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1、2022高中生物 專題2 課題1 微生物的實驗室培養(yǎng)教學案（含解析）新人教版選修1 一、培養(yǎng)基 1．概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。 2．種類：(按物理性質(zhì)分) 3．營養(yǎng)構成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。 二、無菌技術 1．獲取純凈培養(yǎng)物的方法 獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌的入侵，具體操作如下： (1)對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒。 (2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌。 (3)為避免周圍環(huán)

2、境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。 (4)實驗操作時應避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。 2．消毒和滅菌 (1)概念：[填表] 比較項目 理化因素的作用強度 消滅微生物的數(shù)量 芽孢和孢子能否被消滅 消毒 較為溫和 物體表面或內(nèi)部的部分微生物 不能 滅菌 強烈 物體內(nèi)外所有的微生物 能 (2)常用方法：[連線] 三、大腸桿菌的純化培養(yǎng) 1．制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 (1)操作步驟： →→→→ (2)倒平板的方法及注意事項： ①請用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。 ②甲、乙、丙中的滅菌方法是

3、灼燒滅菌。 ③丁中的操作需要等待平板冷卻凝固才能進行。 2．純化大腸桿菌 (1)純化原理：在培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細菌菌落。 (2)接種方法： ①平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。 ②稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。 (3)培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基都放入37_℃恒溫箱中，培養(yǎng)12 h和24 h后，分別觀察、記錄。 四、菌種的保存[連線] 1．不同培養(yǎng)基的具

4、體配方不同，但一般都含(　　) A．碳源、磷酸鹽和維生素 B．氮源和維生素 C．水、碳源、氮源和無機鹽 D．碳元素、氧元素、氫元素、氮元素 解析：選C　培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，此外還應考慮pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)及O2等條件。 2．獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是(　　) A．將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌 B．接種純種細菌 C.適宜環(huán)境條件下培養(yǎng) D．防止外來雜菌的入侵 解析：選D　獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止外來微生物的污染。 3．下列關于消毒和滅菌方法的選擇，對應錯誤的是(　　) A．培養(yǎng)基——高壓蒸汽滅菌 B．牛奶——煮沸消毒 C．接種

5、環(huán)——灼燒滅菌 D．實驗者雙手——化學消毒 解析：選B　對牛奶應采用巴氏消毒法進行消毒。 4．下列敘述錯誤的是(　　) A．右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞，為避免污染需放在酒精燈火焰附近 B．倒平板整個過程應在酒精燈火焰旁進行 C．打開培養(yǎng)皿的皿蓋，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋 D．為避免水滴滴入培養(yǎng)基，平板應倒過來放置 解析：選C　C項應是用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，而不是完全打開，以防雜菌污染。 5．下列有關稀釋涂布平板法的敘述，錯誤的是(　　) A．首先將菌懸液進行一系列的梯度稀釋 B．然后將不同稀釋度的

6、菌懸液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面 C．在適宜條件下培養(yǎng) D．結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落 解析：選D　稀釋涂布平板法是將菌懸液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌懸液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，在適宜條件下培養(yǎng)。只有在稀釋度足夠高的菌懸液里，聚集在一起的微生物才能被分散成單個細胞，從而在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。 1．培養(yǎng)基配制的原則 (1)目的要明確：不同的微生物需求不同，根據(jù)培養(yǎng)目的進行配制。 (2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。營養(yǎng)物質(zhì)濃度過低不能滿足微生物營養(yǎng)需要，過高對微生物的生長有抑制作用。 (3)pH要適宜：各種微生物適宜生長的

7、pH范圍不同，如細菌的適宜pH約為6.5～7.5、放線菌的適宜pH約為7.5～8.5、真菌的適宜pH約為5.0～6.0。為維持pH的相對恒定，可在培養(yǎng)基中加入緩沖劑，常用的緩沖劑是磷酸氫二鉀—磷酸二氫鉀。 2．培養(yǎng)基的成分 營養(yǎng)物質(zhì) 定義 作用 主要來源 碳源 凡能提供碳元素的物質(zhì) 構成生物體細胞的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些也是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì) 無機碳源：CO2、NaHCO3等；有機碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等 氮源 凡能提供氮元素的物質(zhì) 合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物 無機氮源：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等 生長因子

