《2017-2018學(xué)年高中生物 第四章 生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)實(shí)踐 第9課時(shí) 生物成分的分離與測(cè)定技術(shù)同步備課教學(xué)案 蘇教版選修1》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《2017-2018學(xué)年高中生物 第四章 生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)實(shí)踐 第9課時(shí) 生物成分的分離與測(cè)定技術(shù)同步備課教學(xué)案 蘇教版選修1（20頁珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、 第9課時(shí)　生物成分的分離與測(cè)定技術(shù) [學(xué)習(xí)導(dǎo)航]　1.掌握電泳法分離大分子的原理。2.運(yùn)用常用的方法提取和分離蛋白質(zhì)。3.嘗試從血清中提取和分離血紅蛋白。4.了解芳香油的特點(diǎn)，知道提取芳香油的原理及會(huì)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)裝置進(jìn)行提取。 [重難點(diǎn)擊]　1.電泳法分離大分子的原理。2.運(yùn)用常用的方法提取和分離蛋白質(zhì)。 一、蛋白質(zhì)的分離與純化 1.分離與測(cè)定生物成分中蛋白質(zhì)的技術(shù)包括離心沉降法、薄膜透析法、凝膠色譜法和電泳法等。采用醋酸纖維薄膜電泳的方法可以將所帶電荷的數(shù)量和性質(zhì)不同的蛋白質(zhì)從混合樣品中分離并純化出來；采用水蒸氣蒸餾法和脂溶性有機(jī)溶劑提取法可以分離生物組織中的脂肪。 2.

2、蛋白質(zhì)分離的抽提方法 3.蛋白質(zhì)的分離方法 (1)離心沉降法：通過控制離心速度，使分子大小、密度不同的蛋白質(zhì)發(fā)生沉降分層。 (2)薄膜透析法：利用蛋白質(zhì)分子不能透過半透膜的特性，使蛋白質(zhì)與其他小分子化合物分離的方法。 (3)凝膠色譜法 ①概念：根據(jù)蛋白質(zhì)分子量的大小差異對(duì)其進(jìn)行有效分離的方法。 ②原理 a.凝膠 b.分離的過程 項(xiàng)目 進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部的程度 路程 移動(dòng)速度 小分子蛋白質(zhì) 容易 較長 較慢 大分子蛋白質(zhì) 無法進(jìn)入 較短 較快 (4)蒸餾 ①概念：將液體加熱至沸騰，使液體變?yōu)檎魵?，然后使蒸氣冷卻再凝結(jié)為液體，這兩個(gè)過程的聯(lián)合操作稱

3、為蒸餾，是分離和提純液態(tài)混合物常用的方法之一。 ②分離物質(zhì)的種類 a.易揮發(fā)和不易揮發(fā)的物質(zhì)。 b.液體混合物中沸點(diǎn)不同的物質(zhì)。 (5)電泳法：將所帶電荷的數(shù)量和性質(zhì)不同的蛋白質(zhì)從混合樣品中分離并純化出來。 欲研究某種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和功能，需將這種蛋白質(zhì)從組織細(xì)胞中分離、純化出來。結(jié)合教材，完成下列內(nèi)容： 1.怎樣釋放細(xì)胞中的蛋白質(zhì)？ 答案　在提取蛋白質(zhì)時(shí)，可以采用研磨和超聲波結(jié)合的方法將生物組織或細(xì)胞完全破碎，使蛋白質(zhì)從細(xì)胞中釋放出來，并使其溶解在適當(dāng)?shù)某樘嵋褐小? 2.離心沉降法分離蛋白質(zhì) (1)完善下面離心沉降法分離蛋白質(zhì)的示意圖 (2)觀察并總結(jié)離心沉降法

4、分離的原理及其目的：通過控制離心速度，使分子大小、密度不同的蛋白質(zhì)發(fā)生沉降分層，從而達(dá)到分離出不同種類蛋白質(zhì)的目的。 3.薄膜透析法分離蛋白質(zhì) 仔細(xì)觀察下面薄膜透析法分離蛋白質(zhì)的示意圖，完成下列問題： 利用蛋白質(zhì)分子不能透過半透膜的特性，從而使蛋白質(zhì)與其他小分子化合物分離開，達(dá)到純化蛋白質(zhì)的目的。 4.凝膠色譜法 (1)結(jié)合上圖，根據(jù)凝膠色譜法的分離原理，填表分析不同大小的分子洗脫后的次序。 項(xiàng)目 相對(duì)分子質(zhì)量大 相對(duì)分子質(zhì)量小 直徑大小 較大 較小 運(yùn)動(dòng)方式 垂直向下運(yùn)動(dòng) 無規(guī)則的擴(kuò)散運(yùn)動(dòng) 運(yùn)動(dòng)路程 較短 較長 運(yùn)動(dòng)速度 較快 較慢 洗脫次序

5、 先流出 后流出 (2)結(jié)合上圖，分析為什么相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)會(huì)先從色譜柱中洗脫出來？ 答案　相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)由于擴(kuò)散作用進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，而被滯留；相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)被排阻在凝膠顆粒外面，在顆粒之間迅速通過。 (3)凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí)通過一次洗脫能否將所需蛋白質(zhì)與其他雜質(zhì)徹底分離？ 答案　不能。相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無法進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，移動(dòng)距離較近，移動(dòng)速度較快，先洗脫出來；但相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)可能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，也可能不進(jìn)入，導(dǎo)致部分相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)可能與相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)一起洗脫出來。 1.凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí)由色

6、譜柱下端最先流出的是(　　) A.相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì) B.相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì) C.凝膠顆粒 D.葡萄糖或瓊脂糖分子 答案　B 解析　凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理是依據(jù)蛋白質(zhì)分子相對(duì)分子質(zhì)量的大小，相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)分子不能進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較短，移動(dòng)速度快，先洗脫出來；相對(duì)分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)分子能夠進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長，移動(dòng)速度慢，后洗脫出來，因此最先流出的應(yīng)是相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)，而凝膠顆粒是不能流出的。 2.蛋白質(zhì)的分離與純化是蛋白質(zhì)研究的重要技術(shù)。下列有關(guān)敘述不正確的是(　　) A.根據(jù)蛋白質(zhì)分子不能透過半透膜的特性，可將樣品中各種不同的蛋

