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1、人教版高中生物選修1專題5課題1DNA的粗提取與鑒定word導(dǎo)學(xué)案一、基礎(chǔ)知識（一）提取DNA的方法提取生物大分子的差不多思路是選用一定的或方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子。關(guān)于DNA的粗提取而言，確實(shí)是要利用DNA與RNA,蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在和性質(zhì)方面的差異，提取，去除其他成分。（1）DNA的溶解性：（1）DNA的溶解性： DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度的中溶解度不同，利用這一特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀，或者相反，以達(dá)到分離目的。 此外，DNA不溶于溶液，然而細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。利用這一原理，能夠?qū)NA與氨白質(zhì)進(jìn)一步的分離。（2）DNA對酶、高

2、溫順洗滌劑的耐受性：蛋白酶能水解，然而對DNA阻礙。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍耐6080的高溫,而DNA在以上才會變性洗滌劑能夠瓦解，但對DNA阻礙。（二）DNA的鑒定在條件下，DNA遇會被染成色，因此二苯胺能夠作為鑒定DNA的試劑。二、實(shí)驗設(shè)計（一）實(shí)驗材料的選取凡是含有的生物材料都能夠考慮，然而使用的生物組織，成功的可能性更大。（二）破裂細(xì)胞，獵取含DNA的濾液動物細(xì)胞的破裂比較容易，以雞血細(xì)胞為例，在雞血細(xì)胞液中加入一定量的,同時用玻璃棒，過濾后收集濾液即可假如實(shí)驗材料是植物細(xì)胞，需要先用溶解細(xì)胞膜例如，提取洋蔥的DXA時，在切碎的洋蔥中加入一定的和,進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液。（三

3、）去除濾液中的雜質(zhì)方案一利用DNA在京同濃度的NaCl溶液中的不同，通過操縱NaCl溶液的濃度去除雜質(zhì)。方案二直截了當(dāng)在濾液中加入嫩肉粉，反應(yīng)1015min,嫩肉粉中的能夠分解蛋白質(zhì)。方案三將濾液放在的恒溫水浴箱保溫1015min,注意范疇（四）DNA的.析出與鑒定1、將處理后的溶液過濾，加入與濾液體積、的酒精溶液（體積分?jǐn)?shù)為一）,靜置min,溶液中會顯現(xiàn),這確實(shí)是粗提取的DNA。用玻璃棒攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水分。2、取兩支20ml的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為的NaCl溶液5ml,將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解然后，向兩支試管中各加入4ml的試劑?；旌掀?/p>

4、均后，將試管置于中加熱5min,待試管后，比較兩支試管溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否變。實(shí)例：用雞血細(xì)胞液粗提取DNA并鑒定（蘇教版必修2）步驟操作圖示1、提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)將制備好的雞血細(xì)胞液（已在課前配好）510mL,注入到50ml燒杯中。向燒杯中加入20mL,同時用玻璃棒沿一個方向快速攪拌5min,然后，用放有紗布的，漏斗將血細(xì)胞過濾至1000mL的燒杯中，取其濾液。泰博水l投丹5血園一22、溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA將物質(zhì)的量濃度為40mL加入到濾液中，并作玻璃棒沿一個方向攪拌Imin,使其混合平均，這時DNA在溶液中呈溶解狀態(tài)。2moLiL(NaC陶攪拌3、析出含DNA的

5、粘稠物沿?zé)瓋?nèi)壁慢慢加入,同時用玻璃棒沿一個方向不停地輕輕攪拌，這時燒杯中有絲狀物顯現(xiàn).連續(xù)加入蒸飾水，溶液中顯現(xiàn)的黏稠物會越來越多。當(dāng)黏稠物不再增加時停止加入蒸馀水。蒸惚水c摸拌4、濾取含DNA的粘稠物用放多層紗布的漏斗，過濾溶液至1000mL的燒杯中。取紗布上的。1d.t5、將DNA的粘稠物再溶解取一個50mL燒杯，向燒杯內(nèi)注入物質(zhì)的量濃度為20mL。用鈍頭鎰子將紗布上的黏稠物夾至NaCl溶液中，用玻璃棒沿一個方向不停地攪拌3min,使黏稠物盡可能多地溶解于溶液中。絲狀7/2nlML的上/NX蹄液飛&6、過濾含DXA的氯化鈉溶液取一個100mL燒杯，用放有兩層紗布的漏斗過濾以上溶液c取其濾

6、液（DNA溶于中）。一1iM7、提取含雜質(zhì)較少的DNA在上述濾過的溶液中，加入的、體積分?jǐn)?shù)為250mL（加入時動作要慢），并作用玻璃棒沿一個方向攪拌，溶液中會顯現(xiàn)含雜質(zhì)較少的絲狀物。當(dāng)玻璃棒上顯現(xiàn)絲狀物纏繞時，連續(xù)慢慢攪拌，至不再增加時，用玻璃棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。95%冷IV1t卻酒精8、DNA的鑒定取兩支20mL的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為5mL,將絲狀物放入皿一支試管中，用玻嘀棒攪拌，使絲狀物溶解然后,向兩支試箔中各加入4mL的二苯胺試劑?；旌掀骄螅瑢⒃嚬苤糜诜兴屑訜?min,等試管冷卻后，觀看同時比較兩支試管中溶液顏色的變化。T7噪作提示1、以血液為實(shí)驗材料時，每