8、 生長必不可少的微量有機物 是酶和核酸的組成成分 維生素、氨基酸、堿基等 水 — 不僅是優(yōu)良的溶劑，而且可維持生物大分子結(jié)構的穩(wěn)定 培養(yǎng)基、空氣、代謝產(chǎn)物 無機鹽 為微生物提供除碳、氮以外的各種重要元素，包括大量元素和微量元素 是細胞的組成成分、生理調(diào)節(jié)物質(zhì)、某些化能自養(yǎng)菌的能源，酶的激活劑等 無機化合物 [名師點撥]　幾種微生物的營養(yǎng)和能量來源 微生物 碳源 氮源 能源 藍藻 CO2 NH、NO等 光能 硝化細菌 CO2 NH3 NH3的氧化 根瘤菌 糖類等有機物 N2 有機物 大腸桿菌 糖類、蛋白質(zhì)等有機物 蛋白質(zhì)等 有機物

9、 3．幾種常用滅菌和消毒方法的比較 滅菌和消毒種類 主要方法 應用范圍 灼燒滅菌 酒精燈火焰灼燒 微生物接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬用具等，接種過程中的試管口或瓶口等 干熱滅菌 干熱滅菌箱160～170 ℃加熱1～2 h 玻璃器皿(如吸管、培養(yǎng)皿等)、金屬用具等凡不適宜用其他方法滅菌而又能耐高溫的物品 高壓蒸汽滅菌 100 kPa、121 ℃維持15～30 min 培養(yǎng)基及多種器材、物品 煮沸消毒法 100 ℃煮沸5～6 min 家庭餐具等生活用品的消毒 巴氏消毒法 70～75 ℃煮30 min或80 ℃煮15 min 牛奶、啤酒、果酒和醬油等

10、不宜進行高溫滅菌的液體 紫外線消毒 30 W紫外燈照射30 min 接種室、接種箱、超凈工作臺 化學藥物消毒 用體積分數(shù)為70%～75%的酒精、碘酒涂抹，來蘇爾噴灑等 用于皮膚、傷口、動植物組織表面消毒和空氣、手術器械、塑料或玻璃器皿等的消毒 [題組沖關] 1．下列對滅菌和消毒的理解，錯誤的是(　　) A．滅菌是指殺滅環(huán)境中的一切微生物的細胞、芽孢和孢子 B．消毒和滅菌實質(zhì)上是完全相同的 C．接種環(huán)用灼燒法滅菌 D．常用滅菌方法有灼燒滅菌法、干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法 解析：選B　消毒是使用較為溫和的物理或化學方法，僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物，不包括芽孢和孢

11、子。滅菌則是使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 2．下表是某微生物培養(yǎng)基的配方。請分析回答下列問題： 編號 ① ② ③ ④ ⑤ 成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O 含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL (1)從培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分看，此培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)的微生物其同化作用類型是________________。利用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時，微生物所需要的碳源來自____________。 (2)此表中含有的微生物的營養(yǎng)成分包括____________。 (3)若除去該培

12、養(yǎng)基中的①后再加入不含氮元素的有機物，則此培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物種類是__________________________。 (4)培養(yǎng)基若加入氨基酸，則它可充當?shù)臓I養(yǎng)成分是_______________________________。 (5)若要觀察微生物的菌落特點，培養(yǎng)基中還應添加的成分是____________________。 解析：(1)從培養(yǎng)基的成分看，該培養(yǎng)基無有機物，因此可以培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物，微生物所需的碳源只能由空氣中的CO2提供。(2)培養(yǎng)基中的成分包括微生物需要的氮源、無機鹽和H2O。(3)培養(yǎng)基中的①是該培養(yǎng)基中唯一的氮源，去掉后則成為無氮培養(yǎng)基，可用于培養(yǎng)自生固

