2022年高考生物大一輪復(fù)習(xí) 1微生物培養(yǎng)技術(shù)考題演練 中圖版選修11.(xx·青島模擬)急性腸胃炎、手足口病分別是由細菌和病毒通過消化道進入人體導(dǎo)致的，因此檢驗飲用水的細菌含量和病毒含量是有效監(jiān)控疾病發(fā)生的必要措施。請回答下列與檢驗飲用水有關(guān)的問題：(1)檢驗大腸桿菌的含量時，通常將水樣進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，記錄菌落數(shù)量，這種方法稱為_。在下圖所示的四種菌落分布圖中，不可能是用該方法得到的是_。(2)圖中用該方法得到的菌落分布圖中，最符合計數(shù)要求的是圖中的_。(3)用該方法統(tǒng)計樣本菌落數(shù)時是否需要設(shè)置對照組？_。為什么？_。(4)分別取0.1 mL、已稀釋103倍的水樣分別涂布到3個瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，培養(yǎng)基記錄到大腸桿菌的菌落平均數(shù)為50。則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為_?！窘馕觥?1)據(jù)圖可知，D圖所示的菌落分布為平板劃線法接種獲得的。(2)利用稀釋涂布平板法進行微生物計數(shù)時，需要得到30300個菌落的平板進行計數(shù)。(3)為了增強實驗的說服力，通常要設(shè)置對照實驗，本實驗可設(shè)置空白對照排除培養(yǎng)基污染產(chǎn)生的影響。(4)根據(jù)公式計算每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為50×103÷0.1×1 000=5.0×108。答案：(1)稀釋涂布平板法D(2)C(3)需要培養(yǎng)基制備不合格會導(dǎo)致菌落數(shù)增加(4)5.0×108【易錯提醒】(1)不理解平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的結(jié)果而不能對圖中結(jié)果作出正確的判斷。(2)套用計算公式時要注意單位，容易將升與毫升混淆而出錯。2.(xx·新課標(biāo)全國卷)臨床使用抗生素前，有時需要做細菌耐藥實驗。實驗時，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實驗步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素的敏感性?；卮鹣铝袉栴}：(1)為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用_法或_法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。(2)取該單菌落適當(dāng)稀釋，用_法接種于固體培養(yǎng)基表面，在37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，使其均勻生長，布滿平板。(3)為了檢測該致病菌對于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時間后，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素A_；含B的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素B_；含C的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說明_；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的_。(4)根據(jù)上述實驗結(jié)果，為達到抗菌目的，最好應(yīng)選用抗生素_?！窘忸}指南】解答本題可從以下兩個方面著手：(1)分離微生物方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法。(2)透明圈的大小表示此種抗生素抗菌能力的強弱?！窘馕觥?1)在微生物的培養(yǎng)過程中，常用來分離微生物的方法是稀釋涂布平板法或平板劃線法。(2)為了使微生物在培養(yǎng)基上能夠均勻分布，一般用涂布法將微生物接種在培養(yǎng)基上。(3)在抗藥性檢驗過程中，如果在菌落周圍出現(xiàn)透明的圓圈，說明此種抗生素可抑制該細菌生長；透明圈的大小表示此種抗生素抗菌能力的強弱，據(jù)此可判斷A、B、C抗菌能力強弱依次是A、C、B；D的透明圈中出現(xiàn)了一個菌落，說明該菌落對此種抗生素具有耐藥性。(4)實驗結(jié)果表明抗生素A對該致病菌的抗菌效果最好。答案：(1)平板劃線稀釋涂布平板(2)涂布(3)敏感不敏感該致病菌對C的敏感性比對A的弱耐藥菌(4)A【加固訓(xùn)練】(xx·德州模擬)35%40%的甲醛水溶液(福爾馬林)可作為防腐劑，其防腐的原理是使蛋白質(zhì)變性。自然界中有能分解甲醛的細菌和真菌。下圖為分離和純培養(yǎng)分解甲醛細菌的實驗過程。請分析回答：(1)過程的目的是_，過程培養(yǎng)出的是_。