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1、成才之路 生物路漫漫其修遠兮 吾將上下而求索人教版 選修1 DNA和蛋白質技術專題五 課題3血紅蛋白的提取與分離專題五 課 堂 合 作 探 究2思 維 創(chuàng) 新 升 華3知 識 體 系 構 建4課 時 作 業(yè)5課 前 預 習 導 學1 課 前 預 習 導 學 1.掌握提取生物大分子的基本過程和方法。(重點)2理解凝膠色譜法、電泳法等分離生物大分子的基本原理。(重、難點)3嘗試對血液中的血紅蛋白進行提取和分離。 一、凝膠色譜法1概念：也稱做_，是根據(jù)_分離蛋白質的有效方法。2原理當_不同的蛋白質通過凝膠時，相對分子質量_的蛋白質容易進入凝膠內部的通道，路程_，移動速度_，而相對分子質量_的蛋白質無

2、法進入凝膠內部的通道，只能在_移動，路程_，移動速度_，從而使_不同的蛋白質分子得以分離。分配色譜法 相對分子質量大小 相對分子質量 較小 較大 較慢 較大 凝膠外部 短 快 相對分子質量 二、緩沖溶液1作用：在一定范圍內，抵制_的_對溶液pH的影響，維持pH _。2配制：由_種緩沖劑溶解于_中配制而成，通過調節(jié)緩沖劑的_就可以得到不同pH范圍內使用的緩沖液。外界酸和堿相對穩(wěn)定12水使用比例 三、電泳1概念：指_在電場的作用下發(fā)生的_的過程。2原理：在一定的_下，_、_等生物大分子的可解離基團會帶上_或_，在_的作用下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷_的電極移動。帶電粒子遷移pH多肽核酸正電負

3、電電場相反 3作用：電泳利用了待分離樣品中各種分子_的差異及分子本身的_、_的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的_，從而實現(xiàn)樣品中_的分離。4方法：常用的電泳方法有_和_。測定蛋白質分子量時通常使用_。帶電性質大小形狀遷移速度各種分子瓊脂糖凝膠電泳 聚丙烯酰胺凝胺電泳 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 四、實驗操作蛋白質的提取和分離一般分為四步：_、_、_和_。1樣品處理(1)紅細胞的洗滌：目的是_。采用_離心，吸取血漿后加_洗滌，直至上清液中沒有_，表明紅細胞已洗滌干凈。(2)血紅蛋白的釋放：在_和_的作用下，紅細胞破裂，釋放出血紅蛋白。樣品處理 粗分離 純化純度鑒定去除雜蛋白低速短時間生理鹽水黃色蒸餾水甲

4、苯 (3)分離血紅蛋白溶液：把混合液離心后，將試管中的液體用濾紙過濾，除去_，于分液漏斗中靜置片刻后，分離出下層的_。(4)透析：透析袋能使小分子自由進出，而將大分子物質保留在袋內。脂溶性沉淀層紅色透明液體 2凝膠色譜操作(1)凝膠色譜柱的制作：準備材料加工橡皮塞安裝色譜柱。(2)凝膠色譜柱的裝填。(3)樣品的加入和洗脫。其基本過程是調節(jié)緩沖液面加入蛋白質樣品調節(jié)緩沖液面洗脫收集分裝蛋白質。至此，血紅蛋白即可得到粗分離。3純度鑒定：在鑒定的方法中，使用最多的是_。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 五、操作提示1紅細胞的洗滌：_、_與_十分重要。洗滌次數(shù)過少，無法除去_；離心速度_和時間_會使_等一同沉

5、淀，達不到分離效果。2色譜柱填料的處理：商品凝膠使用前需直接放在_中膨脹，可以將加入其中的濕凝膠用_，加速膨脹。3凝膠色譜柱的裝填：在裝填凝膠柱時，不能有_存在。因其能攪亂洗脫液中蛋白質的_，降低分離效果。4蛋白質的分離：如果_，說明色譜柱制作成功。洗滌次數(shù)離心速度離心時間血漿蛋白過高過長白細胞洗脫液沸水浴加熱氣泡洗脫次序紅色區(qū)帶均勻一致地移動 紅細胞破碎后混合液中含有什么成分？紅細胞破碎混合液中不僅含有血紅蛋白，而且還含有細胞破碎物、脂質、甲苯等。 教材P70“旁欄思考題”凝膠實際上是一些微小的多孔球體，小球體內部有許多貫穿的通道。相對分子質量較大的蛋白質分子不能進入凝膠顆粒內部，只能分布在