13、氮微生物，因為自生固氮微生物可以利用大氣中的N2作為氮源。(4)在培養(yǎng)基中加入氨基酸，可以為微生物提供碳源、氮源和特殊營養(yǎng)。(5)微生物的菌落需要在固體培養(yǎng)基的表面生長，因此培養(yǎng)基中需要添加凝固劑(瓊脂)，使液體培養(yǎng)基凝固成固體培養(yǎng)基。 答案：(1)自養(yǎng)型　空氣中的CO2　(2)H2O、無機鹽、氮源　(3)自生固氮微生物　(4)碳源、氮源和特殊營養(yǎng)　(5)凝固劑(瓊脂) 1．操作步驟 2．倒平板操作的注意事項 (1)培養(yǎng)基要冷卻到50 ℃左右時開始倒平板。溫度過高會燙手，過低培養(yǎng)基又會凝固。 (2)要使錐形瓶的瓶口通過酒精燈火焰。通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。

14、(3)倒平板時，要用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開，以免雜菌污染培養(yǎng)基。 (4)平板冷凝后，要將平板倒置。因為平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，培養(yǎng)基表面的溫度也較高，平板倒置后，既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 (5)在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，那么這個平板不能用來培養(yǎng)微生物，因為空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。 (6)整個操作過程要在酒精燈火焰旁進行，避免雜菌污染。 [題組沖關] 3．下列關于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是(　　) A．操作順序

15、為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌 B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯 C．加熱溶化瓊脂時應不斷用玻璃棒攪拌 D．待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右時倒平板 解析：選A　制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，其順序不能顛倒。牛肉膏容易吸潮，所以稱好后需將稱量紙一同放入燒杯，當牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙。在溶化時，加入瓊脂后應不斷用玻璃棒攪拌，防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂。待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右，并且培養(yǎng)基處于溶化狀態(tài)時開始倒平板。 4．下列有關倒平板操作的敘述，錯誤的是(　　) A．將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上 B．使打開的錐形

16、瓶瓶口迅速通過火焰 C．將培養(yǎng)皿打開，培養(yǎng)皿蓋倒放在桌面上 D．等待平板冷卻凝固后需要倒過來放置 解析：選C　整個倒平板過程要防止外來雜菌的入侵，因此滅過菌的培養(yǎng)皿應放在火焰旁，打開的錐形瓶瓶口應迅速通過火焰，培養(yǎng)皿應打開一條稍大于瓶口的縫隙，而不能將培養(yǎng)皿蓋完全打開，等待平板冷卻凝固后需要倒過來放置。 1．平板劃線法 (1)操作步驟 (2)注意事項 ①第一次劃線及每次劃線之前都需灼燒接種環(huán)滅菌，劃線操作結(jié)束仍需灼燒接種環(huán)。 ②灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。 ③在做第二次以及其后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，這樣才能使

17、細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。 ④劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。 ⑤劃線用力要大小適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。 (3)平板劃線操作中幾次灼燒接種環(huán)的目的 項目 第一次劃線前灼燒 每次劃線前灼燒 劃線結(jié)束灼燒 目的 避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種均來自上次劃線的末端 殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者 2．稀釋涂布平板法 (1)操作步驟 ①系列稀釋操作： a．將分別盛有9 mL水的6支試管滅菌，并按101～106的順序編號。

18、 b．用移液管吸取1 mL培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸3次，使菌液與水充分混勻。 c．從101倍稀釋的試管中吸取1 mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，重復b步的混勻操作。依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋。 ②涂布平板操作： (2)注意事項 ①每支試管及其中的9 mL水、移液管等均需滅菌；操作時，試管口和移液管應在離酒精燈火焰1～2 cm處。 ②涂布器用體積分數(shù)為70%的酒精消毒，取出時，讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃。 ③不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。 ④

19、酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不要接觸任何物體。 [名師點撥]　平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較 (1)單細胞菌落的獲得：利用平板劃線法接種時，單細胞菌落從后劃線的區(qū)域挑??；利用稀釋涂布平板法接種時，只有合適的稀釋度才能得到單細胞菌落。 (2)兩種接種方法的應用：兩種方法都能將微生物分散到固體培養(yǎng)基表面，以獲得單細胞菌落，達到分離純化微生物的目的；稀釋涂布平板法還能對微生物進行計數(shù)，而平板劃線法不能用于微生物的計數(shù)。 3．實驗結(jié)果分析與評價 (1)未接種的培養(yǎng)基表面若有菌落生長，說明培養(yǎng)基被污染；若無，則說明未被污染。 (2)在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上可觀察到獨立的菌落。有光

