《中藥化學(xué) 實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) (全套）》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《中藥化學(xué) 實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) (全套）（91頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、實(shí)驗(yàn)一 大黃中游離蒽醌的提取分離與檢識(shí)（一）目的要求學(xué)習(xí)羥基蒽醌類化合物的提取分離和檢識(shí)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求：1.掌握從大黃中提取和分離游離蒽醌的方法。2.掌握用pH梯度萃取法分離不同酸性的羥基蒽醌類化合物。3.掌握蒽醌類化合物的主要檢識(shí)方法。4.熟悉蒽醌類化合物的色譜檢識(shí)方法。5.了解用柱色譜法分離蒽醌類成分。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)大黃為蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L.、唐古特大黃Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和藥用大黃Rheum officinale Baill.的干燥根及根莖。大黃中含有大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚及其

2、苷，總含量約35。1大黃酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。黃色針狀結(jié)晶（升華法），mp.321322，330分解。能溶于堿水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，幾不溶于水。2大黃素(emodin) 分子式C15H10O5，分子量270.23。橙色針狀結(jié)晶(乙醇)，mp.256257，能升華。易溶于乙醇、堿水，微溶于乙醚、氯仿，幾不溶于水。3蘆薈大黃素(aloe-emodin) 分子式C16H10O5，分子量270.23。橙色針狀結(jié)晶（甲苯），mp.223224。易溶于熱乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黃色；溶于堿液呈紅色；氨水及硫酸中呈緋紅色。4大黃酚(chryso

3、phanol) 分子式C15H10O4，分子量254.23。橙黃色六方形或單斜結(jié)晶（乙醇或苯），mp.196197，能升華。易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，極微溶于石油醚、冷乙醇，幾不溶于水。大黃酚 R1=CH3 R2=H大黃素 R1=CH3 R2=OH大黃酸 R1=COOH R2=H大黃素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3蘆薈大黃素 R1=CH2OH R2=H5大黃素甲醚(physcion) 分子式C16H12O5，分子量284.26。磚紅色單斜針狀結(jié)晶，mp.203207，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。（三）實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)是

4、根據(jù)大黃中的羥基蒽醌苷經(jīng)酸水解成游離羥基蒽醌，而游離羥基蒽醌不溶于水，可溶于氯仿、乙醚等親脂性有機(jī)溶劑的性質(zhì)，用氯仿從水解液中將游離羥基蒽醌提取出來(lái)，再利用各游離羥基蒽醌的酸性不同，采用pH梯度萃取法將其分離。其中大黃酚和大黃素甲醚的酸性十分近似，用pH梯度萃取法難以分離，可利用兩者的極性不同，采用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離。（四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1. 提取與分離見(jiàn)書(shū)。2檢識(shí)（1）堿液試驗(yàn) 分別取各蒽醌化合物結(jié)晶少許，置試管中，加1ml乙醇溶解，加數(shù)滴10氫氧化鈉試劑振搖，觀察顏色變化，羥基蒽醌應(yīng)顯紅色。（2）醋酸鎂試驗(yàn) 分別取各蒽醌化合物結(jié)晶少許，置試管中，加1ml乙醇溶解，加數(shù)滴0.5醋酸鎂乙醇試劑，觀

5、察顏色變化，羥基蒽醌應(yīng)顯橙、紅、紫等顏色。（3）薄層色譜檢識(shí)薄層板：硅膠G-CMC-Na試 樣：自制大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素的氯仿溶液對(duì)照品：上述各成分對(duì)照品乙醇溶液展開(kāi)劑：石油醚（3060）-醋酸乙酯-甲酸（1551）上層溶液顯 色：在可見(jiàn)光下觀察，記錄黃色斑點(diǎn)的位置。然后再用濃氨水熏蒸或噴霧5醋酸鎂甲醇溶液，斑點(diǎn)應(yīng)顯紅色。（五）實(shí)驗(yàn)說(shuō)明及注意事項(xiàng)1大黃中蒽醌類化合物的種類、含量與大黃的品種、采集季節(jié)、炮制方法及貯存時(shí)間均有關(guān)系，實(shí)驗(yàn)用藥材應(yīng)注意。2萃取用pH8緩沖液為檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液 ；pH9.9緩沖液為碳酸氫鈉-碳酸鈉緩沖液。配制好的緩沖液要測(cè)pH值。一般萃取大黃酸用pH78范

6、圍的，萃取大黃素用pH9.511范圍的。3用各緩沖液進(jìn)行萃取時(shí)，采用一次性加入的方法，實(shí)驗(yàn)證明，如將緩沖液分次萃取，分離效果不理想。4本實(shí)驗(yàn)也適應(yīng)于以虎杖為原料的提取，但虎杖中不含大黃酸，故直接由大黃素開(kāi)始分離。5色譜分離大黃酚及大黃素甲醚時(shí)，先用氯仿洗脫至出現(xiàn)黃色色帶時(shí)，改用氯仿醋酸乙酯（82）混合溶劑繼續(xù)洗脫，并更換收集器，每10ml為一份，按順序編號(hào)，直至色譜柱的第一色帶全部洗脫下來(lái)為止。各流分經(jīng)硅膠-CMC-Na板，氯仿醋酸乙酯(82)展開(kāi)，用大黃酚和大黃素甲醚作對(duì)照，合并斑點(diǎn)相同流分，分別濃縮、放置析晶，即可獲得大黃酚及大黃素甲醚。（六）思考題1大黃中5種羥基蒽醌化合物的酸性和極性大

7、小應(yīng)如何排列？為什么？2pH梯度萃取法的原理是什么？適用于哪些中藥成分的分離？3蒽醌類化合物及其苷的薄層色譜用什么作吸附劑、展開(kāi)劑和顯色劑？4蒽醌類與醋酸鎂顯色反應(yīng)的必要條件是什么？其顏色反應(yīng)與羥基所在的位置有何關(guān)系？實(shí)驗(yàn)二 補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的提取分離與檢識(shí)（一）目的要求學(xué)習(xí)香豆素類化合物的提取分離及檢識(shí)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求：1掌握用溶劑法提取香豆素類化合物的操作技術(shù)。2通過(guò)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的分離，熟悉干柱色譜的操作技術(shù)。3掌握香豆素類化合物的檢識(shí)方法。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)補(bǔ)骨脂 為豆科植物補(bǔ)骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果實(shí)，全國(guó)各地多有栽培

8、。含有多種呋喃香豆素類成分，主要含補(bǔ)骨脂內(nèi)酯 （補(bǔ)骨脂素）、異補(bǔ)骨脂內(nèi)酯 （異補(bǔ)骨脂素）和補(bǔ)骨脂次素等。其中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素為抗白癜風(fēng)的主要有效成分，具有光敏性質(zhì)。1.補(bǔ)骨脂素(psoralen) 又稱補(bǔ)骨脂內(nèi)酯，分子式C11H6O3，分子量186.16。無(wú)色針狀結(jié)晶（乙醇），mp.189190，有揮發(fā)性。溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。2.異補(bǔ)骨脂素(isopsoralen) 分子式 C11H6O3，分子量186.16。無(wú)色針狀結(jié)晶，mp.137138，溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶于水、乙醚，難溶于冷石油醚。 補(bǔ)骨脂素 異補(bǔ)骨脂素3.補(bǔ)骨脂乙素(isoba

9、vachalcone) 又稱補(bǔ)骨脂酮、異補(bǔ)骨脂查耳酮。分子式C20H20O4，分子量324.36。黃色片狀結(jié)晶（甲醇-水），mp. 166167。4.補(bǔ)骨脂甲素(coryfolin) 又稱補(bǔ)骨脂黃酮，分子式C20H20O4，分子量324.36。無(wú)色針狀結(jié)晶，mp.191192。 補(bǔ)骨脂乙素 補(bǔ)骨脂甲素（三）實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)根據(jù)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素等在乙醇中溶解度大，利用乙醇從中藥補(bǔ)骨脂中提取補(bǔ)骨脂素及異補(bǔ)骨脂素等，并用活性炭吸附脫色，再依據(jù)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的極性差異，利用氧化鋁干柱色譜予以分離。（四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.提取方法:見(jiàn)書(shū)方法:見(jiàn)書(shū)2.精制見(jiàn)書(shū)3.分離取色譜用中性氧化鋁12g，裝于直徑1

