專題11 生物技術(shù)實(shí)踐直擊考綱1.微生物的分離和培養(yǎng)。2.某種微生物數(shù)量的測(cè)定。3.培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用。4.利用微生物發(fā)酵來(lái)生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其他方面的應(yīng)用。5.酶活力測(cè)定的一般原理和方法。6.酶在食品制造和洗滌等方面的應(yīng)用。7.制備和應(yīng)用固相化酶。8.從生物材料中提取某些特定的成分。9.運(yùn)用發(fā)酵加工食品的基本方法。10.測(cè)定食品加工中可能產(chǎn)生的有害物質(zhì)。11.蛋白質(zhì)的提取和分離?？键c(diǎn)33微生物的利用及在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)中的應(yīng)用題組一微生物的利用1(2016全國(guó)乙，39)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下：配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；制作無(wú)菌平板；設(shè)置空白對(duì)照組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作；將各組平板置于37 恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來(lái)源于_。若要完成步驟，該培養(yǎng)基中的成分X通常是_。(2)步驟中，實(shí)驗(yàn)組的操作是_。(3)若在某次調(diào)查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為36個(gè)/平板，而空白對(duì)照組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6個(gè)菌落，這種結(jié)果說(shuō)明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了_現(xiàn)象。若將30(即366)個(gè)/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法_(填“正確”或“不正確”)。答案(1)牛肉膏、蛋白胨瓊脂(2)將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開(kāi)蓋暴露一段時(shí)間(3)污染不正確解析(1)牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物，都可以作為氮源；平板為固體培養(yǎng)基，故需要加入凝固劑瓊脂。(2)實(shí)驗(yàn)探究的是教室內(nèi)“不同高度空氣”中微生物的分布，其中變量為不同高度，故需在不同高度下放置開(kāi)蓋平板。同時(shí)，為了保證單一變量，需要保證開(kāi)蓋放置時(shí)間一致。為了保證實(shí)驗(yàn)可靠性，需要設(shè)置多個(gè)平行組。(3)在完全正確的操作情況下，空白對(duì)照組中不應(yīng)出現(xiàn)菌落。若出現(xiàn)菌落，表明操作過(guò)程中存在雜菌污染，屬于實(shí)驗(yàn)失誤，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均不應(yīng)采用。2(2016全國(guó)丙，39)某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用_對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋，進(jìn)行梯度稀釋的理由是_。(2)推測(cè)在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有_和_。分離純化時(shí)應(yīng)挑選出_的菌落作為候選菌。(3)乳酸菌在20 長(zhǎng)期保存時(shí)，菌液中常需要加入一定量的_(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。答案(1)無(wú)菌水泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落(2)鑒別乳酸菌中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)具有透明圈(3)甘油解析(1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用無(wú)菌水對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋；進(jìn)行梯度稀釋的理由是在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。(2)在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有中和乳酸菌代謝過(guò)程中產(chǎn)生的乳酸和利于乳酸菌的鑒別和分離；分離純化時(shí)應(yīng)挑選出在平板上有透明圈的菌落作為候選菌。(3)乳酸菌在20 長(zhǎng)期保存時(shí)應(yīng)使用甘油管保藏法，故菌液中常需要加入一定量的甘油。3(2014新課標(biāo)全國(guó)，39)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是_；然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為_(kāi)。(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)通過(guò)_滅菌，在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線。這樣做的目的是_。