第一講基因工程和細(xì)胞工程考綱要求1基因工程的誕生()2.基因工程的原理及技術(shù)(含PCR技術(shù))()3.基因工程的應(yīng)用()4.蛋白質(zhì)工程()5植物的組織培養(yǎng)()6.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克隆()7.細(xì)胞融合與單克隆抗體()知識(shí)主干·系統(tǒng)聯(lián)網(wǎng)理基礎(chǔ)建網(wǎng)絡(luò)回扣關(guān)鍵知識(shí)授課提示：對(duì)應(yīng)學(xué)生用書(shū)第97頁(yè)高考必背記一記1基因工程的核心知識(shí)點(diǎn)(1)要求用同一種限制酶切割質(zhì)粒和含有目的基因的片段。其實(shí)也可以用不同限制酶切割，只要二者切割后產(chǎn)生相同黏性末端即可。(2)基因工程是否成功表現(xiàn)在目的基因是否成功表達(dá)，不能將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞當(dāng)作基因工程成功的標(biāo)志。(3)啟動(dòng)子不是起始密碼子，終止子不是終止密碼子。啟動(dòng)子和終止子位于DNA分子上，其作用和轉(zhuǎn)錄有關(guān)，起始密碼子和終止密碼子位于mRNA上，其作用與翻譯有關(guān)。(4)界定基因治療與基因診斷基因治療：將正?；?qū)胗谢蛉毕莸募?xì)胞中，使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能，以達(dá)到治療的目的其原理為“基因重組”及“基因表達(dá)”。基因診斷：制作特定DNA探針與病人樣品DNA混合，分析雜交帶情況其原理為“DNA分子雜交”。2轉(zhuǎn)基因植物的培育涉及的生物工程有基因工程、植物組織培養(yǎng)(植物細(xì)胞工程)；轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的培育涉及的生物工程有基因工程、動(dòng)物細(xì)胞工程、胚胎移植。易混易錯(cuò)判一判1判斷下列有關(guān)基因工程敘述的正誤(1)借助抗生素抗性基因可將含胰島素基因的受體細(xì)胞篩選出來(lái)。(2015·重慶卷)()(2)啟動(dòng)子和終止密碼子均在胰島素基因的轉(zhuǎn)錄中起作用。(2015·重慶卷)(×)(3)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉植株抗蟲(chóng)效果的鑒定必須通過(guò)分子檢測(cè)。(×)(4)重組質(zhì)粒與探針能進(jìn)行分子雜交是因?yàn)镈NA分子脫氧核糖和磷酸交替連接。(×)2判斷下列關(guān)于細(xì)胞工程敘述的正誤(1)細(xì)胞核移植主要在同種動(dòng)物、同種組織的細(xì)胞之間進(jìn)行。(2015·江蘇卷)(×)(2)乳腺細(xì)胞比乳腺癌細(xì)胞更容易進(jìn)行離體培養(yǎng)。(2015·江蘇卷)(×)(3)PEG是促細(xì)胞融合劑，可直接誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合。(2016·江蘇卷)(×)(4)用原生質(zhì)體制備人工種子，要防止細(xì)胞破裂。(2016·江蘇卷)(×)高頻考點(diǎn)·融會(huì)貫通析考點(diǎn)做題組攻破熱點(diǎn)難點(diǎn)授課提示：對(duì)應(yīng)學(xué)生用書(shū)第98頁(yè)考點(diǎn)一基因工程真題試做·明考向1(2018·高考全國(guó)卷)回答下列問(wèn)題：(1)博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá)。該研究除證明了質(zhì)?？梢宰鳛檩d體外，還證明了_(答出兩點(diǎn)即可)。(2)體外重組的質(zhì)?？赏ㄟ^(guò)Ca2參與的_方法導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞；而體外重組的噬菌體DNA通常需與_組裝成完整噬菌體后，才能通過(guò)侵染的方法將重組的噬菌體DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞。在細(xì)菌、心肌細(xì)胞、葉肉細(xì)胞中，可作為重組噬菌體宿主細(xì)胞的是_。(3)真核生物基因(目的基因)在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，表達(dá)出的蛋白質(zhì)可能會(huì)被降解。為防止蛋白質(zhì)被降解，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用_的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，在蛋白質(zhì)純化的過(guò)程中應(yīng)添加_的抑制劑。解析：(1)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌中，該過(guò)程利用的技術(shù)是基因工程。該研究除了證明質(zhì)?？勺鳛檩d體外，還證明了體外重組的質(zhì)?？梢赃M(jìn)入受體細(xì)胞，真核生物基因可在原核細(xì)胞中表達(dá)等。(2)重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞可采用Ca2參與的轉(zhuǎn)化方法；體外重組噬菌體要通過(guò)將體外重組的噬菌體DNA和外殼蛋白(或噬菌體蛋白)進(jìn)行組裝獲得；因?yàn)槭删w是專(zhuān)門(mén)寄生在細(xì)菌中的病毒，所以宿主細(xì)胞選用細(xì)菌。(3)為防止蛋白質(zhì)被降解，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用蛋白酶缺陷型的大腸桿菌作為受體細(xì)胞；在蛋白質(zhì)純化過(guò)程中，為防止目的蛋白質(zhì)被降解，需要添加蛋白酶的抑制劑。答案：(1)體外重組的質(zhì)?？梢赃M(jìn)入受體細(xì)胞；真核生物基因可在原核細(xì)胞中表達(dá)(2)轉(zhuǎn)化外殼蛋白(或答噬菌體蛋白)細(xì)菌(3)蛋白酶缺陷型蛋白酶2(2017·高考全國(guó)卷)真核生物基因中通常有內(nèi)含子，而原核生物基因中沒(méi)有，原核生物沒(méi)有真核生物所具有的切除內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的RNA序列的機(jī)制。已知在人體中基因A(有內(nèi)含子)可以表達(dá)出某種特定蛋白(簡(jiǎn)稱(chēng)蛋白A)?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)某同學(xué)從人的基因組文庫(kù)中獲得了基因A，以大腸桿菌作為受體細(xì)胞卻未得到蛋白A，其原因是_。(2)若用家蠶作為表達(dá)基因A的受體，在噬菌體和昆蟲(chóng)病毒兩種載體中，不選用_作為載體，其原因是_。(3)若要高效地獲得蛋白A，可選用大腸桿菌作為受體。因?yàn)榕c家蠶相比，大腸桿菌具有_(答出兩點(diǎn)即可)等優(yōu)點(diǎn)。(4)若要檢測(cè)基因A是否翻譯出蛋白A，可用的檢測(cè)物質(zhì)是_(填“蛋白A的基因”或“蛋白A的抗體”)。(5)艾弗里等人的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)為證明DNA是遺傳物質(zhì)做出了重要貢獻(xiàn)，也可以說(shuō)是基因工程的先導(dǎo)，如果說(shuō)他們的工作為基因工程理論的建立提供了啟示，那么，這一啟示是_。解析：(1)人是真核生物，從人的基因組文庫(kù)中獲得的基因A有內(nèi)含子，而受體細(xì)胞大腸桿菌是原核生物，原核生物基因中沒(méi)有內(nèi)含子，相應(yīng)的就沒(méi)有切除內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的RNA序列的機(jī)制，故無(wú)法表達(dá)出蛋白A。