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1、昆蟲病毒應(yīng)用簡介昆蟲病毒應(yīng)用簡介胡家鑫2009.12主要內(nèi)容主要內(nèi)容 1 前言前言 2 昆蟲病毒的類群昆蟲病毒的類群 3 重要昆蟲病毒概述重要昆蟲病毒概述 4 昆蟲病毒的生產(chǎn)昆蟲病毒的生產(chǎn) 5 昆蟲病毒在害蟲防治上的應(yīng)用昆蟲病毒在害蟲防治上的應(yīng)用 1. 前言前言 昆蟲病毒是引起昆蟲致病和死亡的重要昆蟲病毒是引起昆蟲致病和死亡的重要病原體。最早關(guān)于昆蟲病毒的記載是中病原體。最早關(guān)于昆蟲病毒的記載是中國，在國，在1149年出版的年出版的農(nóng)書農(nóng)書中，就記中，就記載有家蠶的載有家蠶的“高節(jié)高節(jié)”“”“腳腫腳腫”病，這就病，這就是現(xiàn)在所稱的核型多角體病毒病。是現(xiàn)在所稱的核型多角體病毒病。2 昆蟲病毒的類

2、群昆蟲病毒的類群 病毒病毒virus：一類形態(tài)最小，結(jié)構(gòu)最簡單一類形態(tài)最小，結(jié)構(gòu)最簡單的微生物。由的微生物。由單一的核酸單一的核酸(RNA或或DNA)組成中心核、核外包裹一層外殼蛋白組組成中心核、核外包裹一層外殼蛋白組成。成。 病毒病病毒病viral disease：由病毒病原體引起由病毒病原體引起的疾病。的疾病。2.1 昆蟲病毒的基本特征昆蟲病毒的基本特征昆蟲病毒的一般構(gòu)造昆蟲病毒的一般構(gòu)造： - 昆蟲病毒是一類沒有細(xì)胞構(gòu)造的生物體昆蟲病毒是一類沒有細(xì)胞構(gòu)造的生物體 - 主要組成是主要組成是核酸核酸和和蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)。 - 病毒個(gè)體稱為病毒粒子病毒個(gè)體稱為病毒粒子(virion)，由兩部分構(gòu)成

3、：內(nèi)面，由兩部分構(gòu)成：內(nèi)面是是核心核心（core），成分為核酸；外層是），成分為核酸；外層是衣殼衣殼(capsid)，成分是蛋白質(zhì)。成分是蛋白質(zhì)。 有些衣殼外包被有有些衣殼外包被有囊膜囊膜。成分為脂類。成分為脂類。 核酸的功能核酸的功能是攜帶遺傳信息，決定病毒的遺傳變異性是攜帶遺傳信息，決定病毒的遺傳變異性和傳染性。和傳染性。 蛋白質(zhì)的功能蛋白質(zhì)的功能是保護(hù)核酸，并決定病毒的抗原性。是保護(hù)核酸，并決定病毒的抗原性。不同種類病毒的結(jié)構(gòu)不同種類病毒的結(jié)構(gòu)2.1 昆蟲病毒的基本特征昆蟲病毒的基本特征昆蟲病毒的侵染活動(dòng)昆蟲病毒的侵染活動(dòng)： 在寄主外存在時(shí)沒有代謝、生長和繁殖，只保在寄主外存在時(shí)沒有代謝

4、、生長和繁殖，只保留在適宜條件下侵染寄主的潛在能力。留在適宜條件下侵染寄主的潛在能力。 在不適宜的環(huán)境下活性較易喪失。在不適宜的環(huán)境下活性較易喪失。 對溫度很敏感，在對溫度很敏感，在55 60時(shí)，病毒懸液幾分鐘內(nèi)就會(huì)變性。時(shí)，病毒懸液幾分鐘內(nèi)就會(huì)變性。 X-射線、射線、-射線和紫外線照射能使病毒變性失活。射線和紫外線照射能使病毒變性失活。 有囊膜的病毒容易被脂肪溶劑破壞。一般常用甲醛等消毒劑來消有囊膜的病毒容易被脂肪溶劑破壞。一般常用甲醛等消毒劑來消毒被病毒污染的器皿和空氣。毒被病毒污染的器皿和空氣。 2.2 昆蟲病毒的分類昆蟲病毒的分類2.2.1分類依據(jù)分類依據(jù)： 形態(tài)學(xué)特征形態(tài)學(xué)特征 囊膜

5、的有無；病毒粒子的形狀、大??；亞顯微結(jié)構(gòu)等囊膜的有無；病毒粒子的形狀、大??；亞顯微結(jié)構(gòu)等 生物化學(xué)和生物物理學(xué)特征生物化學(xué)和生物物理學(xué)特征 核酸類型、核酸特性、蛋白質(zhì)構(gòu)成以及隔成分的含量、核酸類型、核酸特性、蛋白質(zhì)構(gòu)成以及隔成分的含量、 分子量、浮力密度和沉降系數(shù)等分子量、浮力密度和沉降系數(shù)等 生物學(xué)特征生物學(xué)特征 病毒入侵生物體的復(fù)制過程、寄主范圍和傳遞方式等病毒入侵生物體的復(fù)制過程、寄主范圍和傳遞方式等2.2 昆蟲病毒的分類昆蟲病毒的分類 2.2.2昆蟲病毒的類群昆蟲病毒的類群： 根據(jù)國際病毒分類委員會(huì)（根據(jù)國際病毒分類委員會(huì)（ICTV） 1981年通過的分類方案，所有已知病毒分為年通過的

6、分類方案，所有已知病毒分為54個(gè)科和群，此外還包括個(gè)科和群，此外還包括5個(gè)建議的或可個(gè)建議的或可能的科和群。能的科和群。 目前已經(jīng)明確分類地位的目前已經(jīng)明確分類地位的昆蟲病毒昆蟲病毒有有11科?？?。2.3 昆蟲病毒的診斷鑒定昆蟲病毒的診斷鑒定 一般的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)方法：一般的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)方法： 根據(jù)染病蟲體的癥狀進(jìn)行診斷。凡是產(chǎn)生多根據(jù)染病蟲體的癥狀進(jìn)行診斷。凡是產(chǎn)生多角體的病毒類型，用一般角體的病毒類型，用一般光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡觀察而明觀察而明確病毒的存在，并可采用某些染色方法來鑒別確病毒的存在，并可采用某些染色方法來鑒別是哪一類具包涵體的病毒。是哪一類具包涵體的病毒。 生物鑒定方法：生