7、白質(zhì)分離 B.根據(jù)蛋白質(zhì)所帶電荷性質(zhì)的差異及分子大小等，可通過電泳法分離蛋白質(zhì) C.根據(jù)蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的大小，可通過凝膠色譜法分離蛋白質(zhì) D.根據(jù)蛋白質(zhì)的分子大小、密度不同，可通過離心沉降法分離蛋白質(zhì) 問題導(dǎo)析　(1)薄膜透析法是利用了蛋白質(zhì)分子不能透過半透膜的特性，將蛋白質(zhì)與其他小分子物質(zhì)(如無機(jī)鹽、單糖、二糖以及氨基酸)分離開來的提純方法。 (2)蛋白質(zhì)所帶電荷的性質(zhì)能決定其在電泳槽中的移動(dòng)方向，分子的大小能影響其移動(dòng)速度。 (3)凝膠色譜法是根據(jù)蛋白質(zhì)分子量的大小差異對(duì)其進(jìn)行有效分離的方法。 (4)離心沉降法是通過控制離心速度，使分子大小、密度不同的蛋白質(zhì)發(fā)生沉降分層，

8、從而達(dá)到分離出不同種類蛋白質(zhì)的目的。 答案　A 解析　蛋白質(zhì)分子是生物大分子，都不能通過半透膜，因此不能利用半透膜分離蛋白質(zhì)。 一題多變 (1)本題四個(gè)選項(xiàng)涉及的提純方法中，哪種不適合將不同種類的蛋白質(zhì)分離？為什么？ 答案　薄膜透析法。因?yàn)楸∧ね肝龇ǖ脑硎歉鶕?jù)蛋白質(zhì)不能通過半透膜的特性，該方法僅可將蛋白質(zhì)與其他一些小分子物質(zhì)分離，而不適合將不同種類的蛋白質(zhì)分離。 (2)電泳法中影響蛋白質(zhì)移動(dòng)速度的因素除了分子大小外，還有哪些因素？ 答案　顆粒的大小、形狀和所帶凈電荷的多少，此外還有電場(chǎng)強(qiáng)度、溶液的pH等因素。 歸納總結(jié)　蛋白質(zhì)分離技術(shù)的原理 (1)薄膜透析法：蛋白質(zhì)水溶液具

9、有親水膠體溶液性質(zhì)，不能透過半透膜。 (2)離心沉降法：在離心力的作用下，分子大小、密度不同的蛋白質(zhì)分子沉降速度不同，從而被分離。 (3)凝膠色譜法：凝膠小球體內(nèi)部有許多貫穿的通道，相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)分子不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，只能分布在顆粒之間，通過的路程較短，移動(dòng)速度較快；相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)分子比較容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，通過的路程較長，移動(dòng)速度較慢，因此可將各種相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分離。 (4)電泳法：不同的物質(zhì)所帶電荷不同，顆粒的大小、形狀不同，因此，在電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度不同。 二、血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳 1.結(jié)合教材，完善下表 實(shí)驗(yàn)步驟 操作方法 配

10、制試劑 配制巴比妥緩沖液、染色液、漂洗液、透明液 準(zhǔn)備器材 醋酸纖維薄膜、常壓電泳儀、點(diǎn)樣器等 架濾紙橋 取雙層濾紙條，一端與支架前沿對(duì)齊，另一端浸入電泳槽的緩沖液中，待濾紙條濕潤后，驅(qū)除氣泡，使濾紙緊貼于支架上 浸泡薄膜 用鑷子夾取醋酸纖維薄膜，識(shí)別出光澤面，并在光澤面的一角用筆做上記號(hào)，然后放在巴比妥緩沖液中浸泡20 min 細(xì)心點(diǎn)樣 取出薄膜，吸去多余液體，平鋪在玻璃板上，有記號(hào)的一面朝下，點(diǎn)樣時(shí)將蓋玻片在血清中蘸一下，在薄膜一端2 cm處輕輕按下，點(diǎn)上細(xì)條狀的血清樣品，隨即提起 平懸薄膜 將點(diǎn)樣端平貼在電泳槽負(fù)極支架的濾紙橋上，有記號(hào)的一面朝上，另一端平貼于正極，

11、呈繃直狀態(tài) 實(shí)施電泳 蓋上電泳槽蓋，在醋酸纖維薄膜平衡約10 min后接通電源，電泳60～90 min 染色 取下薄膜，放入染色液中浸泡5～10 min 漂洗 取出薄膜，在漂洗液中漂洗數(shù)次，直至蛋白質(zhì)區(qū)底色脫凈為止 脫色 用濾紙壓平并吸干薄膜，再浸入透明液中約5 min，取出后平貼于玻璃板上，待完全干燥后便成透明薄膜圖譜 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1.本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟是點(diǎn)樣，點(diǎn)樣的技術(shù)要求有哪些？ 答案　點(diǎn)樣前，應(yīng)將薄膜表面多余的緩沖液用濾紙吸去，以免引起樣品擴(kuò)散；但不宜太干，否則樣品不易進(jìn)入膜內(nèi)，造成點(diǎn)樣起始參差不齊，影響分離效果。 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 (1)血清蛋白

12、主要包括幾種蛋白質(zhì)？含量大小如何？ 答案　從電泳圖譜示意圖中可以看出：血清蛋白主要包括五種蛋白質(zhì)，且含量最多的是清蛋白，其他依次是：γ－球蛋白＞α1－球蛋白＞α2－球蛋白＞β－球蛋白。 (2)這些蛋白質(zhì)帶什么電荷？四種球蛋白的泳動(dòng)速度如何？ 答案　由五種蛋白質(zhì)所處的位置可判斷出它們均帶有負(fù)電荷，四種球蛋白在電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度由快到慢依次為：α1－球蛋白＞α2－球蛋白＞β－球蛋白＞γ－球蛋白。 歸納提煉　關(guān)于血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳的幾點(diǎn)說明 (1)薄膜的浸潤與選膜是電泳成敗的關(guān)鍵之一。 (2)點(diǎn)樣時(shí)，應(yīng)將薄膜表面多余的緩沖液用濾紙吸去，吸水量以不干不濕為宜。 (3)點(diǎn)樣時(shí)，動(dòng)作要輕