(2)噬菌體是專(zhuān)一性侵染細(xì)菌的病毒，以細(xì)菌為宿主細(xì)胞，而昆蟲(chóng)病毒侵染的是昆蟲(chóng)，以昆蟲(chóng)為宿主細(xì)胞。家蠶屬于昆蟲(chóng)，故應(yīng)選用昆蟲(chóng)病毒作為載體。(3)與家蠶相比，大腸桿菌具有繁殖快、容易培養(yǎng)等優(yōu)點(diǎn)，故要高效地獲得蛋白A，可選用大腸桿菌作為受體。(4)檢測(cè)基因A是否翻譯出蛋白A，可用抗原抗體雜交法。(5)艾弗里等人的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中，S型細(xì)菌的DNA可以使R型細(xì)菌發(fā)生轉(zhuǎn)化，說(shuō)明可調(diào)控多糖莢膜產(chǎn)生的基因整合到了R型細(xì)菌的DNA分子中并成功得以表達(dá)。也就是說(shuō)DNA可以從一種生物個(gè)體轉(zhuǎn)移到另一種生物個(gè)體并進(jìn)行表達(dá)，這為基因工程理論的建立提供了啟示。答案：(1)基因A有內(nèi)含子，在大腸桿菌中，其初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中與內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的RNA序列不能被切除，無(wú)法表達(dá)出蛋白A(2)噬菌體噬菌體的宿主是細(xì)菌，而不是家蠶(3)繁殖快、容易培養(yǎng)(4)蛋白A的抗體(5)DNA可以從一種生物個(gè)體轉(zhuǎn)移到另一種生物個(gè)體3.(2017·高考全國(guó)卷)幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)在進(jìn)行基因工程操作時(shí)，若要從植物體中提取幾丁質(zhì)酶的mRNA，常選用嫩葉而不選用老葉作為實(shí)驗(yàn)材料，原因是_。提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是_。(2)以mRNA為材料可以獲得cDNA，其原理是_。(3)若要使目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，需要通過(guò)質(zhì)粒載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，原因是_(答出兩點(diǎn)即可)。(4)當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是_。(5)若獲得的轉(zhuǎn)基因植株(幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是_。解析：(1)在進(jìn)行基因工程操作時(shí)，若要從植物體中提取幾丁質(zhì)酶的mRNA，常選用嫩葉而不選用老葉作為實(shí)驗(yàn)材料，原因是相對(duì)于老葉而言嫩葉組織細(xì)胞更容易被破碎。提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是防止RNA降解。(2)以mRNA為材料獲得cDNA的原理是在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以mRNA為模板按照堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則可以合成cDNA。(3)若要使目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，需要通過(guò)質(zhì)粒載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，原因是目的基因無(wú)復(fù)制原點(diǎn)且目的基因無(wú)表達(dá)所需啟動(dòng)子。(4)DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是磷酸二酯鍵。(5)若獲得的轉(zhuǎn)基因植株不具備所期望的性狀表現(xiàn)，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是目的基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯異常。答案：(1)嫩葉組織細(xì)胞易破碎防止RNA降解(2)在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以mRNA為模板按照堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則可以合成cDNA(3)目的基因無(wú)復(fù)制原點(diǎn)；目的基因無(wú)表達(dá)所需啟動(dòng)子(4)磷酸二酯鍵(5)目的基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯異常4(2017·高考全國(guó)卷)編碼蛋白甲的DNA序列(序列甲)由A、B、C、D、E五個(gè)片段組成，編碼蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段組成，如圖1所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)現(xiàn)要通過(guò)基因工程的方法獲得蛋白乙，若在啟動(dòng)子的下游直接接上編碼蛋白乙的DNA序列(TTCGCTTCTCAGGAAGGA)，則所構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后不能翻譯出蛋白乙，原因是_。(2)某同學(xué)在用PCR技術(shù)獲取DNA片段B或D的過(guò)程中，在PCR反應(yīng)體系中加入了DNA聚合酶、引物等，還加入了序列甲作為_(kāi)，加入了_作為合成DNA的原料。(3)現(xiàn)通過(guò)基因工程方法獲得了甲、乙、丙三種蛋白，要鑒定這三種蛋白是否具有刺激T淋巴細(xì)胞增殖的作用，某同學(xué)做了如下實(shí)驗(yàn)：將一定量的含T淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)液平均分成四組，其中三組分別加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一組作為對(duì)照，培養(yǎng)并定期檢測(cè)T淋巴細(xì)胞濃度，結(jié)果如圖2。由圖2可知：當(dāng)細(xì)胞濃度達(dá)到a時(shí)，添加蛋白乙的培養(yǎng)液中T淋巴細(xì)胞濃度不再增加，此時(shí)若要使T淋巴細(xì)胞繼續(xù)增殖，可采用的方法是_。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)箱中通常要維持一定的CO2濃度，CO2的作用是_。僅根據(jù)圖1、圖2可知，上述甲、乙、丙三種蛋白中，若缺少_(填“A”“B”“C”“D”或“E”)片段所編碼的肽段，則會(huì)降低其刺激T淋巴細(xì)胞增殖的效果。解析：(1)若在啟動(dòng)子的下游直接接上編碼蛋白乙的DNA序列(TTCGCTTCTCAGGAAGGA)，則轉(zhuǎn)錄出的mRNA上缺少起始密碼子，故不能翻譯出蛋白乙。(2)使用PCR技術(shù)獲取DNA片段時(shí)，應(yīng)在PCR反應(yīng)體系中添加引物、耐高溫的DNA聚合酶、模板、dNTP作為原料。(3)T淋巴細(xì)胞濃度之所以不再增加，是因?yàn)榧?xì)胞間出現(xiàn)接觸抑制，因此若要使T淋巴細(xì)胞繼續(xù)增殖，需要對(duì)貼滿(mǎn)瓶壁的細(xì)胞使用胰蛋白酶處理，然后分瓶培養(yǎng)，即細(xì)胞傳代培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)箱中通常要維持一定的CO2濃度，以維持培養(yǎng)液的pH。