10、.0cm28cm的干柱用色譜柱中。將補(bǔ)骨脂素精制品0.2g溶于少量甲醇，加入0.5g氧化鋁拌勻，60烘干，加樣，以苯-石油醚（41）并每50ml加入15滴丙酮為洗脫劑，展層至柱底，置紫外燈下觀察，用刀片切取兩段藍(lán)色熒光色帶，分別用甲醇回流提取，濾過(guò)，濾液回收溶劑至小體積，靜置析晶，抽濾，分別得到補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素結(jié)晶。4.檢識(shí)（1）異羥肟酸鐵反應(yīng) 取試樣少許于試管中，加入7鹽酸羥胺甲醇溶液23滴，再加10氫氧化鈉甲醇溶液23滴，于水浴上加熱數(shù)分鐘，冷卻后，加鹽酸調(diào)pH34，加1三氯化鐵12滴，觀察溶液顏色。（2）開(kāi)環(huán)閉環(huán)試驗(yàn) 取試樣少許加稀氫氧化鈉溶液12ml，加熱，觀察現(xiàn)象，再加稀鹽酸試劑

11、數(shù)滴，觀察所產(chǎn)生現(xiàn)象。（3）熒光 取試樣少許溶于氯仿中，用毛細(xì)管點(diǎn)于濾紙上，晾干后在紫外燈下觀察熒光。（4）薄層色譜檢識(shí)薄層板：硅膠G-CMC-Na板試 樣：補(bǔ)骨脂素乙醇液異補(bǔ)骨脂素乙醇液對(duì)照品：補(bǔ)骨脂素對(duì)照品乙醇液異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品乙醇液展開(kāi)劑：苯-醋酸乙酯（91） 苯-石油醚（41）每50ml含丙酮15滴顯 色：紫外燈下觀察熒光（五）實(shí)驗(yàn)說(shuō)明及注意事項(xiàng)1提取藥材應(yīng)是未炮制過(guò)的補(bǔ)骨脂種子,其補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素等成分含量較高。2補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，具有內(nèi)酯類成分的通性，可用堿提酸沉法提取，但因補(bǔ)骨脂種子中含有大量油脂和糖類成分，易與堿水發(fā)生皂化反應(yīng)和形成膠狀物，致使難以濾過(guò)，降低收

12、得率，故選用50乙醇提取而不用堿溶酸沉法提取。3由補(bǔ)骨脂種子中提取所得的精制品，為補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的混合物結(jié)晶，兩者含量近于11，但隨藥材品種、質(zhì)量等不同而有差異。在進(jìn)行干柱色譜分離之前，應(yīng)先進(jìn)行薄層色譜檢查，了解兩者含量情況。因兩者皆具有光敏作用，均為有效成分，故臨床應(yīng)用時(shí)，不必將兩者分開(kāi)。（六）思考題1從中藥中提取香豆素類成分還有哪些方法？2異羥肟酸鐵反應(yīng)的機(jī)理是什么？實(shí)驗(yàn)三 陳皮中橙皮苷的提取分離與檢識(shí)（一）目的要求學(xué)習(xí)橙皮苷的提取精制和檢識(shí)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求：1掌握橙皮苷的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和理化性質(zhì)及一般提取方法。2了解橙皮苷的檢識(shí)方法。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)陳皮為蕓香科植物福橘Cit

13、rus tangerina Hort.et Tanaka、朱橘Citrus erythrosa Tanaka的果皮。含揮發(fā)油和黃酮類成分橙皮苷、川陳皮素等。20D橙皮苷(hesperidin) 又稱陳皮苷、橘皮苷。分子式C28H34O15，為細(xì)樹(shù)枝狀針形結(jié)晶，mp.258262， -76（C=2,吡啶）。易溶于稀堿及吡啶，微溶于甲醇及熱冰醋酸，幾乎不溶于丙酮、苯及氯仿，在60溶于二甲基甲酰胺及甲酰胺。橙皮苷（三）實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)陳皮中的主要成分是揮發(fā)油和橙皮苷，先用石油醚溶除揮發(fā)油，再用甲醇提取及用活性炭精制得到橙皮苷。也可利用橙皮苷易溶于稀堿水的性質(zhì)，進(jìn)行堿溶酸沉法提取，用甲酰胺精制得橙

14、皮苷。（四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1提取、精制方法：見(jiàn)書(shū)方法：見(jiàn)書(shū)2檢識(shí)（1）Molish反應(yīng) 取橙皮苷少許置于試管中，加乙醇1ml，在水浴中加熱溶解，加-萘酚乙醇溶液23滴振搖，傾斜試管45，沿管壁徐徐滴加1ml濃硫酸，靜置，觀察二層溶液界面變化，應(yīng)呈現(xiàn)紫紅色環(huán)。（2）鹽酸-鎂粉反應(yīng) 取橙皮苷少許置于試管中，加乙醇2ml，在水浴中加熱溶解，加入鎂粉約50mg振搖后，滴加濃鹽酸34滴，產(chǎn)生劇烈反應(yīng)，溶液逐漸由黃色變?yōu)榧t色。（3）鋯-枸櫞酸反應(yīng) 取橙皮苷少許置于試管中，加甲醇2ml，在水浴中加熱溶解，加2二氯氧鋯甲醇試劑3 4滴，呈鮮黃色。再加2枸櫞酸甲醇試劑34滴，黃色變淺。（4）三氯化鋁反應(yīng) 取橙皮苷少許

15、置于試管中，加甲醇2ml，在水浴中加熱溶解，加1三氯化鋁甲醇試劑23滴，呈鮮黃色。（5）四氫硼鈉反應(yīng) 取橙皮苷少許置于試管中，加2ml甲醇溶解，加入等量的2四氫硼鈉的甲醇液，一分鐘后，再加濃鹽酸或濃硫酸數(shù)滴，生成紫色紫紅色。此反應(yīng)也可在濾紙上進(jìn)行。（6）薄層色譜檢識(shí)薄層板：硅膠G-CMC-Na板試 樣：自制橙皮苷乙醇飽和溶液對(duì)照品：橙皮苷對(duì)照品乙醇飽和溶液展開(kāi)劑：醋酸乙酯-甲醇-水（1001713）顯色劑：噴霧0.5醋酸鎂試劑，在紫外燈下觀察顯天藍(lán)色熒光（五）實(shí)驗(yàn)說(shuō)明及注意事項(xiàng)1精制橙皮苷粗品時(shí)所用活性炭，應(yīng)事先用稀鹽酸處理。2橙皮苷微溶于甲醇，故工業(yè)生產(chǎn)中，以甲醇為溶劑提取時(shí)，應(yīng)加熱提取多次

16、。實(shí)驗(yàn)四 槐花米中蕓香苷的提取及槲皮素的制備與檢識(shí)（一）目的要求學(xué)習(xí)黃酮類化合物的提取、分離和檢識(shí)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求：1通過(guò)蕓香苷提取與精制，掌握堿溶酸沉法提取黃酮類化合物的原理和操作。2掌握黃酮類化合物的主要性質(zhì)及黃酮苷、苷元和糖部分的檢識(shí)方法。3掌握由蕓香苷水解制取槲皮素的方法。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)槐花米為豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾，主要含蕓香苷（蘆?。?，含量高達(dá)1220，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖；槐花亦含蕓香苷，但含量較槐米為少。蕓香苷(rutoside) 分子式C27H30O16，分子量610.51。淡黃色針狀結(jié)晶，mp.177178，難溶于

