（浙江選考）2022高考生物二輪復(fù)習(xí) 第八部分 生物技術(shù)實踐 專題訓(xùn)練20 微生物的利用、酶的應(yīng)用一、選擇題1.要篩選得到純凈的菌種,通常在固體培養(yǎng)基上劃線分離,下列操作正確的是()A.每次劃線時,接種環(huán)都需蘸菌液一次B.劃線分離時,需要把接種環(huán)深入到培養(yǎng)基中進行接種C.在超凈臺中接種時要在酒精燈火焰旁進行D.劃線分離后將培養(yǎng)皿正放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)答案 C解析 采用劃線分離,菌種只蘸取一次,A項錯誤;劃線分離,接種環(huán)在培養(yǎng)基表面進行劃線操作,B項錯誤;微生物培養(yǎng)的關(guān)鍵是無菌操作,因此,在超凈臺上接種時,需要在酒精燈火焰旁進行,以防止空氣中微生物的污染,C項正確;劃線分離結(jié)束后,培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中,D項錯誤。2.下列關(guān)于制備固體培養(yǎng)基時倒平板的敘述,正確的是()A.倒好的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿要進行滅菌處理B.應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊,以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上C.為防止微生物污染,要在酒精燈火焰旁進行操作D.倒好培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿,要立即將平板倒過來放置答案 C解析 培養(yǎng)基應(yīng)該在倒平板之前進行高壓蒸汽滅菌,A項錯誤;倒平板時,用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約1020 mL)倒入培養(yǎng)皿,左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋,不能打開皿蓋,B項錯誤;為防止微生物污染,要在酒精燈火焰旁進行操作,C項正確;倒好培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿等培養(yǎng)基凝固后要倒過來放置,D項錯誤。3.固定化酶是從20世紀60年代迅速發(fā)展起來的一種技術(shù)。科研人員用海藻酸鈉作為包埋劑來固定小麥酯酶,以研究固定化酶的相關(guān)性質(zhì)和最佳固定條件。酶活力為固定化酶催化化學(xué)反應(yīng)的總效率,包括酶活性和酶的數(shù)量。圖甲、乙、丙為部分研究結(jié)果。下列有關(guān)敘述錯誤的是()A.由圖甲可知,固定化酯酶比游離酯酶對溫度變化適應(yīng)性更強B.由圖乙可知,濃度為3%的海藻酸鈉包埋效果最好C.由圖丙可知,固定化酯酶一般可重復(fù)使用3次,之后若繼續(xù)使用則酶活力明顯下降D.固定化酶的酶活力較高,主要原因是增大了酶與底物的接觸面積答案 D解析 由圖甲可知,當(dāng)溫度變化時,游離酶的酶活力比固定化酶變化明顯,說明固定化酯酶比游離酯酶對溫度變化適應(yīng)性更強,A項正確;當(dāng)海藻酸鈉濃度較低時,凝膠的孔徑較大,固定化酶容易流失,所以酶活力較低,濃度大難以形成凝膠珠,B項正確;由圖丙可知,當(dāng)使用次數(shù)多于3次時,酶活力顯著下降,C項正確;固定化酶的優(yōu)點是不溶于水,易于產(chǎn)物分離,可反復(fù)使用,能連續(xù)化生產(chǎn)且穩(wěn)定性好,D項錯誤。4.如圖是研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細菌的過程示意圖,下列有關(guān)敘述錯誤的是()A.在配制步驟的培養(yǎng)基時,應(yīng)先調(diào)pH值后髙壓蒸汽滅菌B.步驟純化分解尿素細菌的原理是將聚集的細菌分散,以獲得單菌落C.步驟采用涂布平板法接種,并需向牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入尿素D.