,動物,,體內(nèi)常帶有潛伏病毒,59,病毒增殖鑒定,,(1),細(xì)胞病變效應(yīng),,細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等,(,多數(shù)病毒,),，形成特異性,CPE,,,形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞,(,麻疹病毒,、,巨細(xì)胞病毒,、,呼吸道合胞病毒,等,),,,在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體,(,狂犬病病毒、麻疹病毒等,),（二）病毒的鑒定,,60,腮腺炎病毒感染細(xì)胞,(,2,),紅細(xì)胞吸附,（,hemadsorption,）,病毒,囊,膜表面血凝素,(,HA,),,

25、＋,,紅細(xì)胞,表面HA受體,61,(,3,),干擾現(xiàn)象,（,interference,）,風(fēng)疹病毒＋,人胚腎細(xì)胞 病毒增殖，,CPE,(,－,),埃可病毒＋人胚腎細(xì)胞,,病毒增殖，,CPE,(,＋,),＋人胚腎細(xì)胞,風(fēng)疹病毒？,,?？刹《?CPE(-),—,風(fēng)疹病毒,(,+),,,埃可病毒(-),,CPE(+),—,風(fēng)疹病毒(-),,,?？刹《?+),62,(,4,),細(xì)胞代謝改變,,,,細(xì)胞代謝變慢,或停止,,,培養(yǎng)液,pH,變化減慢,63,,病毒形態(tài)學(xué)鑒定,電子顯微鏡,：設(shè)備、操作復(fù)雜，,應(yīng)用受限,,光學(xué)顯微鏡,：可見,大病毒,（,痘類病毒），,,對一般病毒檢測,意義不大,

26、64,,病毒血清學(xué)鑒定,,鑒定病毒的種、型、亞型,,,(,1,),血凝抑制試驗,（,hemagglutinati,on,,i,nhibition test,）,—,正粘,病毒型與亞型鑒定,,,,,病毒,＋,雞,紅細(xì)胞,＝,凝集,（血凝試驗）,,,,,,病毒,＋,特異性抗體,＋,雞,紅細(xì)胞,＝,不凝集,,,（,血凝抑制試驗,）,,,65,(2),免疫標(biāo)記法,：用已知抗體對病毒進行血清學(xué)鑒定（熒光免疫測定,FIA,、酶聯(lián)免疫測定,EIA,、放射免疫測定,RIA,）,,——多種病毒鑒定,,,(,3,),凝膠免疫擴散試驗,(,gel immunodiffusion,,test,),,,——多種病毒鑒定

27、,66,,病毒分子生物學(xué)鑒定,核酸類型的測定,,理化性狀的檢測,,基因測序和生物對比,,抗原變異病毒基因的鑒定,,,核酸擴增、核酸雜交、基因芯片、基因測序,67,（三）,病毒數(shù)量與感染性測定,1,.,血凝試驗：,可定量檢測,病毒總量,,（活病毒,＋,死病毒）,2.,,蝕斑形成試驗,,（,plaque formation test,）,,感染性病毒量,,3,.,50,％,組織細(xì)胞感染量,（,50,％,tissue culture,,,infectious dose,,TCID,50,）,,,以,CPE,為指標(biāo)，判斷病毒的感染性和毒力,68,69,(,四,),新病毒的鑒定,核酸類型的測定,,理化性

28、狀的檢測,,形態(tài)學(xué)鑒定,,血清學(xué)鑒定,,基因測序和生物對比,70,三、病毒感染的血清學(xué)診斷,應(yīng)用,：,,①采取標(biāo)本分離病毒為時已晚,,②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒,,③為證實所分離的病毒的臨床意義,,④進行血清流行病學(xué)調(diào)查等,71,方法,中和試驗,,特異性抗體中和病毒使之失去感染性。,,用于檢測患者血清中抗體的消長情況，或鑒定病毒及病毒半定量。,,,血凝抑制試驗,,簡單、特異性高，常用于粘病毒、乙型腦炎病毒感染的輔助診斷。,,,補體結(jié)合試驗,,,凝膠免疫擴散試驗,72,四、病毒感染的快速診斷,不分離培養(yǎng)病毒，直接觀察病毒顆粒或檢測病毒成分，數(shù)小時內(nèi)作出診斷。,,,形態(tài)學(xué)檢查：電鏡

29、觀察病毒顆粒,,,病毒成分,檢測：病毒蛋白抗原或核酸,,,早期抗體檢測,：病毒特異性,I,gM,抗體，早期抗原的抗體,73,病毒感染的特異性預(yù)防,,微生物及其代謝產(chǎn)物,,生物制品,動物免疫血清,,（biological products）,,,免疫細(xì)胞,,,細(xì)胞因子,,,防治和診斷感染性疾病,,74,滅活疫苗,（,inactivated vaccine,）,,活疫苗,（,living vaccine,）,,重組載體疫苗,（,recombinant carrier vaccine,）,,亞單位疫苗,（,subunit vaccine,）,,化學(xué)提取或人工合成疫苗,,重組疫苗,（,recombin

30、ant vaccine,）,,核酸疫苗,（,nucleic acid vaccine,）,(,一,),人工主動免疫常用生物制品,75,(,二,),人工被動免疫常用生物制品,,免疫球蛋白,,,血清丙種球蛋白,,,細(xì)胞免疫制劑,,,,IFN-,α、β、γ,,細(xì)胞因子 IL-2、IL-6、IL-12,,,,TNF 、,集落刺激因子,CSF,,,,,,,淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞 —LAK細(xì)胞,,,,76,病毒感染的治療,,核苷類藥物,,,,,非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑,,,蛋白酶抑制劑,,,,其他抗病毒藥物,,,干擾素和干擾素誘生劑,,,中草藥,,,基因治療劑,,,治療性疫苗,,,,抗病化學(xué)制劑,反義寡核苷酸,,干擾,RNA,,核酶（,ribozyme,）,77,核苷類藥物,作用機制,,HSV/VZV,,,無環(huán)鳥苷,（,NA）,,,病毒胸苷激酶,NA,一,磷酸,,,宿主細(xì)胞激酶,,,NA三磷酸,,,（缺乏糖環(huán)3’-OH基）,,,病毒DNA聚合酶 核酸鏈延伸被迫終止,78,思考題,分離病毒的標(biāo)本和作血清學(xué)診斷的標(biāo)本各有何要求？,,常用組織培養(yǎng)法有幾種？各有何應(yīng)用？,,病毒在組織細(xì)胞中增殖的指標(biāo)是什么？,,病毒性感染的快速診斷方法有哪些？,,預(yù)防病毒性感染有哪些人工自動免疫制劑？,,診斷病毒的核酸技術(shù)有哪些？,