第37講微生物技術(shù)考綱要求1.微生物的分離和培養(yǎng)。2.某種微生物數(shù)量的測(cè)定。3.培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用。4.利用微生物進(jìn)行發(fā)酵來(lái)生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其他方面的應(yīng)用?？键c(diǎn)一培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用及微生物的純培養(yǎng)一、培養(yǎng)基的制備1.培養(yǎng)基的配制和滅菌(1)實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基a.含義：人工配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，用以培養(yǎng)、分離、鑒定和保存各種微生物。b.成分：一般包括水分、碳源、氮源、微量元素和無(wú)機(jī)鹽等。選擇培養(yǎng)基a.選擇依據(jù)：不同種類微生物的生長(zhǎng)繁殖對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不同。b.選擇途徑：人為控制培養(yǎng)基的pH、碳源、氮源、滲透壓等條件。c.選擇結(jié)果：使選擇的培養(yǎng)基利于某類或某種微生物的生長(zhǎng)，而不利于其他微生物的生存，可以達(dá)到分離、培養(yǎng)不同微生物的目的。滅菌a.滅菌原因：及時(shí)殺滅培養(yǎng)基中的微生物，同時(shí)防止微生物大量繁殖造成的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分的改變。b.常用的滅菌方法：高壓蒸汽滅菌。(2)方法步驟培養(yǎng)基的制作流程為：稱量溶化調(diào)pH分裝加塞和包扎滅菌擺斜面及倒平板。2.培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基按物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。二、培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用1.探究不同培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì)菌群探究程序：?jiǎn)栴}作出假設(shè)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)實(shí)施實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論表達(dá)交流。2.菌落(1)含義：將微生物通過(guò)某種方法接種到適于生長(zhǎng)的固體培養(yǎng)基表面上，在適宜的溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間后，單個(gè)的菌體或孢子生長(zhǎng)繁殖成的一個(gè)個(gè)肉眼可見的細(xì)胞群體。(2)細(xì)菌與酵母菌的菌落特征細(xì)菌菌落的共同特征為：濕潤(rùn)、黏稠、易用接種環(huán)挑起，菌落各部位顏色一致。酵母菌菌落外形上與細(xì)菌極為相似，但比細(xì)菌菌落大而厚，顏色也較單調(diào)。霉菌菌落較疏松，常呈絨毛狀、絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀，一般比細(xì)菌菌落大幾倍到幾十倍。(3)優(yōu)勢(shì)菌群的培養(yǎng)基細(xì)菌生長(zhǎng)需要的氮源高(C/N為41)，pH中性或微堿性(pH7.27.6)，因此培養(yǎng)細(xì)菌常采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。酵母菌和霉菌生長(zhǎng)所需的碳源含量高(C/N為161)，pH偏酸性(pH56)，因此分離真菌常采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(簡(jiǎn)稱PDA)。三、實(shí)驗(yàn)：微生物的分離與純化(一)實(shí)驗(yàn)原理1.分離的依據(jù)：微生物的分離與純化就是將待檢測(cè)微生物樣品通過(guò)劃線或涂布接種在固體培養(yǎng)基上，樣品中的每一個(gè)細(xì)胞或孢子都可以生長(zhǎng)繁殖形成單個(gè)菌落。2.純化的依據(jù)：將單個(gè)菌落接種到斜面培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后，即可得到一個(gè)微生物的純種。(二)方法步驟1.微生物的分離(1)稀釋：用1 mL無(wú)菌吸管吸取1 mL大腸桿菌培養(yǎng)液，加入到盛有9 mL無(wú)菌水的大試管中，充分混勻，然后用無(wú)菌吸管從此試管中吸取1 mL加入另一支盛有9 mL無(wú)菌水的試管中，混合均勻，依次類推制成101、102、103、104、105、106系列稀釋度的大腸桿菌稀釋液。(2)劃線或涂布平板劃線分離法：在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取大腸桿菌培養(yǎng)液一環(huán)在平板上劃線，常用的劃線方法有平行劃線和連續(xù)劃線兩種。劃線完畢后，蓋上培養(yǎng)皿蓋，做好標(biāo)記。涂布分離法：取3個(gè)平板，底面分別用記號(hào)筆寫上104、105、106三種稀釋度，然后用無(wú)菌吸管分別吸取相應(yīng)稀釋度的稀釋液各0.1 mL，放入已標(biāo)記好的平板上，用無(wú)菌玻璃涂棒在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，室溫下靜置510 min，使菌液吸附進(jìn)培養(yǎng)基。(3)培養(yǎng)：將劃線或涂布接種的平板倒置于培養(yǎng)箱或溫室中37 培養(yǎng)1624 h，即可長(zhǎng)出單個(gè)菌落。2.接斜面分別從培養(yǎng)后長(zhǎng)出的單個(gè)菌落上挑取少許細(xì)胞，接種到斜面培養(yǎng)基上，置培養(yǎng)箱或溫室37 培養(yǎng)24 h，斜面上菌種長(zhǎng)好后，4 保存?zhèn)溆谩?1)培養(yǎng)基一般都含有水分、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽等，有時(shí)還需要加入一些特殊的物質(zhì)()(2)倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上(×)(3)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害()(4)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落(×)(5)用涂布分離法純化大腸桿菌時(shí)，只要稀釋度足夠高，就能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落()如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請(qǐng)思考：(1)獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是什么？提示獲得效果A的接種方法為涂布分離法，獲得效果B的接種方法為平板劃線分離法。(2)某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成了一片，最可能的原因是什么？應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？提示最可能的原因是菌液濃度過(guò)高或劃線時(shí)在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌；采取的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌。(3)接種操作為什么一定要在火焰附近進(jìn)行？提示火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域。