7、物鑒定方法： 通過感染試驗(yàn)方法鑒別病毒的存在，比如接種通過感染試驗(yàn)方法鑒別病毒的存在，比如接種后能引起健蟲發(fā)生同樣疾病。后能引起健蟲發(fā)生同樣疾病。2.3 昆蟲病毒的診斷鑒定昆蟲病毒的診斷鑒定 電子顯微鏡觀察電子顯微鏡觀察 通常包括通常包括超薄切片技術(shù)超薄切片技術(shù)、負(fù)染色技術(shù)和投影技、負(fù)染色技術(shù)和投影技術(shù)等。術(shù)等。 血清學(xué)方法血清學(xué)方法 該法可確定各個(gè)分離株的親緣關(guān)系，鑒別用一該法可確定各個(gè)分離株的親緣關(guān)系，鑒別用一般方法難以區(qū)分的病毒。般方法難以區(qū)分的病毒。 生物化學(xué)及分子生物學(xué)研究鑒定生物化學(xué)及分子生物學(xué)研究鑒定3 重要昆蟲病毒的概述重要昆蟲病毒的概述到到1986年前為止：年前為止： 國內(nèi)外

8、已從約國內(nèi)外已從約1100種昆蟲、螨類中分出種昆蟲、螨類中分出約約1690種病毒種病毒 我國已從約我國已從約7目目26屬屬190種昆蟲中分離出種昆蟲中分離出234株病毒株病毒3 重要昆蟲病毒的概述重要昆蟲病毒的概述 已知昆蟲病毒的寄主有鱗翅目、膜翅目、雙翅已知昆蟲病毒的寄主有鱗翅目、膜翅目、雙翅目、鞘翅目、直翅目、半翅目、同翅目、脈翅目、鞘翅目、直翅目、半翅目、同翅目、脈翅目、革翅目、毛翅目、蜉蝣目、蜻蜓目等，尤目、革翅目、毛翅目、蜉蝣目、蜻蜓目等，尤以鱗翅目為主要寄主。以鱗翅目為主要寄主。 昆蟲病毒中的包涵體病約占昆蟲病毒中的包涵體病約占90以上，其中鱗以上，其中鱗翅目寄主約為翅目寄主約為8

9、0，雙翅目，雙翅目10。在無包涵體。在無包涵體病毒中，鱗翅目寄主占病毒中，鱗翅目寄主占33，雙翅目，雙翅目23，鞘，鞘翅目翅目18，膜翅目，膜翅目2.53 重要昆蟲病毒的概述重要昆蟲病毒的概述 目前已知至少有目前已知至少有20余類的昆蟲病毒，但研余類的昆蟲病毒，但研究歷史最長、防治應(yīng)用最廣的是桿狀病究歷史最長、防治應(yīng)用最廣的是桿狀病毒科中的毒科中的核型多角體病毒核型多角體病毒和和顆粒體病毒顆粒體病毒以及呼腸孤病毒科中的以及呼腸孤病毒科中的質(zhì)型多角體病毒質(zhì)型多角體病毒。3.1 核型多角體病毒核型多角體病毒(NPV) 核型多角體病毒核型多角體病毒(nuclear polyhedrosis viru

10、se,簡稱簡稱NPV)是研究得最早和最為詳是研究得最早和最為詳細(xì)的一類昆蟲病毒。細(xì)的一類昆蟲病毒。 到到1986年為止，國內(nèi)外發(fā)現(xiàn)年為止，國內(nèi)外發(fā)現(xiàn)464株，中國株，中國約約124株，其中株，其中78株為首次發(fā)現(xiàn)。株為首次發(fā)現(xiàn)。 在分類上為桿狀病毒屬（在分類上為桿狀病毒屬（Baculovirus）的的A亞組。亞組。3.1 核型多角體病毒核型多角體病毒(NPV) 一般形態(tài)特征一般形態(tài)特征： - 具有較大的包涵體，稱為具有較大的包涵體，稱為多角體多角體(polyhedra，簡稱，簡稱IB或或PIB)，在被感染的，在被感染的細(xì)胞核內(nèi)形成。細(xì)胞核內(nèi)形成。 - 多角體大小常因寄主昆蟲種類的不同而不同，多

11、角體大小常因寄主昆蟲種類的不同而不同，甚至在統(tǒng)一寄主細(xì)胞內(nèi)，多角體的形狀大小也甚至在統(tǒng)一寄主細(xì)胞內(nèi)，多角體的形狀大小也有區(qū)別。常見的形狀有三角形、四角形、五角有區(qū)別。常見的形狀有三角形、四角形、五角形、立方體、不規(guī)則形等。形、立方體、不規(guī)則形等。核型多角體病毒在電鏡下的照片NPV病毒粒子的形態(tài)結(jié)構(gòu)病毒粒子的形態(tài)結(jié)構(gòu)病毒粒子病毒粒子桿狀桿狀，所以又稱為病毒桿狀體。，所以又稱為病毒桿狀體。 病毒粒子由外到內(nèi)：病毒粒子由外到內(nèi)： 囊膜囊膜（內(nèi)膜）（內(nèi)膜）一層脂質(zhì)膜一層脂質(zhì)膜 衣殼衣殼（內(nèi)膜）（內(nèi)膜）主要成分是蛋白質(zhì)主要成分是蛋白質(zhì) 髓核髓核由由DNA組成，呈螺旋狀組成，呈螺旋狀 后兩者加在一起成為后