17、冷水（18000），略溶于熱水（1200），溶于熱甲醇（17）、冷甲醇（1100）、熱乙醇（130）、冷乙醇（1650），難溶于醋酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀堿液中。槲皮素(quercetin) 又稱槲皮黃素，分子式C15H10O7，分子量302.23。黃色結(jié)晶，mp.314（分解）。溶于熱乙醇（123）、冷乙醇（1300），可溶于甲醇、丙酮、醋酸乙酯、冰醋酸、吡啶等溶劑，不溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿中，幾不溶于水。 蕓香苷 R=葡萄糖鼠李糖 槲皮素 R=H（三）實(shí)驗(yàn)原理由槐花米中提取蕓香苷的方法很多，本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)蕓香苷在冷水和熱水中的溶解度差異的特性進(jìn)行提取和

18、精制，或根據(jù)蕓香苷分子中具有酚羥基，顯弱酸性，能與堿成鹽而增大溶解度，以堿水為溶劑煮沸提取，其提取液加酸酸化后則蕓香苷游離析出。（四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1蕓香苷的提取方法：水提取法 見(jiàn)書(shū)方法 ：堿溶酸沉法見(jiàn)書(shū)2蕓香苷的精制見(jiàn)書(shū)4蕓香苷、槲皮素及糖的檢識(shí)取蕓香苷、槲皮素少許，分別用8ml乙醇溶解，制成試樣溶液，按下列方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，比較苷元和苷的反應(yīng)情況。（1）Molish反應(yīng)：取試樣溶液各2ml，分置于兩支試管中，加10-萘酚乙醇溶液1ml，振搖后傾斜試管45，沿管壁滴加1ml濃硫酸，靜置，觀察并記錄兩液面交界處顏色變化。（2）鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取試樣溶液各2ml，分別置于兩支試管中，各加入鎂粉少許，再加入

19、鹽酸數(shù)滴，觀察并記錄顏色變化。（3）醋酸鎂反應(yīng)：取兩張濾紙條，分別滴加試樣溶液后，加1醋酸鎂甲醇溶液2滴，于紫外燈下觀察熒光變化，并記錄現(xiàn)象。（4）三氯化鋁反應(yīng)：取兩張濾紙條，分別滴加試樣溶液后，加1三氯化鋁乙醇溶液2滴，于紫外燈下觀察熒光變化，并記錄現(xiàn)象。（5）鋯-檸檬酸反應(yīng)：取試樣溶液各2ml，分別置于兩支試管中，各加2二氯氧鋯甲醇溶液34滴，觀察顏色，然后加入2檸檬酸甲醇溶液34滴，觀察并記錄顏色變化。（6）紙色譜檢識(shí)支持劑：新華層析濾紙(中速,20CM7CM)試 樣：自制蕓香苷乙醇溶液自制槲皮素乙醇溶液對(duì)照品：蕓香苷對(duì)照品乙醇溶液槲皮素對(duì)照品乙醇溶液展開(kāi)劑：正丁醇-醋酸-水（415上層

20、）或15醋酸溶液顯色劑：1）在可見(jiàn)光下觀察斑點(diǎn)顏色，再在紫外燈下觀察斑點(diǎn)顏色2）噴霧三氯化鋁試劑，置日光下及紫外燈下觀察并記錄斑點(diǎn)的顏色變化。（7）薄層色譜檢識(shí)薄層板：硅膠G-CMC-Na試 樣：自制1蕓香苷乙醇溶液自制1槲皮素乙醇溶液對(duì)照品：1蕓香苷對(duì)照品乙醇溶液1槲皮素對(duì)照品乙醇溶液展開(kāi)劑：氯仿-甲醇-甲酸（1551）顯色劑：噴霧1三氯化鐵和1鐵氰化鉀水溶液，臨用時(shí)等體積混合（8）糖的紙色譜檢識(shí)取糖的供試液做徑向紙色譜，和已知糖液作對(duì)照，可得到與葡萄糖、鼠李糖相同Rf值的斑點(diǎn)。支持劑：新華層析濾紙（圓形）試 樣：糖的供試液對(duì)照品：1葡萄糖對(duì)照品水溶液1鼠李糖對(duì)照品水溶液展開(kāi)劑：正丁醇-醋酸

21、-水（415上層）顯色劑：噴霧苯胺-鄰苯二甲酸試劑，于105加熱10分鐘或紅外燈下加熱1015分鐘，顯棕色或棕紅色斑點(diǎn)。（五）實(shí)驗(yàn)說(shuō)明及注意事項(xiàng)1在提取前應(yīng)將槐花米略搗碎，使蕓香苷易于被熱水溶出。2本實(shí)驗(yàn)直接用沸水由槐花米中提取蕓香苷，收得率穩(wěn)定，且操作簡(jiǎn)便。如用堿溶酸沉法提取，加入石灰乳可以達(dá)到堿性溶解的目的，又可除去槐花7米中所含的大量粘液質(zhì)，但應(yīng)嚴(yán)格控制其堿性pH89，不可超過(guò)pH10。如pH值過(guò)高，加熱提取過(guò)程中蕓香苷可被水解破壞，降低收得率。加酸沉淀時(shí)，控制pH34,不宜過(guò)低，否則蕓香苷可生成yang鹽而溶于水，也降低收得率。3在提取過(guò)程中，加入硼砂的目的是使其與蕓香苷分子中的鄰二酚

22、羥基發(fā)生絡(luò)合，既保護(hù)了鄰二酚羥基不被氧化破壞，又避免了鄰二酚羥基與鈣離子絡(luò)合（蕓香苷的鈣絡(luò)合物不溶于水），使蕓香苷不受損失，提高收得率。（六）思考題1 黃酮類化合物還有哪些提取方法？蕓香苷的提取還可用什么方法？2 酸水解常用什么酸？為什么用硫酸比用鹽酸水解后處理更方便？3 本試驗(yàn)中各種色譜的原理是什么？解釋化合物結(jié)構(gòu)與Rf值的關(guān)系。4 試討論苷類成分的檢識(shí)程序。實(shí)驗(yàn)五 穿心蓮內(nèi)酯的提取分離與檢識(shí)（一）目的要求學(xué)習(xí)中藥中內(nèi)酯類成分的提取分離及檢識(shí)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求：1掌握從穿心蓮中提取、分離穿心蓮內(nèi)酯的操作方法。2學(xué)習(xí)穿心蓮內(nèi)酯亞硫酸氫鈉加成物的制備。3熟悉穿心蓮內(nèi)酯類成分的性質(zhì)和檢識(shí)方法。4了解去

23、除葉綠素的方法。（二）、主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)穿心蓮為爵床科植物穿心蓮Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees的全草。穿心蓮中含有多種二萜類化合物，主要為穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫氧穿心蓮內(nèi)酯等。1穿心蓮內(nèi)酯(andrographolide) 又稱穿心蓮乙素。分子式C20H30O5，分子量350.44。無(wú)色方形或長(zhǎng)方形結(jié)晶，味極苦。mp.230231，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶中，微溶于氯仿、乙醚、難溶于水、石油醚、苯。2新穿心蓮內(nèi)酯(neoandrographolide) 又稱穿心蓮丙素、穿心蓮新苷。分子式C26H40O8，分子量480.58。無(wú)色柱

24、狀結(jié)晶，無(wú)苦味。mp.167168，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶中，微溶于水，較難溶于苯、乙醚、氯仿及石油醚。22.5D3去氧穿心蓮內(nèi)酯(deoxyandrographolide) 又稱穿心蓮甲素。分子式C20H30O4，分子量334.44。無(wú)色片狀（丙酮、乙醇或氯仿）或無(wú)色針狀結(jié)晶（醋酸乙酯），味稍苦。mp.174175， -40（C=1,無(wú)水乙醇）。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶、氯仿，可溶于乙醚、苯中，微溶于水。4脫水穿心蓮內(nèi)酯(dehydroandrographolide) 分子式C20H28O4,分子量332.42。無(wú)色針狀結(jié)晶（30或50乙醇），mp.204。易溶于乙醇、丙酮，可溶于