命題點(diǎn)一培養(yǎng)基及其制備方法分析1.(2018·天津一中調(diào)研)下表為某培養(yǎng)基的配方，下列敘述正確的是()成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊紅美藍(lán)蒸餾水含量10 g10 g2 g0.4 g0.065 g1 000 mLA.從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基B.該培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨C.該培養(yǎng)基缺少提供生長(zhǎng)因子的物質(zhì)D.該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后就可以接種使用答案B解析分析表中成分可知，該培養(yǎng)基中沒(méi)有凝固劑，為液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分齊全，但存在伊紅、美藍(lán)等鑒別物質(zhì)，屬于鑒別培養(yǎng)基，A項(xiàng)錯(cuò)誤；該培養(yǎng)基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是絕大多數(shù)生物最常利用的碳源，B項(xiàng)正確；該培養(yǎng)基中存在的無(wú)機(jī)鹽和蛋白胨中的某些物質(zhì)可以看作是生長(zhǎng)因子，C項(xiàng)錯(cuò)誤；培養(yǎng)基調(diào)節(jié)完pH還要進(jìn)行滅菌等操作后才能使用，D項(xiàng)錯(cuò)誤。2.(2017·濟(jì)寧模擬)高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實(shí)用性。研究者從熱泉中篩選出了能高效生產(chǎn)高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過(guò)程如下圖所示。請(qǐng)據(jù)圖回答：(1)號(hào)培養(yǎng)基從物理狀態(tài)來(lái)看，屬于固體培養(yǎng)基，配制時(shí)要加入 作為凝固劑，從用途來(lái)看屬于選擇培養(yǎng)基，應(yīng)以 作為唯一碳源。(2)配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是()A.計(jì)算、稱量、倒平板、溶化、滅菌B.計(jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C.計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板D.計(jì)算、稱量、滅菌、溶化、倒平板(3)溶化時(shí)，燒杯中加入瓊脂后要不停地 ，防止瓊脂糊底引起燒杯破裂。對(duì)培養(yǎng)基滅菌的方法一般為 。(4)過(guò)程是 ，過(guò)程所使用的接種方法是 法。(5)部分嗜熱菌在號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)可釋放 分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周圍形成透明圈，挑選相應(yīng)的菌落，接種到號(hào)培養(yǎng)基進(jìn)一步分離純化后，再對(duì)菌種進(jìn)行 培養(yǎng)。答案(1)瓊脂淀粉(2)C(3)攪拌高壓蒸汽滅菌 (4)稀釋涂布分離(5)淀粉酶擴(kuò)大解析固體培養(yǎng)基通常加入瓊脂作為凝固劑。本實(shí)驗(yàn)的目的是獲得產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，故其選擇培養(yǎng)基中應(yīng)以淀粉作為唯一碳源。配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。配制培養(yǎng)基加熱溶化時(shí)，要注意加入瓊脂后需不斷攪拌，防止瓊脂糊底和溢出。對(duì)培養(yǎng)基的滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌。仔細(xì)觀察題圖可知過(guò)程，是菌液稀釋過(guò)程，是采用涂布分離法接種。能產(chǎn)生淀粉酶的部分細(xì)菌能分解利用淀粉，其菌落周圍會(huì)出現(xiàn)透明圈，取這樣的菌落再分離純化可獲得相應(yīng)菌種，以后可以擴(kuò)大培養(yǎng)用于生產(chǎn)。1.培養(yǎng)基的配制原則(1)目的要明確：配制時(shí)應(yīng)根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。(2)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)pH要適宜：細(xì)菌為7.27.6，酵母菌和霉菌為5.06.0，培養(yǎng)不同微生物所需的pH不同。2.微生物對(duì)主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求特點(diǎn)(1)自養(yǎng)型微生物所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是無(wú)機(jī)鹽，碳源可來(lái)自大氣中的CO2，氮源可由含氮無(wú)機(jī)鹽提供。(2)異養(yǎng)型微生物所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要是有機(jī)物，即碳源必須由含碳有機(jī)物提供，氮源也主要是由有機(jī)物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無(wú)機(jī)氮源。命題點(diǎn)二大腸桿菌的純化方法及過(guò)程分析3.下圖中甲是稀釋涂布平板法中的部分操作，乙是平板劃線分離法的操作結(jié)果。下列敘述中錯(cuò)誤的是()A.甲中涂布前要將玻璃涂棒灼燒，冷卻后才能取菌液B.對(duì)于濃度較高的菌液，如甲中的稀釋倍數(shù)僅為102，則所得的菌落不一定是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成C.乙培養(yǎng)皿中所得的菌落都符合要求D.乙中的連續(xù)劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端答案C解析灼燒后的玻璃涂棒如果沒(méi)有冷卻就接觸菌種，會(huì)將菌體殺死，A正確；稀釋倍數(shù)過(guò)低會(huì)導(dǎo)致多個(gè)菌體聚集在一起繁殖成菌落，B正確；平板劃線分離法中最后一次劃線的末端處形成的菌落才是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成，這種菌落才符合要求，C錯(cuò)誤；連續(xù)劃線中，除了第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端，目的是使得菌體的密度越來(lái)越小，保證最后劃線末端處的菌落是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成，D正確。4.大腸桿菌是與我們?nèi)粘Ｉ盥?lián)系非常密切的細(xì)菌，請(qǐng)回答有關(guān)檢測(cè)飲用水中大腸桿菌的問(wèn)題：(1)檢測(cè)飲用水中大腸桿菌的含量時(shí)，通常將樣品進(jìn)行一系列的梯度稀釋，將不同稀釋度的水樣用玻璃涂棒分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，然后記錄菌落數(shù)量，這種方法稱為 。判斷下面所示的4個(gè)菌落分布圖中，不可能是用該方法得到的是 。(2)用上述方法統(tǒng)計(jì)樣本中菌落數(shù)時(shí)是否需要設(shè)置對(duì)照組？ (填“需要”或“不需要”)，其原因是需要判斷培養(yǎng)基 ，對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是將 的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。