12、兩者加在一起成為核衣殼核衣殼。 在在NPV中，通常一個(gè)囊膜內(nèi)由多個(gè)排列成束的核衣中，通常一個(gè)囊膜內(nèi)由多個(gè)排列成束的核衣 殼，稱為殼，稱為病病毒束毒束。 一個(gè)品系的一個(gè)品系的NPV，可能每個(gè)囊膜內(nèi)均只有一個(gè)核衣殼，也由可能，可能每個(gè)囊膜內(nèi)均只有一個(gè)核衣殼，也由可能每個(gè)囊膜內(nèi)由每個(gè)囊膜內(nèi)由1到多個(gè)核衣殼而成為到多個(gè)核衣殼而成為“病毒束病毒束”，前者稱為，前者稱為單粒單粒包埋型病毒包埋型病毒，后者稱為，后者稱為多粒包埋型病毒多粒包埋型病毒。NPV的理化性狀的理化性狀 不溶于水及多種有機(jī)溶劑如乙醇、乙醚、不溶于水及多種有機(jī)溶劑如乙醇、乙醚、三氯甲烷、苯、丙酮等三氯甲烷、苯、丙酮等 強(qiáng)酸或強(qiáng)堿溶液處理，

13、能使多角體蛋白強(qiáng)酸或強(qiáng)堿溶液處理，能使多角體蛋白質(zhì)溶解。質(zhì)溶解。NPV的理化性狀的理化性狀 病毒粒子外有包涵體的保護(hù)，可在自然條件下病毒粒子外有包涵體的保護(hù)，可在自然條件下存活多年仍不失效。對低溫有較高的忍受力。存活多年仍不失效。對低溫有較高的忍受力。 如家蠶如家蠶NPV在在135150條件下反復(fù)凍結(jié)條件下反復(fù)凍結(jié)融解融解5次，其感染力不變。對高溫的抵抗力較次，其感染力不變。對高溫的抵抗力較差，如粉紋夜蛾差，如粉紋夜蛾NPV的失活溫度為的失活溫度為828810min，棉鈴蟲，棉鈴蟲NPV的失活溫度為的失活溫度為758010min，粘蟲的，粘蟲的NPV在在100經(jīng)經(jīng)10min失活失活。NPV對昆

14、蟲的侵染對昆蟲的侵染感病特征：感病特征： 以鱗翅目為例：以鱗翅目為例： 感病初期無明顯異常變化感病初期無明顯異常變化 行動(dòng)遲緩食欲減退，體色變淡或呈油光行動(dòng)遲緩食欲減退，體色變淡或呈油光 病蟲常爬向寄主植物高處，死前體軀變軟病蟲常爬向寄主植物高處，死前體軀變軟 以腹足緊附枝葉倒掛而死以腹足緊附枝葉倒掛而死 皮膚則脆弱易裂，破后流出乳白色或褐色的皮膚則脆弱易裂，破后流出乳白色或褐色的 濃稠液體，內(nèi)含大量新形成的核多角體。濃稠液體，內(nèi)含大量新形成的核多角體。NPV的感染途徑的感染途徑 卵期被病毒污染的蟲卵在幼蟲孵化時(shí)因吞食卵卵期被病毒污染的蟲卵在幼蟲孵化時(shí)因吞食卵殼而感染。殼而感染。 舞毒蛾剛孵化

15、出的幼蟲常因食人染有舞毒蛾剛孵化出的幼蟲常因食人染有LdNPV的的卵殼而致死。病死的初孵幼蟲又為后期幼蟲提卵殼而致死。病死的初孵幼蟲又為后期幼蟲提供接種源。在幼蟲期因供接種源。在幼蟲期因LdNPV引起的死亡率常引起的死亡率常出現(xiàn)兩個(gè)高潮，一是在孵化后出現(xiàn)兩個(gè)高潮，一是在孵化后12周，一是在周，一是在末齡幼蟲期。末齡幼蟲期。NPV的感染途徑的感染途徑 幼蟲被感染后直至出現(xiàn)癥狀和病征的這段潛伏期受多幼蟲被感染后直至出現(xiàn)癥狀和病征的這段潛伏期受多種因素的影響。種因素的影響。 接種量少則潛伏期長。接種量少則潛伏期長。 幼蟲齡期越后易感性一般較小，潛伏期也延長。幼蟲齡期越后易感性一般較小，潛伏期也延長。

16、 溫度顯著影響潛伏期長短，如家蠶在正常室溫下溫度顯著影響潛伏期長短，如家蠶在正常室溫下57天就出現(xiàn)病征，天就出現(xiàn)病征，16 17時(shí)時(shí)15天內(nèi)不出現(xiàn)病征。天內(nèi)不出現(xiàn)病征。 較高的相對濕度也能誘發(fā)某些昆蟲發(fā)生病毒病較高的相對濕度也能誘發(fā)某些昆蟲發(fā)生病毒病 。NPV的選擇性與專化性的選擇性與?；?桿狀病毒曾以選擇性和?；愿叨Q，但試桿狀病毒曾以選擇性和?；愿叨Q，但試驗(yàn)證明一種昆蟲的桿狀病毒能感染其他昆蟲的驗(yàn)證明一種昆蟲的桿狀病毒能感染其他昆蟲的事例并不少見。事例并不少見。 家蠶家蠶NPV能侵染柞蠶等能侵染柞蠶等11種昆蟲。歐洲云杉卷種昆蟲。歐洲云杉卷葉蛾葉蛾(Choristoneura

17、murinana)的的NPV能侵染云能侵染云杉卷葉蛾杉卷葉蛾(Cfuniiferana)、蘋果囊蛾、李食心、蘋果囊蛾、李食心蟲、歐洲松梢卷葉蛾等。紅棕灰夜蛾蟲、歐洲松梢卷葉蛾等。紅棕灰夜蛾(Sarcopolia illoba)NPV能侵染銀紋夜蛾、黃地能侵染銀紋夜蛾、黃地老虎、粘蟲等老虎、粘蟲等12種夜蛾科害蟲。種夜蛾科害蟲。NPV的交叉感染性的交叉感染性 一種昆蟲也可合并感染兩類不同的病毒，一種昆蟲也可合并感染兩類不同的病毒，如黃地老虎、菜粉蝶、粘蟲、粉紋夜蛾、如黃地老虎、菜粉蝶、粘蟲、粉紋夜蛾、云杉卷葉蛾等可合并感染核型多角體病云杉卷葉蛾等可合并感染核型多角體病毒和顆粒體病毒。粘蟲合并感染