13、、穩(wěn)，用力不能太大，以免損壞膜片或印出凹陷影響電泳區(qū)帶分離效果。 (4)點(diǎn)樣應(yīng)點(diǎn)在薄膜的毛面上，點(diǎn)樣量要適中，不宜過多或過少。 (5)電泳時(shí)應(yīng)將薄膜的點(diǎn)樣端置于電泳槽的負(fù)極端，且點(diǎn)樣面向下。 (6)應(yīng)控制染色時(shí)間。時(shí)間過長，薄膜底色不易脫去；時(shí)間太短，著色不易區(qū)分，或造成條帶染色不均勻，必要時(shí)可進(jìn)行復(fù)染。 3.仔細(xì)觀察下圖，所帶負(fù)電荷最少的球蛋白是(　　) A.α1－球蛋白 B.α2－球蛋白 C.β－球蛋白 D.γ－球蛋白 答案　D 解析　對(duì)于幾種球蛋白來說直徑相差不大，引起泳動(dòng)速度的差異主要來自于所帶電荷多少，由圖可知球蛋白由右向左泳動(dòng)，因右側(cè)為負(fù)極，且γ－

14、球蛋白距點(diǎn)樣處最近，所以γ－球蛋白所帶負(fù)電荷最少。 規(guī)律方法　電泳的泳動(dòng)規(guī)律 帶電顆粒直徑越小、越接近于球形，所帶凈電荷越多，則在電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度越快；反之，則越慢。 4.下列關(guān)于血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳的說法中，不正確的是(　　) A.架濾紙橋時(shí)，待濾紙條濕潤后，要驅(qū)除氣泡，以便使濾紙緊貼于支架上 B.浸泡薄膜時(shí)要識(shí)別出光澤面，并做記號(hào) C.平懸薄膜時(shí)，有記號(hào)的一面朝上 D.從染色液中取出薄膜后，用濾紙條壓平并吸干，再浸入透明液中脫色 答案　D 解析　薄膜染色后要先放入漂洗液中漂洗直至蛋白質(zhì)區(qū)底色脫凈為止，然后才用透明液脫色。 三、凝膠色譜法分離血紅蛋白 1.研究目

15、標(biāo) (1)紅細(xì)胞中含有大量的血紅蛋白，一分子血紅蛋白由四條肽鏈構(gòu)成(兩條α－肽鏈和兩條β－肽鏈)，由于其肽鏈中結(jié)合了血紅素而呈現(xiàn)出紅色。 (2)可利用哺乳動(dòng)物血液分離血紅蛋白。 2.實(shí)驗(yàn)器材 豬、羊等血液；色譜柱；交聯(lián)葡聚糖凝膠，20 mmol/L磷酸緩沖液等。 3.實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 利用凝膠色譜法分離血紅蛋白。 4.實(shí)驗(yàn)步驟 (1)樣品處理：低速短時(shí)間離心分離紅細(xì)胞。 用滴管吸出上層血漿后，將下層紅細(xì)胞倒入盛有約5倍體積的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的NaCl溶液(生理鹽水)的燒杯中攪拌后再低速離心，重復(fù)3次，直到紅細(xì)胞被洗凈，上清液不再呈現(xiàn)黃色為止。 (2)血紅蛋白的釋放、分離和透析

16、①在蒸餾水和甲苯的作用下，紅細(xì)胞破裂而釋放出血紅蛋白。 ②將混合液以2 000 r/min 的速度離心10 min，試管中形成4層(自上而下分別為甲苯層、脂溶性物質(zhì)層、血紅蛋白層、雜質(zhì)層)；用濾紙過濾其中的液體，除去脂溶性沉淀層；用分液漏斗分離出下層的紅色透明液體(血紅蛋白溶液)。 ③在透析袋中加入1 mL紅色透明液體，放入物質(zhì)的量濃度為20 mmol/L的磷酸緩沖液中(pH為7.0)透析12 h。 (3)凝膠的制備 將交聯(lián)葡聚糖凝膠用蒸餾水充分溶脹后，制成凝膠懸浮液。凝膠的溶脹一定要完全，否則會(huì)導(dǎo)致色譜柱裝填不均勻，并產(chǎn)生氣泡。 (4)色譜柱的裝填 ①將層析柱洗凈，垂直固定在支架

17、上，選擇有薄膜(100目尼龍紗)端作為層析柱下口。 ②打開色譜柱下端的乳膠管開口，將充分溶脹的凝膠懸浮液輕輕攪動(dòng)均勻，沿層析柱內(nèi)壁緩緩一次性倒入色譜柱內(nèi)。 ③立即連接洗脫瓶，在約50 cm高的操作壓下，用洗脫液(pH為7.0，物質(zhì)的量濃度為20 mmol/L的磷酸緩沖液)充分洗滌平衡凝膠12 h，使凝膠裝填緊密。 (5)樣品的加入 ①打開色譜柱下端的流出口，讓凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝膠面剛好平行，關(guān)閉出口。 ②用滴管小心吸取1 mL樣品溶液沿柱壁輕輕地加入到色譜柱頂端，不能破壞凝膠面。然后，打開流出口，使樣品液逐漸滲入凝膠。 ③當(dāng)樣品恰好完全滲入凝膠床時(shí)，再加入少量的洗脫