據(jù)圖分析，蛋白丙與對(duì)照接近說(shuō)明B、D片段對(duì)于T淋巴細(xì)胞增殖不是非常重要，蛋白甲和乙對(duì)T淋巴細(xì)胞的增殖都有較大影響，甲、乙兩種蛋白中共同的片段是C，所以缺少C片段會(huì)降低其刺激T淋巴細(xì)胞增殖的效果。答案：(1)編碼乙的DNA序列起始端無(wú)ATG，轉(zhuǎn)錄出的mRNA無(wú)起始密碼子(2)模板dNTP(3)進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)維持培養(yǎng)液的pHC融會(huì)貫通·析考點(diǎn)1比較記憶基因工程的三種工具限制酶DNA連接酶載體作用切割目的基因和載體拼接DNA片段，形成重組DNA攜帶目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞作用部位兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵作用特點(diǎn)(條件)識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列在特定位點(diǎn)切割E·coliDNA連接酶只能連接黏性末端T4DNA連接酶能連接黏性末端和平末端能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在并大量復(fù)制有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)具有特殊的標(biāo)記基因2.熟記基因工程的四個(gè)操作步驟(1)目的基因“三種獲取方法”從基因文庫(kù)中獲取(基因組文庫(kù)、cDNA文庫(kù))；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增：其實(shí)質(zhì)是在體外對(duì)目的基因進(jìn)行大量復(fù)制。用PCR儀控制溫度：變性(9095)復(fù)性(5560)延伸(7075)；通過(guò)DNA合成儀用化學(xué)方法人工合成(用于核苷酸序列已知，且核苷酸數(shù)目較少的基因)、利用mRNA反轉(zhuǎn)錄法合成。(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因工程操作的核心基因表達(dá)載體的組成構(gòu)建過(guò)程(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞生物種類(lèi)植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法等顯微注射技術(shù)感受態(tài)細(xì)胞法(Ca2處理法)受體細(xì)胞體細(xì)胞受精卵原核細(xì)胞(4)目的基因的檢測(cè)與鑒定的“兩個(gè)水平”3PCR技術(shù)(1)原理：DNA復(fù)制，即：(2)PCR反應(yīng)過(guò)程過(guò)程說(shuō)明圖解變性當(dāng)溫度上升到90以上時(shí)，雙鏈DNA解聚為單鏈復(fù)性溫度下降到50左右，兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合延伸72左右時(shí)，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新鏈由5端向3端延伸(3)結(jié)果：上述三步反應(yīng)完成后，一個(gè)DNA分子就變成了兩個(gè)DNA分子，隨著重復(fù)次數(shù)的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反應(yīng)過(guò)程都是在PCR擴(kuò)增儀中完成的。4圖解記憶蛋白質(zhì)工程方法技巧·會(huì)應(yīng)用1限制酶及其切點(diǎn)的分析(1)一個(gè)至多個(gè)限制酶切點(diǎn)：作為載體必須具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接。(2)每種酶一個(gè)切點(diǎn)：每種酶的切點(diǎn)最好只有一個(gè)。因?yàn)槊糠N限制酶只能識(shí)別單一切點(diǎn)，若載體上有一個(gè)以上的該酶切點(diǎn)，則切割重組后可能丟失某些片段，若丟失的片段含復(fù)制原點(diǎn)區(qū)，則進(jìn)入受體細(xì)胞后便不能自主復(fù)制。一個(gè)載體若只有某種限制酶的一個(gè)切點(diǎn)，則酶切后既能把環(huán)打開(kāi)接納外源DNA片段，又不會(huì)丟失自己的片段。2DNA的粗提取與鑒定的方法步驟鞏固提升·練題組題組一基因工程的工具及操作程序的考查5(2018·廣東深圳調(diào)研)葉綠體轉(zhuǎn)基因技術(shù)是將外源基因整合到葉綠體基因組中，該技術(shù)能有效改良植物的品質(zhì)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的核心步驟是_，完成該步驟所需要的酶有_。(2)將植物體細(xì)胞處理得到原生質(zhì)體，再通過(guò)_或_法，將目的基因?qū)朐|(zhì)體，使原生質(zhì)體再生細(xì)胞壁之后，通過(guò)_技術(shù)培養(yǎng)可得到相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因幼苗。(3)來(lái)自原核生物中有重要價(jià)值的外源基因，無(wú)需改造和修飾就可在葉綠體中高效表達(dá)，據(jù)此分析，原因是_。(4)對(duì)大多數(shù)高等植物而言，與傳統(tǒng)的細(xì)胞核轉(zhuǎn)基因相比，葉綠體轉(zhuǎn)基因更穩(wěn)定，其遺傳方式_(填“遵循”或“不遵循”)孟德?tīng)柗蛛x定律，不會(huì)隨_(填“花粉”或“卵細(xì)胞”)傳給后代，從而保持了_(填“父本”或“母本”)的遺傳特性。解析：(1)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的操作分四步：獲取目的基因，構(gòu)建基因表達(dá)載體，將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，目的基因的檢測(cè)和鑒定，其中構(gòu)建基因表達(dá)載體是核心步驟，需要用到限制酶和DNA連接酶。(2)將目的基因?qū)朐|(zhì)體，可以用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法。原生質(zhì)體再生細(xì)胞壁之后，通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)可得到相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因幼苗。(3)外源基因無(wú)需改造和修飾就可在葉綠體中高效表達(dá)，原因是葉綠體DNA與原核生物DNA結(jié)構(gòu)類(lèi)似。(4)葉綠體轉(zhuǎn)基因?qū)儆诩?xì)胞質(zhì)基因，不遵循孟德?tīng)柗蛛x定律，受精卵的細(xì)胞質(zhì)幾乎全部來(lái)自于卵細(xì)胞，所以葉綠體轉(zhuǎn)基因不會(huì)隨花粉傳給后代，從而保持了母本的遺傳特性。答案：(1)構(gòu)建基因表達(dá)載體限制酶和DNA連接酶(2)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍植物組織培養(yǎng)(3)葉綠體DNA與原核生物DNA結(jié)構(gòu)類(lèi)似(4)不遵循花粉母本6(2018·高考全國(guó)卷)某種熒光蛋白(GFP)在紫外光或藍(lán)光激發(fā)下會(huì)發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測(cè)細(xì)胞中目的基因的表達(dá)。某科研團(tuán)隊(duì)將某種病毒的外殼蛋白(L1)基因連接在GFP基因的5末端，獲得了L1­GFP融合基因(簡(jiǎn)稱(chēng)為甲)，并將其插入質(zhì)粒P0，構(gòu)建了真核表達(dá)載體P1，其部分結(jié)構(gòu)和酶切位點(diǎn)的示意圖如下，圖中E1E4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)據(jù)圖推斷，該團(tuán)隊(duì)在將甲插入質(zhì)粒P0時(shí)，使用了兩種限制酶，這兩種酶是_。