18、毒和顆粒體病毒。粘蟲合并感染NPV和和GV時(shí)，時(shí)，GV能增強(qiáng)能增強(qiáng)NPV的感染，有協(xié)同的感染，有協(xié)同增效作用。有些合并感染則有干擾作用，增效作用。有些合并感染則有干擾作用，如云杉卷葉蛾先感染的病毒妨礙后感染如云杉卷葉蛾先感染的病毒妨礙后感染病毒的發(fā)展。病毒的發(fā)展。3.2 顆粒體病毒顆粒體病毒(GV) 顆粒體病毒顆粒體病毒（granulosis virus，簡稱，簡稱GV）在分類上屬桿狀病毒科在分類上屬桿狀病毒科B亞組，是亞組，是有包涵有包涵體體的昆蟲病毒。的昆蟲病毒。 目前為止國內(nèi)外發(fā)現(xiàn)目前為止國內(nèi)外發(fā)現(xiàn)GV約約130株，中國株，中國發(fā)現(xiàn)約發(fā)現(xiàn)約42株，其中株，其中26株為首次發(fā)現(xiàn)。株為首次發(fā)

19、現(xiàn)。GV的一般形態(tài)特征的一般形態(tài)特征 包涵體稱包涵體稱顆粒體顆粒體(granule) 或或莢膜莢膜(capsule)。 先在被感染細(xì)胞的核內(nèi)形成，但當(dāng)核膜破裂后先在被感染細(xì)胞的核內(nèi)形成，但當(dāng)核膜破裂后可溢出到細(xì)胞質(zhì)內(nèi)?？梢绯龅郊?xì)胞質(zhì)內(nèi)。 包涵體很小包涵體很小。在電子顯微鏡下觀察，顆粒體的。在電子顯微鏡下觀察，顆粒體的形狀有卵形、橢圓形、長卵形等，通常直徑為形狀有卵形、橢圓形、長卵形等，通常直徑為0.10.3m，長，長0.31.0m。每個(gè)包涵體內(nèi)。每個(gè)包涵體內(nèi)一一般只有一個(gè)病毒粒子般只有一個(gè)病毒粒子。有時(shí)也出現(xiàn)不正常的形。有時(shí)也出現(xiàn)不正常的形狀。狀。左圖：霜天蛾左圖：霜天蛾GV的形的形態(tài)態(tài)右圖：

20、小菜蛾右圖：小菜蛾GV經(jīng)經(jīng)堿處理后的病毒粒子堿處理后的病毒粒子GV的理化性狀的理化性狀 不溶于水和一般的有機(jī)溶劑如乙醚、乙不溶于水和一般的有機(jī)溶劑如乙醚、乙醇、丙酮、二甲苯等。醇、丙酮、二甲苯等。 遇強(qiáng)酸或強(qiáng)堿，包涵體能迅速溶解，并遇強(qiáng)酸或強(qiáng)堿，包涵體能迅速溶解，并可使病毒粒子變性而失去侵染力?？墒共《玖Ｗ幼冃远デ秩玖?。GV的理化性狀的理化性狀 可在室溫下保存可在室溫下保存5年以上而不失侵染力。年以上而不失侵染力。 高溫可使其失活。高溫可使其失活。 冰凍無多大危害。較低的溫度有可能延冰凍無多大危害。較低的溫度有可能延長貯存的時(shí)期。長貯存的時(shí)期。 紫外線或其他輻射線能使完整的病毒失紫外線或其

21、他輻射線能使完整的病毒失活?；睢?用稀堿處理后可獲得完整和具侵染性的用稀堿處理后可獲得完整和具侵染性的病毒粒子。病毒粒子。GV對昆蟲的侵染對昆蟲的侵染 感病特征：感病特征： 感染初期無明顯病征感染初期無明顯病征 之后出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍和停止取食之后出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍和停止取食 隨后蟲體顏色發(fā)生改變，血液漸變?nèi)榘纂S后蟲體顏色發(fā)生改變，血液漸變?nèi)榘?感病蟲體可能膨大或收縮感病蟲體可能膨大或收縮 已死幼蟲體壁脆弱，破后流出大量顆粒體。已死幼蟲體壁脆弱，破后流出大量顆粒體。 染病幼蟲可存活較長時(shí)間。染病幼蟲可存活較長時(shí)間。 病死蟲體有時(shí)用腹足倒掛枝葉上，呈病死蟲體有時(shí)用腹足倒掛枝葉上，呈“”形。形。GV的感病特征

22、的感病特征 染病幼蟲常于染病幼蟲常于幼蟲期幼蟲期即死，有時(shí)也可活即死，有時(shí)也可活至蛹期或成蟲期。從染病到死亡所經(jīng)時(shí)至蛹期或成蟲期。從染病到死亡所經(jīng)時(shí)間因蟲而異。一般間因蟲而異。一般45天，可長至天，可長至34天，天，如粘蟲。幼蟲齡期、侵染劑量、溫度等如粘蟲。幼蟲齡期、侵染劑量、溫度等因素也能影響這段時(shí)期的長短。因素也能影響這段時(shí)期的長短。GV的感染途徑的感染途徑 通過通過口服口服進(jìn)入易感蟲體，顆粒體在中腸進(jìn)入易感蟲體，顆粒體在中腸中溶解，游離的病毒粒子通過腸道柱形中溶解，游離的病毒粒子通過腸道柱形細(xì)胞的微絨毛而侵入，在這些細(xì)胞核中細(xì)胞的微絨毛而侵入，在這些細(xì)胞核中增殖，新形成的顆粒體病毒釋放于

23、血淋增殖，新形成的顆粒體病毒釋放于血淋巴中而導(dǎo)致對其他組織的繼發(fā)感染。巴中而導(dǎo)致對其他組織的繼發(fā)感染。 蟲體外傷和寄生天敵產(chǎn)卵可引起蟲體外傷和寄生天敵產(chǎn)卵可引起GV對皮對皮下感染，也可經(jīng)卵垂直傳播。下感染，也可經(jīng)卵垂直傳播。GV的?；缘膶；?顆粒體病毒的?；暂^強(qiáng)，交叉感染的情況甚顆粒體病毒的?；暂^強(qiáng)，交叉感染的情況甚為少見，一般認(rèn)為顆粒體病毒是包涵體病毒含為少見，一般認(rèn)為顆粒體病毒是包涵體病毒含DNA的各類中?；宰顝?qiáng)的一類。的各類中?；宰顝?qiáng)的一類。 以往尚無顆粒體病毒能在植物或其他動(dòng)物細(xì)胞以往尚無顆粒體病毒能在植物或其他動(dòng)物細(xì)胞中增殖的報(bào)道。近年我國用小菜蛾細(xì)胞系中增殖的報(bào)道。近年