18、液(pH為7.0，物質(zhì)的量濃度為20 mmol/L的磷酸緩沖液)沖洗管壁。重復(fù)數(shù)次，每次既要使樣品恰好全部滲入凝膠床，又不致使凝膠床面干燥而發(fā)生裂縫。隨后可慢慢地逐步加大洗脫劑的量進(jìn)行洗脫，直至洗脫液到適當(dāng)高度。(注意：整個(gè)過程一定要仔細(xì)，避免破壞凝膠柱的床層。) (6)洗脫與收集 連接好凝膠柱層析系統(tǒng)，調(diào)節(jié)洗脫液流速為每分鐘1 mL，進(jìn)行洗脫。仔細(xì)觀察樣品在層析柱內(nèi)的分離現(xiàn)象，當(dāng)紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱的出口時(shí)，收集洗脫液，每收集5 mL即換一支收集管(要預(yù)先編號(hào))，連續(xù)收集，樣品即可完全被洗脫下來。 小貼士　(1)對(duì)色譜柱填料處理時(shí)，因凝膠是干燥的，須將其置于洗脫液中使其充分膨脹，

19、在此期間，可以通過加熱等方法使其膨脹速度加快，這也有利于排除膠粒內(nèi)的空氣，避免凝膠凝固后出現(xiàn)氣泡而影響分離效果。 (2)色譜柱的裝填時(shí)，裝柱過程中嚴(yán)禁產(chǎn)生氣泡，一旦發(fā)現(xiàn)氣泡，必須重裝。 (3)洗脫過程中，注意不能讓洗脫液流干而露出凝膠顆粒，否則需重新裝填色譜粒。 5.結(jié)論與反思 觀察紅色區(qū)帶在洗脫過程中的移動(dòng)狀況，如果紅色區(qū)帶均勻一致地移動(dòng)，并且凝膠色譜柱中沒有氣泡產(chǎn)生，說明色譜柱的裝填是成功的。 6.深入研究 若需對(duì)蛋白質(zhì)純度進(jìn)行鑒定，一般采用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳法。 (1)該方法以聚丙烯酰胺凝膠(為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有分子篩效應(yīng))作為支持介質(zhì)。 (2)SDS—聚丙烯酰胺凝膠

20、電泳具有較高的靈敏度，一般只需要微克量級(jí)的蛋白質(zhì)即可完成鑒定。 (3)蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時(shí)，它的遷移率取決于它所帶的凈電荷、分子的大小和形狀等因素。 向蛋白質(zhì)溶液中加入足夠量的SDS(十二烷基磺酸鈉)等，可使蛋白質(zhì)分子中的二硫鍵還原。十二烷基硫酸根所帶的負(fù)電荷使各種蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物都帶上大大超過了蛋白質(zhì)分子原有的負(fù)電荷量。SDS與蛋白質(zhì)的結(jié)合還可引起蛋白質(zhì)構(gòu)象改變，使不同蛋白質(zhì)的SDS復(fù)合物的短軸長度都一樣。這樣，蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物在凝膠中的遷移率不再受蛋白質(zhì)原有電荷和形狀的影響，而僅僅取決于分子量的大小。 (4)由于聚丙烯酰胺的分子篩作用，小分子蛋白質(zhì)可以很容易地通過凝

21、膠孔，阻力小，遷移速度快；大分子蛋白質(zhì)則因受到較大的阻力而被滯后，這樣蛋白質(zhì)在電泳過程中就會(huì)因其分子量的不同而被分離。 1.實(shí)驗(yàn)操作過程 (1)材料的選擇：與其他真核細(xì)胞相比，哺乳動(dòng)物成熟紅細(xì)胞有什么特點(diǎn)？這一特點(diǎn)對(duì)你進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離有什么意義？ 答案?、俨溉閯?dòng)物成熟紅細(xì)胞內(nèi)沒有細(xì)胞核和各種復(fù)雜細(xì)胞器，排除了其他物質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。②血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過觀察顏色來判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗脫液。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。 (2)洗滌紅細(xì)胞的目的是什么？你如何知道紅細(xì)胞已洗滌干凈？ 答案　洗滌的目的是去除血漿蛋白；離心后的上清液不

22、再呈現(xiàn)黃色，證明紅細(xì)胞已洗滌干凈。 (3)在血紅蛋白釋放過程中，蒸餾水和甲苯的作用分別是什么？ 答案?、僬麴s水可以使紅細(xì)胞吸水漲破，釋放細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白；②甲苯是有機(jī)溶劑，可以溶解細(xì)胞膜，有助于血紅蛋白的釋放。 (4)血紅蛋白釋放后的混合液經(jīng)離心后分為哪幾層？如何獲得血紅蛋白溶液？ 答案?、俜譃?層：從上往下數(shù)，第1層為無色透明的有機(jī)溶劑(甲苯)，第2層為白色的脂類物質(zhì)，第3層為紅色透明的血紅蛋白溶液，第4層為暗紅色的紅細(xì)胞破碎物沉淀。 ②分層的液體→過濾除去脂溶性沉淀層→分液得下層的血紅蛋白溶液。 (5)將收集的血紅蛋白溶液放在透析袋中進(jìn)行透析，透析的目的是什么？ 答案　血紅蛋

23、白是大分子物質(zhì)，不能透過透析袋，這樣可以去除相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)。 2.凝膠色譜操作 (1)在制作凝膠色譜柱時(shí)，凝膠色譜柱的高度不足或直徑過大對(duì)洗脫效果分別有何影響？ 答案　①凝膠色譜柱的高度是樣品隨緩沖溶液流過的距離，凝膠色譜柱的高度不足會(huì)導(dǎo)致達(dá)不到分離效果； ②凝膠色譜柱的直徑大小并不影響分離效果，但直徑過大會(huì)導(dǎo)致洗脫液體積大，樣品稀釋度大，使實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象不明顯。 (2)試從凝膠色譜的分離原理分析，凝膠的裝填為什么要緊密、均勻？ 答案　如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會(huì)在色譜柱內(nèi)形成無效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液的洗脫次序，影響分離的效果。

