《高中生物第一輪復習 實驗26 實驗設計專題研究系列之有關基因工程的探究課件》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《高中生物第一輪復習 實驗26 實驗設計專題研究系列之有關基因工程的探究課件（16頁珍藏版）》請在裝配圖網上搜索。

1、實驗設計專題研究系列之(二十六)有關基因工程的探究實驗專項1探究目的基因插入質粒上的位置情況：若運載體上含抗青霉素基因a和抗四環(huán)素基因b，當目的基因插入a片段中，則該基因不表達，在青霉素培養(yǎng)基上不存活，在四環(huán)素培養(yǎng)基上存活；若插入b基因片段，則結果相反。2探究質粒上抗性基因的情況(1)方法：將重組后的質粒導入受體細胞，分別放在含青霉素、四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，觀察成活情況。(2)現(xiàn)象結論：都成活兩種標記基因都有；只有一個培養(yǎng)基上成活只有其中一種，抗青霉素基因或抗四環(huán)素基因；都不成活兩種抗性基因都不存在?！镜淅痉丁?2010浙江五校聯(lián)考)大腸桿菌pUC118質粒的某限制酶唯一酶切序列，位于該質粒

2、的lacZ基因中，lacZ基因中如果沒有插入外源基因，lacZ基因便可表達出半乳糖苷酶，當培養(yǎng)基中含有IPTG和Xgal時，Xgal便會被半乳糖苷酶水解成藍色，大腸桿菌將形成藍色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，帶有pUC118質粒的大腸桿菌便不能表達半乳糖苷酶，培養(yǎng)基中的Xgal不會被水解成藍色，大腸桿菌將形成白色菌落。pUC118還攜帶了氨芐青霉素抗性基因。下圖是利用lacZ基因的插入失活篩選重組質粒示意圖。據圖回答下列問題：(1)作為受體，大腸桿菌應_，以方便篩選已導入重組質粒的受體大腸桿菌。取用氯化鈣溶液處理(增加其細胞壁的通透性)過的受體大腸桿菌，置于試管中，并加入_。(2)圖

3、中的選擇培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質外，還應加入_等物質，用以篩選導入了重組質粒的受體大腸桿菌。(3)將上述處理后的大腸桿菌置于圖中選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以檢測受體大腸桿菌是否導入重組質粒，請預測菌落的顏色，并分析結果：_。_。思路分析：(1)從圖中看出：質粒上有氨芐青霉素抗性基因，為方便篩選，已導入重組質粒的受體大腸桿菌應不含氨芐青霉素抗性基因。(2)選擇培養(yǎng)基中加入IPTG和Xgal以便顯色反應，同時加入氨芐青霉素作為選擇作用。(3)根據題干顯色反應現(xiàn)象，若長出藍色說明重組質粒沒有導入受體大腸桿菌；若長出白色菌落，說明重組質粒已導入受體大腸桿菌。答案

4、：(1)不含氨芐青霉素抗性基因(或對氨芐青霉素敏感)在試管中制備好的DNA(2)IPTG、Xgal、氨芐青霉素(3)如果長出藍色菌落，說明自連的載體pUC118質粒已轉入受體菌，但目的基因沒有接入載體(或說明重組質粒沒導入受體大腸桿菌)如果長出白色菌落，說明重組質粒已導入受體大腸桿菌【實戰(zhàn)演練】(2010江蘇卷)下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。請回答下列問題：圖1圖2(1)一個圖1所示的質粒分子經Sma切割前后，分別含有_個游離的磷酸基團。(2)若對圖中質粒進行改造，插入的Sma酶切位點越多，質粒的熱穩(wěn)定性越_。(3)用圖中的質粒和外源DN

5、A構建重組質粒，不能使用Sma切割，原因是_。(4)與只使用EcoR相比較，使用BamH和Hind 兩種限制酶同時處理質粒、外源DNA的優(yōu)點在于可以防止_。(5)為了獲取重組質粒，將切割后的質粒與目的基因片段混合，并加入_酶。(6)重組質粒中抗生素抗性基因的作用是為了_。(7)為了從DNA文庫中分離獲取蔗糖轉運蛋白基因，將重組質粒導入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在_的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達的初步檢測。解析：此題考查基因工程操作的基本過程。(1)質粒分子是小型環(huán)狀DNA分子，在酶切前沒有游離的磷酸基團，酶切后形成一個DNA分子片段，在每端(5端)各有一個游離的磷酸基團。(2)

6、在質粒中插入的Sma酶切位點越多，表明插入的CG堿基對越多，因為CG對中的氫鍵多于AT對中的氫鍵，所以熱穩(wěn)定性將增加。(3)由圖可知外源DNA上的目的基因和質粒的抗生素抗性基因上有Sma酶切位點，若用Sma酶切質粒和外源DNA將破壞抗性基因和目的基因。(4)如果只使用EcoR酶切質粒和外源DNA，由于露出的黏性末端相同，很容易使質粒和外源DNA自身連接起來形成環(huán)，用兩種限制酶同時切質粒和外源DNA，因露出的黏性末端不同就可有效防止上述問題的發(fā)生。(5)DNA連接酶可將具有相同黏性末端的DNA片斷連接起來。(6)重組質粒中的抗生素抗性基因屬于標記基因，可用來鑒別和篩選含有目的基因的受體細胞。(7)為獲取蔗糖轉運蛋白基因，將重組質粒導入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，為了完成目的基因表達的初步檢測，應將大腸桿菌培養(yǎng)在只有蔗糖為唯一碳源的培養(yǎng)基中。答案：(1)0、2(2)高(3)Sma會破壞質粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因(4)質粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化(5)DNA連接(6)鑒別和篩選含有目的基因的細胞(7)蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質