24、我國用小菜蛾細(xì)胞系BCIRL-Px2-HNU3復(fù)制小菜粉蝶復(fù)制小菜粉蝶GV和用家蠶和用家蠶細(xì)胞系細(xì)胞系Bm-21E-HNU5復(fù)制小菜蛾復(fù)制小菜蛾GV成功。成功。GV的交叉感染現(xiàn)象的交叉感染現(xiàn)象 鱗翅目幼蟲可合并感染鱗翅目幼蟲可合并感染NPV和和GV兩種病兩種病毒。如黃地老虎、菜粉蝶、粘蟲等可同毒。如黃地老虎、菜粉蝶、粘蟲等可同時(shí)感染顆粒體病毒和時(shí)感染顆粒體病毒和NPV。粘蟲的六齡。粘蟲的六齡幼蟲如單感染幼蟲如單感染NPV，死亡率，死亡率3.4，單感，單感染顆粒體病毒，死亡率染顆粒體病毒，死亡率20%，如二種合，如二種合并感染，則死亡率為并感染，則死亡率為80，死體為，死體為NPV病征，體內(nèi)主要

25、是核型多角體，也有些病征，體內(nèi)主要是核型多角體，也有些同時(shí)存在顆粒體。同時(shí)存在顆粒體。3.3 質(zhì)型多角體病毒質(zhì)型多角體病毒(CPV) 質(zhì)多角體病毒質(zhì)多角體病毒（cytoplasmic polyhedrosis virus，簡稱簡稱CPV）的發(fā)現(xiàn)比）的發(fā)現(xiàn)比NPV和和GV都要遲。日本都要遲。日本蠶病學(xué)家蠶病學(xué)家石森直人石森直人早于早于1934年就觀察到家蠶的年就觀察到家蠶的中腸上皮細(xì)胞內(nèi)存在有多角體，但當(dāng)時(shí)并未確中腸上皮細(xì)胞內(nèi)存在有多角體，但當(dāng)時(shí)并未確定是由一種新型病毒引起的。定是由一種新型病毒引起的。 CPV可感染鱗翅目、雙翅目、膜翅目、鞘翅目、可感染鱗翅目、雙翅目、膜翅目、鞘翅目、脈翅目脈翅

26、目5目昆蟲，但主要見于鱗翅目和雙翅目。目昆蟲，但主要見于鱗翅目和雙翅目。到到1986年前國內(nèi)外已發(fā)現(xiàn)年前國內(nèi)外已發(fā)現(xiàn)CPV228株，代表種株，代表種為家蠶為家蠶CPV。 CPV作為殺蟲劑應(yīng)用的不多，主要原因作為殺蟲劑應(yīng)用的不多，主要原因是只侵染是只侵染中腸上皮細(xì)胞中腸上皮細(xì)胞，在自然界中以，在自然界中以慢性感染的地方病出現(xiàn)。如廣泛用于生慢性感染的地方病出現(xiàn)。如廣泛用于生物制劑尚須進(jìn)一步進(jìn)行安全試驗(yàn)研究。物制劑尚須進(jìn)一步進(jìn)行安全試驗(yàn)研究。 當(dāng)前當(dāng)前CPV用于害蟲防治實(shí)踐的有日本赤用于害蟲防治實(shí)踐的有日本赤松毛蟲松毛蟲(Dendrolimus spectabilis) CPV、。、。CPV的一般形

27、態(tài)特征的一般形態(tài)特征 其包涵體和其包涵體和NPV相似，也是多角體，但只在被相似，也是多角體，但只在被感染細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)形成。質(zhì)型多角體呈六角感染細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)形成。質(zhì)型多角體呈六角形、四角形、球形、橢圓形等。形、四角形、球形、橢圓形等。 質(zhì)型多角體的直徑為質(zhì)型多角體的直徑為0.5m25m， 1個(gè)多角個(gè)多角體可包埋體可包埋10010 000個(gè)病毒粒子。病毒粒子為個(gè)病毒粒子。病毒粒子為球形二十面體，直徑為球形二十面體，直徑為30nm60nm，有內(nèi)、，有內(nèi)、外兩個(gè)二十面殼，每個(gè)殼有外兩個(gè)二十面殼，每個(gè)殼有12個(gè)小單位構(gòu)造。個(gè)小單位構(gòu)造。 1 BmCPV的包涵體形態(tài)，右下為該包涵體的模式圖的包涵體形態(tài)

28、，右下為該包涵體的模式圖2 家蠶質(zhì)型家蠶質(zhì)型CPV的包涵體形態(tài)，右上角為此包涵體的模式圖的包涵體形態(tài)，右上角為此包涵體的模式圖3 揚(yáng)雪毒蛾揚(yáng)雪毒蛾CPV的多角體掃描電鏡圖像的多角體掃描電鏡圖像4 舞毒蛾舞毒蛾CPV包涵體的掃描電鏡圖像包涵體的掃描電鏡圖像1234CPV的理化性狀的理化性狀 不溶于水，但在水中經(jīng)較長時(shí)間可被蝕不溶于水，但在水中經(jīng)較長時(shí)間可被蝕刻，而從表面失去粒子?？?，而從表面失去粒子。 在堿液中的溶解度比在堿液中的溶解度比NPV多角體的溶解多角體的溶解度為小，如以稀度為小，如以稀Na2CO3液或其他稀堿液液或其他稀堿液處理，能失去表面病毒粒子，剩下不溶處理，能失去表面病毒粒子，剩

29、下不溶解的多角體，呈多孔的海綿狀。解的多角體，呈多孔的海綿狀。 在堿液中很快被破壞，在從多角體中分在堿液中很快被破壞，在從多角體中分離提純時(shí)須加注意。離提純時(shí)須加注意。CPV對昆蟲的侵染對昆蟲的侵染感病特征：感病特征： 早期食欲不振、體軀變小，有時(shí)蟲體比早期食欲不振、體軀變小，有時(shí)蟲體比例不當(dāng)，頭部顯得大。中腸中多角體的例不當(dāng)，頭部顯得大。中腸中多角體的大量增殖使體色改變?yōu)辄S色或淡白色等。大量增殖使體色改變?yōu)辄S色或淡白色等。中腸細(xì)胞液化后，多角體可被嘔出或由中腸細(xì)胞液化后，多角體可被嘔出或由糞便排出。糞便排出。CPV的感染過程的感染過程 質(zhì)型多角體病毒被易感昆蟲口服后或?qū)⒂坞x的質(zhì)型多角體病毒被