24、 (3)在裝填凝膠柱時(shí)，如果有氣泡存在，會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)的分離有何影響？ 答案　氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。 歸納總結(jié)　血紅蛋白的提取和分離各操作的主要目的 操作 目的 紅細(xì)胞的洗滌 去除雜蛋白，如血漿蛋白 血紅蛋白的釋放 使紅細(xì)胞破裂，釋放血紅蛋白 分離血紅蛋白溶液 經(jīng)過離心使血紅蛋白與其他雜質(zhì)分離開 透析 除去樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì) 純化 除去相對(duì)分子質(zhì)量較大的雜質(zhì)蛋白質(zhì) 5.下列關(guān)于凝膠色譜法分離血紅蛋白實(shí)驗(yàn)中樣品的加入和洗脫的敘述中，不正確的是(　　) A.加樣前，打開色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降

25、到凝膠面的下面 B.用吸管小心地將1 mL透析后的樣品加到色譜柱的頂端，不要破壞凝膠面 C.加樣后，打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi) D.等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口 答案　A 解析　加樣前，應(yīng)打開色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝膠面平齊，關(guān)閉出口，而不應(yīng)使緩沖液下降到凝膠面的下面，A項(xiàng)不正確。加樣時(shí)不要破壞凝膠面，B項(xiàng)正確。加樣后，打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，C項(xiàng)正確。等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口，再加緩沖液，D項(xiàng)正確。 6.下圖表示血紅蛋白提取和分離的部分實(shí)驗(yàn)裝置，請(qǐng)據(jù)圖分析回答下列問題： (1)血紅蛋白是人和其他脊椎動(dòng)物紅細(xì)

26、胞的主要組成成分，其在紅細(xì)胞中的作用體現(xiàn)了蛋白質(zhì)具有 功能。 (2)甲裝置用于 ，目的是去除樣品中 的雜質(zhì)，圖中A是 。B是 溶液。 (3)用乙裝置分離蛋白質(zhì)的方法叫 ，是根據(jù) 分離蛋白質(zhì)的有效方法。 (4)乙裝置中，C是 ，其作用是 。 (5)用乙裝置分離血紅蛋白時(shí)，待 時(shí)，用試管收集流出液，每5 mL

27、收集一管，連續(xù)收集6管，圖中試管序號(hào)表示收集的先后。經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，試管②和試管⑤中蛋白質(zhì)含量最高，則試管⑤中的蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量比血紅蛋白 (填“大”或“小”)。 答案　(1)運(yùn)輸 (2)透析(粗分離)　相對(duì)分子質(zhì)量較小　磷酸緩沖液　血紅蛋白 (3)凝膠色譜法　相對(duì)分子質(zhì)量的大小 (4)磷酸緩沖液　洗脫血紅蛋白 (5)紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱的出口　小 解析　(1)血紅蛋白能攜帶氧氣，體現(xiàn)了蛋白質(zhì)具有運(yùn)輸功能。(2)甲裝置為透析裝置，目的是去除樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)。其中A是磷酸緩沖液，B是血紅蛋白溶液。(3)乙裝置分離蛋白質(zhì)的方法叫凝膠色譜法，是根據(jù)蛋白質(zhì)的相對(duì)分

28、子質(zhì)量大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。(4)乙裝置中，C溶液為磷酸緩沖液，作用是洗脫血紅蛋白。(5)待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱出口時(shí)，用試管收集流出液，每5 mL收集一管，連續(xù)收集。最先收集到的蛋白質(zhì)是血紅蛋白分子，則試管②內(nèi)的大量蛋白質(zhì)為血紅蛋白。由于試管⑤晚于試管②收集得到， 因此其內(nèi)收集到的蛋白質(zhì)比血紅蛋白分子移動(dòng)速度慢，其相對(duì)分子質(zhì)量比血紅蛋白小。 規(guī)律方法　凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)中確定收集蛋白質(zhì)時(shí)間的方法 (1)血紅蛋白的收集：利用血紅蛋白的顏色，當(dāng)紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱出口時(shí)，就要收集流出液。 (2)其他無色蛋白質(zhì)的收集：可以在實(shí)驗(yàn)時(shí)加入指示劑以掌握樣品的移動(dòng)位置，確定最佳的收集時(shí)機(jī)。

29、 四、從生物材料中提取某些特定成分 1.植物芳香油的特點(diǎn) (1)具有揮發(fā)性，故可用水蒸氣蒸餾法提取。 (2)易溶于有機(jī)溶劑，故可采用萃取法提取芳香油。 2.提取橘皮中的芳香油 (1)橘皮芳香油的成分及用途 ①成分：橘皮芳香油的主要成分是檸檬烯。 ②用途：橘皮芳香油是生產(chǎn)食用香精、化妝品香精和醫(yī)藥香精的優(yōu)質(zhì)原料。 (2)提取方法：橘皮芳香油存在于果皮的油細(xì)胞中，具有一定的揮發(fā)性，其沸點(diǎn)低于水的沸點(diǎn)。在蒸餾時(shí)，隨著溫度的升高和水分的侵入，果皮油細(xì)胞漲破，芳香油流出并隨水一起形成蒸氣，蒸氣再通過冷凝管，經(jīng)接液管流入收集瓶。由于油輕水重，靜置后分離。 1.適合用水蒸氣蒸餾法

30、提取的成分應(yīng)具有怎樣的特性？ 答案　適用于具有揮發(fā)性的，能隨水蒸氣蒸發(fā)而不被破壞，與水不發(fā)生反應(yīng)，且難溶或不溶于水的成分的提取。 2.在水中蒸餾的操作中，如何避免加熱時(shí)發(fā)生暴沸？ 答案　蒸餾燒瓶下墊石棉網(wǎng)，并向液體中加入幾片碎石或瓷片。 3.為什么冷凝管中水流應(yīng)從下方進(jìn)水，上方出水？ 答案　與蒸氣流向相反，冷卻效果好。 4.為什么液體混合物中各組分的沸點(diǎn)如果相差不大就不適合采用蒸餾的方法提?。? 答案　若各組分的沸點(diǎn)相差不大，在蒸餾時(shí)會(huì)同時(shí)蒸發(fā)出，達(dá)不到分離的效果，所以不適合采用蒸餾的方法進(jìn)行分離。 歸納拓展　植物芳香油的提取方法 提取方法 提取原理 方法步驟 適用范圍