使用這兩種酶進(jìn)行酶切是為了保證_，也是為了保證_。(2)將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細(xì)胞后，若在該細(xì)胞中觀(guān)察到了綠色熒光，則說(shuō)明L1基因在牛的皮膚細(xì)胞中完成了_和_過(guò)程。(3)為了獲得含有甲的牛，該團(tuán)隊(duì)需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細(xì)胞的_移入牛的_中、體外培養(yǎng)、胚胎移植等。(4)為了檢測(cè)甲是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，某同學(xué)用PCR方法進(jìn)行鑒定，在鑒定時(shí)應(yīng)分別以該牛不同組織細(xì)胞中的_(填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”)作為PCR模板。解析：(1)由題意可知，L1基因和GFP基因合成了L1­GFP融合基因(簡(jiǎn)稱(chēng)為甲)，題圖中顯示了四個(gè)酶切位點(diǎn)，當(dāng)將L1­GFP融合基因插入質(zhì)粒P0時(shí)，可用E1和E4限制酶進(jìn)行酶切，用這兩種酶進(jìn)行酶切不會(huì)破壞甲的完整性，同時(shí)能保證甲按照正確的方向與載體連接。(2)若在牛皮膚細(xì)胞中觀(guān)察到了綠色熒光，則說(shuō)明L1­GFP融合基因得到表達(dá)，即目的基因在受體細(xì)胞中通過(guò)轉(zhuǎn)錄和翻譯合成了熒光蛋白。(3)為了獲得含有甲的牛，可將含有目的基因的細(xì)胞的細(xì)胞核移入牛的去核卵母細(xì)胞中，然后進(jìn)行體外培養(yǎng)、胚胎移植等。(4)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，可以檢測(cè)目的基因是否存在。PCR擴(kuò)增的模板是DNA。答案：(1)E1和E4甲的完整甲與載體正確連接(2)轉(zhuǎn)錄翻譯(3)細(xì)胞核去核卵母細(xì)胞(4)核DNA題組二基因工程的應(yīng)用及蛋白質(zhì)工程的考查7近年興起的CRISPR­Cas技術(shù)被用于預(yù)防和治療多種人類(lèi)遺傳病。該技術(shù)的核心是一段具有特定序列的RNA(CRISPRRNA)及與該RNA結(jié)合在一起的Cas蛋白?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)治療人類(lèi)遺傳病最有效的手段是基因治療，通常又分為_(kāi)和_兩種類(lèi)型。(2)用該技術(shù)治療遺傳病的基本過(guò)程是：根據(jù)遺傳病致病基因的序列設(shè)計(jì)一段RNA(即CRISPRRNA)，將該RNA與Cas蛋白結(jié)合形成復(fù)合體，并導(dǎo)入患者細(xì)胞中，導(dǎo)入方法與外源基因?qū)肴梭w細(xì)胞相似，可采用_法；進(jìn)入細(xì)胞后的復(fù)合體在RNA的指引下按照_原則準(zhǔn)確地結(jié)合在致病基因部位，而Cas蛋白則對(duì)致病基因進(jìn)行切割。由此可見(jiàn)，Cas蛋白應(yīng)該是一種_酶。(3)對(duì)于患遺傳病的個(gè)體來(lái)說(shuō)，不可能對(duì)每個(gè)細(xì)胞都注射該復(fù)合體，因此，研究人員選用_為運(yùn)載體，從而使復(fù)合體在運(yùn)載體的協(xié)助下能夠大量主動(dòng)進(jìn)入人體細(xì)胞，但在使用前需要對(duì)運(yùn)載體進(jìn)行_處理，以保證其安全性。該運(yùn)載體進(jìn)入人體細(xì)胞的方式通常是_。解析：(1)基因治療分為體內(nèi)基因治療和體外基因治療兩種類(lèi)型。(2)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；進(jìn)入細(xì)胞后的復(fù)合體在RNA的指引下按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則準(zhǔn)確地結(jié)合在致病基因部位；Cas蛋白可對(duì)致病基因進(jìn)行切割，由此可見(jiàn)，Cas蛋白應(yīng)該是一種限制性核酸內(nèi)切酶。(3)利用動(dòng)物病毒侵染動(dòng)物細(xì)胞的特性，可選用動(dòng)物病毒作為運(yùn)載體，從而使復(fù)合體在運(yùn)載體的協(xié)助下能夠大量主動(dòng)進(jìn)入人體細(xì)胞，但在使用前需要對(duì)運(yùn)載體進(jìn)行滅毒(或減毒)處理，以保證其安全性。該運(yùn)載體進(jìn)入人體細(xì)胞的方式通常是胞吞。答案：(1)體內(nèi)基因治療體外基因治療(2)顯微注射堿基互補(bǔ)配對(duì)限制性核酸內(nèi)切(3)動(dòng)物病毒滅毒(或減毒)胞吞8科學(xué)家通過(guò)利用PCR定點(diǎn)突變技術(shù)改造Rubisco酶基因，提高了光合作用過(guò)程中Rubisco酶對(duì)CO2的親和力，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)PCR過(guò)程所依據(jù)的原理是_，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成_；擴(kuò)增過(guò)程需要加入_酶。(2)啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，其作用是_。目的基因能在不同生物體內(nèi)正常表達(dá)原來(lái)的蛋白質(zhì)，說(shuō)明整個(gè)生物界_。PCR定點(diǎn)突變技術(shù)屬于_的范疇。(3)可利用定點(diǎn)突變的DNA構(gòu)建基因表達(dá)載體。常用_將基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞，還需用到植物細(xì)胞工程中的_技術(shù)，來(lái)最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。解析：(1)PCR依據(jù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制，在用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因前要依據(jù)一段已知目的基因的脫氧核苷酸序列合成引物；擴(kuò)增過(guò)程需要加入耐高溫的DNA聚合(或TaqDNA聚合)酶。(2)啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合部位，可驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA；因生物界共用一套遺傳密碼，所以目的基因可以在不同細(xì)胞內(nèi)表達(dá)合成相同蛋白質(zhì)。(3)常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞，借助于植物組織培養(yǎng)技術(shù)，獲得轉(zhuǎn)基因植物。答案：(1)DNA雙鏈復(fù)制引物耐高溫的DNA聚合(或TaqDNA聚合)(2)RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合部位，可驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA共用一套密碼子蛋白質(zhì)工程(3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法植物組織培養(yǎng)考點(diǎn)二細(xì)胞工程真題試做·明考向1(2018·高考全國(guó)卷)2018年細(xì)胞期刊報(bào)道，中國(guó)科學(xué)家率先成功地應(yīng)用體細(xì)胞對(duì)非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物進(jìn)行克隆，獲得兩只克隆猴“中中”和“華華”?