《高中生物《第二章 第二節(jié) 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)》課件 新人教版選修1》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《高中生物《第二章 第二節(jié) 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)》課件 新人教版選修1（19頁珍藏版）》請?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、專題專題2 2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用，進(jìn)行微研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用，進(jìn)行微生物數(shù)量的測定。生物數(shù)量的測定。 土壤中能分解尿素的細(xì)菌土壤中能分解尿素的細(xì)菌（1）從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌）從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌（2）統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這）統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這 樣的細(xì)菌樣的細(xì)菌課題背景 尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。但是尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氮之后，才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕浮?尿素最初是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的。 1828年，德國化學(xué)家維勒

2、成功地通過無機(jī)物的化學(xué)反映合成了尿素，揭開了歷史上人工合成有機(jī)物的新篇章。尿素課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)（一）篩選菌株（一）篩選菌株原理：原理：有選擇作用，常用方法常用方法：稀釋涂布平板法、顯微鏡：稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法，直接計(jì)數(shù)法， 還可以用過濾膜法還可以用過濾膜法：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，中的一個活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確，一般選擇

3、菌落數(shù)在為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在3030300300的平板進(jìn)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)需重新實(shí)驗(yàn)。 ：設(shè)置重復(fù)組，目的是增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。將待測樣設(shè)置重復(fù)組，目的是增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。將待測樣品經(jīng)一系列品經(jīng)一系列1010倍稀釋，然后選擇三個稀釋度的菌液，分別取倍稀釋，然后選擇三個稀釋度的菌液，分別取0.1ml0.1ml接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計(jì)數(shù)菌落數(shù)。為是布在

4、整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計(jì)數(shù)菌落數(shù)。為是結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度菌液加到三個或三個以上的結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度菌液加到三個或三個以上的平板上，經(jīng)涂布培養(yǎng)，計(jì)算出菌落平均數(shù)平板上，經(jīng)涂布培養(yǎng)，計(jì)算出菌落平均數(shù)2、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（1）原理：此法利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。（2）方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)板是特制的載玻片，其上有特定的面積為1mm2，高為0.1mm的計(jì)數(shù)室，一個計(jì)數(shù)室又被分成25個（或16個）中格，每個中格再被分成16個（或25個）小格，每個計(jì)數(shù)室都由400個小格組成。 （3）操作：將稀釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上，蓋上

5、蓋玻片，然后在顯微鏡下計(jì)數(shù)45個中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個小格所含的細(xì)菌數(shù)，再按計(jì)數(shù)公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。 （4）計(jì)算公式 每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)=每小格平均細(xì)菌數(shù)X400X10000X稀釋倍數(shù) （5）缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。3過濾膜法以測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例。將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)液基上培養(yǎng)。在該培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色?？梢愿鶕?jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。 1. 1.想一想，如何從平板上的菌落數(shù)推測出想一想，如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？每克樣品中的菌落數(shù)？答：統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，答：統(tǒng)計(jì)

6、某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)最好能統(tǒng)計(jì)3 3個平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平個平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進(jìn)行計(jì)算。均值，然后按課本旁欄的公式進(jìn)行計(jì)算。A A同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同，可能同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同，可能的解釋有兩種。的解釋有兩種。一是由于土樣不同一是由于土樣不同；二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。 （三）設(shè)置對照（三）設(shè)置對照究竟是哪個原因，可以通過實(shí)驗(yàn)來證明。究竟是哪個原因，可以通過實(shí)驗(yàn)來證明。另一種方案另一種方案：將將A A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培

7、養(yǎng)基是下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。通過這個事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)否受到污染。通過這個事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說服力，對照的設(shè)置是必不可少的。果要有說服力，對照的設(shè)置是必不可少的。實(shí)驗(yàn)方案有兩種實(shí)驗(yàn)方案有兩種一種方案一種方案：可以由其他同學(xué)用與可以由其他同學(xué)用與A A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與A A同學(xué)一致，則證明同學(xué)一致，則證明A A無無誤；如果結(jié)果不同，則證明誤；如果結(jié)果不同，則證明A A同學(xué)存在操作失同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。誤或培養(yǎng)基的配制有問題。四、實(shí)驗(yàn)案例四、實(shí)驗(yàn)案例 實(shí)驗(yàn)的具體操作步驟如下實(shí)驗(yàn)的具體操作步

8、驟如下: : 1.1.土壤取樣土壤取樣 從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土鏟去表層土3 cm3 cm左右，再取樣，將左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。土壤中某樣品細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)土壤中某樣品細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)2.2.設(shè)置重復(fù)組，目的是增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力設(shè)置重復(fù)組，目的是增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。將待測樣品經(jīng)一系列與準(zhǔn)確性。將待測樣品經(jīng)一系列1010倍稀釋，倍稀釋，然后選擇三個稀釋度的菌液，分別取然后選擇三個稀釋度的菌液，分別取0.1ml0.1ml接種到已制備好的平板上，然后用接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面，無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計(jì)數(shù)菌落數(shù)。為是放在適宜的溫度下培養(yǎng)計(jì)數(shù)菌落數(shù)。為是結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度菌液加結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度菌液加到三個或三個以上的平板上，經(jīng)涂布培養(yǎng)，到三個或三個以上的平板上，經(jīng)涂布培養(yǎng)，計(jì)算出菌落平均數(shù)計(jì)算出菌落平均數(shù) ：3.3.為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確，一般選擇菌落為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在數(shù)在3030300300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)誤，需重新實(shí)驗(yàn)。