(3)在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進(jìn)行 (填“消毒”或“滅菌”)處理；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和 ；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使其內(nèi)蛋白質(zhì)變性，還能損傷它的 的結(jié)構(gòu)。(4)檢測(cè)大腸桿菌實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過(guò)的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò) 處理才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。答案(1)涂布分離法D(2)需要是否被雜菌污染(滅菌是否合格)未接種(3)滅菌消毒DNA (4)滅菌解析D中菌落分布情況為平板劃線分離法所得。為判斷培養(yǎng)基滅菌是否合格，本實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置對(duì)照。要判斷固體培養(yǎng)基是否被污染，可將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置一段時(shí)間，若發(fā)現(xiàn)有菌落說(shuō)明培養(yǎng)基已被污染。消毒是指使用較溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進(jìn)行滅菌處理，對(duì)操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和用酒精消毒?？键c(diǎn)二微生物的利用一、從土壤中分離有益微生物實(shí)驗(yàn)：從土壤中分離纖維素分解菌1.實(shí)驗(yàn)原理(1)反應(yīng)依據(jù)：土壤中存在大量纖維素分解菌，包括真菌、細(xì)菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶，分解和利用纖維素和半纖維素。(2)檢測(cè)依據(jù)：因此在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能很好地生長(zhǎng)，并產(chǎn)生黃色或棕綠色色素，其他微生物則不能生長(zhǎng)。2.方法步驟方法一：(1)制備培養(yǎng)基：依據(jù)小辭典，配制依姆歇涅茨基液體培養(yǎng)基。(2)分裝：按每試管5 mL分裝，然后加入7 cm×1 cm濾紙條，濾紙條緊貼內(nèi)壁，且一半浸入培養(yǎng)基中，121 滅菌20 min。(3)制備土壤稀釋液：制備101、102、103、104、105的土壤稀釋液。(4)接種培養(yǎng)：分別吸取各稀釋度的土壤稀釋液1 mL接種到濾紙條上，每個(gè)稀釋度重復(fù)4次，置培養(yǎng)箱中28 培養(yǎng)14 d。(5)觀察：檢查各試管中濾紙條上出現(xiàn)的菌落和濾紙顏色變化情況。方法二：(1)制備培養(yǎng)基：制備依姆歇涅茨基培養(yǎng)基平板，在平板上鋪一張直徑略小于平板的濾紙，用少量上述液體培養(yǎng)基潤(rùn)濕。(2)接種培養(yǎng)：在濾紙上等距放8個(gè)直徑約10 mm的土粒，蓋上培養(yǎng)皿蓋以保持濕度，置恒溫培養(yǎng)箱中2830 培養(yǎng)。(3)觀察：每隔2 d觀察土粒周圍濾紙變色情況，直到濾紙顏色變化，長(zhǎng)成菌落，于4 冰箱中保存?zhèn)溆?。二、微生物?duì)有機(jī)物質(zhì)的分解1.探究纖維素分解菌是否只能分解纖維素(1)問(wèn)題：分解纖維素的微生物能否分解其他物質(zhì)呢？(2)作出假設(shè)：假設(shè)分解纖維素的微生物還能分解其他物質(zhì)，包括淀粉、木質(zhì)素、果膠等大分子含碳有機(jī)物。(3)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)：分組設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，用同一種分解纖維素的微生物分解不同的其他物質(zhì)(淀粉、果膠和木質(zhì)素等)，或者用不同分解纖維素的微生物分解同一種物質(zhì)，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中注意設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)重復(fù)等。(4)實(shí)施實(shí)驗(yàn)：根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，認(rèn)真進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。(5)得出結(jié)論：根據(jù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得出結(jié)論。(6)表達(dá)交流。2.分解纖維素的微生物的意義與作用(1)在自然界碳素循環(huán)中具有重要意義。(2)微生物的種類繁多、分布廣、數(shù)量大，而且所起的作用也多種多樣。三、利用微生物制作食品實(shí)驗(yàn)：利用微生物制作豆豉1.實(shí)驗(yàn)原理(1)豆豉是用煮熟的大豆經(jīng)過(guò)納豆菌發(fā)酵制成的。納豆菌分泌的蛋白酶能夠分解大豆中的蛋白質(zhì)，產(chǎn)生小分子多肽及多種氨基酸，制成風(fēng)味獨(dú)特的發(fā)酵食品。(2)在制備過(guò)程中，根據(jù)納豆菌的芽孢對(duì)熱不敏感的特性，可采用高溫控制雜菌污染。2.方法步驟(1)制備豆豉菌懸液：在錐形瓶中倒入3040 mL開水，加入新鮮的豆豉56粒，搖勻，備用。(2)浸泡：將黃豆裝入杯中加水浸泡15 h左右。(3)煮豆：將浸泡過(guò)的黃豆煮2030 min，直到黃豆用手輕輕一掐就破即可。(4)接種：在容器內(nèi)鋪上一塊雙層紗布，將煮好的黃豆趁熱撈入容器內(nèi)，將豆豉菌懸液灑在豆子表面，用消過(guò)毒的玻璃棒快速攪拌均勻。(5)發(fā)酵：用另一塊雙層紗布蓋在豆子表面，40 發(fā)酵15 h左右。當(dāng)黃豆表面長(zhǎng)出一層菌膜時(shí)，根據(jù)口味加入鹽或醬密封保存。(1)選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類(×)(2)篩選能分解尿素的細(xì)菌所利用的培養(yǎng)基中，尿素是唯一的氮源()(3)分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低(×)(4)纖維素是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的主要成分，在纖維素酶的作用下，纖維素可以水解成葡萄糖()(5)在篩選能分解纖維素的細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)中，選擇培養(yǎng)的目的是增大樣品中目的菌株的濃度()(6)制作豆豉要避免雜菌污染，要對(duì)原料進(jìn)行高壓蒸汽滅菌(×)研究人員在依姆歇涅茨基培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有棕綠色色素圈的菌落如圖1所示，并用篩選到的纖維素酶高產(chǎn)菌株J1和J4，在不同的溫度和pH條件下進(jìn)行發(fā)酵，測(cè)得發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果見圖2，請(qǐng)分析：圖1圖2(1)圖中棕綠色色素圈大小代表什么？降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是哪種？提示棕綠色色素圈大小與纖維素酶的量和活性有關(guān)，降解纖維素能力最強(qiáng)的是菌株。(2)結(jié)合圖2推測(cè)哪種菌株更適合用于人工瘤胃發(fā)酵？提示J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高，更適合用于人工瘤胃發(fā)酵。命題點(diǎn)一選擇培養(yǎng)基成分及配制方法的分析1.