考點(diǎn)84 動物細(xì)胞融合與單克隆抗體 1動物細(xì)胞融合（1）原理：細(xì)胞膜的流動性。（2）融合方法：聚乙二醇(PEG)、滅活的病毒、電激等。（3）意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能，也為制造單克隆抗體開辟了新途徑。2單克隆抗體（1）制備過程 （2）優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高，可大量制備。（3）用途：作為診斷試劑；用于治療疾病和運(yùn)載藥物。 考向 單克隆抗體的制備過程分析 1下圖是單克隆抗體制備流程的簡明示意圖。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是 A是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的B淋巴細(xì)胞B過程體現(xiàn)了細(xì)胞膜的流動性C所示細(xì)胞因高度分化而失去了分裂能力D是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細(xì)胞群【參考答案】C 解題技巧制備單克隆抗體過程中兩次篩選的方法及目的項(xiàng)目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導(dǎo)融合后得到多種雜交細(xì)胞，另外還有未融合的細(xì)胞由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激，所以經(jīng)選擇性培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選：未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞(“BB”細(xì)胞、 “瘤瘤”細(xì)胞)都會死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞(“B瘤”細(xì)胞)能生長用多孔培養(yǎng)皿培養(yǎng)，在每個(gè)孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群篩選目的得到雜交瘤細(xì)胞得到能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞 2單克隆抗體的特點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高、可以大量制備，已被廣泛應(yīng)用于疾病的診斷和治療。用H7N9病毒制備單克隆抗體的流程如下圖所示： （1）過程常用的方法是_。（2）向小鼠體內(nèi)注射抗原蛋白，使小鼠產(chǎn)生_免疫。從小鼠體內(nèi)分離的細(xì)胞是_，細(xì)胞應(yīng)具有的特點(diǎn)是_。（3）體外培養(yǎng)細(xì)胞，首先應(yīng)保證其處于_的環(huán)境中，其次需要提供充足的營養(yǎng)和適宜的溫度。培養(yǎng)箱充入二氧化碳的作用是_。（4）對于轉(zhuǎn)基因成功的細(xì)胞還要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和_檢測。（5）若要預(yù)防H7N9禽流感，可用圖中的_作為疫苗?！敬鸢浮浚?）顯微注射技術(shù) （2）體液(只答特異性不可) B淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞或已免疫的B淋巴細(xì)胞) 既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體 （3）無菌、無毒(缺一不可) 維持培養(yǎng)液的pH （4）(專一)抗體（5）抗原蛋白 1下列有關(guān)單克隆抗體制備及其應(yīng)用的敘述，不正確的是A制備單克隆抗體運(yùn)用的技術(shù)有動物細(xì)胞融合和動物細(xì)胞培養(yǎng)B給小鼠注射抗原，是為了獲得能產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細(xì)胞C需要從雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞D利用生物導(dǎo)彈治療癌癥就是利用了單克隆抗體清除癌細(xì)胞2利用細(xì)胞工程的方法，以SARS病毒核衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體。下列相關(guān)敘述正確的是A用純化的核衣殼蛋白反復(fù)注射到小鼠體內(nèi)，產(chǎn)生的血清抗體為單克隆抗體B體外培養(yǎng)單個(gè)漿細(xì)胞可以獲得大量針對SARS病毒的單克隆抗體C將等量漿細(xì)胞和骨髄瘤細(xì)胞混合，經(jīng)PEG誘導(dǎo)融合后的細(xì)胞均為雜交瘤細(xì)胞D利用該單克隆抗體可診斷出SARS病毒的感染者3通過細(xì)胞工程生產(chǎn)單克降抗體時(shí)，通常要經(jīng)過三次篩選：選出能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞在特定培養(yǎng)基中篩選雜交瘤細(xì)胞選出能產(chǎn)生特定抗體并能大量增殖的細(xì)胞群。