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急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

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1、急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)2.3.1.1 目的 (1)檢測(cè)消毒劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的急性毒性作用和強(qiáng)度。(2)為亞急(慢)性毒性等試驗(yàn)提供劑量選擇的依據(jù)。2.3.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 小鼠或大鼠任選一種,雌雄各半。小鼠體重 18g22g,大鼠體重 180g220g,根據(jù)不同的計(jì)算 LD50方法,選用適當(dāng)?shù)膭?dòng)物數(shù)量。2.3.1.3 試驗(yàn)分組 如應(yīng)用概率單位-對(duì)數(shù)圖解法計(jì)算 LD50,隨機(jī)分為 5 個(gè)6 個(gè)劑量組。通常最高劑量組的動(dòng)物死亡率應(yīng)90%,最低劑量組動(dòng)物死亡率應(yīng)10%。可先以較大的組距較少量動(dòng)物進(jìn)行預(yù)試,找出其粗略致死劑量范圍,然后再設(shè)計(jì)正式試驗(yàn)的劑量分組。2.3.1.4 操作程序 (1)動(dòng)物

2、的準(zhǔn)備:試驗(yàn)前,一般禁食過夜,不限制飲水。(2)受試物的配制:常以水或食用植物油為溶劑配制成溶液,或采用 0.5%羧甲基纖維素配制成混懸液。灌胃給予受試物的最大容量,小鼠不超過 0.2ml/10g 體重,大鼠不超過 1.0ml/100g 體重。(3)染毒方法:用灌胃方式將受試物一次給予動(dòng)物。若受試物毒性很低,一次灌胃容量太大,可在 24h 內(nèi)分成 2 次3 次給予,其總劑量作為一日劑量計(jì)算。(4)染毒后觀察動(dòng)物的中毒表現(xiàn)和死亡數(shù)及死亡時(shí)間,并對(duì)死亡動(dòng)物和觀察期滿處死動(dòng)物進(jìn)行尸體解剖,肉眼觀察,發(fā)現(xiàn)有異常的組織或臟器,尚需進(jìn)一步作組織病理學(xué)檢查。觀察時(shí)間 14d。2.3.1.5 LD50 的計(jì)算

3、方法 根據(jù)給受試物后 14d 內(nèi)的各劑量組動(dòng)物死亡率計(jì)算 LD50(半數(shù)致死劑量)。2.3.1.5.1 概率單位-對(duì)數(shù)圖解法:(1)根據(jù)各劑量組動(dòng)物死亡率,從表 2-9 中查各組的概率單位。因死亡率為 0%和 100%的概率單位,與所試動(dòng)物數(shù)有關(guān),故需另在表2-10 中查找。例如:對(duì)死亡率為 45%的概率單位,可查表 2-9。先在表的左側(cè)縱標(biāo)目上找到 40,而后在表的上行橫標(biāo)目處找到 5,兩者交叉點(diǎn)處的 4.87,即為 45%的概率單位。又如:某組用 10 只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,如果全部存活(死亡率為 0%),查表 2-10,其概率單位為 3.04。表 2-9 百分率-概率單位換算表%0 1 2 3 4

4、 5 6 7 8 9 0 .2.67 2.95 3.12 3.25 3.36 3.45 3.52 3.59 3.66 10 3.72 3.77 3.82 3.87 3.92 3.96 4.01 4.05 4.08 4.12 20 4.16 4.19 4.23 4.26 4.29 4.33 4.36 4.39 4.42 4.45 30 4.48 4.50 4.53 4.56 4.59 4.61 4.64 4.67 4.69 4.72 40 4.75 4.77 4.80 4.82 4.85 4.87 4.90 4.92 4.95 4.97 50 5.00 5.03 5.05 5.08 5.10 5

5、.13 5.15 5.18 5.20 5.23 60 5.25 2.28 5.31 5.33 5.36 5.39 5.41 5.44 5.47 5.50 70 5.52 5.55 5.58 5.61 5.64 5.67 5.71 5.74 5.77 5.81 80 5.84 5.88 5.92 5.95 5.99 6.04 6.08 6.13 6.18 6.23 90 6.28 6.34 6.41 6.48 6.55 6.64 6.75 6.88 7.05 7.33 注:橫標(biāo)目數(shù)字為死亡率的個(gè)位數(shù),縱標(biāo)目數(shù)字為死亡率的十位數(shù)。表 2-10 相應(yīng)于反應(yīng)率為 0及 100的概率單位 該組動(dòng)物數(shù) 反

6、應(yīng)率 該組動(dòng)物數(shù) 反應(yīng)率 0%100%0%100%.11 3.00 7.00 2 3.85 6.15 12 2.97 7.03 3 3.62 6.38 13 2.93,7.07 4 3.47 6.53 14 2.90 7.10 5 3.36 6.64 15 2.87 7.13 6 3.27 6.73 16 2.85 7.15 7 3.20 6.80 17 2.82 7.18 8 3.13 6.87 18 2.80 7.20 9 3.09 6.91 19 2.78 7.22 10 3.04 6.96 20 2.76 7.24 (2)用方格紙繪散點(diǎn)圖,橫軸表示劑量的對(duì)數(shù)值(X),縱軸為概率單位值(

7、Y),將各組數(shù)值點(diǎn)在圖上。(3)按各點(diǎn)的分布趨勢(shì),用直尺繪出一條最適合于各點(diǎn)的直線,使線上方的點(diǎn)到線的總距離與線下方的點(diǎn)到線的總距離相近,此線應(yīng)盡量靠近概率單位為 5 的點(diǎn)及附近的點(diǎn)。(4)查出求概率單位 5 處的劑量對(duì)數(shù),其反對(duì)數(shù)即為 LD50。按下列公式計(jì)算 LD50 的 95%可信限。S=(X2 X1)/(Y2 Y1)Sm=S/(N/2)-1/2 LD50 對(duì)數(shù)值的 95%可信限=log LD50 1.96Sm (上式結(jié)果,經(jīng)反對(duì)數(shù)變換后,可得 LD50 的 95%可信限)Sm 為 LD50的標(biāo)準(zhǔn)誤;S 為標(biāo)準(zhǔn)差;X1、X2 分別為機(jī)率單位等于 4(Y1)和 6(Y2)時(shí)相應(yīng)的劑量對(duì)數(shù)值

8、;N為 Y1(=4)及 Y2(=6)相應(yīng)的死亡率間所用的動(dòng)物數(shù)。2.3.1.5.2 一次最大限度試驗(yàn):如 20 只動(dòng)物(雌雄各半)一次灌胃劑量 5000mg/kg 體重,在14d 內(nèi)又無死亡,可判定 LD50大于 5000mg/kg 體重。2.3.1.5.3 其他方法:如霍恩(Horn)法、寇氏(Karber)法等。2.3.1.6 評(píng)價(jià)規(guī)定 消毒劑的毒性評(píng)價(jià):LD50大于 5000mg/kg 體重者屬實(shí)際無毒;LD50為 501mg/kg5000mg/kg 體重者屬低毒;LD50為 51mg/kg500mg/kg 體重者屬中等毒;LD50為 1mg/kg50mg/kg 體重者屬高毒;LD50小于 1mg/kg 體重者屬劇毒。注:為評(píng)價(jià)消毒劑在實(shí)際應(yīng)用時(shí)對(duì)人體的安全性,當(dāng)產(chǎn)品原形LD505000mg/kg 體重時(shí),需增做消毒劑最高應(yīng)用液濃度 5 倍溶液的急性經(jīng)口毒性試驗(yàn),并計(jì)算其 LD50。

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