選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某一種或某一類微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或?qū)σ恍┪锢?、化學(xué)抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。利用這種培養(yǎng)基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來(lái)。為選擇酵母菌和硝化細(xì)菌，應(yīng)選用的培養(yǎng)基分別為()A.伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、含青霉素的培養(yǎng)基B.含青霉素的培養(yǎng)基、含氨的無(wú)機(jī)培養(yǎng)基C.含氨的無(wú)機(jī)培養(yǎng)基、含青霉素的培養(yǎng)基D.含青霉素的培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基答案B解析酵母菌是真菌，通?？梢杂煤嗝顾氐呐囵B(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，因?yàn)榍嗝顾匾种萍?xì)菌生長(zhǎng)，但不能抑制真菌生長(zhǎng)。硝化細(xì)菌為自養(yǎng)型生物，能夠利用土壤中氨氧化成亞硝酸，進(jìn)而將亞硝酸氧化成硝酸所釋放的能量，把無(wú)機(jī)物轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)物以維持自身生命活動(dòng)，利用含氨的無(wú)機(jī)培養(yǎng)基可進(jìn)行選擇培養(yǎng)。2.苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，為土壤樣品。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入 作為碳源，中不同濃度碳源的培養(yǎng)基 (填“影響”或“不影響”)細(xì)菌的數(shù)量，如果要測(cè)定中活細(xì)菌數(shù)量，常采用 法。(2)為對(duì)照，微生物在中不生長(zhǎng)，在中生長(zhǎng)，與培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于 ；使用 法可以在上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)進(jìn)行倒置培養(yǎng)的原因是 。(3)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如何防止其他微生物的污染？ 。答案(1)苯酚影響涂布分離(2)的培養(yǎng)基中沒(méi)有加入苯酚作為碳源，的培養(yǎng)基中加入了苯酚作為碳源涂布分離法或平板劃線分離防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基(3)培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過(guò)程進(jìn)行無(wú)菌操作解析(1)選擇降解利用苯酚的細(xì)菌的培養(yǎng)基是以苯酚為唯一碳源的培養(yǎng)基；苯酚是唯一的碳源，當(dāng)苯酚消耗盡時(shí)，菌株因缺少碳源而不能繼續(xù)繁殖，所以中不同濃度的碳源會(huì)影響細(xì)菌數(shù)量；一般采用涂布分離法來(lái)測(cè)定中活菌數(shù)目。(2)與培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于的培養(yǎng)基中沒(méi)有加入苯酚作為碳源，的培養(yǎng)基中加入了苯酚作為碳源；使用涂布分離法或平板劃線分離法可以在上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)要倒置培養(yǎng)，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基。(3)從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實(shí)驗(yàn)過(guò)程要無(wú)菌操作：無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵：a.實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；b.將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌；c.為避免周圍環(huán)境中微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；d.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。選擇培養(yǎng)基的制作方法(1)在培養(yǎng)基全部營(yíng)養(yǎng)成分具備的前提下，加入物質(zhì)：依據(jù)某些微生物對(duì)某些物質(zhì)的抗性，在培養(yǎng)基中加入某些物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物生長(zhǎng)，如培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽時(shí)可抑制多種細(xì)菌的生長(zhǎng)，但不影響金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)，從而可將該菌分離出來(lái)；而在培養(yǎng)基中加入青霉素時(shí)可抑制細(xì)菌、放線菌的生長(zhǎng)，從而分離得到酵母菌和霉菌。(2)通過(guò)改變培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分達(dá)到分離微生物的目的：培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可分離自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而無(wú)法生存；培養(yǎng)基中若缺乏有機(jī)碳源則異養(yǎng)微生物無(wú)法生存，而自養(yǎng)微生物可利用空氣中的CO2制造有機(jī)物生存。(3)利用培養(yǎng)基的特定化學(xué)成分分離特定微生物：如當(dāng)石油是唯一碳源時(shí)，可抑制不能利用石油的微生物生長(zhǎng)，使能夠利用石油的微生物生長(zhǎng)，從而分離出能消除石油污染的微生物。(4)通過(guò)某些特殊環(huán)境分離微生物：如在高鹽環(huán)境中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時(shí)易失水而不能生存；在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環(huán)境中因酶失活而無(wú)法生存。命題點(diǎn)二微生物的分離與計(jì)數(shù)3.下表是某同學(xué)列出的分離土壤中微生物的培養(yǎng)基配方，據(jù)此回答下列問(wèn)題：培養(yǎng)基配方KH2PO41.4 gNa2HPO42.1 gMgSO4·7H2O0.2 g葡萄糖10.0 g尿素1.0 g瓊脂15.0 g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL(1)從作用上看，該培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基，提供氮源的物質(zhì)是 ，細(xì)菌能利用該氮源是由于體內(nèi)能合成 酶。(2)在對(duì)分離的能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行鑒定時(shí)，還需在培養(yǎng)基中加入 指示劑，若指示劑變 ，說(shuō)明有目的菌株存在。(3)為了測(cè)定微生物的數(shù)量，接種時(shí)應(yīng)采用 法，某同學(xué)在4個(gè)培養(yǎng)基上分別接種稀釋倍數(shù)為106的土壤樣液0.1 mL，培養(yǎng)后菌落數(shù)分別為180、155、176、129個(gè)，則每毫升原土壤樣液中上述微生物的數(shù)量為 個(gè)，測(cè)定的活菌數(shù)比實(shí)際活菌數(shù) (填“低”“高”或“基本一致”)。