步驟挑取中不同種的菌落分別接種,比較細菌分解尿素的能力答案 C解析 在配制步驟的培養(yǎng)基時,應(yīng)先調(diào)pH值后髙壓蒸汽滅菌,A項正確;步驟純化分解尿素細菌的原理是將聚集的細菌分散,以獲得單菌落,B項正確;要篩選出能高效分解尿素細菌,所選用的培養(yǎng)基要以尿素為唯一氮源,但牛肉膏和蛋白胨中都含有尿素,因此步驟所用的培養(yǎng)基中不能含有牛肉膏蛋白胨,C項錯誤;步驟挑取中不同種的菌落分別接種,比較細菌分解尿素的能力,D項正確。二、非選擇題5.(2018寧波模擬)研究小組從土壤中篩選以多環(huán)芳烴(PAHs)為碳源和能源的細菌,用以降解工業(yè)廢水和生活污水中的PAHs。請回答下列問題。(1)為了從土壤中篩選PAHs降解菌,需配制以為唯一碳源的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基經(jīng)A.121 (500 g/cm2壓力),15 minB.90 (500 g/cm2壓力),15 minC.121 (1 kg/cm2壓力),15 minD.90 (500 g/cm2壓力),30 min高壓蒸汽滅菌,待冷卻至60 后倒平板。 (2)倒平板時應(yīng)使錐形瓶的瓶口通過火焰,目的是。在倒平板的過程中,如果培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位,則這個平板不能用來培養(yǎng)PAHs降解菌,原因是 。 (3)制備土壤稀釋液,用方法接種于固體培養(yǎng)基表面,培養(yǎng)時,需將培養(yǎng)皿并放在37 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。 (4)用劃線法純化PAHs降解菌的過程中,在第二次及其后的劃線操作時,須從上一次劃線的末端開始劃線,原因是 。 答案 (1)PAHsC(2)防止雜菌污染空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生(3)涂布倒置(4)使細菌數(shù)隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少,最終得到由單個細菌繁殖而成的菌落解析 (1)為了從土壤中篩選PAHs降解菌,需配制以PAHs為唯一碳源的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基經(jīng)過高壓蒸汽滅菌121 (1 kg/cm2壓力),15 min,待冷卻至60 后倒平板。(2)倒平板時應(yīng)使錐形瓶的瓶口通過火焰,目的是防止雜菌污染,在倒平板的過程中,如果培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位,則這個平板不能用來培養(yǎng)PAHs降解菌,原因是空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。(3)制備土壤稀釋液,用涂布方法接種于固體培養(yǎng)基表面,培養(yǎng)時,需將培養(yǎng)皿倒置并放在37 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。(4)用劃線法純化PAHs降解菌的過程中,在第二次及其后的劃線操作時,須從上一次劃線的末端開始劃線,原因是使細菌數(shù)隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少,最終得到由單個細菌繁殖而成的菌落。6.下圖為“大腸桿菌的培養(yǎng)和分離”實驗的基本流程,請回答下列問題。A.配制培養(yǎng)基B.滅菌C.培養(yǎng)(液體培養(yǎng)基)D.劃線分離和培養(yǎng)(固體培養(yǎng)基)E.菌種短期保存(1)A過程配制的是通用細菌培養(yǎng)基,稱為培養(yǎng)基。配制時除了加入特定的營養(yǎng)物質(zhì)以外,還要加入一定量的氯化鈉,以維持。對培養(yǎng)基pH的調(diào)節(jié),應(yīng)該在B過程的(填“前面”或“后面”)。 (2)E過程所需的溫度是。 (3)D過程后,一個菌體便會形成一個,這種分離方法是的通用方法,也是篩選特定菌株的最簡便方法之一。 