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1、教師用書獨具演示教師用書獨具演示演示結(jié)束演示結(jié)束PCR技術(shù)的原理及條件技術(shù)的原理及條件 模板模板 脫氧核脫氧核 苷酸苷酸 引物引物 多聚酶鏈式反應多聚酶鏈式反應 體外體外 擴增擴增DNA 片段片段 DNA DNA拷貝拷貝 80100 DNA的的 雙螺旋結(jié)構(gòu)雙螺旋結(jié)構(gòu) 雙鏈雙鏈 變性變性 降低降低 兩條彼此分離的兩條彼此分離的 DNA鏈鏈 3 5 3 DNA 模板鏈模板鏈 脫氧核苷酸脫氧核苷酸 Taq DNA聚合酶聚合酶 緩沖溶液緩沖溶液 90以上以上 解聚解聚 50左右左右 堿基互補配對堿基互補配對 72左右左右 脫氧核苷酸脫氧核苷酸 DNA聚合酶聚合酶 DNA 序列序列 指數(shù)擴增指數(shù)擴增 2

2、60nm 溫度溫度 DNA擴增擴增 恒溫水浴鍋恒溫水浴鍋 水浴鍋水浴鍋 PCR反應的微量離心管反應的微量離心管 0.5mL PCR 反應反應 外源外源DNA 高壓滅菌高壓滅菌 緩沖液緩沖液 酶酶 20 槍頭槍頭 手指輕輕彈擊管的側(cè)壁手指輕輕彈擊管的側(cè)壁 PCR技術(shù)原理及分析技術(shù)原理及分析 細胞內(nèi)細胞內(nèi)DNA復制和復制和PCR反應的比較反應的比較 體內(nèi)體內(nèi)DNA復制復制PCR反應反應不同點不同點場所場所細胞內(nèi)細胞內(nèi)細胞外細胞外能量能量ATP提供能量提供能量不需不需ATP提供能量提供能量解旋解旋在解旋酶作用下在解旋酶作用下，細胞提供能量，細胞提供能量，部分解開，部分解開加熱至加熱至90 以上時，以

3、上時，雙鏈全部解開，不需雙鏈全部解開，不需解旋酶解旋酶不同點不同點引物引物一小段一小段RNA可以是可以是RNA或單鏈或單鏈DNA分子片段分子片段合成子鏈合成子鏈在引物基礎上，在引物基礎上，一條鏈連續(xù)合成一條鏈連續(xù)合成，另一條鏈不連，另一條鏈不連續(xù)合成續(xù)合成分別從兩條鏈的引物分別從兩條鏈的引物端開始，都是連續(xù)合端開始，都是連續(xù)合成，控制溫度成，控制溫度72 特點特點邊解旋邊復制，邊解旋邊復制，半保留復制半保留復制體外迅速擴增體外迅速擴增不同點不同點Taq DNA聚合酶聚合酶不需要不需要需要需要循環(huán)次數(shù)循環(huán)次數(shù)受生物體自身控受生物體自身控制制30多次多次溫度溫度體內(nèi)溫和條件體內(nèi)溫和條件高溫高溫(可變可變)相同點相同點需提供需提供DNA復制的模板復制的模板四種脫氧核苷酸為原料四種脫氧核苷酸為原料都需要一定的緩沖溶液都需要一定的緩沖溶液子鏈延伸的方向都是從子鏈延伸的方向都是從5端到端到3端端網(wǎng)網(wǎng) 絡絡 構(gòu)構(gòu) 建建