6、顆粒之間，通過的路程較短，移動速度較快；相對分子質量較小的蛋白質分子比較容易進入凝膠內的通道，通過的路程較長，移動速度較慢。因此，樣品中相對分子質量較大的蛋白質先流出，相對分子質量中等的分子后流出，相對分子質量最小的分子最后流出，從而使各種相對分子質量不同的分子得以分離。 如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會在色譜柱內形成無效的空隙，使本該進入凝膠內部的樣品分子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液的流動次序，從而影響分離的效果。 課 堂 合 作 探 究 (一)依據(jù)蛋白質的特性的差異蛋白質的理化性質(如形狀、大小、電荷性質和多少、溶解度、吸附性質、親和力等)千差萬別，由此可提取和分離各種蛋白質。血紅蛋白提

7、取和分離的方法 (二)蛋白質的分離方法：凝膠色譜法1概念：凝膠色譜法也稱做分配色譜法，是根據(jù)相對分子質量大小分離蛋白質的有效方法。2原理：大多數(shù)凝膠由糖類化合物構成的小球體，內部有許多貫穿的通道，當不同的蛋白質通過凝膠時，相對分子質量較小的蛋白質容易進入凝膠內部的通道，路程較長移動速度較慢；而相對分子量較大的蛋白質無法進入凝膠內部的通道，只能在凝膠外部移動，路程較短，移動速度較快。 (三)緩沖溶液1作用：在一定范圍內，緩沖溶液能夠抵制外界的酸和堿對溶液pH的影響，維持pH基本不變。2配制：通常由12種緩沖劑溶解于水中配制而成。調節(jié)緩沖劑的使用比例就可以制得在不同pH范圍內使用的緩沖液。 (四)

8、電泳1概念：帶電粒子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程。2原理：許多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解離的基團，在一定pH下，這些基團會帶上正電或負電。在電場的作用下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極移動。電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質的差異以及分子本身的大小、形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。 電泳利用了除哪些性質外使樣品中各種分子分離()A帶電性質差異B分子的大小C分子的形狀 D分子的變性溫度解析電泳是指帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程，帶電性質不同、分子的大小和形狀不同都會影響帶電粒子在電場中的遷移速度。答案D導學號 063504

9、12 利用凝膠色譜法，什么樣的蛋白質先洗脫出來()A相對分子質量大的 B溶解度高的C相對分子質量小的 D所帶電荷多的答案A解析凝膠色譜法是根據(jù)相對分子質量的大小分離蛋白質的有效方法。相對分子質量較小的蛋白質能進入凝膠內部通道，路程較長，移動速度較慢；相對分子質量大的蛋白質，路程較短，移動速度較快，首先洗脫出來。導學號 06350413 蛋白質的提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。提取和分離血紅蛋白的實驗操作 (二)凝膠色譜操作的主要步驟 3純度鑒定SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳判斷純化的蛋白質是否達到要求，需要進行蛋白質純度的鑒定。鑒定的方法中，使用最多的是SDS聚丙烯酰胺凝膠

10、電泳。 4結果分析與評價 蛋白質提取和分離分為哪幾步()A樣品處理、凝膠色譜操作、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳B樣品處理、凝膠色譜操作、純化C樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定D樣品處理、純化、粗分離、純度鑒定解析蛋白質的提取和分離分為樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定四步。A中凝膠色譜操作及SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳為實驗操作過程中的技術。答案C導學號 06350414 相對分子質量不同的蛋白質在凝膠中的行進過程，可表示為下圖中哪一個()答案B導學號 06350415 解析本題考查對凝膠色譜法分離蛋白質原理的理解，蛋白質相對分子質量越大，越容易通過凝膠間隙而先被洗脫，蛋白質相對分子質量越小則易進入凝膠

11、內部而后被洗脫。 思 維 創(chuàng) 新 升 華 一、蛋白質分子在凝膠中的運動情況分析特別提示：凝膠色譜的原理是相對分子質量小的蛋白質進入凝膠孔道，路程長，移動速度慢；而相對分子質量大的蛋白質在凝膠外部移動，路程短，移動快，這種現(xiàn)象又稱分子篩效應。相對分子質量大相對分子質量小直徑大小大于凝膠顆粒空隙直徑小于凝膠顆?？障吨睆竭\動方式垂直向下運動無規(guī)則的擴散運動運動速度較快較慢運動路程較短較長洗脫次序先從凝膠柱中洗脫出來后從凝膠柱中洗脫出來 二、樣品處理、分離與純化的目的不同目的紅細胞洗滌去除雜質，如血漿蛋白血紅蛋白釋放使紅細胞破裂，釋放血紅蛋白分離血紅蛋白溶液經(jīng)過離心使血紅蛋白與其他雜質分離開透析除去樣品中相對分子質量較小的雜質純化除去相對分子質量較大的蛋白質 知 識 體 系 構 建 答案較慢較快pH帶電性質凝膠色譜法