答案(1)選擇尿素脲(催化尿素分解的)(2)酚紅紅(3)涂布分離1.6×109低解析(1)題干指出表中是分離土壤中微生物的培養(yǎng)基配方，其中尿素是唯一氮源，能生長(zhǎng)的菌落說(shuō)明能利用尿素中的氮源，以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可以選擇尿素分解菌，所以從用途上屬于選擇培養(yǎng)基。(2)在對(duì)分離的能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行鑒定時(shí)，還需在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，說(shuō)明有目的菌株存在。(3)純化微生物可以用涂布分離法和平板劃線分離法，其中涂布分離法能用于微生物的計(jì)數(shù)。1 mL原土壤樣液中上述微生物數(shù)量(180155176129)÷4×106×101.6×109個(gè)；涂布分離法計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)的數(shù)量比實(shí)際數(shù)量會(huì)偏少，原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。4.(2018·天水一中期末)某實(shí)驗(yàn)小組欲從豆油污染的土壤中篩選出高效降解脂肪的菌株。請(qǐng)回答：(1)在篩選過(guò)程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以 為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。(2)為避免培養(yǎng)基污染，需將培養(yǎng)皿呈 狀態(tài)放置。為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過(guò)高，需將培養(yǎng)液進(jìn)行 處理。為了排除 ，需設(shè)置接種等量無(wú)菌水的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。(3)為了篩選出菌株，可將適量的 試劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色后，如果菌落周圍的現(xiàn)象是 ，則說(shuō)明此種菌能夠分泌脂肪酶。(4)純化菌種時(shí)，為了得到菌落，可采用 法接種于新的培養(yǎng)基平板上。(5)實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行的原因是 。答案(1)豆油選擇(2)倒置梯度稀釋實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響(培養(yǎng)基被污染)(3)蘇丹(或蘇丹)出現(xiàn)透明圈(不出現(xiàn)橘黃色圈或紅色圈)(4)平板劃線分離(5)避免周圍環(huán)境中微生物的污染矯正易錯(cuò)強(qiáng)記長(zhǎng)句1.無(wú)菌操作技術(shù)包括消毒和滅菌，消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化學(xué)藥物消毒和紫外線消毒等；滅菌包括火焰滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。2.培養(yǎng)基的制備包括稱量、溶化、調(diào)pH、分裝、加塞和包扎、滅菌、倒平板等步驟，倒置平板的目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水滴滴入培養(yǎng)基造成污染。3.尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都運(yùn)用了選擇培養(yǎng)基，前者所用的培養(yǎng)基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培養(yǎng)基中纖維素是唯一的碳源。下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題：1.圖甲是利用平板劃線分離法進(jìn)行微生物接種，圖乙是利用涂布分離法進(jìn)行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是接種環(huán)和玻璃涂棒；對(duì)這兩種接種工具進(jìn)行滅菌和消毒的方法依次是灼燒滅菌和酒精消毒。2.接種后，在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)為什么進(jìn)行倒置培養(yǎng)？防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基。3.下圖是采用上述接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，其接種方法是圖乙(填“圖甲”或“圖乙”)。重溫高考演練模擬1.漆酶屬于木質(zhì)降解酶類，在環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域有著廣泛用途。下圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過(guò)程，相關(guān)敘述正確的是(多選)()A.生活污水中含有大量微生物，是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品B.篩選培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物，通過(guò)菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落C.在涂布平板上長(zhǎng)出的菌落，再通過(guò)劃線進(jìn)一步純化D.斜面培養(yǎng)基中含有大量營(yíng)養(yǎng)物，可在常溫下長(zhǎng)期保存菌株答案BC解析漆酶降解“木質(zhì)”，則漆酶菌株多存在于“木質(zhì)”豐富的場(chǎng)所，生活污水中含有大量微生物，但不一定含有產(chǎn)漆酶的菌株，A錯(cuò)誤；產(chǎn)漆酶菌株可降解木質(zhì)素，在篩選培養(yǎng)基中加入木質(zhì)素可篩選產(chǎn)漆酶的菌株，篩選時(shí)可通過(guò)菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落，B正確；在涂布平板上長(zhǎng)出的菌落可能還有其他雜菌，可再通過(guò)平板劃線法進(jìn)一步純化，C正確；斜面培養(yǎng)基中含有大量營(yíng)養(yǎng)物，可在低溫下長(zhǎng)期保存菌株，D錯(cuò)誤。2.(2017·全國(guó)，37)某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生 。能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原因是 ，但可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是 (答出兩點(diǎn)即可)。(2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇 (填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是 。(3)用來(lái)篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有 (答出兩點(diǎn)即可)。答案(1)脲酶分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO2來(lái)合成有機(jī)物為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，為其他有機(jī)物的合成提供原料(2) 尿素其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用(3)為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)鹽離子，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH穩(wěn)定解析(1)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。