25、氯仿，微溶于苯，幾不溶于水。穿心蓮內(nèi)酯 去氧穿心蓮內(nèi)酯 新穿心蓮內(nèi)酯 脫水穿心蓮內(nèi)酯（三）實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)是利用穿心蓮內(nèi)酯類成分易溶于甲醇、乙醇、丙酮等溶劑的性質(zhì)，選用乙醇為提取溶劑進(jìn)行提取。穿心蓮中含有大量葉綠素，故用活性炭吸附，除去葉綠素等脂溶性雜質(zhì)。又根據(jù)穿心蓮內(nèi)酯與去氧穿心蓮內(nèi)酯在氯仿中溶解度不同而進(jìn)行分離。也可利用穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯及新穿心蓮內(nèi)酯結(jié)構(gòu)上的差異所表現(xiàn)的極性不同，用氧化鋁柱色譜分離。（四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1 提取方法：略方法：略2 精制 略3 分離 略4穿心蓮內(nèi)酯類成分的檢識(shí)（1）異羥肟酸鐵反應(yīng) 取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶數(shù)毫克，加乙醇1ml溶解，加7鹽酸羥胺甲醇溶液23滴，加10氫

26、氧化鉀甲醇溶液12滴使呈堿性，于水浴上加熱2分鐘，放冷后，加稀鹽酸使呈酸性，加1三氯化鐵溶液12滴，混勻，呈紫紅色。（2）Legal反應(yīng) 取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶少許，加乙醇1ml溶解，加0.3亞硝酰鐵氰化鈉溶液24滴，加10氫氧化鈉溶液12滴，呈紫色。（3）Kedde反應(yīng) 取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶少許，加乙醇1ml溶解，加堿性3,5-二硝基苯甲酸試劑2滴，呈紫色。（4）穿心蓮內(nèi)酯類成分的薄層色譜檢識(shí)薄層板：硅膠G-CMC-Na試 樣：自制穿心蓮內(nèi)酯乙醇溶液對(duì)照品：穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品乙醇溶液展開(kāi)劑：氯仿-甲醇（91）氯仿-正丁醇-甲醇（212）顯色劑：噴霧Kedde試劑，加熱顯色（五）實(shí)驗(yàn)說(shuō)明及注意事項(xiàng)1穿心蓮

27、內(nèi)酯類化合物為二萜類內(nèi)酯，性質(zhì)極不穩(wěn)定，易氧化、聚合而樹(shù)脂化。因此提取所用的穿心蓮應(yīng)是當(dāng)年產(chǎn)的新藥材，并且要未受潮變質(zhì)的莖葉部分，否則內(nèi)酯含量明顯下降至極低，難以提取得到。2提取時(shí)，如用熱乙醇加熱回流提取穿心蓮總內(nèi)酯，能同時(shí)提出大量穿心蓮中的葉綠素、樹(shù)脂以及無(wú)機(jī)鹽等雜質(zhì)。使析晶和精制較為困難，因此本實(shí)驗(yàn)用冷浸法和超聲波振蕩法提取。3以超聲波振蕩法提取省時(shí)，濃縮析晶時(shí)脂溶性雜質(zhì)少，易得到黃色結(jié)晶，得率高。4穿心蓮內(nèi)酯的析晶宜在含乙醇量稍高的情況下進(jìn)行，此時(shí)晶形與結(jié)晶的純度都較好。當(dāng)溶液的含水量較高，或粘稠度太大時(shí)，往往不易析出結(jié)晶。（六）思考與練習(xí)1葉綠素除用活性炭吸附法去除外，還可采用哪些方法

28、去除？2穿心蓮總內(nèi)酯的分離可采用哪些方法？試比較各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。3根據(jù)穿心蓮內(nèi)酯類成分的結(jié)構(gòu)，試判斷其極性的強(qiáng)弱，在進(jìn)行吸附薄層色譜時(shí)其Rf值大小如何？4Legal反應(yīng)和Kedde反應(yīng)的機(jī)理是什么？什么樣的結(jié)構(gòu)才有陽(yáng)性反應(yīng)？實(shí)驗(yàn)六 八角茴香油的提取分離與檢識(shí)（一）目的要求學(xué)習(xí)揮發(fā)油的提取和各類組成成分的檢識(shí)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求：1掌握揮發(fā)油的水蒸氣蒸餾提取法。2學(xué)習(xí)揮發(fā)油的一般檢識(shí)及揮發(fā)油中固體成分的分離。3掌握揮發(fā)油中化學(xué)成分的薄層點(diǎn)滴定性檢識(shí)。4了解揮發(fā)油單向二次薄層色譜檢識(shí)。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)八角茴香為木蘭科植物八角茴香Illicium verum Hook.f.的干燥成熟果實(shí)。

29、分布于福建、廣東、廣西、貴州、云南等省區(qū)。含揮發(fā)油49，一般約5（果皮中較多）、脂肪油約22（主要存在于種子中）及蛋白質(zhì)、樹(shù)膠、樹(shù)脂等。揮發(fā)油中主要成分是茴香醚，約為總揮發(fā)油的8090，冷時(shí)常自油中析出，故稱茴香腦。此外，尚含莽草酸及少量甲基胡椒酚、茴香醛、茴香酸等。 茴香醚（腦） 甲基胡椒酚 茴香醛 莽草酸 茴香酸1茴香腦(anethole) 又稱大茴香醚、茴香烯、茴香醚。分子式C10H12O，分子量148.21。為白色結(jié)晶，mp.21.4，bp.235。與乙醚、氯仿混溶，溶于苯、醋酸乙酯、丙酮、二硫化碳及石油醚，幾不溶于水。2莽草酸(shikimic acid) 又稱毒八角酸。分子式C7H

30、10O5,分子量174.15。無(wú)色針狀結(jié)晶（甲醇醋酸乙酯），mp.190191。在100ml水中可溶解18g，100ml無(wú)水乙醇中可溶解2.5g，幾乎不溶于氯仿、苯、石油醚。3甲基胡椒酚(methylchavicol) 分子式C10H12O，為無(wú)色液體，bp.215216。4茴香醛 (anisaldehyde) 分子式C8H8O2，有兩種狀態(tài)：棱晶，mp.36.3，bp.236；液體，mp.0，bp.248。5.茴香酸 (anisic acid) 分子式C8H8O3，為針狀結(jié)晶，mp.184，bp.275280。（三）實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)是水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油的通法。揮發(fā)油的組成成分較復(fù)雜，常含有

31、烷烴、烯烴、醇、酚、醛、酮、酸、醚等官能團(tuán)。因此可以用一些檢出試劑在薄層板上進(jìn)行點(diǎn)滴試驗(yàn)，從而了解組成揮發(fā)油的成分類型。揮發(fā)油中各類成分的極性互不相同，一般不含氧的烴類和萜類化合物極性較小，在薄層色譜板上可被石油醚較好的展開(kāi)；而含氧的烴類和萜類化合物極性較大，不易被石油醚展開(kāi)，但可被石油醚與醋酸乙酯的混合溶劑較好的展開(kāi)。為了使揮發(fā)油中各成分能在一塊薄層色譜板上進(jìn)行分離，常采用單向二次色譜法展開(kāi)。（四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1茴香腦的提取分離取八角茴香50g，搗碎，置圓底燒瓶中，加適量水浸泡濕潤(rùn)，按一般水蒸氣蒸餾法進(jìn)行蒸餾提取。也可將搗碎的八角茴香置于揮發(fā)油測(cè)定器的燒瓶中，加蒸餾水500ml與數(shù)粒玻璃珠，連接