答案 (1)LB滲透壓前面(2)4 (3)單菌落消除雜菌污染解析 (1)培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基為LB培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中加入一定濃度氯化鈉用于維持培養(yǎng)液的滲透壓,培養(yǎng)基應(yīng)調(diào)節(jié)好pH后再進行滅菌。(2)短時間內(nèi)保存菌種,將菌種接種于斜面上,置于4 冰箱進行保存。(3)經(jīng)過分離,一個菌體形成一個單菌落,單菌落是消除雜菌污染的通用方法,也是篩選特定菌株的最簡便方法之一。7.下列是有關(guān)大腸桿菌的培養(yǎng)實驗,請回答下列問題。(1)配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時,根據(jù)“細菌喜葷,霉菌喜素”的規(guī)律,通常在培養(yǎng)基中加入蛋白胨和作為營養(yǎng)物質(zhì)。 (2)大腸桿菌培養(yǎng)和分離的實驗中,在中進行擴大培養(yǎng),培養(yǎng)液經(jīng)后,在LB固體培養(yǎng)基上進行,并將培養(yǎng)皿放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),可以獲得如圖效果。為了檢測接種、培養(yǎng)過程是否受雜菌污染以及,應(yīng)同時將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 (3)對于獲得的純菌種,通常可以依據(jù)的形狀、大小等特征進行初步的鑒定。 (4)關(guān)于“大腸桿菌培養(yǎng)和分離”的操作中,下列敘述正確的是。 A.高壓蒸汽滅菌結(jié)束時,打開排氣閥使壓力表指針回到零后,開啟鍋蓋B.倒平板時,應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊,以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上C.為了防止污染,接種工具經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落D.用記號筆標記培養(yǎng)皿中菌落時,應(yīng)標記在皿底上答案 (1)酵母提取物(2)LB液體培養(yǎng)基稀釋分離倒置無菌操作是否規(guī)范(3)菌落(4)D解析 (1)配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時,根據(jù)“細菌喜葷,霉菌喜素”的規(guī)律,通常在培養(yǎng)基中加入蛋白胨和酵母提取物作為營養(yǎng)物質(zhì)。(2)大腸桿菌培養(yǎng)和分離的實驗中,在 LB液體培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng),培養(yǎng)液經(jīng)稀釋后,在LB固體培養(yǎng)基上進行分離,并將培養(yǎng)皿倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),可以獲得如圖效果。為了檢測接種、培養(yǎng)過程是否受雜菌污染以及無菌操作是否規(guī)范,應(yīng)同時將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(3)對于獲得的純菌種,通常可以依據(jù)菌落的形狀、大小等特征進行初步的鑒定。(4)高壓蒸汽滅菌結(jié)束,等待壓力表指針回到零后,才能開啟鍋蓋,不能打開排氣閥使壓力表指針回到零,A項錯誤;倒平板過程中不能打開培養(yǎng)皿的皿蓋,B項錯誤;接種環(huán)在火焰上灼燒后,待冷卻后才可以快速挑取菌落,C項錯誤;用記號筆標記培養(yǎng)皿中菌落時,應(yīng)標記在皿底上,D項正確。8.(2018浙江新高考研究聯(lián)盟第二次聯(lián)考)回答下列有關(guān)果膠酶生產(chǎn)及固定化應(yīng)用的問題。(1)用射線處理一些霉菌后,稀釋并接種在以較低濃度果膠為的培養(yǎng)基中,可獲得產(chǎn)果膠酶的高產(chǎn)菌株。