(3)在示意圖A和圖B中，_表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中_的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高_(dá)的利用率。答案(1)檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格3.8107(2)灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落(3)B(4)溶解氧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)解析(1)為了檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，可在涂布接種前，隨機(jī)取滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時(shí)間。0.1 mL稀釋液中平均有(393837)/338個(gè)活菌，則每毫升稀釋液中活菌的數(shù)目為38/0.1380，則稀釋前每毫升水樣中活菌數(shù)目為3801003.8104，則每升水樣中活菌數(shù)目為3.81041 0003.8107。(2)接種環(huán)、接種針等金屬用具可直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，以達(dá)到迅速?gòu)氐诇缇哪康?。在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線，其目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落。(3)比較圖A和圖B可以看出：A培養(yǎng)基中細(xì)菌的分布呈線性，是用平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果；B培養(yǎng)基中細(xì)菌均勻分布，是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)振蕩培養(yǎng)可以提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，因此振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。題組二傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)中的應(yīng)用4(2016全國(guó)甲，39)蘋(píng)果醋是以蘋(píng)果汁為原料經(jīng)發(fā)酵而成的，回答下列問(wèn)題：(1)酵母菌的呼吸代謝途徑如圖所示。圖中過(guò)程和是蘋(píng)果醋生產(chǎn)的第一階段，在酵母菌細(xì)胞的_中進(jìn)行，其產(chǎn)物乙醇與_試劑反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色，這一反應(yīng)可用于乙醇的檢驗(yàn)；過(guò)程在酵母菌細(xì)胞的_中進(jìn)行，與無(wú)氧條件相比，在有氧條件下，酵母菌的增殖速度_。(2)第二階段是在醋酸菌的作用下將第一階段產(chǎn)生的乙醇轉(zhuǎn)變?yōu)榇姿岬倪^(guò)程，根據(jù)醋酸菌的呼吸作用類(lèi)型，該過(guò)程需要在_條件下才能完成。(3)在生產(chǎn)過(guò)程中，第一階段和第二階段的發(fā)酵溫度不同，第一階段的溫度_(填“低于”或“高于”)第二階段。(4)醋酸菌屬于_核生物，其細(xì)胞結(jié)構(gòu)中_(填“含有”或“不含有”)線粒體。答案(1)細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)重鉻酸鉀線粒體快(2)有氧(3)低于(4)原不含有解析(1)圖示中的過(guò)程和分別表示無(wú)氧呼吸的第一、第二階段，其場(chǎng)所均為細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)；橙色的重鉻酸鉀溶液，在酸性條件下與乙醇(酒精)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，變成灰綠色。過(guò)程表示有氧呼吸的第二、第三階段，其場(chǎng)所分別為線粒體基質(zhì)和線粒體內(nèi)膜，即在酵母菌細(xì)胞的線粒體中進(jìn)行。與無(wú)氧條件相比，在有氧條件下，酵母菌的增殖速度快。(2)醋酸菌是一種好氧菌，在氧氣充足的條件下才能進(jìn)行旺盛的生命活動(dòng)，因此將第一階段產(chǎn)生的乙醇轉(zhuǎn)變?yōu)榇姿岬倪^(guò)程，需要在有氧條件下才能完成。(3)第一階段即果酒的制作，所控制的溫度范圍是1825 ，第二階段即果醋的制作所控制的溫度范圍是3035 ，所以第一階段的溫度低于第二階段。(4)醋酸菌屬于原核生物，其細(xì)胞結(jié)構(gòu)中不含線粒體等復(fù)雜的細(xì)胞器。5(2013新課標(biāo)全國(guó)，39)回答下列有關(guān)泡菜制作的習(xí)題：(1)制作泡菜時(shí)，所用鹽水需煮沸，其目的是_。為了縮短制作時(shí)間，有人還會(huì)在冷卻后的鹽水中加入少量陳泡菜液，加入陳泡菜液的目的是_。(2)泡菜制作過(guò)程中，乳酸發(fā)酵的過(guò)程即為乳酸菌進(jìn)行_的過(guò)程。該過(guò)程發(fā)生在乳酸菌細(xì)胞的_中。(3)泡菜制作過(guò)程中影響亞硝酸鹽含量的因素有_、_和_等。(4)從開(kāi)始制作到泡菜品質(zhì)最佳這段時(shí)間內(nèi)，泡菜液逐漸變酸。這段時(shí)間內(nèi)泡菜壇中乳酸菌和其他雜菌的消長(zhǎng)規(guī)律是_，原因是_。答案(1)殺滅雜菌增加乳酸菌數(shù)量(2)無(wú)氧呼吸細(xì)胞質(zhì)(3)溫度腌制時(shí)間食鹽用量(4)乳酸菌數(shù)量增多，雜菌數(shù)量減少乳酸菌比雜菌更為耐酸解析根據(jù)泡菜制作過(guò)程中乳酸菌的來(lái)源、呼吸類(lèi)型、呼吸產(chǎn)物所引起的環(huán)境變化回答相應(yīng)問(wèn)題，還要注意每步操作的目的以及一些相關(guān)物質(zhì)的變化。