20、滑型菌落，菌落邊緣整齊，表面有光澤，濕潤、光滑、呈灰色；也有粗糙型菌落，菌落扁平，干澀、邊緣不整齊；還有黏液型菌落，為含莢膜菌的菌落。 (3)培養(yǎng)12 h和24 h，菌落大小不同，培養(yǎng)24 h，菌落大，灰色深，光澤度強。 (4)若在培養(yǎng)基中觀察到不同形態(tài)的菌落，原因可能是菌液不純、混入其他雜菌或在實驗操作過程中被雜菌污染。 [題組沖關] 5．下列關于平板劃線操作的敘述，正確的是(　　) A．使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，在操作過程中不需要再滅菌 B．打開含菌種的試管，需通過酒精燈火焰滅菌，取出菌種后需馬上塞上棉塞 C．將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線即可 D．最

21、后將平板倒置，放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 解析：選D　在平板劃線時，已滅過菌的接種環(huán)在每次劃線后，必須用灼燒滅菌法滅菌，以殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種；盛有菌種的試管在打開或重新塞棉塞前，都需將試管口通過酒精燈火焰灼燒滅菌；在平板內(nèi)劃三至五條平行線后應蓋上皿蓋，并灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域劃線，并按此操作繼續(xù)往三、四、五區(qū)域劃線；接種完成后，需將平板倒置放入培養(yǎng)箱，以防培養(yǎng)皿皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 6．(全國卷Ⅲ)某同學用新鮮的泡菜濾液為實驗材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；?/p>

22、答下列問題： (1)分離純化乳酸菌時，首先需要用________對泡菜濾液進行梯度稀釋，進行梯度稀釋的理由是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (2)推測在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有____________________和_________________________________________________

23、_______________________。 分離純化時應挑選出________________的菌落作為候選菌。 (3)乳酸菌在－20 ℃長期保存時，菌液中常需要加入一定量的____________(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。 解析：(1)分離純化乳酸菌時，首先需要用無菌水對泡菜濾液進行梯度稀釋，這樣既可避免雜菌污染，又可將乳酸菌分散成單個細胞，以便在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。(2)乳酸的積累影響乳酸菌的增殖，加入碳酸鈣可以中和乳酸菌代謝(無氧呼吸)過程中產(chǎn)生的乳酸，另外，乳酸和碳酸鈣反應，進而導致碳酸鈣分解形成透明圈，有利于乳酸菌的鑒別和分離。(3)對于需要長期保存的菌種

24、，可以采用甘油管藏的方法。在3 mL的甘油瓶中，裝入1 mL甘油后滅菌。將1 mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20 ℃的冷凍箱中保存。 答案：(1)無菌水　泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落　(2)鑒別乳酸菌　中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)　具有透明圈　(3)甘油 [隨堂基礎鞏固]　 1．下列關于培養(yǎng)基的說法，正確的是(　　) A．任何培養(yǎng)基都必須含有碳源、氮源、礦質(zhì)元素、水及生長因子 B．培養(yǎng)基只有兩類：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基 C．固體培養(yǎng)基中加入少量水即可制成液體培養(yǎng)基 D．配制培養(yǎng)基時要注意各種養(yǎng)分的濃度和比例 解析：選D　不同微生物對

25、營養(yǎng)物質(zhì)的需求不同，如自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基不需要加碳源，自生固氮菌的培養(yǎng)基不需要加氮源。按不同的分類標準，培養(yǎng)基可有不同的種類和作用，其中固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基里加入瓊脂等凝固劑配制而成的。配制培養(yǎng)基時要注意各種養(yǎng)分的濃度和比例。 2．下列操作與消毒滅菌無關的是(　　) A．接種前用酒精燈火焰灼燒接種環(huán) B．接種前用酒精擦拭雙手 C．將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng) D．接種在酒精燈的火焰旁完成 解析：選C　接種用具、器皿、空氣中都存在大量微生物，必須嚴格地消毒滅菌。A、B、D三項都是實驗操作過程中消毒或滅菌的措施。將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)與滅菌無關。 3．采用干熱滅菌、灼燒滅菌