31、 水蒸氣蒸餾法 利用水蒸氣將揮發(fā)性較強(qiáng)的植物芳香油攜帶出來 ①水蒸氣蒸餾 ②分離油層 ③除水過濾 適用于提取玫瑰油、薄荷油等揮發(fā)性較強(qiáng)的芳香油 壓榨法 通過機(jī)械加壓，壓榨出果皮中的芳香油 ①石灰水浸泡、漂洗 ②壓榨、過濾、靜置 ③再次過濾 適用于柑橘、檸檬等易焦糊原料的提取 有機(jī)溶劑萃取法 使提取物溶解在有機(jī)溶劑中，蒸發(fā)后得到提取物 ①粉碎、干燥 ②萃取、過濾 ③濃縮 適用范圍廣，要求原料的顆粒要盡可能細(xì)小，能充分浸泡在有機(jī)溶劑中 7.下列屬于植物芳香油理化性質(zhì)的是(　　) ①具有較強(qiáng)的揮發(fā)性?、谝兹苡谒、垡兹苡谟袡C(jī)溶劑?、芫哂刑厥獾闹参锵阄?

32、A.①②③ B.②③④ C.①③④ D.①②④ 答案　C 解析　植物芳香油是植物有效成分的提取液，其特點(diǎn)是具有特殊的植物香味和較強(qiáng)的揮發(fā)性，且難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑。 8.蒸餾裝置安裝完畢后，可以在蒸餾瓶中加幾粒沸石，目的是(　　) A.加速沸騰 B.防止液體過度沸騰 C.減緩沸騰 D.防止蒸餾瓶炸裂 答案　B 1.下列關(guān)于蛋白質(zhì)提取的敘述中，不正確的是(　　) A.分離與純化蛋白質(zhì)之前首先要用適當(dāng)?shù)姆椒ㄊ沟鞍踪|(zhì)釋放出來 B.抽提時(shí)要依據(jù)蛋白質(zhì)的不同特性選擇不同的溶劑 C.蛋白質(zhì)的粗提取物離心可除去一些小分子雜質(zhì) D.蛋白質(zhì)的粗制品可能是多種蛋

33、白質(zhì)的混合物 答案　C 解析　對(duì)抽提得到的粗提取物離心可除去固體雜質(zhì)。 2.離心沉降法是純化蛋白質(zhì)的方法之一，在這一過程中蛋白質(zhì)會(huì)分層，這一現(xiàn)象與蛋白質(zhì)的何種性質(zhì)有關(guān)(　　) A.酸堿性 B.所帶電荷多少 C.分子大小和密度 D.種類 答案　C 解析　根據(jù)蛋白質(zhì)之間或蛋白質(zhì)與其他分子之間在分子大小和密度上的不同，采用離心沉降法，使其分層而分離。 3.下列關(guān)于植物芳香油的描述，正確的是(　　) A.易揮發(fā)、沸點(diǎn)高、易溶于水 B.不揮發(fā)、沸點(diǎn)高、易溶于有機(jī)溶劑 C.不揮發(fā)、沸點(diǎn)低、易溶于水 D.易揮發(fā)、沸點(diǎn)低、易溶于有機(jī)溶劑 答案　D 解析　植物芳香油具有較強(qiáng)的

34、揮發(fā)性，其沸點(diǎn)比水低，不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，因此可用有機(jī)溶劑來提取。 4.下列關(guān)于電泳概念的理解，錯(cuò)誤的是(　　) A.能進(jìn)行電泳的物質(zhì)一般是帶電顆粒 B.帶電顆粒向著與其電性相同的電極移動(dòng) C.影響泳動(dòng)速度的因素包括帶電顆粒的性質(zhì)、電場(chǎng)強(qiáng)度、溶液的pH等 D.電泳支持物有濾紙、大分子凝膠、醋酸纖維薄膜等 答案　B 解析　電泳是指帶電顆粒向著與其電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。 5.回答下列有關(guān)蛋白質(zhì)分離和純化的問題： (1)要獲得血清蛋白的粗制品，必須將含有檸檬酸鈉的血液進(jìn)行 處理，然后將 裝入透析袋中除去

35、 。 (2)要獲得血紅蛋白，應(yīng)如何破碎紅細(xì)胞？ 。 (3)下圖為血清蛋白通過醋酸纖維薄膜的電泳圖譜，你認(rèn)為含量最多的蛋白質(zhì)是 ，含負(fù)電荷最多的球蛋白是 ，相對(duì)分子質(zhì)量最大的球蛋白是 。 (4)電泳是目前應(yīng)用最為普遍的 蛋白質(zhì)的方法。 答案　(1)離心　上清液　小分子物質(zhì) (2)加入蒸餾水使其漲破 (3)清蛋白　α1－球蛋白　γ－球蛋白 (4)(分離)純

36、化 課時(shí)作業(yè) [學(xué)考達(dá)標(biāo)] 1.在水蒸氣蒸餾裝置中，從進(jìn)水口通入水的作用是(　　) A.加熱 B.防止過度沸騰 C.過濾 D.冷凝 答案　D 解析　在使用水蒸氣蒸餾法提取植物芳香油時(shí)，需要用到蒸餾裝置，在裝置中，進(jìn)、出水口之間的水是不斷流動(dòng)的，以降低裝置溫度，使水蒸氣與芳香油混合物冷卻成為液體，便于分離。 2.下列關(guān)于植物芳香油的說法，錯(cuò)誤的是(　　) A.可溶于水，所以可以用蒸餾法提取 B.具有較強(qiáng)的揮發(fā)性，能隨水蒸氣一起蒸發(fā) C.提取方法主要有蒸餾法、壓榨法和萃取法 D.蒸餾時(shí)，流入收集瓶中的乳濁液分層，上層為芳香油，下層為水 答案　A 解析　植物芳香油