30、易感昆蟲口服后或?qū)⒂坞x的病毒粒子注射入蟲體血腔均可引起感染。病毒粒子注射入蟲體血腔均可引起感染。 病毒進(jìn)入蟲體消化道后為堿性消化液溶解病毒進(jìn)入蟲體消化道后為堿性消化液溶解而釋放出粒子，繼而侵入中腸上皮細(xì)胞，在其而釋放出粒子，繼而侵入中腸上皮細(xì)胞，在其細(xì)胞質(zhì)內(nèi)增殖，也可傳染至前后腸細(xì)胞。形成細(xì)胞質(zhì)內(nèi)增殖，也可傳染至前后腸細(xì)胞。形成多角體后，有半數(shù)以上的病毒粒子不被包埋而多角體后，有半數(shù)以上的病毒粒子不被包埋而游離，釋放到細(xì)胞間隙，再次感染健康細(xì)胞。游離，釋放到細(xì)胞間隙，再次感染健康細(xì)胞。最后細(xì)胞解體，多角體脫落在中腸腔。一般經(jīng)最后細(xì)胞解體，多角體脫落在中腸腔。一般經(jīng)720天死亡。天死亡。CPV的

31、專化性的?；?通常認(rèn)為質(zhì)型多角體病毒只感染中腸上皮通常認(rèn)為質(zhì)型多角體病毒只感染中腸上皮細(xì)胞。一般認(rèn)為其寄主?；某潭人戚^細(xì)胞。一般認(rèn)為其寄主?；某潭人戚^多數(shù)含多數(shù)含DNA病毒者為低。往往能超科感病毒者為低。往往能超科感染，從不同寄主所獲分離毒株也有同種染，從不同寄主所獲分離毒株也有同種的可能。的可能。4 昆蟲病毒的生產(chǎn)昆蟲病毒的生產(chǎn) 病毒為專性寄生病原，至今尚未研究出病毒為專性寄生病原，至今尚未研究出能在人工培養(yǎng)基上生長，只能在活細(xì)胞能在人工培養(yǎng)基上生長，只能在活細(xì)胞中增殖。因此，目前國內(nèi)外應(yīng)用于害蟲中增殖。因此，目前國內(nèi)外應(yīng)用于害蟲防治的昆蟲病毒制劑主要是通過活蟲體防治的昆蟲病毒制劑主要

32、是通過活蟲體增殖和細(xì)胞培養(yǎng)法繁殖。增殖和細(xì)胞培養(yǎng)法繁殖。 4.1 在昆蟲活體中大量增殖昆蟲病毒在昆蟲活體中大量增殖昆蟲病毒 3種途徑：種途徑： 直接在自然種群中繁殖直接在自然種群中繁殖 從野外采回大量活蟲接種繁殖從野外采回大量活蟲接種繁殖 在室內(nèi)條件下飼育大量害蟲接種繁殖在室內(nèi)條件下飼育大量害蟲接種繁殖 可采用自然飼料或人工飼料。近年來，各種可采用自然飼料或人工飼料。近年來，各種類型的昆蟲病毒包括類型的昆蟲病毒包括NPV、CPV、GV和昆蟲和昆蟲痘病毒等通過人工飼料飼育昆蟲而增殖均獲得痘病毒等通過人工飼料飼育昆蟲而增殖均獲得較好的成效。較好的成效。4.2 在細(xì)胞系中大量增殖昆蟲病毒在細(xì)胞系中大

33、量增殖昆蟲病毒 用組織培養(yǎng)增殖的病毒在致病性、?；杂媒M織培養(yǎng)增殖的病毒在致病性、?；约捌渌匦苑矫嬗袩o變異，尚待進(jìn)一步及其他特性方面有無變異，尚待進(jìn)一步研究。同時(shí)，因組織培養(yǎng)法要求條件較研究。同時(shí)，因組織培養(yǎng)法要求條件較嚴(yán)格，大量增殖病毒還存在不少問題，嚴(yán)格，大量增殖病毒還存在不少問題，目前尚未達(dá)到實(shí)用階段。目前尚未達(dá)到實(shí)用階段。 4.3 昆蟲病毒殺蟲劑的生產(chǎn)實(shí)例昆蟲病毒殺蟲劑的生產(chǎn)實(shí)例 1 核多角體病毒殺蟲劑核多角體病毒殺蟲劑 2 顆粒體病毒殺蟲劑顆粒體病毒殺蟲劑4.3.1 核多角體病毒殺蟲劑核多角體病毒殺蟲劑目前，核型多角體病毒是應(yīng)用最廣泛的昆目前，核型多角體病毒是應(yīng)用最廣泛的昆蟲病毒

34、。在中國已進(jìn)入大田試驗(yàn)的生產(chǎn)蟲病毒。在中國已進(jìn)入大田試驗(yàn)的生產(chǎn)示范的核多角體病毒殺蟲劑有：棉鈴蟲示范的核多角體病毒殺蟲劑有：棉鈴蟲NPV、斜紋夜蛾、斜紋夜蛾NPV、油桐尺蠖、油桐尺蠖NPV、茶黃毒蛾茶黃毒蛾NPV、舞毒蛾、舞毒蛾NPV、美國白蛾、美國白蛾NPV、楊尺蠖、楊尺蠖NPV、甘藍(lán)夜蛾、甘藍(lán)夜蛾NPV等。等。 現(xiàn)以斜紋夜蛾現(xiàn)以斜紋夜蛾NPV為例，介紹為例，介紹NPV殺蟲劑的生產(chǎn)工藝及流程。殺蟲劑的生產(chǎn)工藝及流程。斜紋夜蛾斜紋夜蛾NPV殺蟲劑的生產(chǎn)殺蟲劑的生產(chǎn) 斜紋夜蛾屬鱗翅目夜蛾科。分布很廣，遍及全斜紋夜蛾屬鱗翅目夜蛾科。分布很廣，遍及全國，危害植物達(dá)國，危害植物達(dá)99科科290種以上，