26、、高壓蒸汽滅菌、紫外線照射等幾種方法，可分別殺死哪些部位的雜菌(　　) A．接種環(huán)、吸管、培養(yǎng)基、接種室 B．吸管、接種環(huán)、培養(yǎng)基、接種箱 C．培養(yǎng)基、吸管、接種環(huán)、接種箱 D．培養(yǎng)皿、吸管、培養(yǎng)基、雙手 解析：選B　干熱滅菌是將滅菌物品放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170 ℃下加熱1～2 h，適用于耐高溫且需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等；灼燒滅菌是利用酒精燈火焰的充分燃燒層滅菌，如接種針、接種環(huán)等；高壓蒸汽滅菌用高壓蒸汽滅菌鍋，一般在壓力為100 kPa，溫度為121 ℃的條件下，維持15～30 min，主要用于培養(yǎng)基滅菌；紫外線照射適用于物體表面滅菌和空

27、氣滅菌，如接種室、接種箱、超凈工作臺等，使用前用紫外線照射約30 min。 4．不同的微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要各不相同。下列有關一種以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物營養(yǎng)的描述，錯誤的是(　　) A．氮源物質(zhì)為該微生物提供必要的氮元素 B．碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì) C．無機鹽是該微生物不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì) D．水是該微生物的營養(yǎng)要素之一 解析：選B　由題干以CO2為唯一碳源可知，該微生物可以利用CO2合成有機物，CO2不能為微生物提供能量，其能源來自光能或氧化無機物釋放出的化學能。 5．將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基都放入37 ℃恒溫箱的目的是(　　) A．對比觀察培養(yǎng)基有

28、沒有被微生物利用 B．對比分析培養(yǎng)基是否被雜菌污染 C．沒必要放入未接種的培養(yǎng)基 D．為了下次接種時再使用 解析：選B　對未接種的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，起到對照作用，可確定培養(yǎng)基是否被雜菌污染。 6．下列有關平板劃線操作的描述，錯誤的是(　　) A．將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅 B．接種環(huán)在平板上劃線的位置是隨機的 C．在挑取菌種前和接種完畢后均要將試管口通過酒精燈火焰 D．最后一區(qū)的劃線不能與第一區(qū)相連 解析：選B　接種環(huán)在平板上劃線的位置并不是隨機的：將沾有菌種的接種環(huán)伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線后應蓋上皿蓋，并灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始

29、往第二區(qū)域內(nèi)劃線，重復以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。 7．圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，回答相關問題： (1)圖甲是利用____________法進行微生物接種，圖乙是利用____________法進行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是________和________；對這兩種接種工具進行滅菌和消毒的方法依次是____________和酒精消毒。 (2)平板劃線時，為保證微生物的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐步減少，每次劃線都要從______________________開始，平板劃線結(jié)束后，最后一次劃的線不能與第一次劃的線________。 (3)接種操作為什么一

30、定要在火焰附近進行？_______________________________________________________。 (4)下圖是接種后培養(yǎng)的效果圖解，其接種方法是______(填“圖甲”或“圖乙”)。 (5)假設用圖乙所示方法接種培養(yǎng)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落連成一片，可能的原因是什么？________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________

31、__。 解析：(1)圖甲和圖乙分別是平板劃線法和稀釋涂布平板法進行微生物接種，這兩種方法所用的接種工具分別是接種環(huán)和涂布器。(2)平板劃線時，每次劃線前都要從上一次劃線的末端開始，最后一次劃線不能與第一次劃線相連。(3)由于在酒精燈火焰附近存在著無菌區(qū)域，因此接種常在火焰附近進行。(4)培養(yǎng)基上的菌落分布均勻，接種方法為稀釋涂布平板法。(5)采用稀釋涂布平板法進行菌種分離時，稀釋度要足夠高，否則會使微生物不能分散成單個細胞。 答案：(1)平板劃線　稀釋涂布平板　接種環(huán)　涂布器　灼燒滅菌　(2)上一次劃線的末端　相連(或相接、相交、交叉等)　(3)火焰附近存在著無菌區(qū)域　(4)圖乙　 (5