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)“中中”和“華華”的獲得涉及核移植過(guò)程，核移植是指_。通過(guò)核移植方法獲得的克隆猴，與核供體相比，克隆猴體細(xì)胞的染色體數(shù)目_(填“減半”“加倍”或“不變”)。(2)哺乳動(dòng)物的核移植可以分為胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植，胚胎細(xì)胞核移植獲得克隆動(dòng)物的難度_(填“大于”或“小于”)體細(xì)胞核移植，其原因是_。(3)在哺乳動(dòng)物核移植的過(guò)程中，若分別以雌性個(gè)體和雄性個(gè)體的體細(xì)胞作為核供體，通常，所得到的兩個(gè)克隆動(dòng)物體細(xì)胞的常染色體數(shù)目_(填“相同”或“不同”)，性染色體組合_(填“相同”或“不同”)。解析：(1)核移植是指將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞核，移入一個(gè)已去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，形成重組細(xì)胞。重組細(xì)胞形成的早期胚胎可移植到受體子宮內(nèi)進(jìn)一步發(fā)育，最終分娩得到克隆動(dòng)物。因?yàn)槿旧w在細(xì)胞核中，所以克隆動(dòng)物體細(xì)胞的染色體數(shù)目與提供細(xì)胞核的個(gè)體的體細(xì)胞相同。(2)由于動(dòng)物的胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性相對(duì)容易，而動(dòng)物的體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)全能性十分困難，因此，動(dòng)物體細(xì)胞核移植的難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植。(3)哺乳動(dòng)物雌雄個(gè)體的體細(xì)胞中，細(xì)胞核內(nèi)常染色體的數(shù)目是相同的，性染色體組合是不同的。若分別以雌性個(gè)體和雄性個(gè)體的體細(xì)胞作為核供體，則得到的克隆動(dòng)物的體細(xì)胞中常染色體的數(shù)目相同，性染色體組合不同。答案：(1)將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞核，移入一個(gè)已去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中不變(2)小于胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性相對(duì)容易(3)相同不同2(2016·高考全國(guó)卷)如圖表示通過(guò)核移植等技術(shù)獲得某種克隆哺乳動(dòng)物(二倍體)的流程?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)圖中A表示正常細(xì)胞核，染色體數(shù)為2n，則其性染色體的組成可為_(kāi)。過(guò)程表示去除細(xì)胞核，該過(guò)程一般要在卵母細(xì)胞培養(yǎng)至適當(dāng)時(shí)期再進(jìn)行，去核時(shí)常采用_的方法。代表的過(guò)程是_。(2)經(jīng)過(guò)多次傳代后，供體細(xì)胞中_的穩(wěn)定性會(huì)降低。因此，選材時(shí)必須關(guān)注傳代次數(shù)。(3)若獲得的克隆動(dòng)物與供體動(dòng)物性狀不完全相同，從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是_。(4)與克隆羊“多莉(利)”培育成功一樣，其他克隆動(dòng)物的成功獲得也證明了_。解析：(1)核移植技術(shù)中，供體可以是雌性也可以是雄性，因此，A的性染色體組成可為XX或XY；去核的方法是顯微操作，將早期胚胎移入代孕個(gè)體的技術(shù)是胚胎移植。(2)動(dòng)物細(xì)胞傳代培養(yǎng)至1050代時(shí)，部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)(核型)可能會(huì)發(fā)生變化，因此，核移植技術(shù)中的供體細(xì)胞應(yīng)為傳代培養(yǎng)10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞。(3)克隆動(dòng)物的遺傳物質(zhì)來(lái)源于兩個(gè)個(gè)體，其核基因來(lái)自于供體，細(xì)胞質(zhì)基因來(lái)自于受體(卵母細(xì)胞)，細(xì)胞質(zhì)基因也會(huì)影響克隆動(dòng)物的性狀。(4)克隆動(dòng)物的成功獲得證明了動(dòng)物已分化的體細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性。答案：(1)XX或XY顯微操作胚胎移植(2)遺傳物質(zhì)(3)卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的性狀產(chǎn)生影響(4)動(dòng)物已分化體細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性3(2014·高考新課標(biāo)全國(guó)卷)某研究者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測(cè)定各小鼠血清抗體的效價(jià)(能檢測(cè)出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù))，結(jié)果如圖所示。若要制備雜交瘤細(xì)胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞(染色體數(shù)目40條)，并將該細(xì)胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞(染色體數(shù)目60條)按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測(cè)，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)制備融合所需的B淋巴細(xì)胞時(shí)，所用免疫小鼠的血清抗體效價(jià)需達(dá)到16000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過(guò)_次免疫后才能有符合要求的。達(dá)到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細(xì)胞的是_小鼠，理由是_。(2)細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)完成后，融合體系中除含有未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞外，可能還有_，體系中出現(xiàn)多種類(lèi)型細(xì)胞的原因是_。(3)雜交瘤細(xì)胞中有_個(gè)細(xì)胞核，染色體數(shù)目最多是_條。(4)未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是_。解析：(1)由圖可知，要想獲得血清抗體效價(jià)達(dá)到16000以上的小鼠，小鼠至少需要經(jīng)過(guò)4次免疫后才能有符合要求的。達(dá)到要求后的X、Y、Z3只小鼠中，由于Y小鼠的血清抗體效價(jià)最高，顯著高于其他兩只小鼠，因此最適合用于制備B淋巴細(xì)胞。