37、為脂溶性物質(zhì)，不溶于水，而易溶于有機(jī)溶劑。 3.為防止血液凝固，在采血容器中要預(yù)先加入抗凝血?jiǎng)?　　) A.NaCl B.甲苯 C.蒸餾水 D.檸檬酸鈉 答案　D 4.帶電荷的蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中移動(dòng)的速度主要取決于(　　) A.所帶的電荷多少 B.蛋白質(zhì)的分子大小 C.蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量 D.蛋白質(zhì)的分子大小和所帶的電荷多少 答案　D 5.電泳過程中什么樣的分子遷移速度最快(　　) A.纖維狀、大分子 B.纖維狀、小分子 C.球狀、大分子 D.球狀、小分子 答案　D 解析　在電泳過程中，分子遷移速度主要取決于分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身

38、的大小、形狀的不同。一般來說，球狀分子比纖維狀分子易移動(dòng)，小分子比大分子易移動(dòng)。 6.用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí)，相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)(　　) A.路程較長，移動(dòng)速度較慢 B.路程較長，移動(dòng)速度較快 C.路程較短，移動(dòng)速度較慢 D.路程較短，移動(dòng)速度較快 答案　D 解析　凝膠顆粒內(nèi)部有許多貫穿的通道，當(dāng)相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)通過凝膠時(shí)，相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長，移動(dòng)速度較慢；而相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快。 [高考提能] 7.凝膠色譜法是分離蛋白質(zhì)分子的一種常用方法，但并非所有的蛋

39、白質(zhì)都可以用此方法進(jìn)行分離，能分離的蛋白質(zhì)分子之間必須(　　) A.具有相同的相對(duì)分子質(zhì)量 B.相對(duì)分子質(zhì)量不同，但都是相對(duì)分子質(zhì)量較大的分子 C.相對(duì)分子質(zhì)量不同，但都是相對(duì)分子質(zhì)量較小的分子 D.具有不同的相對(duì)分子質(zhì)量 答案　C 解析　若在凝膠分離范圍之外的分子，在不改變凝膠種類的情況下是很難被分離的。對(duì)于分子的大小不同，但同屬于凝膠分離范圍內(nèi)的各種分子，在凝膠床中的分布情況是不同的，分子較大的只能進(jìn)入孔徑較大的那一部分凝膠。 8.如圖是用已除去DNA的濾液進(jìn)行血紅蛋白的提取和分離實(shí)驗(yàn)的裝置，下列有關(guān)敘述不正確的是(　　) A.首先用圖甲裝置對(duì)濾液進(jìn)行處理，其目的是去除

40、相對(duì)分子質(zhì)量較大的雜質(zhì) B.圖乙裝置的試管收集到的液體中最先得到的是相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì) C.用圖乙裝置分離血紅蛋白時(shí)，待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集流出液，每管收集5 mL，連續(xù)收集 D.圖丙裝置可用于電泳法分離提純血紅蛋白 答案　A 解析　用圖甲裝置對(duì)濾液進(jìn)行處理，其目的是去除相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)；圖乙裝置表示通過凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的過程，蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量較大被排阻在凝膠顆粒的外面，在顆粒之間迅速通過。 9.工業(yè)生產(chǎn)上，植物芳香油的提取常采用水蒸氣蒸餾法，其原因是(　　) A.利用水蒸氣可將揮發(fā)性強(qiáng)的植物芳香油攜帶出來 B.水蒸氣蒸餾法可分為水中蒸餾

41、、水上蒸餾和水氣蒸餾 C.植物芳香油揮發(fā)性強(qiáng)，易溶于有機(jī)溶劑 D.操作最簡(jiǎn)單，成本較低 答案　D 解析　在工業(yè)生產(chǎn)中，提取芳香油的原理與實(shí)驗(yàn)室提取的原理相同，只是在工業(yè)生產(chǎn)中，要考慮生產(chǎn)成本和操作過程等問題。在各種提取方法中，因?yàn)樗魵庹麴s法的成本低，操作簡(jiǎn)單而常被工業(yè)生產(chǎn)采用。 10.利用水蒸氣蒸餾法提取茉莉精油的正確步驟是(　　) A.鮮茉莉花＋清水→水蒸氣蒸餾→除水→分離油層→茉莉油 B.鮮茉莉花＋清水→水蒸氣蒸餾→油水混合物→分離油層→除水→茉莉油 C.鮮茉莉花＋清水→除水→水蒸氣蒸餾→油水混合物→分離油層→茉莉油 D.鮮茉莉花＋清水→分離油層→除水→水蒸氣蒸餾→茉莉

42、油 答案　B 解析　用水蒸氣蒸餾法提取茉莉精油時(shí)，應(yīng)先將新鮮的茉莉花與清水共沸進(jìn)行蒸餾，然后在得到的油水混合物中加入氯化鈉使之分層，再進(jìn)行分液，為除去茉莉油中仍存在的水分，可加入無水硫酸鈉，過濾后可以得到較純的茉莉油。 11.蛋白質(zhì)分子中，氨基酸的α－氨基和α－羧基雖然大部分結(jié)合成為肽鍵，但是蛋白質(zhì)分子內(nèi)仍含有各種酸性基團(tuán)和堿性基團(tuán)，如肽鏈末端的α－氨基和α－羧基、天冬氨酸和谷氨酸殘基中的羧基、賴氨酸和組氨酸殘基中的各種堿性基團(tuán)，所以蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。在酸性溶液中，堿性基團(tuán)的解離增大，使蛋白質(zhì)帶正電荷；在堿性溶液中，酸性基團(tuán)的解離加強(qiáng)，使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷。當(dāng)溶液到達(dá)某一pH時(shí)，蛋白質(zhì)可因

43、內(nèi)部酸性和堿性基團(tuán)的解離相等而呈等電狀態(tài)，這時(shí)的溶液pH叫做蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。不處于等電點(diǎn)狀態(tài)的蛋白質(zhì)分子的正、負(fù)電荷量是不相同的。請(qǐng)回答下列問題： (1)多數(shù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)接近于5，一般含堿性基團(tuán)較多的蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) (“偏高”還是“偏低”)。 (2)根據(jù)等電點(diǎn)的不同，可用 法將不同種類的蛋白質(zhì)分子分開。 (3)簡(jiǎn)述根據(jù)等電點(diǎn)分離不同種類的蛋白質(zhì)分子的原理。