32、)稀釋倍數(shù)不夠，菌液的濃度太高 [課時跟蹤檢測]　 一、選擇題 1．下列關于微生物的營養(yǎng)，說法正確的是(　　) A．同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源 B．凡是碳源都能提供能量 C．除水以外的無機物僅提供無機鹽 D．無機氮源也可能提供能量 解析：選D　對一些微生物來說，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。CO2是光能自養(yǎng)細菌的碳源，但不能提供能量。CO2和N2是無機物，也是微生物的碳源和氮源。硝化細菌所利用的氮源是無機氮源氨，同時氨也為硝化細菌提供用以化能合成作用的能源。 2．培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒方法依次是(　　) ①

33、化學消毒?、谧茻郎缇、鄹蔁釡缇、茏贤饩€消毒?、莞邏赫羝麥缇、薨褪舷? A．⑤③②①④⑥　　　　　　B．①②③④⑤⑥ C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤ 解析：選A　培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿耐高溫，需用干熱滅菌；接種環(huán)可用灼燒滅菌達到迅速徹底地滅菌的效果；實驗操作者的雙手可用化學藥劑進行消毒，如用酒精擦拭雙手；空氣可用紫外線消毒；為不破壞牛奶中的營養(yǎng)成分，可采用巴氏消毒。 3．(江蘇高考)做“微生物的分離與培養(yǎng)”實驗時，下列敘述正確的是(　　) A．高壓滅菌加熱結(jié)束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋 B．倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免

34、培養(yǎng)基濺到皿蓋上 C．為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落 D．用記號筆標記培養(yǎng)皿中菌落時，應標記在皿底上 解析：選D　在高壓滅菌的操作過程中，加熱結(jié)束后應讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，待壓力表的壓力降到零時，打開放氣閥，旋松螺栓，打開蓋子。倒平板時，用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，而不是完全取下放到一邊。接種環(huán)經(jīng)火焰灼燒滅菌后應在火焰旁冷卻后，再用其挑取菌落。在微生物的培養(yǎng)中，一般在皿底上用記號筆做標記。 4．下列有關平板劃線法操作的敘述，錯誤的是(　　) A．第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 B．每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃

35、線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種 C．在每一區(qū)域內(nèi)劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液 D．劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)能及時殺死接種環(huán)上的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者 解析：選C　在用平板劃線法分離大腸桿菌的實驗中，接種環(huán)取菌種前灼燒的目的是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；以后每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線后殘留的菌種；劃線結(jié)束后仍需灼燒接種環(huán)，是為了避免細菌污染環(huán)境和感染操作者；從第二次劃線開始，每次劃線時接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端。 5．為了保持菌種的純凈需要進行菌種的保藏，下列有關敘述錯誤的是(　　) A．對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法

36、 B．臨時保藏的菌種一般是接種到試管的斜面培養(yǎng)基上 C．臨時保藏菌種容易被污染或產(chǎn)生變異 D．對于需要長期保存的菌種，可以采用低溫－4 ℃保藏的方法 解析：選D　對于需要長期保存的菌種，可采用甘油管藏法，即在3 mL甘油瓶中加入1 mL甘油后滅菌，將1 mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20 ℃的冷凍箱中保存。 6．用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(　　) ①可以用相同的培養(yǎng)基?、诙夹枰褂媒臃N針進行接種　③都需要在酒精燈火焰旁進行接種?、芏伎梢杂脕碛嫈?shù)活菌 A．①② B．③④ C．①③ D

37、．②④ 解析：選C　平板劃線法或稀釋涂布平板法都使用固體培養(yǎng)基；平板劃線法采用接種針或接種環(huán)進行操作，而稀釋涂布平板法采用涂布器進行操作；進行接種操作時，要進行無菌操作，需要在酒精燈火焰旁接種，避免空氣中的微生物污染培養(yǎng)基；平板劃線法一般用于分離菌體而不能計數(shù)活菌。 7．下表是對四種生物的能源、碳源、氮源、新陳代謝類型的描述，正確的是(　　) 選項 項目 硝化細菌 乳酸菌 根瘤菌 衣藻 A 能源 NH3 乳酸 N2 光能 B 碳源 CO2 糖類等 糖類等 CO2 C 氮源 NH3 N2 N2 NO D 代謝類型 自養(yǎng)需氧型 異養(yǎng)厭氧型