(2)由于細(xì)胞融合是隨機(jī)的，且融合率達(dá)不到100%，不同種類(lèi)的細(xì)胞膜均可以相互融合，因此可出現(xiàn)B淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合、骨髓瘤細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的情況。(3)雜交瘤細(xì)胞形成后，小鼠的免疫B淋巴細(xì)胞核與其骨髓瘤細(xì)胞核會(huì)融合形成一個(gè)細(xì)胞核。小鼠的B淋巴細(xì)胞(染色體數(shù)目40條)和骨髓瘤細(xì)胞(染色體數(shù)目60條)融合后，染色體數(shù)量是兩者之和，即為100條。(4)由于B淋巴細(xì)胞不能無(wú)限增殖，經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后，不可能達(dá)到無(wú)限細(xì)胞系水平，因而都不能存活。答案：(1)4YY小鼠的血清抗體效價(jià)最高(2)B淋巴細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞細(xì)胞融合是隨機(jī)的，且融合率達(dá)不到100%(3)1100(4)細(xì)胞不能無(wú)限增殖融會(huì)貫通·析考點(diǎn)一、植物細(xì)胞工程1理清植物細(xì)胞工程兩大技術(shù)(1)植物組織培養(yǎng)的條件植物組織培養(yǎng)的關(guān)鍵植物激素的使用生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素的比值作用效果比值高時(shí)促進(jìn)根分化、抑制芽形成比值低時(shí)促進(jìn)芽分化、抑制根形成比值適中促進(jìn)愈傷組織形成光照的使用：脫分化階段不需要給予光照，再分化階段需要給予光照，以利于葉綠素的形成。(2)植物體細(xì)胞雜交的關(guān)鍵酶解法用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁。促融劑聚乙二醇。雜種細(xì)胞的形成標(biāo)志新細(xì)胞壁的形成。培養(yǎng)雜種植株的技術(shù)植物組織培養(yǎng)。雜種植株培育成功的原理細(xì)胞具全能性。2有關(guān)植物細(xì)胞工程的關(guān)鍵問(wèn)題(1)植物細(xì)胞A和植物細(xì)胞B雜交獲得的雜種細(xì)胞的類(lèi)型有三種：AA型、BB型、AB型，符合要求的只有AB型，需要進(jìn)行篩選。(2)雜種植株遺傳物質(zhì)的變化：雜種植株的變異類(lèi)型屬于染色體變異，雜種植株的染色體數(shù)通常是兩親本細(xì)胞染色體數(shù)目之和，雜種植株屬于異源多倍體。3辨析3種細(xì)胞雜種細(xì)胞、重組細(xì)胞和雜交細(xì)胞(1)雜種細(xì)胞：植物體細(xì)胞雜交過(guò)程中，兩種細(xì)胞去掉細(xì)胞壁之后形成的原生質(zhì)體融合，融合的原生質(zhì)體出現(xiàn)細(xì)胞壁之后形成的細(xì)胞叫雜種細(xì)胞。(2)重組細(xì)胞：體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到去核卵母細(xì)胞之后形成的細(xì)胞叫重組細(xì)胞。(3)雜交細(xì)胞：動(dòng)物細(xì)胞融合形成的細(xì)胞常稱(chēng)為雜交細(xì)胞。二、動(dòng)物細(xì)胞工程1動(dòng)物細(xì)胞工程條件、酶及措施(1)營(yíng)養(yǎng)條件：加入動(dòng)物血清、血漿等；通入氧氣以滿(mǎn)足代謝的需要；通入二氧化碳以維持培養(yǎng)液的pH。(2)胰蛋白酶的兩次使用：首先用胰蛋白酶處理動(dòng)物的器官或組織，以制備單細(xì)胞懸液；培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生接觸抑制時(shí)，同樣要用胰蛋白酶使細(xì)胞分散開(kāi)。(3)避免雜菌污染的措施：培養(yǎng)液及培養(yǎng)用具滅菌處理，加入一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液。2克隆動(dòng)物培育流程圖克隆動(dòng)物的技術(shù)手段有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、核移植、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植。動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)的關(guān)鍵點(diǎn)：(1)受體細(xì)胞：去核的卵母細(xì)胞。(2)用去核的卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞的原因：營(yíng)養(yǎng)豐富；體積大，易操作；含有刺激細(xì)胞核恢復(fù)分裂能力的物質(zhì)。3動(dòng)物細(xì)胞融合的原理、方法及應(yīng)用(1)原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性。(2)促融方法：滅活的病毒、物理法、化學(xué)法。(3)應(yīng)用：制備單克隆抗體。4理清單克隆抗體制備的過(guò)程(1)3種細(xì)胞特點(diǎn)不同B淋巴細(xì)胞：能分泌抗體，不能大量增殖。骨髓瘤細(xì)胞：能大量增殖，不能分泌抗體。雜交瘤細(xì)胞：既能分泌抗體，又能大量增殖。(2)2次篩選目的不同第1次：獲得能分泌抗體的雜交細(xì)胞。第2次：獲得能分泌所需特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。方法技巧·會(huì)應(yīng)用1植物體細(xì)胞雜交分析(1)植物體細(xì)胞雜交的終點(diǎn)是培育成雜種植株，而不是形成雜種細(xì)胞就結(jié)束。雜種植株具備兩種植物的遺傳特征，原因是雜種植株中含有兩種植物的遺傳物質(zhì)。(2)該技術(shù)在育種上應(yīng)用時(shí)最大的優(yōu)點(diǎn)是能克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。(3)目前還不能讓雜種植物完全按人們的需要去表達(dá)親代的優(yōu)良性狀。2單克隆抗體制備過(guò)程中兩次篩選分析第一次篩選：利用特定選擇培養(yǎng)基篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，即AB型細(xì)胞(A為B細(xì)胞，B為骨髓瘤細(xì)胞)，不需要A、B、AA、BB型細(xì)胞。第二次篩選：利用多孔板法和抗原抗體雜交法篩選，獲得產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。3界定“克隆”動(dòng)物與“試管”動(dòng)物鞏固提升·練題組題組一植物細(xì)胞工程及應(yīng)用的考查4(2018·安徽蕪湖質(zhì)檢)下圖為A、B兩種二倍體植物體細(xì)胞雜交過(guò)程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答：(1)步驟的方法是_。步驟常用的化學(xué)試劑是_，之后_(填“是”或“否”)需要篩選。(2)在利用雜種細(xì)胞培育成為雜種植物的過(guò)程中，運(yùn)用的技術(shù)手段是_，其中步驟是_。植物體細(xì)胞雜交的目的是獲得新的雜種植物，與A、B兩種植物相比，該雜種植物是新物種的原因是_。(3)培育該雜種植物的過(guò)程中，遺傳物質(zhì)的傳遞是否遵循孟德?tīng)栠z傳規(guī)律？為什么？_。解析：(1)圖為植物體細(xì)胞雜交過(guò)程示意圖，其中表示去壁獲取原生質(zhì)體的過(guò)程，常用酶解法，即用纖維素酶和果膠酶處理；表示人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，常用的化學(xué)試劑是聚乙二醇(PEG)，誘導(dǎo)后形成的兩兩融合的原生質(zhì)體有三種，所以需要進(jìn)行篩選。