32、揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測(cè)定器的刻度部分，并使溢流入燒瓶時(shí)為止。緩緩加熱至沸，至測(cè)定器中油量不再增加，停止加熱，放冷，分取油層（見(jiàn)圖）。實(shí)圖-1 揮發(fā)油測(cè)定器將所得的八角茴香油置冰箱中冷卻1小時(shí)，即有白色結(jié)晶析出，趁冷濾過(guò)，用濾紙壓干。結(jié)晶為茴香腦，濾液為析出茴香腦后的八角茴香油。2檢識(shí)（1）油斑試驗(yàn) 取八角茴香油適量，滴于濾紙片上，常溫下（或加熱烘烤），觀察油斑是否消失。（2）薄層色譜板點(diǎn)滴反應(yīng) 取硅膠G薄層色譜板1塊，用鉛筆按表畫(huà)線。將揮發(fā)油試樣用510倍量乙醇稀釋后，用毛細(xì)管分別滴加于每排小方格中，再將各種檢識(shí)試劑用滴管分別滴于各揮發(fā)油試樣斑點(diǎn)上，觀察顏色變

33、化。初步推測(cè)每種揮發(fā)油中可能含有化學(xué)成分的類型。實(shí)-表1 揮發(fā)油薄層板點(diǎn)滴反應(yīng) 試劑試樣試劑1三氯化鐵試劑22,4-二硝基苯肼試劑3堿性高錳酸鉀試劑4香草醛-濃硫酸試劑50.05溴酚藍(lán)試劑6硝酸鈰銨試劑1 2 3 4 5 6八角茴香油檸檬油丁香油薄荷油樟腦油桉葉油松節(jié)油空白對(duì)照（3）揮發(fā)油薄層色譜單向二次展開(kāi)檢識(shí) 取硅膠G-CMC-Na薄層板（6cm15cm）一塊，在距底邊1.5cm及8cm處分別用鉛筆畫(huà)起始線和中線。將八角茴香油溶于丙酮，用毛細(xì)管點(diǎn)于起始線上呈一長(zhǎng)條形，先用石油醚（3060）-醋酸乙酯（8515）為展開(kāi)劑展開(kāi)至薄層板中線處取出，揮去展開(kāi)劑，再放入石油醚（3060）中展開(kāi)至接近

34、薄層板頂端時(shí)取出，揮去展開(kāi)劑后，分別用下列幾種顯色劑噴霧顯色。1香草醛-硫酸試劑：可與揮發(fā)油產(chǎn)生紫色、紅色等。熒光素-溴試劑：如產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)，表明含有不飽和化合物。2,4-二硝基苯肼試劑：如產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)，表明含有醛或酮類化合物。0.05溴甲酚綠乙醇試劑：如產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)，表明含有酸性化合物。觀察斑點(diǎn)的數(shù)量、位置及顏色，推測(cè)每種揮發(fā)油中可能含有化學(xué)成分的種類及數(shù)量。（五）實(shí)驗(yàn)說(shuō)明及注意事項(xiàng)1通過(guò)觀察餾出液的混濁程度來(lái)判斷揮發(fā)油是否提取完全。最初的餾出液中含油量較多，明顯混濁，隨著餾出液中油量的減少，混濁度也隨著降低，至餾出液變?yōu)槌吻迳踔翢o(wú)揮發(fā)油氣味時(shí)，停止蒸餾。2提取完畢，須放冷，待油水完全分層后

35、，再將油層放出，盡量不帶出水分。3進(jìn)行單向二次展開(kāi)時(shí)，先用極性較大的展開(kāi)劑展開(kāi)至中線，然后再用極性較小的展開(kāi)劑展開(kāi)。在第一次展開(kāi)后，應(yīng)將展開(kāi)劑完全揮干，再進(jìn)行第二次展開(kāi)，否則將影響第二次展開(kāi)劑的極性，從而影響分離效果。4揮發(fā)油易揮發(fā)逸失，因此進(jìn)行層析檢識(shí)時(shí)，操作應(yīng)迅速及時(shí)，不宜久放。5噴灑香草醛-濃硫酸顯色劑時(shí)，應(yīng)于通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行；用溴甲酚綠試劑顯色時(shí)，應(yīng)避免在酸性條件下進(jìn)行。（六）思考題1從八角茴香中提取分離茴香腦的原理是什么？2利用點(diǎn)滴反應(yīng)檢識(shí)揮發(fā)油的組成優(yōu)點(diǎn)是什么？3單向二次展開(kāi)薄層色譜法檢識(shí)揮發(fā)油中各成分時(shí)，為什么第一次展開(kāi)所用的展開(kāi)劑極性最好大于第二次展開(kāi)所用的展開(kāi)劑的極性？單向二次展

36、開(kāi)薄層色譜法有什么優(yōu)點(diǎn)？ 實(shí)驗(yàn)七 丁香中揮發(fā)油的提取分離與檢識(shí)（一）目的要求1掌握揮發(fā)油的一般化學(xué)檢識(shí)及薄層色譜檢識(shí)方法。2熟悉揮發(fā)油中酸性成分的分離方法。3學(xué)會(huì)應(yīng)用揮發(fā)油含量測(cè)定器提取藥材中揮發(fā)油及含量測(cè)定的操作方法。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)丁香 別名：公丁香（花蕾）、母丁香（果實(shí)）。為桃金娘科植物丁香Eugenia caryophyllata Thunb.的干燥花蕾及果實(shí)。原產(chǎn)于非洲摩洛哥，現(xiàn)我國(guó)廣東亦有種植。丁香花蕾含揮發(fā)油（即丁香油）1420，油中主要成分丁香酚，約7895，乙酰丁香酚約3及少量的丁香烯、甲基正戊酮、甲基正庚酮、香莢蘭醛等。另尚含齊墩果酸、鞣質(zhì)、脂肪油及蠟。果實(shí)含

37、丁香油29。丁香酚(eugenol) 分子式C10H12O2，分子量164.20。無(wú)色或蒼黃色液體，bp.225。幾不溶于水，與乙醇、乙醚、氯仿可混溶。 丁香酚（三）實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)用水蒸氣蒸餾法提取丁香揮發(fā)油。利用丁香酚為苯丙素類衍生物，具有酚羥基，遇到氫氧化鈉水溶液即轉(zhuǎn)為鈉鹽而溶解，酸化時(shí)又可游離的性質(zhì)將丁香酚從揮發(fā)油中分離出來(lái)。并利用可與三氯化鐵試劑發(fā)生反應(yīng)的性質(zhì)進(jìn)行檢識(shí)，也可進(jìn)行薄層色譜檢識(shí)。（四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1丁香油的提取 取丁香50g，搗碎，置于燒瓶中，加適量水浸泡濕潤(rùn)，按一般水蒸氣蒸餾法進(jìn)行蒸餾提取。也可將搗碎的丁香置于揮發(fā)油測(cè)定器的燒瓶中，加蒸餾水300ml與數(shù)粒玻璃珠，連接揮發(fā)油測(cè)

38、定器。自測(cè)定器上端加水使充滿刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止，精確加入1ml二甲苯，然后連接回流冷凝管。加熱蒸餾30分鐘后，停止加熱，放置15分鐘以上，讀取測(cè)定器中二甲苯油層容積，減去開(kāi)始蒸餾前加入二甲苯的量，即為揮發(fā)油的量，再計(jì)算出丁香中揮發(fā)油的含量。2丁香酚的分離 將所得的丁香油置于分液漏斗中，加10氫氧化鈉溶液80ml提取，并加150ml蒸餾水稀釋，分取下層水溶液，用10鹽酸酸化使丁香酚呈油狀液體，分取油層，用無(wú)水硫酸鈉脫水干燥，得純品丁香酚。3檢識(shí) 取少許丁香酚置于試管中，加1ml乙醇溶解，加23滴三氯化鐵試劑，顯藍(lán)色。4薄層色譜檢識(shí) 將提取得到的丁香油用乙醚配制成每1ml含0.02ml丁