38、 自養(yǎng)需氧型 自養(yǎng)需氧型 解析：選B　從能源來看，硝化細菌的能源是氧化氨氣為硝酸鹽過程釋放的能量，乳酸菌和根瘤菌需糖類等有機物供能；從氮源看，乳酸菌需要NH、NO；從代謝類型看，根瘤菌為異養(yǎng)需氧型；從碳源看，硝化細菌與衣藻需CO2，乳酸菌和根瘤菌需要糖類等有機物。 8．下面是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序為1、2、3、4、5。下列敘述正確的是(　　) A．在五個區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)和培養(yǎng)基進行滅菌 B．劃線操作時完全打開皿蓋，劃完立即蓋上 C．接種時不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達到分離單菌落的目的 D．第1區(qū)和第5區(qū)的劃線最終要連接起來，以便比較前后的菌落數(shù) 解析

39、：選C　在每次劃線前后都要對接種環(huán)進行滅菌；進行劃線操作時，左手將培養(yǎng)皿的皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋；注意接種時不能劃破培養(yǎng)基，否則難以達到分離單菌落的目的；第1區(qū)和第5區(qū)的劃線不能相連。 9．某研究小組從有機廢水中分離微生物用于廢水處理，下列敘述正確的是(　　) A．培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行滅菌 B．轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進行劃線 C．接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng) D．培養(yǎng)過程中每隔一周觀察一次 解析：選B　在配制培養(yǎng)基的過程中要先滅菌后倒平板；轉(zhuǎn)換劃線角度后要對接種環(huán)進行灼燒滅菌，殺滅接種環(huán)上殘留的菌種，再進

40、行劃線；接種后的培養(yǎng)皿應放置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；微生物生長、繁殖較快，在培養(yǎng)過程中一般要隔天觀察一次。 10．科學家通過實驗發(fā)現(xiàn)了細菌的快速進化過程。人們發(fā)現(xiàn)，用肉湯培養(yǎng)假單胞桿菌，如果肉湯保持不動，不久后，在肉湯的不同部位，如表面、底部或其他部位，細菌的形態(tài)發(fā)生了如圖所示的變化，出現(xiàn)一定數(shù)量的變異株。下列有關說法錯誤的是(　　) A．這個實驗說明了細菌在不同的小環(huán)境中發(fā)生了進化 B．細菌的生命周期短，繁殖速度快，容易受到外界環(huán)境影響而發(fā)生變化 C．用靜置的肉湯培養(yǎng)FS細菌，其菌落形狀將趨于一致 D．用不斷搖動的肉湯培養(yǎng)SM細菌，不會出現(xiàn)FS細菌和WS細菌 解析：選C　分析題干

41、信息可知，最初的SM細菌在靜置的肉湯表面繁殖，一段時間后，有一部分在肉湯底部繁殖，這部分可能向厭氧方向進化，故細菌在不同的小環(huán)境下可發(fā)生進化。細菌生命周期短，繁殖速度快，容易受外界環(huán)境因素(如溫度、氧氣)的影響。用靜置的肉湯培養(yǎng)FS細菌，該細菌也有可能向不同方向進化，如進化成WS細菌。不斷搖動，肉湯中的溶氧會抑制厭氧型的FS細菌；不斷搖動，容器與肉湯無固定接觸面，WS細菌無法附著生長繁殖。 二、非選擇題 11．(1)在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮________、________和滲透壓等條件。由于該細菌具有體積小、結(jié)構簡單、變異類型容易選擇、________、_____

42、___等優(yōu)點，因此常作為遺傳學研究的實驗材料。 (2)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行________(填“消毒”或“滅菌”)；操作者的雙手需要進行清洗和________(填“消毒”或“滅菌”)；空氣中的細菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能________________________________________________________________________。 (3)若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，要想使所得估計值更接近實際值，除應嚴格操作、多次重復外，還應保證待測樣品稀釋的_________________

43、_________________。 (4)通常，對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細菌進行初步的________________________________________________________________________。 (5)培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應采用的檢測方法是_______________________________。 解析：(1)大腸桿菌具有體積小、結(jié)構簡單、變異類型容易選擇、易培養(yǎng)、生活周期短等優(yōu)點，培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮溫度、酸堿度和滲透壓等條件。(2)對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿應

