全自動(dòng)還原糖測(cè)定儀說(shuō)明書 山東省科學(xué)院生物中心 地 址：中國(guó)·濟(jì)南市科院路19號(hào) 電 話：（0531）82605742 82605322 傳 真：（0531）82965634 郵 編：250014 電子郵箱： 感謝您選用由山東省科學(xué)院生物中心研制、獲得國(guó)家發(fā)明專利的“全自動(dòng)還原糖測(cè)定儀”。 本技術(shù)是根據(jù)費(fèi)林試劑測(cè)定原理設(shè)計(jì)而成的全自動(dòng)測(cè)定儀。測(cè)定的各種條件由計(jì)算機(jī)控制，操作者只需用移液器將微量樣品注入反應(yīng)池即可全自動(dòng)完成測(cè)定過(guò)程，自動(dòng)顯示和打印結(jié)果，操作簡(jiǎn)單，使用方便，測(cè)定周期短，準(zhǔn)確度高。 一、基本原理 斐林試劑是一種氧化劑，由甲、乙液組成。測(cè)定時(shí)一定量的甲、乙液混合，首先形成氫氧化銅，然后形成酒石酸鉀銅絡(luò)合物。次甲基藍(lán)作為滴定終點(diǎn)指示劑，在氧化溶液中呈藍(lán)色，被還原后呈無(wú)色。用標(biāo)準(zhǔn)還原糖滴定時(shí)，還原糖首先使銅還原，至銅被還原完畢，糖才使次甲基藍(lán)還原成無(wú)色，即為滴定終點(diǎn)。 在滴定過(guò)程中，溶液顏色逐漸變化：藍(lán)色→深藍(lán)色→淺藍(lán)色→ 紫紅色→淡紫紅色→在終點(diǎn)時(shí)突然變化至無(wú)色透明。 用特定波長(zhǎng)的光電轉(zhuǎn)換裝置，檢測(cè)滴定過(guò)程中透光率的變化（見圖1）。根據(jù)電壓變化曲線由儀器控制系統(tǒng)自動(dòng)記錄、采樣、確定滴定終點(diǎn)。根據(jù)終點(diǎn)時(shí)消耗標(biāo)準(zhǔn)還原糖的量，由控制系統(tǒng)自動(dòng)計(jì)算出樣品中的還原糖含量，并顯示和打印結(jié)果。 滴定過(guò)程的電信號(hào)變化及控制原理如下： 圖2、自動(dòng)控制系統(tǒng) 二、儀器結(jié)構(gòu) 儀器由反應(yīng)系統(tǒng)、自動(dòng)控制系統(tǒng)和機(jī)殼三部分組成。 加熱 進(jìn)樣 滴定 清洗 溫度傳感器 光源 光電轉(zhuǎn)換 試劑 排空 攪拌電機(jī) 圖3、反應(yīng)池結(jié)構(gòu)圖 滴定反應(yīng)系統(tǒng)由滴定池主體構(gòu)成；滴定池左右兩側(cè)有入射光源和光電轉(zhuǎn)換器，滴定池前后兩側(cè)有液體進(jìn)出管道，滴定池內(nèi)側(cè)有溫度傳感器和液體加熱電極，根據(jù)需要調(diào)整液體溫度；滴定池底部有電磁攪拌器，使滴定液體均勻混合；上部是進(jìn)樣口，可用微量注射器將被測(cè)樣品注入滴定池（圖3）。柱塞泵自動(dòng)加入標(biāo)準(zhǔn)液、滴定液、兩個(gè)蠕動(dòng)泵（圖4）可自動(dòng)完成清洗和排空。 自動(dòng)控制系統(tǒng)包括電源電路、控制電路、控制面板、微型打印機(jī)，按設(shè)定程序控制滴定池液體的進(jìn)出、液體溫度、攪拌、光電反應(yīng)信息的收集和轉(zhuǎn)換、計(jì)算、測(cè)定結(jié)果顯示及打印。 雙柱塞泵 彈簧 泵頭 凹型模塊 泵管 單柱塞泵 蠕動(dòng)泵1 蠕動(dòng)泵2 圖4、泵系統(tǒng) 三、操作步驟 （一）參數(shù)設(shè)置 1、 模式選擇：主程序?yàn)榈味ㄟ^(guò)程中電壓信號(hào)由低到高變化，模式燈亮；按模式健后，模式燈滅，滴定過(guò)程電壓信號(hào)由高到低變化。 2、 參數(shù)意義： F0-----排空泵（1）（默認(rèn)值為22秒），設(shè)定排空泵轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)間。 F1-----排空泵（1）+ 清洗泵（2秒）（默認(rèn)值為 4），設(shè)定排空泵、清洗泵轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)間 。 