這三個(gè)過程的先后順序是A BC D4某研究者利用細(xì)胞工程制備抗A的單克隆抗體。先用抗原(A)分別免疫3只同種小白兔(X、Y和Z)，每只小白兔免疫5次，每次免疫一周后測定各小白兔血清抗體的效價(jià)(能檢測出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù))，制備B淋巴細(xì)胞時(shí)，免疫小鼠的血清抗體效價(jià)需達(dá)到16 000以上，結(jié)果如圖所示。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是 A將抗原A注入小白兔體內(nèi)的目的是獲得已免疫的B淋巴細(xì)胞B最適合用于制備B淋巴細(xì)胞的是第五次免疫后的Y小白兔C骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞的融合必須使用滅活的病毒進(jìn)行促融D融合細(xì)胞需經(jīng)兩次篩選才可獲得只分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞5關(guān)于下面制備單克隆抗體過程示意圖的敘述，不正確的是 A表示已免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞均是從小鼠的脾臟中提取的B促進(jìn)細(xì)胞融合的方法可以利用聚乙二醇作介導(dǎo)C中的篩選是通過抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行的D可以無限增殖6下圖是單克隆抗體制備流程的示意圖。下列有關(guān)敘述正確的是 A從小鼠脾臟中獲得細(xì)胞主要參與細(xì)胞免疫B過程利用細(xì)胞膜選擇透過性原理C細(xì)胞同時(shí)具有脾臟細(xì)胞和鼠骨髓瘤細(xì)胞的特性D是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細(xì)胞群7甘草酸是中藥甘草中的主要活性成分。為了快速檢測甘草酸，科研人員利用細(xì)胞工程技術(shù)制備了抗甘草酸的單克隆抗體，其基本操作過程如下圖。相關(guān)敘述正確的是 A過程注射相應(yīng)抗原后應(yīng)立即從小鼠脾臟中提取細(xì)胞甲B過程誘導(dǎo)細(xì)胞融合，利用了細(xì)胞膜的選擇透過性C過程、的篩選方法相同，細(xì)胞丙、丁遺傳物質(zhì)相同D過程無論在體內(nèi)還是體外進(jìn)行，細(xì)胞丁都可大量增殖8人絨毛膜促性腺激素（HCG）是女性懷孕后胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種糖蛋白，制備抗HCG單克隆抗體可用于早孕的診斷。下圖是抗HCG單克隆抗體制備流程示意圖。相關(guān)敘述正確的是 A過程所用的促融方法與植物體細(xì)胞雜交完全相同B過程以抗HCG單克隆抗體為抗原進(jìn)行檢測C應(yīng)給小鼠多次注射HCG，以獲得較多的記憶細(xì)胞D過程需要添加抗生素等物質(zhì)，以防止病毒污染9如下圖所示，請據(jù)圖回答下面的問題。 （1）淋巴細(xì)胞能與骨髓瘤細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞，兩種細(xì)胞膜也能“融合”在一起，說細(xì)胞膜具有_特點(diǎn)。此過程中，常用的生物誘導(dǎo)劑為_，該雜交細(xì)胞的特點(diǎn)是_。（2）雜交瘤細(xì)胞的體外培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基成分有何主要不同？_。（3）單克隆抗體注入體內(nèi)后可以自動追蹤抗原(病原體或癌變細(xì)胞等)并與之結(jié)合，而絕不攻擊任何正常細(xì)胞，故稱為“生物導(dǎo)彈”，這是利用了_。（4）在單克隆抗體制備過程中，應(yīng)用了細(xì)胞工程中的_和_兩大技術(shù)。102013年4月16日國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會公布，全國共報(bào)告人感染H7N9禽流感確診病例77例，其中16人已死亡，禽流感再度備受關(guān)注。醫(yī)學(xué)界正在致力于研究預(yù)防H7N9禽流感病毒的疫苗和單克隆抗體?？茖W(xué)家決定采用基因敲除術(shù)將小鼠的Ig基因敲除，代之以人的Ig基因，然后用H7N9病毒去免疫小鼠，再經(jīng)雜交瘤技術(shù)即可產(chǎn)生大量完全人源化抗體。如圖是某科研機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)方案。請回答： （1）此處基因敲除技術(shù)的受體細(xì)胞不是小鼠的受精卵，而是小鼠的_細(xì)胞，經(jīng)技術(shù)處理后的該細(xì)胞，再重新植入小鼠脾臟中增殖。（2）小鼠B淋巴細(xì)胞用B表示，小鼠骨髓瘤細(xì)胞用A表示，在培養(yǎng)液中，用滅活的動物病毒作促融劑，培養(yǎng)液中共有_種類型的融合細(xì)胞（只考慮兩兩融合）（3）第一次篩選是選出_型的細(xì)胞（用字母組合表示），篩選具體方法是在培養(yǎng)基中加入某種物質(zhì)，抑制骨髓瘤細(xì)胞DNA的復(fù)制，而B細(xì)胞DNA復(fù)制雖不受影響，但增殖能力很有限，只有雜交瘤細(xì)胞可以借助B細(xì)胞DNA復(fù)制的途徑，繼續(xù)增殖。