35、在大田作物種以上，在大田作物中，主要危害棉花、大豆、花生、芝麻、煙草、中，主要危害棉花、大豆、花生、芝麻、煙草、甘薯、甜菜、玉米、高粱、水稻等，在蔬菜中，甘薯、甜菜、玉米、高粱、水稻等，在蔬菜中，主要危害甘藍(lán)、白菜等十字花科蔬菜和水生蔬主要危害甘藍(lán)、白菜等十字花科蔬菜和水生蔬菜，也危害芋頭，莧菜、馬鈴薯、番茄、辣椒、菜，也危害芋頭，莧菜、馬鈴薯、番茄、辣椒、瓜類、豆類等瓜類、豆類等斜紋夜蛾斜紋夜蛾NPV的生產(chǎn)工藝的生產(chǎn)工藝1 健康斜紋夜蛾幼蟲的人工飼養(yǎng)和管理健康斜紋夜蛾幼蟲的人工飼養(yǎng)和管理 人工飼料的成分人工飼料的成分：黃豆粉黃豆粉100g，山梨酸，山梨酸1.6g，麩皮，麩皮100g，泥泊金，

36、泥泊金1.6g，酵母粉，酵母粉40g，水，水1000ml，瓊脂，瓊脂12g，L-抗壞血酸抗壞血酸4g 卵管理卵管理：在幼蟲孵化前一天，用在幼蟲孵化前一天，用5福爾馬福爾馬林溶液將卵塊浸泡林溶液將卵塊浸泡15分鐘，無菌水漂洗分鐘，無菌水漂洗3次，次，滅菌紙上晾干，移入盛有人工飼料的塑料盒里，滅菌紙上晾干，移入盛有人工飼料的塑料盒里，放置放置25度條件下孵育度條件下孵育1 健康斜紋夜蛾幼蟲的人工飼養(yǎng)和管理健康斜紋夜蛾幼蟲的人工飼養(yǎng)和管理 幼蟲管理幼蟲管理： 根據(jù)以幼蟲的生活習(xí)性盒飼養(yǎng)密度的要求，把根據(jù)以幼蟲的生活習(xí)性盒飼養(yǎng)密度的要求，把幼蟲分為兩階段進(jìn)行飼養(yǎng)。幼蟲分為兩階段進(jìn)行飼養(yǎng)。14齡幼蟲飼養(yǎng)

37、齡幼蟲飼養(yǎng)密度可為密度可為300粒粒500粒粒/盒；盒；蟲子養(yǎng)到蟲子養(yǎng)到4齡后，齡后，飼養(yǎng)密度要適當(dāng)調(diào)小。由于飼養(yǎng)密度要適當(dāng)調(diào)小。由于46齡幼蟲蛻皮會(huì)齡幼蟲蛻皮會(huì)吐水，造成容器濕度過大，影響生長發(fā)育。所吐水，造成容器濕度過大，影響生長發(fā)育。所以相對濕度也應(yīng)適度調(diào)低。以相對濕度也應(yīng)適度調(diào)低。1 健康斜紋夜蛾幼蟲的人工飼養(yǎng)和管理健康斜紋夜蛾幼蟲的人工飼養(yǎng)和管理蛹的管理蛹的管理： 將老熟幼蟲放入自制的沙營造蛹室（在已消毒將老熟幼蟲放入自制的沙營造蛹室（在已消毒的有紗蓋的木盒里，放入的有紗蓋的木盒里，放入10cm高的已高溫消毒高的已高溫消毒的沙子），待蛹體變黑后，挑取個(gè)體大，富有的沙子），待蛹體變黑后

38、，挑取個(gè)體大，富有光澤，有活力的蛹，放入產(chǎn)卵箱羽化。光澤，有活力的蛹，放入產(chǎn)卵箱羽化。 成蟲管理成蟲管理： 將蛹放入墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中，移入紙制養(yǎng)將蛹放入墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中，移入紙制養(yǎng)蟲籠內(nèi)，每籠放蟲籠內(nèi)，每籠放10對蛹，成蟲交配產(chǎn)卵后收剪對蛹，成蟲交配產(chǎn)卵后收剪卵塊。卵塊。斜紋夜蛾斜紋夜蛾NPV的生產(chǎn)工藝的生產(chǎn)工藝 將飼養(yǎng)至將飼養(yǎng)至4齡的幼蟲，按一定的濃度齡的幼蟲，按一定的濃度進(jìn)進(jìn)行涂毒感染，飼養(yǎng)行涂毒感染，飼養(yǎng)24小時(shí)后換無毒飼料。小時(shí)后換無毒飼料。從感染后的第從感染后的第5天開始收集病死蟲。收集天開始收集病死蟲。收集的死蟲即使處理或放冰箱冷藏。的死蟲即使處理或放冰箱冷藏。斜紋夜蛾斜紋

39、夜蛾NPV的生產(chǎn)工藝的生產(chǎn)工藝3 病毒提取干燥病毒提取干燥 將病蟲尸以將病蟲尸以1：10自來水混合，倒入電動(dòng)勻漿自來水混合，倒入電動(dòng)勻漿機(jī)研磨過濾，濾液經(jīng)差速離心法，離心機(jī)研磨過濾，濾液經(jīng)差速離心法，離心34次，次，收集沉淀，漿沉淀按收集沉淀，漿沉淀按1：1加入填充劑存放加入填充劑存放20下保存。取凍結(jié)的沉淀物機(jī)械粉碎，便可下保存。取凍結(jié)的沉淀物機(jī)械粉碎，便可獲多角體干粉。經(jīng)顯微鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)確定含量，獲多角體干粉。經(jīng)顯微鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)確定含量，存放于存放于4冰箱備用。冰箱備用。4 產(chǎn)品的質(zhì)量檢測與藥效產(chǎn)品的質(zhì)量檢測與藥效 含量毒力測定產(chǎn)品衛(wèi)生性檢測產(chǎn)品安全含量毒力測定產(chǎn)品衛(wèi)生性檢測產(chǎn)品安全性檢測

