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1、 l 通 過 本 實 驗 學 習 PCR反 應 的 基 本 原 理 與實 驗 技 術 。 l 聚 合 酶 鏈 式 反 應 (polymerase chain reaction,PCR)， 是 一 種 在 體 外 快 速 擴 增特 定 基 因 或 DNA序 列 的 方 法 ， 故 又 稱 為基 因 的 體 外 擴 增 法 。l 在 待 擴 增 的 DNA片 斷 兩 側 和 與 其 兩 側 互 補的 兩 個 寡 核 苷 酸 引 物 ， 經(jīng) 變 性 、 退 火 和延 伸 若 干 個 循 環(huán) 后 ， DNA擴 增 2n倍 。 l 1.變 性 ： 在 加 熱 或 堿 性 條 件 下 可 使 DNA雙 螺

2、 旋的 氫 鍵 斷 裂 ， 形 成 單 鏈 DNA， 稱 之 為 變 性 。l 2.退 火 ： 是 模 板 與 引 物 的 復 性 。 引 物 是 與 模 板某 區(qū) 序 列 互 補 的 一 小 段 DNA片 段 。l 3.延 伸 ： 從 結 合 在 特 定 DNA模 板 上 的 引 物 為 出發(fā) 點 ， 將 四 種 脫 氧 核 苷 酸 以 堿 基 配 對 形 式 按5 3 的 方 向 沿 著 模 板 順 序 合 成 新 的 DNA鏈 。 Parameter ConcentrationTemplate pHdNTPsG elatin PrimersMg2+ oncentrationEnzyme

3、Total volume 10 attomoles(1 106 molecules)8.4（ 10mM Tris-Hcl）200 M(each one) 100 g/ml (optional)0.5 M(each one);(0.11.0 M)0.5mM 10mM 1 unit25100 l 電 泳 儀 PCR儀 移 液 器 l 1、 DNA模 板l 2、 4種 dNTPl 3、 引 物 1、 引 物 2l 4、 Taq酶l 5、 瓊 脂 糖l 6、 DNA相 對 分 子 質(zhì) 量 標 準 物l 7、 吸 頭 、 50ul PCR管 l 10 PCR緩 沖 液 (含 Mg2 )l 4 dNTP

4、(每 種 1mmol)l Tag酶 1U/ull DNA模 板l 引 物 1: 5- G G G G AATTCATG G TG AG CAAG G G C-3l 引 物 2: 5-GACCTG CAG G CATG CAAG CTTG G C-3 l 引 物 溶 液 濃 度 10pmol/ul l 1在 0.5ml RCR管 內(nèi) 配 置 20ul反 應 體 系 ： CK(ul) 1#(ul)模 板 0 1引 物 1 0.4 0.4引 物 2 0.4 0.410 PCR Buffer 2 2Taq酶 0.5 0.5dNTPs 0.4 0.4ddH 2O 14.3 15.3Total 20 20 實 驗 報 告l 要 求 ：l 1、 寫 出 本 實 驗 目 的 、 原 理 ；l 2、 實 驗 器 材 及 實 驗 步 驟 ；l 3、 列 出 實 驗 結 果 示 意 圖 并 分 析 原 因 。 PCR結 果 。 1、 對 照 (無 模 板 )； 2 6、PCR產(chǎn) 物 （ 5ul樣 品 ）