39、香油的供試液。另取丁香酚對(duì)照品，加乙醚制成每1ml含20微升的對(duì)照品溶液，吸取上述兩種溶液各5微升，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層色譜板上，以石油醚（6090）醋酸乙酯（91）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴灑5香草醛硫酸溶液，于105加熱烘干。在供試品色譜與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。（五）實(shí)驗(yàn)說(shuō)明及注意事項(xiàng)1采用揮發(fā)油含量測(cè)定器提取揮發(fā)油，可以初步了解該藥材中揮發(fā)油的含量，但所用的藥材量應(yīng)使蒸出的揮發(fā)油量不少于0.5ml為宜。2揮發(fā)油含量測(cè)定裝置一般分為兩種，一種適用于相對(duì)密度小于1.0的揮發(fā)油測(cè)定。另一種適用于測(cè)定相對(duì)密度大于1.0的揮發(fā)油。藥典規(guī)定，測(cè)定相對(duì)密度大于1.0的揮發(fā)油，

40、也在相對(duì)密度小于1.0的測(cè)定器中進(jìn)行，其作法是在加熱前，預(yù)先加入1ml二甲苯于測(cè)定器內(nèi)，然后進(jìn)行水蒸氣蒸餾，使蒸出的相對(duì)密度大于1.0的揮發(fā)油溶于二甲苯中。由于二甲苯的相對(duì)密度為0.8969，一般能使揮發(fā)油與二甲苯的混合溶液浮于水面。由測(cè)定器刻度部分讀取油層的量時(shí)，扣除加入二甲苯的體積即為揮發(fā)油的量。3用揮發(fā)油測(cè)定器提取揮發(fā)油，以測(cè)定器刻度管中的油量不再增加作為判斷是否提取完全的標(biāo)準(zhǔn)。（六）思考題1從丁香中提取分離丁香酚的原理是什么？2除可利用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油外，還可采用什么方法提取揮發(fā)油？原理是什么？實(shí)驗(yàn)八 甾體皂苷元的提取分離與檢識(shí)（一）目的要求學(xué)習(xí)從藥材中提取、精制和檢識(shí)甾體皂苷元

41、，通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求：1掌握用酸水解，有機(jī)溶劑提取和精制皂苷元的方法。2熟悉皂苷及皂苷元的性質(zhì)和檢識(shí)方法。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)甾體皂苷主要存在于百合科、薯蕷科、龍舌蘭科等植物中。某些甾體皂苷元如薯蕷皂苷元、替告皂苷元及?？稍碥赵仁侵扑幑I(yè)中合成甾體激素類藥物及甾體避孕藥的重要原料。穿山龍為薯蕷科植物穿龍薯蕷Dioscorea nipponica Mak.的干燥根莖。具有舒筋活血、消食利水、祛痰截瘧的功效。主治風(fēng)寒濕痹、慢性氣管炎、消化不良、勞損扭傷、瘧疾、癰腫。常被作為提取薯蕷皂苷元的原料，穿山龍總皂苷水解可得1.52.6薯蕷皂苷元。1薯蕷皂苷(dioscin) 分子式C45H72O16

42、，分子量869.08，針狀結(jié)晶，mp.275277（分解），可溶于甲醇、乙醇、醋酸，微溶于丙酮、戊醇，難溶于石油醚、苯，不溶于水。 薯蕷皂苷 2薯蕷皂苷元(diosgenin) 又稱薯蕷皂素,分子式C27H42O3，分子量414.61。為白色結(jié)晶性粉末（乙醇），mp.206208，可溶于常用的有機(jī)溶劑及醋酸中，不溶于水。（三）實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)藥材中的薯蕷皂苷，經(jīng)酸加熱水解可產(chǎn)生薯蕷皂苷元和糖。因甾體皂苷元不溶于水，可溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)，用石油醚連續(xù)回流提取總皂苷元，再用活性炭吸附脫色精制，得到精制薯蕷皂苷元。（四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1薯蕷皂苷元的提取、精制略2薯蕷皂苷與皂苷元的檢識(shí)（1）泡沫試驗(yàn)：取

43、穿山龍的水浸液2ml，置于小試管中，用力振搖1分鐘，應(yīng)產(chǎn)生多量泡沫，放置10分鐘，泡沫量應(yīng)無(wú)顯著變化。（2）溶血試驗(yàn)：取清潔試管二支，一支加入穿山龍的水浸液0.5ml，另一支加入蒸餾水0.5ml作對(duì)照，然后各加入0.8氯化鈉水溶液0.5ml，搖勻，再向每支試管中加入紅細(xì)胞懸浮液1ml，充分搖勻，靜置，觀察溶血現(xiàn)象。如試管中溶液為透明的鮮紅色，管底無(wú)紅色沉淀物為全部溶血；如試管中溶液透明但無(wú)色，管底沉著大量紅細(xì)胞，振搖立即發(fā)生混濁為不溶血。（3）醋酐-濃硫酸反應(yīng)：取薯蕷皂苷元結(jié)晶少許，置白瓷板上，加醋酐數(shù)滴溶解后，加濃硫酸1滴，觀察顏色變化。（4）三氯醋酸反應(yīng)：取薯蕷皂苷元結(jié)晶少許，置于干燥試管

44、中，加等量固體三氯醋酸，于6070恒溫水浴中加熱數(shù)分鐘后，觀察顏色變化。（5）磷鉬酸試驗(yàn)：取薯蕷皂苷元結(jié)晶少許，溶于乙醇中，用毛細(xì)管點(diǎn)于濾紙片或硅膠薄層板上，滴加磷鉬酸試劑于斑點(diǎn)上，110加熱，觀察顏色變化，并與空白試劑作對(duì)照。（6）薄層色譜檢識(shí)薄層板：硅膠G-CMC-Na板試 樣：薯蕷皂苷元精制品乙醇溶液對(duì)照品：薯蕷皂苷元對(duì)照品乙醇溶液展開(kāi)劑：氯仿-丙酮（937）顯 色：噴5磷鉬酸乙醇溶液，110加熱10分鐘顯色。（五）實(shí)驗(yàn)說(shuō)明及注意事項(xiàng)1穿山龍經(jīng)酸水解后應(yīng)充分洗滌呈中性，以免烘干時(shí)被碳化。2在干燥水解后的原料時(shí)，應(yīng)注意經(jīng)常翻動(dòng)，以縮短干燥時(shí)間。3石油醚極易揮發(fā)和燃燒，必須用水浴加熱且水浴溫

45、度不宜過(guò)高，以能使石油醚微沸即可，并應(yīng)加大冷凝水流速，以便冷凝完全。4本實(shí)驗(yàn)也可用石蒜科龍舌蘭屬植物劍麻Agaue sisalana Perrine為原料提取甾體皂苷元，此植物南方各省有種植，將劍麻葉片刮去纖維，殘?jiān)鼔赫ト≈?，將汁液自然發(fā)酵2周（酶水解得其次生苷），布袋濾過(guò)收集沉淀，曬干，以干渣為原料，用硫酸水解，再用石油醚提取得甾體皂苷元。（六）思考題1從植物中提取甾體皂苷元可用什么方法？要注意什么問(wèn)題？2請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)從其他含甾體皂苷的藥材中提取分離皂苷元的方法，并說(shuō)明原理。實(shí)驗(yàn)九 防己中粉防己堿的提取分離與檢識(shí)（一）目的要求學(xué)習(xí)生物堿類成分的一般提取分離法，通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求：1掌握生物堿的溶劑提取法