F2-----清洗泵（2）（默認(rèn)值為9秒），設(shè)定清洗泵轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)間。 F3-----試劑泵（3）（默認(rèn)值為40秒），設(shè)定試劑泵轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)間。 F4-----泵3復(fù)位時(shí)間（默認(rèn)值為48秒）。 F5-----泵4預(yù)推時(shí)間（默認(rèn)值為8秒）。 F6-----泵4復(fù)位時(shí)間（默認(rèn)值為99秒）。 F7-----時(shí)鐘（暫時(shí)不用）。 F8-----G1值（默認(rèn)值為0），測(cè)定樣品的線形范圍。 F9-----G2值（默認(rèn)值為10），測(cè)定樣品的線形范圍 FA----采樣電壓，根據(jù)不同的樣品選擇（默認(rèn)值為3）。 FB----連續(xù)測(cè)定次數(shù)（默認(rèn)值為10次）。 （二）操作步驟 1 插上電源，打開后蓋上的開關(guān)，屏幕上顯示出 0000. 2 重復(fù)按壓[功能]鍵進(jìn)行各參數(shù)值設(shè)定（如不輸入?yún)?shù)值，各參數(shù)值則為儀器的初始默認(rèn)值），按[輸入]鍵完成參數(shù)輸入。 3 按[開關(guān)]鍵，啟動(dòng)程序，儀器自動(dòng)進(jìn)入穩(wěn)定程序及定標(biāo)，T1值的確定。 4 微型打印機(jī)打印出T1值之后進(jìn)行T2值的標(biāo)定。待進(jìn)樣指示燈亮?xí)r，用移液器吸取500微升定標(biāo)用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖（1%）溶液注入反應(yīng)池進(jìn)行定標(biāo)，反應(yīng)完成后儀器打印定標(biāo)T2值。 5 定標(biāo)完成后，自動(dòng)進(jìn)入測(cè)定程序。用取液器吸取500微升待測(cè)液, 待進(jìn)樣指示燈亮?xí)r將待測(cè)液注入反應(yīng)池，反應(yīng)結(jié)束后儀器自動(dòng)打印測(cè)定結(jié)果。 6 反應(yīng)結(jié)束后蠕動(dòng)泵1和蠕動(dòng)泵2動(dòng)作，排空、清洗，完成一個(gè)樣品測(cè)定程序自動(dòng)進(jìn)入下一個(gè)測(cè)定循環(huán)。 7 按照測(cè)定次數(shù)設(shè)定值完成一個(gè)測(cè)定周期后，直接按[測(cè)定]鍵，進(jìn)入下一個(gè)測(cè)定循環(huán)。 8 測(cè)定過(guò)程中如果需要暫停，可在顯示屏數(shù)字閃爍時(shí)按下[測(cè)定]鍵，該反應(yīng)完成后，自動(dòng)停機(jī)；再次測(cè)定只需按下[開關(guān)]鍵，繼續(xù)測(cè)定，無(wú)需重新定標(biāo)。 9 測(cè)定結(jié)束后，關(guān)掉電源即可關(guān)機(jī)。 （三）復(fù)位設(shè)置 進(jìn)樣器內(nèi)有較大氣泡時(shí)進(jìn)行復(fù)位操作。甲、乙液泵按復(fù)位Ⅰ實(shí)現(xiàn)復(fù)位，卸下進(jìn)樣器手工排出氣泡；標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖泵按復(fù)位Ⅱ?qū)崿F(xiàn)復(fù)位，卸下進(jìn)樣器手工排出氣泡。 （四）標(biāo)準(zhǔn)試劑： 1、 斐林甲液：硫酸銅（CuSO4?5H2O）35.0g，1%次甲基藍(lán)溶液5.0ml，共溶后定容至1000ml。 2、 斐林乙液：氫氧化鈉（NaOH）126.4g，酒石酸鉀鈉（C4H4O6KNa?4H2O）117.0g，亞鐵氰化鉀（K4F4(CN)6?3H2O）9.4g，以水共溶后定容至1000ml。 3、 100g/L標(biāo)準(zhǔn)無(wú)水葡萄糖（C6H12O6）溶液。 