(2)上述實驗中，不需要進行滅菌處理的是_，培養(yǎng)基滅菌的常用方法為_。(3)由的接種可選用_法，通過培養(yǎng)能獲得_。經(jīng)過過程后，取樣測定甲醛濃度，選出_，再分離、培養(yǎng)菌株。此菌種異化作用的類型是_。(4)為研究甲醛初始濃度對菌株降解甲醛能力的影響，進行了相應(yīng)實驗并得到如下圖所示結(jié)果。由圖可知，當(dāng)甲醛的初始濃度小于1 200 mg/L時，菌株_；當(dāng)甲醛的初始濃度增高至1 600 mg/L時，48小時后菌株對甲醛的降解能力很弱，甚至失去降解能力，其原因可能是_?！窘忸}指南】解答本題需要明確以下三方面：(1)微生物的選擇培養(yǎng)的原理和方法。(2)無菌技術(shù)的方法及其意義。(3)環(huán)境條件對微生物生長的影響?！窘馕觥?1)過程用的肉湯培養(yǎng)基主要是對污泥中的微生物進行擴大培養(yǎng)，以增加目的菌的菌群數(shù)量(提高目的菌的種群密度)，過程用的培養(yǎng)基以甲醛為唯一碳源，因此可以選擇出以甲醛為碳源的細菌(甲醛分解菌)。(2)培養(yǎng)過程中，目的菌來自活性污泥，因此活性污泥不能進行滅菌處理，其他的器材均需滅菌處理。其中培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌。(3)微生物的純培養(yǎng)可以利用平板劃線法或稀釋涂布平板法進行接種，通過培養(yǎng)后能獲得單個菌落。通過過程培養(yǎng)后，分解甲醛能力強的菌株可使培養(yǎng)液中的甲醛大量分解，含量下降。由培養(yǎng)條件需振蕩培養(yǎng)可知，此菌種的異化作用為需氧型。(4)由曲線可知，當(dāng)甲醛的初始濃度小于或等于1 200 mg/L時，曲線均能降至0，因此可以完全降解甲醛；當(dāng)甲醛的初始濃度增高至1 600 mg/L時，甲醛下降到一定濃度便不再下降，說明甲醛分解菌已經(jīng)失去分解甲醛的能力，可能是甲醛濃度過高會使菌體蛋白質(zhì)變性，從而降低了細菌降解甲醛的能力(甲醛濃度過高會產(chǎn)生毒害作用，降低了細菌降解甲醛的能力)。答案：(1)增加目的菌的菌群數(shù)量(提高目的菌的種群密度)以甲醛為碳源的細菌(2)活性污泥高壓蒸汽滅菌法(3)平板劃線(稀釋涂布平板)單個菌落甲醛濃度最低的培養(yǎng)瓶需氧型(4)可以完全降解甲醛甲醛濃度過高會使菌體蛋白質(zhì)變性，從而降低了細菌降解甲醛的能力(甲醛濃度過高會產(chǎn)生毒害作用，降低了細菌降解甲醛的能力)3.(xx·濰坊模擬)據(jù)報道，從部分企業(yè)生產(chǎn)的速凍食品中檢出葡萄球菌超標(biāo)，“細菌門”事件引起公眾普遍關(guān)注。葡萄球菌能分解卵黃中的卵磷脂，在含卵黃的固體培養(yǎng)基上形成的菌落周圍會出現(xiàn)特有的乳白色的乳濁環(huán)。請回答下列問題：(1)某興趣小組欲檢測某果汁類食品中是否含有葡萄球菌，請幫他們完善下列步驟。配制培養(yǎng)基：稱取適量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等，加入蒸餾水，攪拌加熱至完全溶解后調(diào)節(jié)pH，分裝到錐形瓶后進行_，在無菌狀態(tài)下加入卵黃液(100 mL 10%滅菌NaCl溶液中加一個雞蛋黃，振蕩均勻)搖勻后立即倒平板。接種：取待檢測果汁2.5 mL加入22.5 mL滅菌生理鹽水中，制成接種樣液。實驗組：將接種樣液用_法接種在含卵黃的固體培養(yǎng)基上。對照組：將_用平板劃線法接種在含卵黃的固體培養(yǎng)基上或不接種作為_對照。將上述接種后的培養(yǎng)皿同時放在36的恒溫箱中培養(yǎng)48 h。觀察：觀察培養(yǎng)基表面_。(2)培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨為葡萄球菌生長和繁殖提供_。葡萄球菌能耐受高濃度的NaCl溶液，所以在配制培養(yǎng)基時加入高濃度的NaCl溶液可以將它分離出來，此培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。(3)若要統(tǒng)計某土壤樣品中該活菌數(shù)目，宜采用_法?！窘忸}指南】(1)關(guān)鍵信息：葡萄球菌能分解卵黃中的卵磷脂，在含卵黃的固體培養(yǎng)基上形成的菌落周圍會出現(xiàn)特有的乳白色的乳濁環(huán)。接種樣液是用滅菌生理鹽水稀釋的。對照組用平板劃線法接種。(2)必備知識：對照實驗除自變量不同，其他均相同。要統(tǒng)計土壤中的活菌數(shù)目宜用稀釋涂布平板法?！窘馕觥?1)培養(yǎng)基的制備流程：計算稱量溶化滅菌倒平板。比較實驗組和對照組可知，實驗的自變量為是否接種接種樣液，接種方法為無關(guān)變量，因此實驗組的接種方法應(yīng)與對照組相同，也應(yīng)用平板劃線法。對照組不接種，或接種接種樣液的溶劑，為空白對照。