44、進行滅菌，操作者的雙手需要進行清洗和消毒。紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷DNA的結(jié)構。(3)稀釋涂布平板法要先將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，操作中應保證樣品稀釋的比例合適。(4)對獲得的純菌種可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細菌進行初步的鑒定。(5)檢測培養(yǎng)基是否被污染的方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜條件下進行培養(yǎng)，觀察是否有菌落形成。 答案：(1)溫度　酸堿度　易培養(yǎng)　生活周期短　(2)滅菌　消毒　損傷DNA的結(jié)構　(3)比例合適　(4)鑒定(或分類)　(5)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)

45、生 12．下面為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的成分列表，據(jù)此回答： 成分 牛肉膏 蛋白胨 NaCl H2O 含量 0.5 g 1 g 0.5 g 100 mL (1)蛋白胨在培養(yǎng)基中的作用是_________________________________。 (2)要用此材料配制觀察細菌菌落狀況的培養(yǎng)基，還需添加的成分是____________。 (3)確定表中各成分含量依據(jù)的原則是_________________________________________。 (4)培養(yǎng)基配制好后，分裝前應進行的工作是_________________________________

46、__。 (5)從配制培養(yǎng)基直到培養(yǎng)完成，所采用的預防雜菌污染的方法有_________________________________________________________________________。 (6)在培養(yǎng)基凝固前要擱置斜面，其目的是____________________________________________________________________。 解析：蛋白胨中含有大量的蛋白質(zhì)降解而成的多肽類物質(zhì)等，因而在培養(yǎng)基中提供碳源、氮源和生長因子。細菌菌落是在固體培養(yǎng)基上形成的。確定各營養(yǎng)成分含量要依據(jù)所培養(yǎng)的微生物的需要。培養(yǎng)基配制好后，首先要調(diào)

47、整pH，然后再分裝，整個操作過程都要保證無雜菌污染。 答案：(1)提供碳源、氮源、生長因子　(2)瓊脂(凝固劑)　(3)所培養(yǎng)微生物對各營養(yǎng)成分的需要量　(4)調(diào)整pH　(5)對培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌、灼燒接種環(huán)、酒精棉擦手、在火焰旁接種、在火焰旁迅速用棉塞塞住試管口　(6)擴大接種面積 13．在培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細菌菌落。實驗基本步驟如下： ―→―→―→ 請回答下列有關問題： (1)配制培養(yǎng)基時，各成分含量確定的原則是________________________。不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進行的是__

48、_____________________________。 (2)倒平板的適宜溫度是50 ℃左右，原因是_____________________________。待平板冷凝后，要將平板倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可防止________________________。 (3)純化菌株時，若使用稀釋涂布平板法進行接種，應選擇的涂布工具是圖中的________；若使用平板劃線法進行接種，應選擇的接種工具是圖中的________。 (4)劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落

49、可能的操作失誤有________________________________________________________________________。 (5)若用大腸桿菌進行實驗，使用過的培養(yǎng)基及培養(yǎng)物必須經(jīng)過________處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴散。 解析：培養(yǎng)基中各成分含量要根據(jù)微生物的生長需要來確定。微生物生長需要一定的pH，所以培養(yǎng)基裝瓶前需要調(diào)節(jié)pH。由圖可知，A為接種環(huán)，B為涂布器，C為膠頭滴管，D為接種針，稀釋涂布平板法應選擇的涂布工具是B，平板劃線法應選擇的接種工具是A。第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落，造成此現(xiàn)象的原因可能有兩個：一是接種環(huán)灼燒后未冷卻，菌種接觸到高溫的接種環(huán)而死亡；二是劃第二劃線區(qū)域第一條線時未從第一區(qū)域末端開始。有的大腸桿菌會釋放一種強烈的毒素，因此，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴散。 答案：(1)所培養(yǎng)微生物對各營養(yǎng)成分的需要量　調(diào)整pH　(2)溫度過高會燙手，過低培養(yǎng)基又會凝固　皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染　(3)B　A　(4)①接種環(huán)灼燒后未冷卻?、趧澗€未從第一區(qū)域末端開始　(5)滅菌