此種培養(yǎng)基稱為_培養(yǎng)基。（4）將能產(chǎn)生抗H7N9病毒的雜交瘤細(xì)胞在動物培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，其培養(yǎng)液與植物組織培養(yǎng)的MS培養(yǎng)基相比，特有成分是_。（5）利用上述技術(shù)生產(chǎn)的單克隆抗體可制作成診斷盒，用于準(zhǔn)確、快速診斷H7N9禽流感病毒的感染者，這種診斷運(yùn)用了_雜交技術(shù)。（6）有人設(shè)想，能否利用經(jīng)H7N9病毒免疫后的小鼠效應(yīng)T細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，形成雜交瘤細(xì)胞，大量生產(chǎn)單克隆干擾素，用于H7N9禽流感患者的有效治療。你覺得該方法_（填“可行”或“不可行”），因?yàn)開。 11（2018·江蘇卷）如圖為細(xì)胞融合的示意圖，下列敘述正確的是 A若a細(xì)胞和b細(xì)胞是植物細(xì)胞，需先去分化再誘導(dǎo)融合Ba細(xì)胞和b細(xì)胞之間的融合需要促融處理后才能實(shí)現(xiàn)Cc細(xì)胞的形成與a、b細(xì)胞膜的流動性都有關(guān)Dc細(xì)胞將同時(shí)表達(dá)a細(xì)胞和b細(xì)胞中的所有基因12（2017·江蘇卷）牛雄性胚胎中存在特異性H-Y 抗原，可在牛早期胚胎培養(yǎng)液中添加H-Y 單克隆抗體，篩選胚胎進(jìn)行移植，以利用乳腺生物反應(yīng)器進(jìn)行生物制藥。下列相關(guān)敘述正確的是AH-Y 單克隆抗體由骨髓瘤細(xì)胞分泌B應(yīng)選用原腸胚做雌雄鑒別C鑒別后的雄性胚胎可直接做胚胎移植D用H-Y 抗原免疫母?？色@得相應(yīng)抗體 1【答案】D 2【答案】D【解析】單克隆抗體是由單個(gè)的雜交瘤細(xì)胞經(jīng)過增殖而形成的遺傳信息相同的大量細(xì)胞產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體，所以用純化的核衣殼蛋白反復(fù)注射到小鼠體內(nèi)，產(chǎn)生的血清抗體不屬于單克隆抗體，A錯(cuò)誤；漿細(xì)胞不能增殖，體外培養(yǎng)單個(gè)漿細(xì)胞不能獲得大量針對SARS病毒的單克隆抗體，B錯(cuò)誤；將等量漿細(xì)胞和骨髄瘤細(xì)胞混合，經(jīng)PEG誘導(dǎo)融合后的細(xì)胞中，只有漿細(xì)胞和骨髄瘤細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞才屬于雜交瘤細(xì)胞，C錯(cuò)誤；利用該單克隆抗體能夠與抗原特異性結(jié)合的原理，可診斷出SARS病毒的感染者，D正確。3【答案】B 4【答案】C【解析】制備抗A的單克隆抗體，必須先獲得能產(chǎn)生抗A的B淋巴細(xì)胞，則需要將抗原A注入小白兔體內(nèi)從而獲得已免疫的B淋巴細(xì)胞，A正確。由于第五次免疫后Y小白兔的血清抗體的效價(jià)最高，因此最適合用于制備B淋巴細(xì)胞，B正確。骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞的融合可以采用物理法（離心、電激）、化學(xué)法（聚乙二醇）或滅活的病毒進(jìn)行促融，C錯(cuò)誤。融合細(xì)胞需經(jīng)兩次篩選才可獲得只分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞，第一次是篩選出雜交瘤細(xì)胞(用選擇培養(yǎng)基)，第二次是進(jìn)一步篩選出能產(chǎn)生抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞，D正確。5【答案】A 【解析】已免疫的B淋巴細(xì)胞可以從小鼠的脾臟中提取，也可以從血漿中提取，骨髓瘤細(xì)胞是從小鼠的骨髓中提取的。單克隆抗體是利用已免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成的雜交瘤細(xì)胞得到的，融合方法可以用化學(xué)方法聚乙二醇，生物方法滅活的病毒等。如果要篩選能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群，可以通過檢測抗原抗體反應(yīng)，如果有反應(yīng)說明產(chǎn)生了抗體。融合細(xì)胞具有雙親的特點(diǎn)，既能無限增殖又能產(chǎn)生單一抗體。6【答案】D【解析】是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的效應(yīng)B細(xì)胞，參與體液免疫，A錯(cuò)誤；在動物細(xì)胞融合的過程中，利用細(xì)胞膜的流動性，B錯(cuò)誤；效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，只考慮兩兩融合會有三種結(jié)果：雜交瘤細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞、B細(xì)胞自身融合細(xì)胞等，只有雜交瘤細(xì)胞既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體，C錯(cuò)誤；過程表示用抗體陽性檢測，篩選出能分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，D正確。