根據(jù)題干關(guān)鍵信息“葡萄球菌能分解卵黃中的卵磷脂，在含卵黃的固體培養(yǎng)基上形成的菌落周圍會出現(xiàn)特有的乳白色的乳濁環(huán)”可知，存在葡萄球菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)周圍有乳濁環(huán)的菌落，因此可以根據(jù)是否出現(xiàn)周圍有乳濁環(huán)的菌落判斷是否存在葡萄球菌。(2)培養(yǎng)基中的牛肉膏可以為葡萄球菌生長和繁殖提供碳源、氮源、磷酸鹽和維生素，蛋白胨可以為葡萄球菌生長和繁殖提供氮源和維生素。加入高濃度的NaCl溶液的培養(yǎng)基可以抑制大多數(shù)微生物的生長繁殖，因此該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(3)統(tǒng)計某土壤樣品中葡萄球菌的活菌數(shù)目應(yīng)采用稀釋涂布平板法。答案：(1)滅菌(高壓蒸汽滅菌)平板劃線無菌生理鹽水空白是否出現(xiàn)周圍有乳濁環(huán)的菌落(2)碳源、氮源、磷酸鹽和維生素選擇(3)稀釋涂布平板4.(xx·煙臺模擬)人和哺乳動物的尿中含有尿素，大量尿素的存在會對環(huán)境造成污染。土壤中有些細菌含有脲酶，可通過降解尿素作為其生長的氮源?，F(xiàn)對土壤中的這類細菌進行分離實驗，請回答下列問題。(1)將樣液進行一系列的梯度稀釋，然后接種培養(yǎng)。在稀釋土壤溶液的過程中每一步都要在_旁進行操作。接種后的培養(yǎng)皿_于37的_中培養(yǎng)。(2)用含有酚紅指示劑的培養(yǎng)基篩選能分泌脲酶的細菌，從功能上劃分該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。若培養(yǎng)基中存在能分解尿素的細菌，其菌落周圍會出現(xiàn)紅色環(huán)帶，這是由于尿素被分解產(chǎn)生的_使pH升高，酚紅指示劑產(chǎn)生顏色變化，從而證明這一菌株可以以尿素作為氮源。變色區(qū)域越大，表明該菌株利用尿素的能力_。(3)與全營養(yǎng)培養(yǎng)基中的菌落相比，以尿素為氮源的培養(yǎng)基中菌落數(shù)()A.多B.少C.相等D.幾乎為零【解析】(1)微生物的接種操作要在酒精燈的火焰旁進行，接種后的平板要倒置于37的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(2)加入指示劑的培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基。加入的酚紅指示劑可以指示培養(yǎng)基pH的變化，當(dāng)分解尿素的細菌分解尿素時，會產(chǎn)生氨，使培養(yǎng)基pH升高，培養(yǎng)基變紅，并且產(chǎn)生的氨量與紅色的顏色深淺呈正相關(guān)。(3)以尿素為氮源的培養(yǎng)基上只能生長尿素分解菌，因此該培養(yǎng)基上長出的菌落數(shù)目比全營養(yǎng)培養(yǎng)基上長出的菌落數(shù)少。答案：(1)酒精燈火焰倒置恒溫培養(yǎng)箱(2)鑒別氨越強(3)B5.現(xiàn)在大力提倡無紙化辦公，但是每年仍然不可避免地產(chǎn)生大量的廢紙，其主要成分是木質(zhì)纖維，人類正努力將其轉(zhuǎn)化為一種新的資源乙醇。如圖是工業(yè)上利用微生物由纖維素生產(chǎn)乙醇的基本工藝流程，請回答相關(guān)問題：(1)自然界中環(huán)節(jié)需要的微生物大多分布在_的環(huán)境中。將從土壤中獲得的微生物培養(yǎng)在以_為碳源、并加入_的培養(yǎng)基上，篩選周圍有_的菌落。(2)在如上所述的篩選過程中獲得了三個菌落，對它們分別培養(yǎng)，并完成環(huán)節(jié)，且三種等量酶液中酶的濃度相同，則你認為三種酶液的活性_(一定相同、不一定相同、一定不同)，可以通過_進行定量測定來鑒定其活性是否相同。(3)根據(jù)測定結(jié)果，環(huán)節(jié)常選擇木霉，則中獲得的酶是_酶。(4)生產(chǎn)中可以滿足環(huán)節(jié)的常見菌種是_，為了確保獲得產(chǎn)物乙醇，環(huán)節(jié)要注意_?！窘馕觥?1)富含纖維素的土壤中，含有大量以纖維素為碳源的纖維素分解菌。剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素分解后，復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，通過此方法來篩選纖維素分解菌。(2)酶液中酶的濃度相同，酶的活性不一定相同，可通過測定纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖量是否相等來鑒定其活性是否相同。(3)木霉能產(chǎn)生纖維素酶，可以將纖維素分解。(4)在乙醇發(fā)酵中常用的微生物是酵母菌，在接種過程中一定要避免雜菌污染。乙醇是酵母菌無氧發(fā)酵的產(chǎn)物，發(fā)酵過程中一定要保持無氧的環(huán)境。答案：(1)富含纖維素(其他答案合理也可，如落葉較多等)纖維素剛果紅透明圈(2)不一定相同對纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖(3)纖維素(4)酵母菌發(fā)酵裝置的密閉性(或保證無氧條件等)