46、和粉防己堿與防己諾林堿的分離方法。2熟悉生物堿的一般理化性質(zhì)。3熟悉粉防己堿和防己諾林堿的檢識(shí)方法。4掌握連續(xù)回流法（索氏提取器）、萃取法、結(jié)晶法等的基本操作過(guò)程及注意事項(xiàng)。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)防己為防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore的干燥根?？偵飰A含量約為1.52.3，主要為粉防己堿和防己諾林堿。1粉防己堿(tetrandrine) 又稱粉防己甲素，分子式C38H42N2O6，在防己中的含量約為1，為無(wú)色針狀結(jié)晶（乙醚），mp.217218。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，溶于乙醚、苯等有機(jī)溶劑，幾乎不溶于水和石油醚。 粉防己堿 R=CH3防己諾

47、林堿 R=H2防己諾林堿(fangchinoline) 又稱粉防己乙素，分子式C37H40N2O6，在防己中的含量約為0.5，六面體粒狀結(jié)晶（丙酮），mp.237238。溶解度與粉防己堿相似，但因較粉防己堿多一個(gè)酚羥基，故極性較粉防己堿稍大，因此在冷苯中的溶解度小于粉防己堿，可利用此性質(zhì)相互分離。（三）實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)粉防己堿和防己諾林堿游離時(shí)難溶于水，易溶于氯仿，成鹽后易溶于水，難溶于氯仿的性質(zhì)提取得到總生物堿。再利用兩者在冷苯中的溶解度不同，使之相互分離。（四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1防己總生物堿的提取 略2防己總生物堿的精制 略3粉防己堿和防己諾林堿的分離 略4防己生物堿的檢識(shí)（1）生物堿沉淀反應(yīng)

48、 取粉防己堿的鹽酸水溶液8 ml分置于4支試管中，分別滴加下列試劑23滴，觀察并記錄有無(wú)沉淀產(chǎn)生及顏色變化。碘化鉍鉀試劑 碘化汞鉀試劑 碘碘化鉀試劑 硅鎢酸試劑（2）薄層色譜檢識(shí)薄層板：硅膠G-CMC-Na板試 樣：自制粉防己堿乙醇溶液 自制防己諾林堿乙醇溶液對(duì)照品：粉防己堿標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液 防己諾林堿標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液展開(kāi)劑：氯仿-丙酮-甲醇（611）氨氣飽和顯色劑：噴霧改良碘化鉍鉀試劑（五）實(shí)驗(yàn)說(shuō)明及注意事項(xiàng)1提取總生物堿時(shí)，回收乙醇至稀浸膏狀即可，不宜過(guò)干，否則當(dāng)加入1鹽酸水溶液后，易結(jié)成膠狀團(tuán)塊，影響提取效果。2兩相溶劑萃取時(shí)，應(yīng)注意不可用力振搖，應(yīng)將分液漏斗輕輕旋轉(zhuǎn)搖動(dòng)，以免產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，

49、影響分層，但萃取振搖的時(shí)間需適當(dāng)延長(zhǎng)。且不可因怕產(chǎn)生乳化現(xiàn)象而不敢振搖或?yàn)轭A(yù)防乳化現(xiàn)象產(chǎn)生而減少振搖的程度和時(shí)間，從而造成萃取分離不完全。要力求萃取完全，提盡生物堿，防止生物堿丟失過(guò)多而影響收得率。倘若發(fā)生嚴(yán)重乳化現(xiàn)象難以分層時(shí)，可用以下方法解決：將難以分層的乳化液置于三角燒瓶中，取定性濾紙少許揉成蓬松的團(tuán)塊，放入乳化液中，用玻璃棒攪拌片刻后，乳化液中的粘稠物質(zhì)被吸附在濾紙團(tuán)的周圍，從而削弱和破壞了乳化液的穩(wěn)定性，克服了乳化現(xiàn)象，因而得到澄清溶液。然后濾過(guò)，必要時(shí)可再加入適量溶劑洗滌濾紙團(tuán)，濾過(guò)，合并濾液即可。3檢查生物堿是否萃取完全的方法，通常采用薄層色譜、紙上斑點(diǎn)試驗(yàn)或生物堿沉淀反應(yīng)。取最

50、后一次氯仿萃取液數(shù)滴，水浴上蒸去溶劑，殘留物加5鹽酸溶液0.5ml溶解后，傾入試管中，加碘化鉍鉀試劑12滴，如無(wú)沉淀或無(wú)明顯混濁，則表示生物堿已提取完全或基本被提取完全，否則應(yīng)繼續(xù)萃取。也可取最后一次氯仿萃取液1滴，滴于一薄層板或?yàn)V紙片上，干燥后，噴灑改良碘化鉍鉀試劑，觀察有無(wú)紅棕色斑點(diǎn)出現(xiàn)，若無(wú)紅棕色斑點(diǎn)，表示已萃取完全。（六）思考題1粉防己堿、防己諾林堿在結(jié)構(gòu)與性質(zhì)上有何異同點(diǎn)？實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)怎樣利用它們的共性及個(gè)性進(jìn)行提取及分離？請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)方案。2分離水溶性與脂溶性生物堿的常用方法有哪些？3萃取過(guò)程中怎樣防止和消除乳化？實(shí)驗(yàn)十 黃連中鹽酸小檗堿的提取分離與檢識(shí)（一）目的要求學(xué)習(xí)提取精制和檢識(shí)

51、黃連中的小檗堿，通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求：1掌握小檗堿的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和理化性質(zhì)。2熟悉浸漬法、鹽析法、結(jié)晶法和薄層色譜法的基本操作過(guò)程及注意事項(xiàng)。3了解鹽酸小檗堿的檢識(shí)方法。（二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)黃連為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch.、三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao、峨嵋野連Coptis omeiensis(Chen)C.Y.Cheng或云連Coptis teeta Wall.的根莖。黃連的根狀莖含多種生物堿，主要為小檗堿（黃連素），約58，其次為黃連堿、甲基黃連堿、掌葉防己堿、藥根堿、木蘭堿等。葉含小檗堿1.49。小檗堿

52、(berberine)：分子式(C20H18NO4)，分子量336.37。系季銨生物堿。游離小檗堿為黃色針狀結(jié)晶（乙醚），mp.145，能緩緩溶于冷水（120），可溶于冷乙醇（1100），易溶于熱水或熱乙醇，難溶于丙酮、氯仿、苯，幾乎不溶于石油醚。鹽酸小檗堿(C20H17NO4HCl2H2O)，為黃色結(jié)晶，微溶于冷水（1500），易溶于沸水，幾乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。硫酸小檗堿( (C20H18NO4)2SO43H2O)，溶于水（130），溶于乙醇。重硫酸小檗堿(C20H18NO4HSO4)為黃色結(jié)晶或粉末，溶于水（1150），微溶于乙醚。 小檗堿 木蘭堿（三）實(shí)驗(yàn)原理根據(jù)小檗堿的鹽酸鹽在

53、水中溶解度小，而小檗堿的硫酸鹽水中溶解度較大。因此，從植物原料中提取小檗堿時(shí)常用稀硫酸水溶液浸泡或滲漉，然后向提取液中加入10的食鹽，在鹽析的同時(shí)，也提供了氯離子，使其硫酸鹽轉(zhuǎn)變?yōu)槁然￠迚A（即鹽酸小檗堿）而析出。（四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1鹽酸小檗堿的提取、精制 略2鹽酸小檗堿的檢識(shí)（1）濃硝酸或漂白粉試驗(yàn)：取鹽酸小檗堿少許，加4ml稀硫酸溶解，分置于兩支試管中。一支試管滴加濃硝酸數(shù)滴，即顯櫻紅色。另一支試管加少許漂白粉，也立即顯櫻紅色。（2）丙酮試驗(yàn)：取鹽酸小檗堿約50mg，加蒸餾水3ml緩緩加熱溶解后，加氫氧化鈉試劑2滴，顯橙色。溶液放冷后，加丙酮4滴振搖，即發(fā)生混濁。放置后析出黃色丙酮小檗堿沉淀。