7【答案】D 【解析】過程注射相應(yīng)抗原后應(yīng)經(jīng)過一段時(shí)間，使小鼠產(chǎn)生漿細(xì)胞，再從小鼠脾臟中提取細(xì)胞甲，A項(xiàng)錯(cuò)誤；過程誘導(dǎo)細(xì)胞融合，利用了細(xì)胞膜的流動性，B項(xiàng)錯(cuò)誤；過程篩選雜交瘤細(xì)胞，過程篩選能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞，二者方法不同，C項(xiàng)錯(cuò)誤；過程無論在體內(nèi)還是體外進(jìn)行，細(xì)胞丁都可大量增殖，D項(xiàng)正確。8【答案】B 9（1）流動性 聚乙二醇(或滅活病毒) 具有無限增殖能力，能產(chǎn)生特異性抗體（2）動物細(xì)胞培養(yǎng)用的是液體培養(yǎng)基，且其中含有動物血清（3）抗原與抗體之間結(jié)合的高度特異性（4）動物細(xì)胞融合 動物細(xì)胞培養(yǎng)【解析】（1）淋巴細(xì)胞能與骨髓瘤細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞，兩種細(xì)胞膜也能“融合”在一起，說明細(xì)胞膜具有一定的流動性；常用聚乙二醇或滅活病毒作為誘導(dǎo)劑，該雜交細(xì)胞的特點(diǎn)是具有無限增殖能力，能產(chǎn)生特異性抗體。（2）動物細(xì)胞培養(yǎng)用的是液體培養(yǎng)基，且其中含有動物血清；植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，而且含有生長素和細(xì)胞分裂素。（3）單克隆抗體注入體內(nèi)后可以自動追蹤抗原并與之結(jié)合，而絕不攻擊任何正常細(xì)胞，故稱為“生物導(dǎo)彈”，這是利用了抗原與抗體之間結(jié)合的高度特異性。（4）在單克隆抗體制備過程中，應(yīng)用了細(xì)胞工程中的動物細(xì)胞融合和動物細(xì)胞培養(yǎng)兩大技術(shù)。10【答案】（1）B淋巴（2）3（3）AB 選擇（4）動物血清或血漿（5）抗原抗體（6）不可行 骨髓瘤細(xì)胞是效應(yīng)T細(xì)胞要攻擊殺死的靶細(xì)胞，兩者不可能融合成雜交瘤細(xì)胞【解析】（1）此處基因敲除技術(shù)的受體細(xì)胞不是小鼠的受精卵，而是小鼠的B淋巴細(xì)胞細(xì)胞，因?yàn)锽淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體。（2）在誘導(dǎo)細(xì)胞融合時(shí)，若考慮兩兩融合，則有AA、BB和AB三類細(xì)胞，而在制備單克隆抗體的制備過程中需要異種細(xì)胞核融合的細(xì)胞，所以需要選擇培養(yǎng)基的篩選才能獲得所需要的雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞既能無限增殖又能產(chǎn)生專一抗體。（3）第一次篩選是選出AB型的細(xì)胞（用字母組合表示），篩選具體方法是在培養(yǎng)基中加入某種物質(zhì)，抑制骨髓瘤細(xì)胞DNA的復(fù)制，而B細(xì)胞DNA復(fù)制雖不受影響，但增殖能力很有限，只有雜交瘤細(xì)胞可以借助B細(xì)胞DNA復(fù)制的途徑，繼續(xù)增殖。此種培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。（4）將能產(chǎn)生抗H7N9病毒的雜交瘤細(xì)胞在動物培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，其培養(yǎng)液與植物組織培養(yǎng)的MS培養(yǎng)基相比，特有成分是動物血清或血漿。（5）利用上述技術(shù)生產(chǎn)的單克隆抗體可制作成診斷盒，用于準(zhǔn)確、快速診斷H7N9禽流感病毒的感染者，這種診斷運(yùn)用了抗體抗原雜交技術(shù)。（6）由于骨髓瘤細(xì)胞是效應(yīng)T細(xì)胞要攻擊殺死的靶細(xì)胞，兩者不可能融合成雜交瘤細(xì)胞，所以不能利用經(jīng)H7N9病毒免疫后的小鼠效應(yīng)T細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，形成雜交瘤細(xì)胞。11【答案】BC 12【答案】D【解析】單克隆抗體由雜交瘤細(xì)胞分泌，A錯(cuò)誤；做雌雄性別鑒別應(yīng)選擇囊胚期的滋養(yǎng)層細(xì)胞，B錯(cuò)誤；由于是利用乳腺生物反應(yīng)器進(jìn)行生物制藥，則鑒別后的雌性胚胎可直接做胚胎移植，雄性胚胎沒有意義，C錯(cuò)誤；H-Y抗原免疫母牛，使其體內(nèi)產(chǎn)生體液免疫，產(chǎn)生相應(yīng)的漿細(xì)胞，獲得相應(yīng)抗體，D正確。 11