《5.1《DNA的粗提取與鑒定》活動(dòng)單李百勝》由會(huì)員分享,可在線閱讀,更多相關(guān)《5.1《DNA的粗提取與鑒定》活動(dòng)單李百勝(12頁(yè)珍藏版)》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。
1、DNA的粗提取和鑒定知識(shí)要點(diǎn):1. DNA的物理化學(xué)性質(zhì),尤其是DNA的溶解性;2二苯胺法鑒定DNA的方法和原理。、DNA的粗提取的原理思考1 : DNA存在于真核生物細(xì)胞的哪些部位?思考2 :提取生物大分子的一般思路是什么?1、DNA的性質(zhì):在NaCI溶液中的溶解度對(duì)蛋白酶的耐受性對(duì)高溫的耐受性對(duì)洗滌劑的 耐受性DNA蛋白質(zhì)DNA和蛋白質(zhì)的溶解性、對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性DNA粗提取的原理有些哪些?i、 DNA 在 mol/L NaCI溶液中溶解度最小ii、DNA不溶于溶液,而蛋白質(zhì)等能夠溶解2、DNA鑒定的原理:在的條件下,DNA遇會(huì)被染成cTSmol/L 度、DNA粗提取的主要步驟:1
2、 材料選擇:適于作實(shí)驗(yàn)材的材料:選用 的生物材料;如雞(紅)血,其適宜作為實(shí)驗(yàn)材料的原因:雞血(紅)細(xì)胞核的易 DNA含量豐富,材料易得;雞血細(xì)胞極 吸水脹破。哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞呢?2、主要實(shí)驗(yàn)步驟(以雞血紅細(xì)胞為例):廠方法:將510mL雞血細(xì)胞液 加入20mL中;用玻棒同方向攪拌5min ;用34紗布過(guò)濾,以除去顆粒較大的雜質(zhì)過(guò)濾;收破碎細(xì)胞,釋放Q方法:向?yàn)V液中加入2倍體積的 工詫” *濾獲?。蝗芙饧?xì)胞核二1內(nèi) DNAK ;mol/LNaCI 溶液,攪拌1min ;過(guò)目的:使與DNA結(jié)合的_ J 高溶液NaCI溶液中解聚,釋放出;DNA溶解于注意:按同一方向攪拌廠方法:沿?zé)谙驗(yàn)V液中緩慢加
3、入蒸憎水,并輕輕按同一方向攪拌,使DNA析出, DNA析出直到;可以在玻棒上收集到黏稠物(或過(guò)濾或離心收集黏稠物)目的:降低NaCI溶液濃度達(dá)到mol/L 皿V左右使DNA析出3min,使.注意:加入的蒸幗水不能過(guò)多使NaCI溶液濃度過(guò)低,DNA又會(huì):DNA的:初步純化:DNA充分溶解;過(guò)濾,收集濾液;向?yàn)V液中貼壁緩慢加入50mL冷凍的95% 乙醇,并用玻棒按冋一方向緩慢、均勻地?cái)嚢?,在玻棒上收集白色絲狀物 (DNA )廣方法:向20mL 2mol/LNaCI溶液中加入黏稠物并按同一方向攪拌I原理:DNA不溶于中,而蛋白質(zhì)能溶于歸納:本實(shí)驗(yàn)中幾次過(guò)濾?過(guò)濾的目的是什么?中O過(guò)濾一:過(guò)濾二:過(guò)濾
4、三:本實(shí)驗(yàn)中幾次加入蒸館水的目的各是什么?第一次:向雞血細(xì)胞液中加入蒸綢水,目的: 第二次:向溶解DNA的2mol/LNaCI溶液中加入蒸f留水,目的:拓展:1、以菜花為材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),如何獲得核物質(zhì)?取材、剪碎7加入洗滌劑、食鹽7研磨、過(guò)濾加洗滌劑的目的:加入食鹽的目的:2、分析教材中方案一、二、三的原理。方案一:方案二:方案三:3、 探究不同方法、洗滌劑、食鹽用量對(duì)DNA粗提取量的影響(說(shuō)說(shuō)實(shí)驗(yàn)思路)三、DNA的鑒定:1、 方法:取甲、乙兩支試管,并向其中加入5mL (等量)的2mol/LNaCI溶液;向甲試管中加入粗提取的DNA并攪拌使DNA溶解;向兩支試管中各加入4mL (等量)二苯胺
5、試劑,混勻,沸水中加熱5min,待試管冷卻后,比較兩支試管的顏色(藍(lán)色)變化。2、注意點(diǎn):實(shí)驗(yàn)中需要對(duì)照,目的:證明四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià):是否提取到 DNA觀察提取的DNA顏色:如果不是白色絲狀物,說(shuō)明DNA中的雜質(zhì)較多;二苯胺鑒定:出現(xiàn)藍(lán)色說(shuō) 明實(shí)驗(yàn)基本成功,如果不呈現(xiàn)藍(lán)色,可能所提取的DNA含量低,或是實(shí)驗(yàn)操作中出現(xiàn)錯(cuò)誤,需要重新制備。2、粗提取得到的絲狀物為什么略帶黃色?實(shí)驗(yàn)提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。3、 影響絲狀物總量的因素有哪些?實(shí)驗(yàn)材料種類和數(shù)量、溶解核DNA時(shí)的NaCI溶液濃度、實(shí)驗(yàn)方法、攪拌方法(攪拌不當(dāng)可能破壞DNA)五、案例:(快