40、性檢測5 昆蟲病毒在害蟲防治上的應(yīng)用昆蟲病毒在害蟲防治上的應(yīng)用5.1 應(yīng)用昆蟲病毒防治害蟲的現(xiàn)狀應(yīng)用昆蟲病毒防治害蟲的現(xiàn)狀 較早應(yīng)用于森林害蟲膜翅目葉蜂類的防治，如較早應(yīng)用于森林害蟲膜翅目葉蜂類的防治，如歐洲云杉葉蜂、歐洲松葉蜂、斯氏松葉蜂等，歐洲云杉葉蜂、歐洲松葉蜂、斯氏松葉蜂等，在林區(qū)應(yīng)用在林區(qū)應(yīng)用NPV等可獲得較為持久的防治效果。等可獲得較為持久的防治效果。 在鱗翅目森林害蟲中，利用病毒防治有效的實(shí)在鱗翅目森林害蟲中，利用病毒防治有效的實(shí)例也不少。如舞毒蛾，天幕毛蟲、松毒蛾、松例也不少。如舞毒蛾，天幕毛蟲、松毒蛾、松帶蛾等林木害蟲。帶蛾等林木害蟲。 目前大約已有目前大約已有50余種昆蟲病

41、毒進(jìn)行過大田防治余種昆蟲病毒進(jìn)行過大田防治試驗(yàn)。試驗(yàn)。我國約有我國約有20種昆蟲病毒進(jìn)行過或正在進(jìn)行大田試種昆蟲病毒進(jìn)行過或正在進(jìn)行大田試驗(yàn)。其中研究較多應(yīng)用較廣的如棉鈴蟲驗(yàn)。其中研究較多應(yīng)用較廣的如棉鈴蟲NPV，用該種病毒防治棉鈴蟲，每用該種病毒防治棉鈴蟲，每667m2用感染病毒用感染病毒的老齡死蟲的老齡死蟲230頭頭(核型多角體數(shù)約為核型多角體數(shù)約為0.156l011)對水噴霧，在棉花生長期發(fā)生害蟲時(shí)對水噴霧，在棉花生長期發(fā)生害蟲時(shí)每隔每隔45天噴天噴1次，共噴次，共噴9次，棉花產(chǎn)量比對照次，棉花產(chǎn)量比對照區(qū)顯著增產(chǎn)。區(qū)顯著增產(chǎn)。 美國應(yīng)用棉鈴蟲美國應(yīng)用棉鈴蟲NPV的制劑防治棉花、玉的制劑

42、防治棉花、玉米、高梁、煙草、番茄等作物上的棉鈴蟲和煙米、高梁、煙草、番茄等作物上的棉鈴蟲和煙草夜蛾等害蟲的效果一般相當(dāng)于常用化學(xué)農(nóng)藥。草夜蛾等害蟲的效果一般相當(dāng)于常用化學(xué)農(nóng)藥。加拿大研究菜青蟲的黃絨繭蜂能在寄主種群中傳加拿大研究菜青蟲的黃絨繭蜂能在寄主種群中傳播播GV。 美國研究于甘藍(lán)幼苗移植時(shí)以粉紋夜蛾美國研究于甘藍(lán)幼苗移植時(shí)以粉紋夜蛾NPV污染幼苗，能在整個(gè)生長季節(jié)維持較高病污染幼苗，能在整個(gè)生長季節(jié)維持較高病毒濃度并向周圍傳開，毒濃度并向周圍傳開，84天后未處理區(qū)植株上天后未處理區(qū)植株上幼蟲死亡率竟高達(dá)幼蟲死亡率竟高達(dá)89。 椰犀角金龜子椰犀角金龜子(Oryctes rhinoceros

43、)種群密種群密度不高時(shí)度不高時(shí)(25頭頭hm2)散布獨(dú)角仙桿狀病毒散布獨(dú)角仙桿狀病毒(C亞組亞組)，活動(dòng)的成蟲傳播病毒每月可達(dá)，活動(dòng)的成蟲傳播病毒每月可達(dá)3km，5個(gè)月后該蟲種群中病毒病發(fā)展到流行水平。個(gè)月后該蟲種群中病毒病發(fā)展到流行水平。利用病毒防治害蟲一方面可以起到微生物利用病毒防治害蟲一方面可以起到微生物殺蟲劑的短期防治作用，另一方面使用殺蟲劑的短期防治作用，另一方面使用后有可能使病毒長期存在于農(nóng)林生態(tài)系后有可能使病毒長期存在于農(nóng)林生態(tài)系中，作為一類被引入的生態(tài)因子而起調(diào)中，作為一類被引入的生態(tài)因子而起調(diào)節(jié)害蟲種群密度的作用。節(jié)害蟲種群密度的作用。 常規(guī)方法施用或釋放帶毒昆蟲散布常規(guī)方法

44、施用或釋放帶毒昆蟲散布一定限量的病毒后，病原可在昆蟲種群一定限量的病毒后，病原可在昆蟲種群間自行傳播。毒餌劑和散布帶毒蟲體具間自行傳播。毒餌劑和散布帶毒蟲體具有較高的經(jīng)卵巢傳播的潛力，其他昆蟲有較高的經(jīng)卵巢傳播的潛力，其他昆蟲或寄生物和捕食者有機(jī)械傳播病毒的潛或寄生物和捕食者有機(jī)械傳播病毒的潛能。能。5.2 局限性局限性 昆蟲病毒對害蟲的防治也有其局限性，昆蟲病毒對害蟲的防治也有其局限性，如感染的潛伏期較長，一般從感染到致如感染的潛伏期較長，一般從感染到致死需死需714天或更長時(shí)間，由于?；暂^天或更長時(shí)間，由于?；暂^強(qiáng)，殺蟲譜性較窄。如僅用于短期速效強(qiáng)，殺蟲譜性較窄。如僅用于短期速效性防治，在經(jīng)濟(jì)上和當(dāng)前所獲效果上不性防治，在經(jīng)濟(jì)上和當(dāng)前所獲效果上不如高效低毒的化學(xué)農(nóng)藥，如從害蟲綜合如高效低毒的化學(xué)農(nóng)藥，如從害蟲綜合治理要求考慮，利用病毒防治害蟲具有治理要求考慮，利用病毒防治害蟲具有重要的意義和前途。重要的意義和前途。謝謝!Thank you!