(2)圖中表示再生出新細(xì)胞壁的過(guò)程，雜種細(xì)胞通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育成為雜種植物，過(guò)程表示脫分化，表示再分化過(guò)程。圖中獲得的雜種植物與A、B兩種植物間均存在生殖隔離，所以是新物種。(3)圖示為植物體細(xì)胞雜交過(guò)程，沒(méi)有經(jīng)過(guò)不同配子的結(jié)合，所以不屬于有性生殖，因此該過(guò)程中遺傳物質(zhì)的傳遞不遵循孟德?tīng)栠z傳規(guī)律。答案：(1)酶解法聚乙二醇是(2)植物組織培養(yǎng)技術(shù)脫分化該雜種植株與A、B兩種植物間均存在生殖隔離(3)不遵循，該過(guò)程不屬于有性生殖5(2018·福建廈門(mén)模擬)細(xì)胞工程是一門(mén)新興的生物工程技術(shù)。在動(dòng)、植物的育種，藥物提取，藥物生產(chǎn)等領(lǐng)域的應(yīng)用十分廣泛。利用所學(xué)知識(shí)回答以下關(guān)于細(xì)胞工程的相關(guān)問(wèn)題。(1)采用植物細(xì)胞工程育種的方法如下：雜種細(xì)胞愈傷組織胚狀體目的植株以胚狀體為材料，經(jīng)過(guò)人工薄膜包裝得到的人工種子，在適宜條件下同樣能夠萌發(fā)成幼苗，與天然種子培育相比，人工種子的培育具有哪些顯著的優(yōu)點(diǎn)？_(答出兩點(diǎn))。甲、乙原生質(zhì)體經(jīng)誘導(dǎo)融合完成的標(biāo)志是_。利用雜種細(xì)胞采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)可以培育成雜種植株，該技術(shù)的核心步驟是_和_。(2)已知西湖龍井含有的茶堿是植物細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，具有提神、抗衰老功效?？捎弥参锝M織培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)茶堿的工業(yè)化生產(chǎn)。若利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可將龍井茶葉細(xì)胞培養(yǎng)到_階段，然后從_(填細(xì)胞器)中提取茶堿。如果想獲得脫毒的龍井茶苗，可以切取一定大小的_等進(jìn)行組織培養(yǎng)。解析：圖中不同物種的甲、乙細(xì)胞首先經(jīng)過(guò)酶解法去壁處理，得到甲、乙兩種原生質(zhì)體，經(jīng)物理或者化學(xué)方法誘導(dǎo)融合，得到雜種細(xì)胞(新生細(xì)胞壁形成為標(biāo)志)，再經(jīng)過(guò)組織培養(yǎng)過(guò)程，得到雜種植株。(1)以胚狀體為材料，經(jīng)過(guò)人工薄膜包裝得到的人工種子，在適宜條件下同樣能夠萌發(fā)成幼苗，與天然種子相比，人工種子具有的優(yōu)點(diǎn)有：生產(chǎn)不受季節(jié)限制、不會(huì)出現(xiàn)性狀分離、能保持優(yōu)良品種的遺傳特性、方便貯存和運(yùn)輸?shù)?。甲、乙原生質(zhì)體經(jīng)誘導(dǎo)融合完成的標(biāo)志是形成新的細(xì)胞壁。植物組織培養(yǎng)技術(shù)包括脫分化和再分化兩個(gè)核心步驟。(2)若利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可將龍井茶葉細(xì)胞培養(yǎng)到愈傷組織階段，愈傷組織呈高度液泡化，然后從其液泡中提取茶堿。莖尖、根尖和芽尖等分生區(qū)部位含有少量的病毒或不含病毒，因此如想獲得脫毒的龍井茶苗，可以切取一定大小的莖尖(根尖和芽尖也可)等進(jìn)行組織培養(yǎng)。答案：(1)生產(chǎn)不受季節(jié)、氣候和地域的限制；一般不會(huì)出現(xiàn)性狀分離、能保持優(yōu)良品種的遺傳特性形成新的細(xì)胞壁脫分化再分化(2)愈傷組織液泡莖尖(或根尖、芽尖)題組二動(dòng)物細(xì)胞工程及其應(yīng)用的考查6(2018·廣東佛山質(zhì)檢)癌胚抗原(CEA)是某些癌細(xì)胞表面產(chǎn)生的一種糖蛋白，臨床上通過(guò)制備CEA的單克隆抗體來(lái)診斷癌癥?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)制備CEA的單克隆抗體時(shí)，首先將_注入小鼠體內(nèi)，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)。然后從產(chǎn)生免疫反應(yīng)小鼠的脾臟中獲取_細(xì)胞，將其與骨髓瘤細(xì)胞融合，該融合過(guò)程所利用的基本原理是_。因?yàn)槿诤下什皇?00%，且融合過(guò)程具有_性，所以要對(duì)融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選。篩選出的雜交瘤細(xì)胞還要經(jīng)過(guò)多次篩選，最終獲得_(答兩個(gè)特點(diǎn))的雜交瘤細(xì)胞。(2)獲得雜交瘤細(xì)胞后，將其注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖或_，之后從中提取大量CEA抗體。CEA單克隆抗體的主要優(yōu)點(diǎn)有_(答三個(gè))。(3)CEA單克隆抗體與抗癌藥物偶聯(lián)后，可以使抗癌藥物定向作用于癌細(xì)胞，該過(guò)程所利用的免疫學(xué)原理為_(kāi)。解析：(1)制備CEA的單克隆抗體時(shí)，首先將癌胚抗原注入小鼠體內(nèi)，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)。然后從產(chǎn)生免疫反應(yīng)小鼠的脾臟中獲取B淋巴細(xì)胞，細(xì)胞融合的原理為細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性。細(xì)胞融合過(guò)程具有隨機(jī)性，因此需要篩選出雜交瘤細(xì)胞。篩選出的雜交瘤細(xì)胞還要經(jīng)過(guò)多次篩選最終獲得既能產(chǎn)生CEA(特異性)抗體，又能無(wú)限增殖的雜交瘤細(xì)胞。(2)單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)為特異性強(qiáng)、靈敏度高并可大量制備。(3)“生物導(dǎo)彈”是單抗上連接抗癌藥物，通過(guò)抗體和相應(yīng)抗原(癌細(xì)胞)特異性結(jié)合，利用抗癌藥物或毒素殺傷和破壞癌細(xì)胞。答案：(1)癌胚抗原(CEA)B淋巴(或漿)細(xì)胞膜具一定的流動(dòng)性隨機(jī)既能產(chǎn)生CEA(特異性)抗體，又能無(wú)限增殖(2)在體外培養(yǎng)特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量生產(chǎn)(3)抗原和抗體的特異性結(jié)合7如圖是某實(shí)驗(yàn)室做的通過(guò)動(dòng)物纖維母細(xì)胞等獲得單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)研究。據(jù)圖回答相關(guān)問(wèn)題：(1)過(guò)程實(shí)施前需將誘導(dǎo)基因與_相連接構(gòu)建_，在導(dǎo)入小鼠成纖維細(xì)胞時(shí)一般采用_法導(dǎo)入，此步驟中用到的工具酶有_。(2)過(guò)程的實(shí)質(zhì)是_。甲細(xì)胞是_細(xì)胞，乙細(xì)胞是_細(xì)胞。(3)過(guò)程一般用_誘導(dǎo)，丙細(xì)胞的特點(diǎn)是_。解析：(1)基因工程操作過(guò)程中需要將目的基因與運(yùn)載體連接構(gòu)建基因表達(dá)載體，將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法。基因工程中的工具酶是限制酶和DNA連接酶。