6、速閱讀、理解步驟原理)以菜花為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行【實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備】將新鮮菜花和體積分 數(shù)為DNA的粗提取【提取DNA的具體步驟】95%的乙醇溶液放入冰箱冷凍室24 h1、取材稱取30 g菜花,去梗取花,切碎。2、 研磨 將碎菜花放入研缽中,倒入10 mL研磨液,充分研磨10 min。教材中建議采用洗發(fā)香波、洗滌劑等一些去污劑,使植物細(xì)胞膜破碎,釋放學(xué)生可以設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn),比較哪一種方法可以提取到純度更高的高純度的DNA。一般實(shí)驗(yàn)室提取DNA都采用一種陽(yáng)離子去污劑一一十六烷三甲基澳化鞍分離緩沖液,(體積比為24 : 1)DNA。碎,同時(shí)將DNA與植物中多糖等雜質(zhì)分開,再用氯仿一異丙醇混合液使細(xì)胞膜破抽提去
7、除雜質(zhì)蛋白,得到高純度的DNAo(有條件的學(xué)??蓪?5 min,取上清液放入95%的預(yù)冷乙醇溶液中,)沉淀35 min后、可3、過(guò)濾在漏斗中墊上尼龍紗布,將菜花研磨液過(guò)濾到燒杯中濾液倒入塑料離心管中進(jìn)行離心,用1000 r/mi n的轉(zhuǎn)速,離心燒杯中)。在4 C冰箱中放置幾分鐘后,再取上清液。4、沉淀將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分?jǐn)?shù)為并用見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉(zhuǎn),將絮狀物纏繞在玻璃棒上。八訓(xùn)練題:在DNA粗提取的過(guò)程中,兩次向燒杯中加入蒸憎水的作用分別是A. 稀釋血液;沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂;降低氯化鈉的濃度C.使血細(xì)胞破裂;增大DNA的溶解度D .使血細(xì)胞破裂;沖
8、洗樣品2.下列實(shí)驗(yàn)中所用試劑錯(cuò)誤的是A. 在觀察植物細(xì)胞有絲分裂實(shí)驗(yàn)中,使用醋酸洋紅溶液使染色體著色B. 在提取葉綠體色素實(shí)驗(yàn)中,使用丙酮提取色素DNAC. 在DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中,使用氯化鈉溶液析出3 D.在蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)中,使用蘇丹川染液鑒定蛋白質(zhì)NaCI的物質(zhì)量為多少mol/L時(shí),DNA的溶解度最小4- A. 0.12 B . 0.13C . 0.14 D . 0.15在提嫩酌姍蔽幡苗飜網(wǎng)耐閔的是A.溶解雜質(zhì)從細(xì)胞核中癩解蛋白質(zhì)C .析出DNA.溶解DNA5.A. NaCI溶液提瑕翻OW溶液是A . NaCI溶液B .酒精C蒸憎水.檸檬酸鈉6.DNA所用的溶液B .冷卻90%的酒
9、精.加熱95%的酒精D .冷卻95%的酒精玻璃棒緩緩、輕輕地?cái)嚢枞芤海úAО舨灰辈宓綗撞?.DNA遇一苯胺(沸水?。r(shí),會(huì)染成A .磚紅色B .紅色C .紫色&可以鑒定DNA的物質(zhì)是藍(lán)色 rm i iA 斐林試劑B . 95%的酒精C .甲基綠溶液D9.破譯生苯胺溶液物基因組DNA的遺傳信息或進(jìn)行基因操作,首先要提取細(xì)胞核DNA下列不適宜作為DNA提取的實(shí)驗(yàn) 材料是A .雞血細(xì)胞B .蛙的紅細(xì)胞C.人的成熟紅細(xì)胞D .菜花操作及其作用的表述.正10 .(多選)下表是尖于DNA粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中所使用的材料、確的是試劑操作作用A檸檬酸鈉溶液與雞血混合防止血液凝固B蒸館水與雞血細(xì)胞混合保持細(xì)
10、胞形狀C蒸館水加入到溶解有DNA的NaCI中析出DNA絲狀物D冷卻的酒精加入到過(guò)濾后DNA的NaCI中產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)門(多選)下列矢于DNA粗提取與鑒定的說(shuō)法不正確的是A.溶液中的溶解度洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜,同時(shí)也能控制DNA在NaCI(I )實(shí)驗(yàn)材料選用雞血球液,而不用雞全血,主要原因是雞血球(2)在圖A所示的實(shí)驗(yàn)步驟中加蒸憎Tf5f島昨液懸中c所示實(shí)驗(yàn)步娠(3)為鑒定實(shí)驗(yàn)所得絲狀物主要成分是 溶液,結(jié)果絲B. 在探究洗滌劑對(duì)植物細(xì)胞 DNA提取的影響實(shí)驗(yàn)中,需要控制的變量是洗滌劑和植物細(xì)胞C. 常溫下,DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色D. 將濾液放在6075 C的恒溫水浴箱中保溫1015分鐘能去除濾液中的雜質(zhì),其原理是利用了 DNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同12 如圖所示是尖于“ DNA的粗提取和物理性狀觀察”實(shí)驗(yàn):液中含有較高含量的水的目的是,通過(guò)圖B所示的步驟取得濾液,再在溶液中加入2 mol/L NaCI溶液的目的是中加蒸憎水的目的是 。DNA可滴加狀物被染成 少年智則國(guó)智,少年富則國(guó)富,少年強(qiáng)則國(guó)強(qiáng),少年獨(dú)立則國(guó)獨(dú)立,少年自由則國(guó)自由,少年進(jìn)步則國(guó)進(jìn) 步,少年勝于歐洲,則國(guó)勝于歐洲,少年雄于地球,則國(guó)雄于地球。