能分解尿素的細(xì)菌是一種分解者，屬于異養(yǎng)型生物，不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源。能分解尿素的細(xì)菌可以用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是：一方面可氧化分解為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，另一方面其代謝中間產(chǎn)物可為多種有機(jī)物的合成提供原料。(2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇以尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，而其他兩組都含有含氮物質(zhì)NH4NO3，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3不能起到篩選作用。(3)用來(lái)篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用：KH2PO4和Na2HPO4構(gòu)成緩沖液，可維持培養(yǎng)基的pH相對(duì)穩(wěn)定；KH2PO4和Na2HPO4能為微生物生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)鹽。3.(2016·全國(guó)乙，39)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下：配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；制作無(wú)菌平板；設(shè)置空白對(duì)照組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作；將各組平板置于37 恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來(lái)源于 。若要完成步驟，該培養(yǎng)基中的成分X通常是 。(2)步驟中，實(shí)驗(yàn)組的操作是 。(3)若在某次調(diào)查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為36個(gè)/平板，而空白對(duì)照組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6個(gè)菌落，這種結(jié)果說(shuō)明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了 現(xiàn)象。若將30(即366)個(gè)/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法 (填“正確”或“不正確”)。答案(1)牛肉膏、蛋白胨瓊脂(2)將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時(shí)間(3)污染不正確解析(1)牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物，都可以作為氮源；平板為固體培養(yǎng)基，故需要加入凝固劑瓊脂。(2)實(shí)驗(yàn)探究的是教室內(nèi)“不同高度空氣”中微生物的分布，其中自變量為不同高度，故需在不同高度下放置開蓋平板。同時(shí)，為了保證單一變量，需要保證開蓋放置時(shí)間一致。為了保證實(shí)驗(yàn)可靠性，需要設(shè)置多個(gè)平行組。(3)在完全正確的操作情況下，空白對(duì)照組中不應(yīng)出現(xiàn)菌落。若出現(xiàn)菌落，表明操作過(guò)程中存在雜菌污染，屬于實(shí)驗(yàn)失誤，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均不應(yīng)采用。4.(2016·四川，10)圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過(guò)程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。(1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以 為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加 作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后，其菌落周圍的指示劑將變成 色。(2)在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液0.1 mL，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過(guò)程采取的接種方法是 ，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為 ×108個(gè)；與血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)較 。(3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個(gè)核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為 ，突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)含 個(gè)氨基酸。答案(1)尿素酚紅紅(2)涂布分離法1.75少 (3)UGA115解析(1)脲酶能夠催化尿素分解為氨，故圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以尿素作為唯一氮源。由于尿素被分解成了氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高，使酚紅指示劑變紅色。(2)用于計(jì)數(shù)細(xì)菌菌落數(shù)的接種方法是涂布分離法，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)應(yīng)介于30300之間，故選擇細(xì)菌菌落數(shù)為156、178和191的平板計(jì)數(shù)，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)為(156178191)÷3÷0.1×1051.75×108。由于兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連接在一起時(shí)，往往統(tǒng)計(jì)的是一個(gè)菌落，故用此方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)偏少。(3)密碼子由三個(gè)相鄰的堿基組成，271個(gè)堿基和后面2個(gè)堿基一起共構(gòu)成91個(gè)密碼子，箭頭處插入的70個(gè)核苷酸和后面2個(gè)堿基一起共構(gòu)成24個(gè)密碼子，緊隨其后是UGA，應(yīng)為終止密碼，因此表達(dá)的蛋白質(zhì)含115個(gè)氨基酸。1.(2018·張家口檢測(cè))下列有關(guān)微生物培養(yǎng)與應(yīng)用的說(shuō)法，正確的是()A.天然培養(yǎng)基是指直接取自自然界不需加工的培養(yǎng)基B.接種前需對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手等進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理C.大腸桿菌的純化培養(yǎng)過(guò)程包括培養(yǎng)基的配制和純化大腸桿菌兩個(gè)階段D.