通過觀察比較培養(yǎng)基上可判斷菌株是否屬于同一種類。 (2)在分離高產(chǎn)果膠酶菌種的試驗操作中,對于獲得純化的果膠酶高產(chǎn)菌單菌落影響最大的是。 A.實驗所用的霉菌孢子來源于多個菌株B.涂布前涂布器未在酒精燈火焰上的灼燒滅菌C.已添加果膠的蔗糖豆芽汁培養(yǎng)基作為選擇培養(yǎng)基D.實驗操作過程中未打開超凈臺的過濾風(fēng)(3)黑曲酶在發(fā)酵過程中除分泌果膠酶外,常還分泌蛋白酶、淀粉酶、欲檢測黑曲霉在某種環(huán)境下分泌的總酶(蛋白質(zhì))量,可將提取液稀釋后加入試劑,在特定光程下測定OD值,并利用以繪制的標準曲線定量。 (4)利用或交聯(lián)法對果膠酶進行固定化處理時,果膠酶與介質(zhì)間均可形成新的化學(xué)鍵,固定化酶柱使用結(jié)束后用大量清水洗滌,其目的是。 答案 (1)唯一碳源菌落的形態(tài)特征(2)C(3)雙縮脲總酶(蛋白)含量為橫坐標,以O(shè)D值為縱坐標或反映總酶(蛋白)含量和OD值關(guān)系(4)共價偶聯(lián)法洗去殘留的果膠解析 (1)獲得產(chǎn)果膠酶的高產(chǎn)菌株,應(yīng)以果膠為唯一碳源和營養(yǎng)物質(zhì),并對培養(yǎng)后的菌落形態(tài)進行觀察,進而確定不同菌株的類別。(2)在分離菌株時,若實驗所用的霉菌孢子來源于多個菌株,可增加菌株類型,增加選擇的方向,不會影響果膠酶高產(chǎn)菌株的篩選;涂布前,若涂布器未在酒精燈火焰上灼燒,可能會減少菌落的數(shù)量,但對高產(chǎn)菌株的篩選、純化不會有太大影響;添加蔗糖的豆芽汁,會使一些不能分解果膠的菌株生長,影響篩選;實驗操作時未打開過濾風(fēng),可能會一定程度上影響菌株篩選,但不會明顯影響分解果膠菌株的篩選。(3)測定蛋白質(zhì),應(yīng)加入與蛋白質(zhì)能夠發(fā)生反應(yīng)的試劑,即雙縮脲試劑,然后以總酶的量為橫坐標,以O(shè)D值為縱坐標繪制標準曲線。(4)若讓果膠酶和介質(zhì)之間形成新的化學(xué)鍵,應(yīng)采用共價偶聯(lián)法和交聯(lián)法對果膠酶進行固定化處理,實驗結(jié)束后,對固定化酶柱進行洗滌,主要目的是洗去殘留的底物,即果膠。9.已知某細菌的兩種突變類型細菌和細菌的營養(yǎng)條件和菌落特征都相同,但細菌能分解有機物A而不能分解有機物B,細菌能分解有機物B而不能分解有機物A?，F(xiàn)有這兩種類型細菌的混合液樣品,要將其分離,有人設(shè)計了一種方案,部分操作步驟如圖。(1)步驟一使用的是培養(yǎng)基,其中含有細菌生長所需的水、無機鹽、碳源和氮源等營養(yǎng)物質(zhì),此外還必須加入,以利于對不同菌種進行分離操作。 (2)步驟一采用方法接種,此接種法可使接種細菌逐漸稀釋,經(jīng)適宜條件培養(yǎng),可形成單個、獨立的,最終可能得到純種的細菌;要進行上述接種操作,必須在及酒精燈火焰附近進行,以避免雜菌污染。 (3)步驟三中,若對其中某瓶培養(yǎng)液中A、B兩種有機物的含量進行測定,當(dāng)培養(yǎng)液中檢測出如下的實驗結(jié)果,其中能說明培養(yǎng)液中只有細菌的是。 A.有機物A與B含量都明顯下降 B.有機物A含量明顯下降,B含量基本不變C.有機物A含量基本不變,B含量明顯下降D.有機物A、B含量都基本不變答案 (1)LB固體瓊脂(2)劃線菌落超凈臺(3)B解析 (1)步驟一表示將菌種分離培養(yǎng),使用的是LB固體培養(yǎng)基,其中含有細菌生長所需的水、無機鹽、碳源和氮源等營養(yǎng)物質(zhì);固體培養(yǎng)基中需要加入瓊脂作為凝固劑。(2)根據(jù)題圖文字信息“蛇形線末端”可以確定步驟一采用劃線分離接種,此接種法可使接種細菌逐漸稀釋,經(jīng)適宜條件培養(yǎng),可形成單個、獨立的菌落,最終可能得到純種的細菌;要進行上述接種操作,必須在超凈臺及酒精燈火焰附近進行,以避免雜菌污染。(3)若A與B兩種有機物含量都明顯下降,說明瓶中同時存在細菌和細菌,說明兩者未分離;若A含量明顯下降,而B含量基本不變,說明培養(yǎng)液中只有細菌;若B含量明顯下降,而A含量基本不變,說明培養(yǎng)液中只有細菌;如果化合物A、B含量都基本不變,說明培養(yǎng)液中沒有這兩種細菌。