54、（3）沒(méi)食子酸試驗(yàn)：取鹽酸小檗堿約20mg，置白瓷皿中，加硫酸1ml溶解后，加5沒(méi)食子酸的乙醇溶液5滴，置水浴上加熱，即顯翠綠色。（4）薄層色譜檢識(shí)薄層板：中性氧化鋁（軟板）試 樣：自制鹽酸小檗堿乙醇溶液對(duì)照品：鹽酸小檗堿對(duì)照品乙醇溶液展開(kāi)劑：氯仿甲醇（91）顯 色：自然光下觀察黃色斑點(diǎn)或紫外燈下觀察熒光（5）紙色譜檢識(shí)支持劑：新華層析濾紙（中速、20cm7cm）試 樣：自制鹽酸小檗堿乙醇溶液對(duì)照品：鹽酸小檗堿對(duì)照品乙醇溶液展開(kāi)劑：正丁醇-醋酸-水（411）顯 色：紫外燈下觀察熒光（五）實(shí)驗(yàn)說(shuō)明及注意事項(xiàng)1浸泡黃連粗粉的硫酸水溶液，一般為0.20.3為宜。若硫酸水溶液濃度過(guò)高，小檗堿可成為重硫

55、酸小檗堿，其溶解度（1150）明顯較硫酸小檗堿（130）小，從而影響提取效果。硫酸水溶液浸出效果與浸漬時(shí)間有關(guān)，有報(bào)道，浸漬12小時(shí)約可浸出小檗堿80，浸漬24小時(shí)，可浸出92。常規(guī)提取應(yīng)浸漬多次，使小檗堿提取完全，本實(shí)驗(yàn)中只收集第一次浸出液。2進(jìn)行鹽析時(shí)，加入氯化鈉的量，以提取液量的10（g/v）計(jì)算，即可達(dá)到析出鹽酸小檗堿的目的。氯化鈉的用量不可過(guò)多，否則溶液的相對(duì)密度增大，造成析出的鹽酸小檗堿結(jié)晶呈懸浮狀態(tài)難以下沉。鹽析用的氯化鈉用市售的精制食鹽，因粗制食鹽混有較多泥沙等雜質(zhì)，影響產(chǎn)品質(zhì)量。3在精制鹽酸小檗堿過(guò)程中，因鹽酸小檗堿放冷極易析出結(jié)晶，所以加熱煮沸后，應(yīng)迅速抽濾或保溫濾過(guò)，防止

56、溶液在濾過(guò)過(guò)程中冷卻，析出鹽酸小檗堿結(jié)晶阻塞濾材，造成濾過(guò)困難，減低提取率。4本實(shí)驗(yàn)流程也適用于以三棵針、黃柏為原料提取小檗堿，但因其小檗堿含量較低，應(yīng)加大藥材量，以150g以上為宜。（六）思考題1怎樣從黃連中提取分離鹽酸小檗堿？原理是什么？2試述小檗堿的檢識(shí)方法。3用薄層色譜法檢識(shí)小檗堿時(shí)，為什么常選用氧化鋁為吸附劑？如果選用硅膠作吸附劑，怎樣操作才能達(dá)到較準(zhǔn)確的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)十一 應(yīng)用薄層色譜法檢識(shí)中藥制劑（一）目的要求學(xué)習(xí)中藥制劑的鑒別方法，通過(guò)實(shí)驗(yàn)要求：1掌握薄層色譜法的操作技術(shù)及分離原理。2掌握中藥制劑鑒別的一般程序及定性檢識(shí)的原理。3熟悉檢識(shí)其所含化學(xué)成分的方法與實(shí)驗(yàn)技術(shù)。（二）實(shí)驗(yàn)原

57、理本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)中藥制劑牛黃解毒片中的主要成分或特征成分的性質(zhì)，選用適當(dāng)?shù)娜軇┖头椒▽?duì)試樣進(jìn)行預(yù)處理，盡量排除干擾物質(zhì)，達(dá)到提高待測(cè)成分或特征成分的相對(duì)濃度，以利在進(jìn)行薄層色譜鑒別時(shí)提高色譜清晰度，實(shí)現(xiàn)應(yīng)用薄層色譜檢測(cè)技術(shù)鑒別和控制中藥制劑質(zhì)量。（三）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容牛黃解毒片為包衣片。處方為：牛黃50g，雄黃50g，石膏200g，大黃200g，黃芩150g，桔梗100g，冰片25g，甘草50g。以上八味藥，雄黃水飛或粉碎成極細(xì)粉；大黃粉碎成細(xì)粉；牛黃、冰片研細(xì)；其余黃芩等四味加水煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮成稠膏，加入大黃、雄黃粉末，制成顆粒，干燥，再加入牛黃、冰片粉末，混勻，壓制

58、成1000片，包衣即得。1牛黃的鑒別（1）供試液制備；取本品10片，刮去包衣，研碎，加10ml氯仿研磨，濾過(guò)，再用10ml氯仿浸洗濾渣，合并濾液，濃縮至1ml為供試液。（2）對(duì)照液制備：取膽酸0.001g溶于1ml氯仿中，作為對(duì)照品溶液。取缺牛黃的模擬牛黃解毒片（相當(dāng)于10片），按供試液制備法處理，得陰性對(duì)照液。（3）薄層色譜檢識(shí)薄層板：硅膠G-CMC-Na樣 品：牛黃解毒片供試液對(duì)照品：膽酸對(duì)照液模擬牛黃解毒片對(duì)照液展開(kāi)劑：正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（63211）顯色劑：噴霧5磷鉬酸乙酸溶液，110加熱10分鐘2冰片的鑒別（1）供試液制備：取本品2片，刮去包衣，研碎，加4ml甲醇-氯仿（1

59、1），室溫下浸漬30min，時(shí)加振搖，濾過(guò)，濾液使成5ml，作為供試液。（2）對(duì)照液制備：取冰片適量，加甲醇-氯仿（11）溶解，制成1ml含4mg的溶液。取缺冰片的模擬牛黃解毒片（相當(dāng)于2片），按供試液制備法處理，得陰性對(duì)照液。（3）薄層色譜檢識(shí)薄層板：硅膠G試 樣：牛黃解毒片供試液對(duì)照品：冰片對(duì)照液，模擬牛黃解毒片對(duì)照液展開(kāi)劑：石油醚-醋酸乙酯-苯（1824）顯色劑：噴霧5磷鉬酸乙醇溶液，110加熱顯色3大黃的鑒別（1）供試液制備：取本品6片，刮去包衣，研碎，加10ml甲醇回流提取15分鐘，冷后濾過(guò)，濾液使成5ml，作為供試液。（2）對(duì)照液制備：取1g大黃藥材，同供試液制備法制成對(duì)照液。分別

60、取大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對(duì)照品適量，加乙醇溶解成1ml對(duì)照品溶液。取缺大黃的模擬牛黃解毒片（相當(dāng)于6片），同供試液制備法制得陰性對(duì)照液。（3）薄層色譜檢識(shí)薄層板：硅膠CMC-Na試 樣：牛黃解毒片供試液、對(duì)照品：大黃藥材對(duì)照液，模擬牛黃解毒片對(duì)照液大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對(duì)照液展開(kāi)劑：石油醚（6090）-甲酸乙酯-甲酸（1551）上層溶液顯色劑：顯色前后置日光及紫外光（365nm）下觀察，再噴霧0.5醋酸鎂乙醇溶液顯色。4黃芩的鑒別（1）供試液的制備：取本品6片，刮去包衣，研碎，加10ml甲醇回流提取15分鐘，放冷后濾過(guò)，濾液使成5ml，作為供試液。（2）對(duì)照液的制備：取1g黃芩，同供試液制備法處理，得對(duì)照液。取黃芩苷對(duì)照品適量，加乙醇溶液1ml含1mg的對(duì)照品溶液。取缺黃芩的模擬牛黃解毒片（相當(dāng)于6片），同供試液制備法制