(2)過(guò)程是干細(xì)胞的分化過(guò)程，實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)。由圖可知，病毒注入小鼠體內(nèi)獲得的乙細(xì)胞是漿細(xì)胞(已免疫的B細(xì)胞)，所以甲是骨髓瘤細(xì)胞。(3)誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合用滅活的病毒或PEG，丙細(xì)胞是雜交瘤細(xì)胞，其特點(diǎn)是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專(zhuān)一的抗體。答案：(1)載體基因表達(dá)載體顯微注射限制酶、DNA連接酶(2)基因的選擇性表達(dá)骨髓瘤B(淋巴)(3)滅活的病毒(或聚乙二醇)既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專(zhuān)一的抗體課堂加固訓(xùn)練練模擬做典題提高解題能力授課提示：對(duì)應(yīng)學(xué)生用書(shū)第103頁(yè)1(2018·湖南郴州質(zhì)檢)利用基因工程技術(shù)培育馬鈴薯新品種，目前已經(jīng)取得豐碩成果。請(qǐng)根據(jù)教材所學(xué)知識(shí)回答下列問(wèn)題：(1)馬鈴薯易患多種疾病，導(dǎo)致其產(chǎn)量不高。通過(guò)導(dǎo)入抗病基因并使其表達(dá)可以提高馬鈴薯產(chǎn)量，基因工程中使用最多的抗病基因是_和病毒的復(fù)制酶基因。(2)馬鈴薯是雙子葉植物，常用_(方法)將目的基因?qū)腭R鈴薯受體細(xì)胞中。構(gòu)建好的基因表達(dá)載體基本結(jié)構(gòu)包括目的基因、標(biāo)記基因、_、_、_等五部分。(3)科學(xué)家還培育出抗除草劑的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯，其設(shè)計(jì)方法：修飾除草劑作用的靶蛋白，使其對(duì)除草劑_(填“敏感”或“不敏感”)，或使靶蛋白過(guò)量表達(dá)，植物吸收除草劑后仍能_。(4)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，還需對(duì)轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)行_。解析：(1)在基因工程中，使用最多的抗病基因是病毒外殼蛋白基因和病毒的復(fù)制酶基因。(2)常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)腭R鈴薯等雙子葉植物的受體細(xì)胞中。構(gòu)建好的基因表達(dá)載體的基本結(jié)構(gòu)包括目的基因、標(biāo)記基因、終止子、啟動(dòng)子和復(fù)制原點(diǎn)等五部分。(3)培育抗除草劑的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯，需通過(guò)修飾，使除草劑作用的靶蛋白對(duì)除草劑不敏感，或使靶蛋白過(guò)量表達(dá)，使植物吸收除草劑后仍能正常代謝。(4)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，還需對(duì)轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)行目的基因的檢測(cè)與鑒定。答案：(1)病毒外殼蛋白基因(2)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法啟動(dòng)子終止子復(fù)制原點(diǎn)(3)不敏感正常代謝(4)目的基因的檢測(cè)與鑒定2大腸桿菌pUC18質(zhì)粒是基因工程中常用的運(yùn)載體，某限制酶在此質(zhì)粒上的唯一酶切位點(diǎn)位于LacZ基因中，如果沒(méi)有插入外源基因，LacZ基因便可表達(dá)出半乳糖苷酶，當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和Xgal時(shí)，Xgal便會(huì)被半乳糖苷酶水解成藍(lán)色，大腸桿菌將形成藍(lán)色菌落，反之，則形成白色菌落。如圖表示利用此質(zhì)粒實(shí)施基因工程的主要流程。(1)已獲得的目的基因可利用_技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。(2)目的基因插入質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒的過(guò)程中，需要DNA連接酶恢復(fù)_鍵。(3)將試管中的物質(zhì)和大腸桿菌共同置于試管的目的是_；大腸桿菌需事先用Ca2進(jìn)行處理，目的是_。(4)將試管中的菌液接種于選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)基中應(yīng)含有大腸桿菌必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如_和生長(zhǎng)因子，還應(yīng)加入IPTG、Xgal以及氨芐青霉素，其中加入氨芐青霉素的作用是篩選出_。(5)若觀(guān)察到培養(yǎng)基上出現(xiàn)_色菌落，則說(shuō)明大腸桿菌中已成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒。如果作為受體細(xì)胞的大腸桿菌也含有LacZ基因，則不利于重組質(zhì)粒的篩選，原因是_。答案：(1)PCR(2)磷酸二酯(3)進(jìn)行轉(zhuǎn)化使大腸桿菌細(xì)胞處于感受態(tài)(4)碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、水導(dǎo)入pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌(5)白無(wú)論大腸桿菌是否導(dǎo)入重組質(zhì)粒，均會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色菌落3動(dòng)植物細(xì)胞工程在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、醫(yī)藥衛(wèi)生等領(lǐng)域有著廣泛的用途?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)在將兩種植物細(xì)胞進(jìn)行雜交之前，需要用_酶進(jìn)行處理，若將處理后的細(xì)胞放入較高濃度的蔗糖溶液中，會(huì)發(fā)生_。誘導(dǎo)兩種植物細(xì)胞融合可以采用物理或化學(xué)的方法進(jìn)行，常用的物理方法有_(寫(xiě)2種即可)。(2)融合的細(xì)胞形成愈傷組織，在愈傷組織的培養(yǎng)過(guò)程中，當(dāng)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比值_(填“高”或“低”)時(shí)，有利于叢芽的分化；通過(guò)上述過(guò)程獲得雜種植株依據(jù)的原理是_。(3)在制備單克隆抗體的過(guò)程中，融合的結(jié)果是出現(xiàn)多種不同的雜交細(xì)胞，需要在特定的培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選，從而得到_細(xì)胞。單克隆抗體與傳統(tǒng)方法獲得的抗體相比，具有_的特點(diǎn)，因此廣泛用于疾病的診斷等方面。解析：(1)植物體細(xì)胞雜交過(guò)程有兩個(gè)關(guān)鍵，一個(gè)是在將植物細(xì)胞進(jìn)行雜交之前，必須去除細(xì)胞壁，該過(guò)程需要用到纖維素酶和果膠酶；另外一個(gè)是誘導(dǎo)原生質(zhì)體的融合，方法包括物理法(離心、振動(dòng)、電刺激)和化學(xué)法(聚乙二醇)。將處理后的細(xì)胞放入較高濃度的蔗糖溶液中，會(huì)發(fā)生滲透作用。(2)在愈傷組織的培養(yǎng)過(guò)程