7、100ml血液中需要加入3g,防止o2、加入洗滌劑后，動作要、,否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟地操作。加入酒精和用玻璃棒攪拌時，動作要,以免加劇，導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。3、二苯胺試劑要,否則會阻礙鑒定的成效.四、課題成果評判1、是否提取出了DNA觀看你提取的DM顏色，假如不是白色絲狀物，講明DNA中的較多：二苯胺鑒定顯現(xiàn)藍(lán)色講明實(shí)驗，假如不出現(xiàn)藍(lán)色，可能所提取的DNA,或是實(shí)驗操作中顯現(xiàn)，需要重新制備。2、分析DNA中的雜質(zhì)本實(shí)驗提取的DNA粗制品有可能仍舊含有、等雜質(zhì)。3、不同實(shí)驗方法的比較關(guān)于不同的實(shí)驗方法，本課題能夠采納分組的方法進(jìn)行研究。第一選取不同的實(shí)驗材料，其次同

8、種材料還能夠采納不同方法，從多方面比較實(shí)驗結(jié)果，如DA的、，二苯胺顯色的等，看看哪種實(shí)驗材料、哪種提取方法的成效更好.五、課題延伸本課題使用的洗滌劑是些組金的混合物，在嚴(yán)格的科學(xué)實(shí)驗中專門少使用。實(shí)驗室提取高純度的DAN時，通常使用、或等化學(xué)試劑。（-）旁欄摸索題1 .什么緣故加入蒸儲水能使雞血細(xì)胞破裂？答：蒸儲水關(guān)于雞血細(xì)胞來講是一種液體，水分能夠大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞，再加上攪拌的,就加速了雞血細(xì)胞的破裂（細(xì)胞膜和核膜的破裂），從而開釋出DNAo2 .加入洗滌劑和食鹽的作用分不是什么？答：洗滌劑是一些離子去污劑，能，有利于DNA的；食鹽的要緊成分是NaCl,有利于3 .假如研磨不充分，

9、會對實(shí)驗結(jié)果產(chǎn)生如何樣的阻礙？答：研磨不充分會使細(xì)胞核內(nèi)的DA開釋不完全，提取的DNA量,阻礙實(shí)驗結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。4 .此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？答：可能含有、和等雜質(zhì)。5 .什么緣故反復(fù)地溶解與析出DNA,能夠去除雜質(zhì)？答：用高鹽濃度的溶液溶解DNA,能除去；用低鹽濃度使DNA析出，能除去。因此，通過反復(fù)溶解與析出DA,就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。6 .方案二與方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開；方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì),與DNA分離。（二）討論題

10、圖5-1是DNA在XaCl溶液中的溶解度曲線，請依照曲線圖，摸索下面的咨詢題1 .在什么濃度下，DNA的溶解度最??？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何變化的？答：在NaCl溶液濃度為0.14mol/L時，DNA的溶解度最?。寒?dāng)NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時，隨著NaCl溶液濃度的升高，DNA的溶解度:當(dāng)NaCl溶液濃度高于Q14mol/L時，隨著NaCl溶液濃度的升高，DNA的溶解度。2 .如何通過操縱NaCl溶.液的濃度使DNA在鹽溶液中溶解或析出？答：依照DNA在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度最小的特性，一樣先用較高濃度的NaCl溶液使DNA溶解，然后再用蒸儲水稀釋至使

11、DNA析出。（三）練習(xí)3 .答：提取蛋白質(zhì)比提取DXA的難度大。這是因為，與DNA相比，蛋白質(zhì)對溫度、鹽濃度、pH等條件要敏銳.得多，專門容易：同時蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu),理化性質(zhì),使得蛋白質(zhì)的提取沒有一種統(tǒng)一的方法，只能依照特定蛋白質(zhì)的特性摸索提取的條件，設(shè)計特定的方法?！局R拓展】1 .制備雞血細(xì)胞液時，什么緣故要在新奇的雞血中加入檸檬酸鈉？答：制備雞血細(xì)胞液時，要在新奇的雞血中加入抗凝劑一一檸檬酸鈉，Q其原理是檸椽酸鈉能與血漿中CaL發(fā)生反應(yīng)，生成檸椽酸鈣絡(luò)合物，血漿中游離的Ca.大大減少,血液便可不能凝固。2 .雞血離心或靜置沉淀后，什么緣故要棄出上清液？答：因為上清液是,沒有血細(xì)胞.DNA要緊存在于試管底部的中，因此提取雞血中的DNA時，要除去血液中的上清液。3 .盛放雞血細(xì)胞液的容器最好是塑料容器，什么緣故？答：雞血細(xì)胞破裂以后開釋出的DNA,容易被玻璃容器吸附，由于細(xì)胞內(nèi)DNA的含量本來就比較少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就會更少。因此，實(shí)驗過程中最好使用的燒杯和試管，如此能夠減少提取過程的DA的缺失。4 .什么緣故析出DNA時要用冷卻的酒精？答：預(yù)冷的酒精溶液具有以下優(yōu)點(diǎn)，一是抑制核酸水解酶的活性，防止DNA降解；二是降低分子運(yùn)動，易于形成沉淀析出：三是低溫有利于增加DNA分子的柔韌性，減少斷裂。