分離分解尿素的細(xì)菌時(shí)，尿素是培養(yǎng)基中唯一的氮源和碳源答案C解析天然培養(yǎng)基是指用天然物質(zhì)制成的培養(yǎng)基，但也需要加工；實(shí)驗(yàn)操作者的雙手應(yīng)消毒，不能滅菌；分離分解尿素的細(xì)菌時(shí)，尿素是培養(yǎng)基中唯一的氮源，不是碳源，需加入不含氮元素的有機(jī)物(如葡萄糖)作為碳源。2.做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是()A.高壓蒸汽滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋B.倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上C.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落D.用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上答案D解析A項(xiàng)，高壓蒸汽滅菌過(guò)程中加熱結(jié)束后，讓其自然冷卻，待壓力表的壓力降到零時(shí)，再慢慢打開排氣閥以排除余氣，然后才能開蓋取物；B項(xiàng)，倒平板時(shí)左手拿培養(yǎng)皿，右手拿錐形瓶，左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋；C項(xiàng)，灼燒接種環(huán)之后，要在火焰旁冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種；D項(xiàng)，在微生物的培養(yǎng)中，一般將培養(yǎng)皿倒置，在皿底上用記號(hào)筆做標(biāo)記。3.(2018·鄭州測(cè)試)下面是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序?yàn)?、2、3、4、5。下列敘述正確的是()A.在五個(gè)區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌B.劃線操作時(shí)完全打開皿蓋，劃完立即蓋上C.接種時(shí)不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達(dá)到分離單菌落的目的D.第1區(qū)和第5區(qū)的劃線最終要連接起來(lái)，以便比較前后的菌落數(shù)答案C解析在每次劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌；進(jìn)行劃線操作時(shí)，左手將培養(yǎng)皿的皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋；注意接種時(shí)不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達(dá)到分離單菌落的目的；第1區(qū)和第5區(qū)的劃線不能相連。4.(2017·濟(jì)南模擬)某研究小組從有機(jī)廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是()A.培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌B.轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線C.接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)D.培養(yǎng)過(guò)程中每隔一周觀察一次答案B解析培養(yǎng)基滅菌后再分裝到培養(yǎng)皿中；轉(zhuǎn)換劃線角度后要灼燒接種環(huán)，冷卻后再?gòu)纳洗蝿澗€的末端開始進(jìn)行劃線；接種后的培養(yǎng)皿必須放在恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)過(guò)程中一般每隔12 h或24 h觀察一次。5.(2015·全國(guó)，39)已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P(guān)問(wèn)題：(1)顯微觀察時(shí)，微生物A菌體中的油脂通?？捎?染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用 (填“溶劑浸提法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。(2)為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應(yīng)選用以 為碳源的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。(3)若要測(cè)定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用 直接計(jì)數(shù)；若要測(cè)定其活菌數(shù)量，可選用 法進(jìn)行計(jì)數(shù)。(4)為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學(xué)測(cè)得相同時(shí)間內(nèi)，在35 、40 、45 溫度下降解10 g油脂所需酶量依次為4 mg、1 mg、6 mg，則上述三個(gè)溫度中， 條件下該酶活力最小。為了進(jìn)一步確定該酶的最適溫度，應(yīng)圍繞 設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。答案(1)蘇丹(或蘇丹)溶劑浸提法(2)油脂(3)血球計(jì)數(shù)板涂布分離(4)4540解析(1)生物組織中的油脂能被蘇丹(或蘇丹)染成橘黃色(或紅色)。(2)為了篩選出能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，我們應(yīng)選用只能讓該菌落生長(zhǎng)的選擇培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中只能選用油脂作為唯一碳源。(3)血球計(jì)數(shù)板可用于直接計(jì)數(shù)培養(yǎng)液中的菌體數(shù)，但是不分死活，因此要計(jì)數(shù)活菌數(shù)量可采用涂布分離法。(4)溫度影響酶的活性，在三個(gè)溫度中，45 需酶量最高，說(shuō)明酶活性最低；在三個(gè)溫度實(shí)驗(yàn)中，40 所需酶量最少，低于35 和45 所用酶量，說(shuō)明酶的最適溫度介于35 和45 之間，因此應(yīng)圍繞40 設(shè)計(jì)不同溫度梯度，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。6.(2017·重慶質(zhì)檢)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)研究上，常需要進(jìn)行微生物的分離和計(jì)數(shù)。(1)下表為兩種微生物的培養(yǎng)基配方：A組KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g15.0 gB組纖維素粉NaNO3Na2HPO4·7H2OKH2PO4MgSO4·7H2OKCl酵母膏水解酪素5 g1 g1.2 g0.9 g0.5 g0.5 g0.5 g0.5 g注：上述兩種培養(yǎng)基中的物質(zhì)溶解后，均用蒸餾水定容至1 000 mL。從功能上來(lái)看，上述兩種培養(yǎng)基均屬于 培養(yǎng)基。如果要對(duì)土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離，則需要選擇 培養(yǎng)基(填“A”或“B”)，該培養(yǎng)基中的碳源是 。在分離尿素分解菌所用的培養(yǎng)基中可加入 指示劑，根據(jù)指示劑的顏色可鑒定某種細(xì)菌能否分解尿素，若有分解尿素的細(xì)菌，培養(yǎng)基將會(huì)呈現(xiàn) 。(2)下圖是某同學(xué)采用的接種微生物的方法，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：本實(shí)驗(yàn)采用的接種微生物的方法是 法，把聚集的菌種逐步 分散到培養(yǎng)基的表面，為達(dá)到這一目的，操作上應(yīng)注意： (至少答2項(xiàng))。