44、 。 答案　(1)偏高　(2)電泳 (3)不同蛋白質(zhì)具有不同的等電點(diǎn)，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)混合物調(diào)到其中一種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，這種蛋白質(zhì)大部分或全部被沉淀下來 解析　含堿性基團(tuán)較多的蛋白質(zhì)溶液，在pH接近于5時(shí)解離程度較大，蛋白質(zhì)帶正電荷。要使蛋白質(zhì)內(nèi)部酸性和堿性基團(tuán)解離相等呈等電狀態(tài)，必須提高溶液的pH，使酸性基團(tuán)解離增加，故蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)提高。根據(jù)等電點(diǎn)不同，可以利用電泳法將特定的蛋白質(zhì)分離出來。 12.通過對(duì)橘皮芳香油提取過程的學(xué)習(xí)，請(qǐng)你自己設(shè)計(jì)一個(gè)提取茉莉油的過程，請(qǐng)回答下列問題： (1)第一步，采摘

45、原料，提煉茉莉油的原料為 ，要在盛花期采收，此時(shí)，茉莉油的含量較高。 (2)提取茉莉油常采用 法，此方法是通過水分子向原料中滲透，使 ，形成精油與水的共沸物，蒸餾出的水蒸氣與精油通過 、 后得到精油。 (3)下圖是茉莉油的生產(chǎn)工藝，請(qǐng)回答： 茉莉花＋水 　↓ 蒸餾器→→→油水混合物→→直接精油→加→過濾→茉莉油 ①向蒸餾器中加入原料時(shí)，茉莉花與清水的質(zhì)量比大約為 。 ②A表示

46、 過程，B表示 過程，C表示 。通過C提取出的直接精油，可能還混有一定的水分，所以要向提取液中加入D 吸水，放置過夜，再過濾除去固體物質(zhì)，即可得到茉莉油。 答案　(1)茉莉花　(2)水蒸氣蒸餾　植物中精油成分向水中擴(kuò)散　冷凝　油水分離　(3)①1∶4　②水蒸氣蒸餾　冷凝　分離油層　無水硫酸鈉 13.血紅蛋白是人和其他脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞的主要組成成分，負(fù)責(zé)血液中O2或CO2的運(yùn)輸。請(qǐng)根據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖回答下列問題： (1)將實(shí)驗(yàn)流程補(bǔ)充完整：A為

47、 ，B為 。凝膠色譜法是根據(jù) 而達(dá)到蛋白質(zhì)分離的有效方法。 (2)洗滌紅細(xì)胞的目的是去除 ，洗滌次數(shù)過少，無法除去 ；離心速度過高和時(shí)間過長會(huì)使 一同沉淀，達(dá)不到分離的效果。洗滌干凈的標(biāo)志是 。釋放血紅蛋白的過程中起作用的是 。 (3)在洗脫過程中加入物質(zhì)的量濃度為20 mmol/L的磷酸緩沖液(pH為7.0)的目的是

48、 。 如果紅色區(qū)帶 ，說明色譜柱制作成功。 答案　(1)血紅蛋白的釋放　樣品的加入和洗脫　相對(duì)分子質(zhì)量的大小 (2)雜蛋白(血漿蛋白)　血漿蛋白　白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞　離心后的上清液中沒有黃色　蒸餾水和甲苯 (3)準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外溶液的pH和體內(nèi)環(huán)境中的pH基本一致　均勻

49、一致地移動(dòng) 解析　凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法，在蛋白質(zhì)提取與分離過程中包括樣品的處理、粗分離、純化和純度鑒定四步，每一步均應(yīng)用了不同的操作技術(shù)，需要注意。 [真題體驗(yàn)] 14.(2011·海南，30)許多植物含有天然香料，如薄荷葉中含有薄荷油。現(xiàn)用薄荷葉提取薄荷油。 回答問題： (1)薄荷油是揮發(fā)性物質(zhì)，提取薄荷油時(shí)應(yīng)選用 (鮮、干)薄荷葉作原料，其原因是 。 (2)用萃取法提取薄荷油時(shí)，采用的溶劑是 ，原理是 。 (3)用水蒸氣蒸餾法提取薄荷油時(shí)，在油水混合物中加入氯化鈉的作

50、用是 。常用于分離油層和水層的器皿是 。分離出的油層中加入無水硫酸鈉的作用是 ，除去固體硫酸鈉的常用方法是 。 答案　(1)鮮　薄荷油易揮發(fā)，鮮薄荷葉中薄荷油含量高 (2)乙醚　薄荷油易溶于有機(jī)溶劑，且乙醚沸點(diǎn)低、易蒸發(fā) (3)增加鹽的濃度，使分層更明顯　分液漏斗　吸去油層中的水分　過濾 15.(2011·廣東，5)以下關(guān)于豬血紅蛋白提純的描述中，不正確的是(　　) A.洗滌紅細(xì)胞時(shí)，使用生理鹽水可防止紅細(xì)胞破裂 B.豬成熟紅細(xì)胞中缺少細(xì)胞器和細(xì)胞核，提純時(shí)雜蛋白較少 C.血紅蛋白的顏色可用于凝膠色譜法分離過程的監(jiān)測(cè) D.在凝膠色譜法分離過程中，血紅蛋白比分子量較小的雜蛋白移動(dòng)慢 答案　D 解析　生理鹽水和紅細(xì)胞內(nèi)的溶液為等滲溶液，A正確；各種細(xì)胞器和細(xì)胞核中都含有蛋白質(zhì)，所以不含有細(xì)胞器和細(xì)胞核的紅細(xì)胞內(nèi)，蛋白質(zhì)種類較少，提純時(shí)雜蛋白較少，B正確；血紅蛋白有顏色，所以在凝膠色譜法分離過程中易分辨，可用于監(jiān)測(cè)，C正確；凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)，分子量較小的易進(jìn)入凝膠內(nèi)部，移動(dòng)速度比較慢，故血紅蛋白比分子量較小的雜蛋白移動(dòng)快，D錯(cuò)誤。 20