以上試劑按比例調(diào)配后使用。 （五）試劑準(zhǔn)備 1 甲液：將標(biāo)準(zhǔn)試劑中的費(fèi)林甲液按（1:2）稀釋即可。 2 乙液：將標(biāo)準(zhǔn)試劑中的費(fèi)林乙液按（1:1）稀釋即可。 3 1%標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：準(zhǔn)確稱取5.000g烘干葡萄糖，溶解并加入2.5 ml鹽酸，定容至500ml。 4 100g/L標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：精確稱取100.0g分析純無(wú)水葡萄糖，加蒸餾水溶解，并加10ml分析純鹽酸，定容1000ml，備用。 5 0.5%標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：吸取上述10%標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液 50ml，加水稀釋定容至1000ml。 6 參照上條配制0.2%、0.4%、3%、5%等標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。 7 根據(jù)待測(cè)液濃度范圍，可選定費(fèi)林甲乙液的稀釋比例。 （六）泵管聯(lián)接 1 蠕動(dòng)泵1左端口接蒸餾水瓶。 2 蠕動(dòng)泵2右端口接廢液瓶。 3 雙柱塞泵端入口分別接甲乙液試劑瓶。 4 單柱塞泵端入口接滴定糖瓶。 （七）注意事項(xiàng) 1 儀器使用穩(wěn)壓電源。 2 儀器使用兩周后反應(yīng)池要清洗,用清洗液浸泡二分鐘,再 用注射器排出。 3 謹(jǐn)防反應(yīng)液濺出。 4 反應(yīng)池裝好后請(qǐng)勿轉(zhuǎn)動(dòng),謹(jǐn)防漏液。 5 正確使用移液器。 特別注意：經(jīng)常檢查試劑瓶，及時(shí)添加試劑以免管道進(jìn)入 氣泡，影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度。 附： 裝機(jī)清單： 1 還原糖測(cè)定儀一臺(tái) 2 備用管道一套 3 微量進(jìn)樣器一個(gè) 4 使用說(shuō)明書一本 儀器如有改型，恕不另外通知 四、問(wèn)題及處理措施 出 現(xiàn) 問(wèn) 題 檢 查 項(xiàng) 目 處 理 措 施 開機(jī)無(wú)反應(yīng) 檢查電源線、保險(xiǎn)管 連接好電源線，保持保險(xiǎn)管完好。 反應(yīng)池加熱不停 檢查溫度控制器、反應(yīng)池右耳 連接好溫度控制器插頭、反應(yīng)池右耳旋緊 反應(yīng)時(shí)間顯示為99秒 檢查甲乙液、注射器、連接管道 保持試劑瓶液面高度，注射器、管道內(nèi)無(wú)氣泡、破損 測(cè)定值漂移 檢查注射器、連接管道，攪拌轉(zhuǎn)子、光源 保持注射器、連接管道無(wú)氣泡、破損，攪拌轉(zhuǎn)子、光源工作正常。 打印機(jī)不走紙 檢查打印機(jī)、打印紙 更換打印紙 如遇其他問(wèn)題，請(qǐng)與本中心技術(shù)人員聯(lián)系 五、主要性能指標(biāo)： 1、電源：220V 50Hz 2、主機(jī)大?。?85×390×20cm（L×W×H） 3、重量：22.5Kg 4、靈敏度：0.01 % RG 5、線形范圍：0 — 1.0% RG （可根據(jù)需要設(shè)定） 6、測(cè)定周期：< 4分鐘 7、抗干擾能力強(qiáng)，不受樣品顏色和濁度的影響， 適合于發(fā)酵液、 糖化液； 8、測(cè)定成本低，試劑消耗量低于常規(guī)方法； 9、操作簡(jiǎn)單，用微量移液器將被測(cè)樣品注入反應(yīng)池就可全自動(dòng)完成； 10、測(cè)定原理與目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)一致， 不需特殊材料和試劑，各生 產(chǎn)廠家可直接應(yīng)用。 六、面板