三位同學(xué)用涂布分離法測(cè)定同一土壤樣品中細(xì)菌數(shù)量，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下統(tǒng)計(jì)結(jié)果：甲同學(xué)涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是236和260，取平均值248；乙同學(xué)涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是210、240和250，取平均值233；丙同學(xué)涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是21、212和256，取平均值163；在三位同學(xué)的統(tǒng)計(jì)中， 同學(xué)的統(tǒng)計(jì)是正確的。答案(1)選擇A葡萄糖酚紅 紅色(2)平板劃線分離稀釋每次劃線前接種環(huán)要灼燒；冷卻后從上一次劃線的末端開始劃線乙解析(1)據(jù)題表中的培養(yǎng)基的配方分析，A組中的氮源為尿素，是篩選尿素分解菌的選擇培養(yǎng)基。B組中的碳源是纖維素，是篩選纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基。對(duì)土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離時(shí)，需要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，應(yīng)當(dāng)選擇A組培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中的碳源是葡萄糖。尿素分解菌可以用酚紅指示劑進(jìn)行鑒定。尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘倍筽H升高，使酚紅指示劑呈紅色。(2)據(jù)圖分析，圖示表示平板劃線分離法接種，是把聚集的菌種逐步稀釋到培養(yǎng)基的表面，操作上應(yīng)注意每次劃線前接種環(huán)要灼燒；冷卻后從上一次劃線的末端開始劃線。在進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)選擇菌落數(shù)在30300之間的平板，同時(shí)為避免誤差應(yīng)選擇至少3個(gè)或3個(gè)以上的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)并取平均值。7.2015年與我國(guó)女科學(xué)家屠呦呦平分諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)的是愛(ài)爾蘭科學(xué)家威廉·坎貝爾和日本藥物科學(xué)博士大村智，他們二人的貢獻(xiàn)是發(fā)現(xiàn)了一種新的藥物，名為阿維菌素，其衍生產(chǎn)品降低了河盲癥和淋巴絲蟲病的發(fā)病率，同時(shí)還能有效對(duì)抗其他寄生蟲病，治療效果顯著。大村智從土壤樣品中分離鏈霉菌的新菌株，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)通過(guò)成千上萬(wàn)鏈霉菌培養(yǎng)物篩選出一些較有發(fā)展前途的菌株，這就是阿維菌素的來(lái)源。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)制備鏈霉菌培養(yǎng)基時(shí)，在各成分都溶化后和分裝前，要進(jìn)行的是 和滅菌，對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的常用方法是 。倒平板時(shí)要待平板冷凝后，將平板倒置，其主要原因是 。(2)圖的接種方法是將聚集的菌種進(jìn)行 后，分散到培養(yǎng)基的表面。在培養(yǎng)基上接種時(shí)接種環(huán)需通過(guò)灼燒滅菌，完成圖中劃線操作，共需要灼燒接種環(huán) 次。圖表示的是用 法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(3)在純化過(guò)程中，在固體培養(yǎng)基上劃線分離后，經(jīng)培養(yǎng)，在劃線的末端出現(xiàn) ，表明目的菌已分離純化。(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液的 的含量，同時(shí)可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高 的利用率。答案(1)調(diào)節(jié)pH高壓蒸汽滅菌法防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水珠落入培養(yǎng)基造成污染，并防止培養(yǎng)基水分過(guò)快地?fù)]發(fā)(2)逐步稀釋4涂布分離(3)不連續(xù)單個(gè)菌落(4)溶解氧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)8.(2017·云南名校統(tǒng)考)下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方，請(qǐng)根據(jù)表格和所學(xué)知識(shí)回答下列相關(guān)問(wèn)題：成分含量成分含量蛋白胨10.0 g乳糖5.0 g蔗糖5.0 gK2HPO42.0 g顯色劑(伊紅美藍(lán))0.2 g瓊脂12.0 g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL(1)大腸桿菌的同化類型為 ，從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看，大腸桿菌屬于 。(2)在微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)中，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是 ，因此需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行 (填“消毒”或“滅菌”)，操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和 ?？諝庵械募?xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使 ，還能破壞DNA的結(jié)構(gòu)。(3)根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于 (填“選擇”或“鑒別”)培養(yǎng)基，若要分離能分解尿素的細(xì)菌，需將培養(yǎng)基中 換成 ，若要鑒定分解尿素的細(xì)菌，還需將伊紅美藍(lán)換成 。(4)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，常用的接種方法是 和 。通過(guò)上述方法可以分離得到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見的子細(xì)胞群體，稱為 。(5)使用以下微生物發(fā)酵生產(chǎn)特定產(chǎn)物時(shí)，所利用的主要微生物的細(xì)胞結(jié)構(gòu)與大腸桿菌相同的是 (多選)。A.制作果酒 B.由果酒制作果醋C.制作泡菜 D.制作腐乳答案(1)異養(yǎng)型分解者(2)防止外來(lái)雜菌的入侵滅菌消毒蛋白質(zhì)變性(3)鑒別蛋白胨尿素酚紅指示劑(4)平板劃線分離法涂布分離法菌落 (5)BC解析該培養(yǎng)基含有顯色劑(伊紅美藍(lán))屬于鑒別培養(yǎng)基。若要分離能分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)以尿素為唯一氮源，因此應(yīng)將蛋白胨換成尿素。若要鑒別尿素分解菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。制作果酒、果醋、泡菜和腐乳利用的微生物分別是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌和毛霉，其中醋酸菌、乳酸菌與大腸桿菌都屬于原核生物，酵母菌和毛霉屬于真核生物。20