1微生物的培養(yǎng)(1)無(wú)菌技術(shù)：主要包括消毒和滅菌。消毒方法：常用煮沸消毒法、巴氏消毒法。常用滅菌方法：灼燒滅菌接種環(huán)、接種針等金屬器具；干熱滅菌主要針對(duì)玻璃器皿等；高壓蒸汽滅菌主要針對(duì)培養(yǎng)基等。(2)如圖為倒平板操作過(guò)程，操作時(shí)要待培養(yǎng)基冷卻至50 左右時(shí)，在酒精燈火焰附近進(jìn)行。制備固體培養(yǎng)基最后要將平板倒置，其主要目的是防止培養(yǎng)皿皿蓋上的水珠滴入培養(yǎng)基造成污染。(3)平板劃線操作(4)稀釋涂布平板法：先將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。如圖所示：2某種微生物的分離與計(jì)數(shù)(1)分離選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可以分離得到固氮微生物。當(dāng)培養(yǎng)基的某種營(yíng)養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí)，也具有分離效果。改變微生物的培養(yǎng)條件，也可以達(dá)到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)能得到耐高溫的微生物。(2)計(jì)數(shù)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)a篩選菌株：利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基篩選菌株。b計(jì)數(shù)方法：活菌計(jì)數(shù)法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。前者為了增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力和準(zhǔn)確性，需設(shè)置重復(fù)組，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。c過(guò)程：土壤取樣樣品的稀釋微生物的培養(yǎng)與觀察。分解纖維素的微生物的分離a實(shí)驗(yàn)原理即：可根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。b流程：土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋涂布平板挑選菌落。(3)鑒定方法鑒定分解尿素的細(xì)菌含酚紅指示劑的尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基細(xì)菌指示劑變紅，則該菌能分解尿素鑒定纖維素分解菌3.微生物在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)中的應(yīng)用項(xiàng)目果酒和果醋的制作腐乳制作泡菜制作作用菌類(lèi)果酒：酵母菌果醋：醋酸菌毛霉乳酸菌原理酵母菌在無(wú)氧條件下將葡萄糖氧化成乙醇；醋酸菌在有氧條件下將乙醇氧化為醋酸毛霉將蛋白質(zhì)、脂肪分解成小分子有機(jī)物乳酸菌將糖轉(zhuǎn)化為乳酸原料選擇新鮮葡萄(或蘋(píng)果)豆腐大白菜、花椰菜等新鮮干凈的蔬菜實(shí)驗(yàn)流程讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉加鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制裝壇發(fā)酵成品操作注意事項(xiàng)材料選擇與處理；防止發(fā)酵液污染，控制好發(fā)酵條件材料用量；防止雜菌污染；控制溫度及酒精含量泡菜壇的選擇；腌制條件(無(wú)氧)共同點(diǎn)都是天然的發(fā)酵，利用了微生物新陳代謝過(guò)程中代謝產(chǎn)物的作用或直接獲取代謝產(chǎn)物考向一微生物的培養(yǎng)、分離與選擇1(2016江蘇，25)漆酶屬于木質(zhì)降解酶類(lèi)，在環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域有著廣泛用途。下圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過(guò)程，相關(guān)敘述正確的是(多選)()A生活污水中含有大量微生物，是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品B篩選培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物，通過(guò)菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落C在涂布平板上長(zhǎng)出的菌落，再通過(guò)劃線進(jìn)一步純化D斜面培養(yǎng)基中含有大量營(yíng)養(yǎng)物，可在常溫下長(zhǎng)期保存菌株答案BC解析漆酶降解“木質(zhì)”，則漆酶菌株多存在于“木質(zhì)”豐富的場(chǎng)所，生活污水中含有大量微生物，但不一定含有產(chǎn)漆酶的菌株，A錯(cuò)誤；產(chǎn)漆酶菌株可降解木質(zhì)素，在篩選培養(yǎng)基中加入木質(zhì)素可篩選產(chǎn)漆酶的菌株，篩選時(shí)可通過(guò)菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落，B正確；在涂布平板上長(zhǎng)出的菌落，再通過(guò)劃線進(jìn)一步純化，C正確；斜面培養(yǎng)基中含有大量營(yíng)養(yǎng)物，可在低溫下長(zhǎng)期保存菌株，D錯(cuò)誤。2(2016四川，10)圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過(guò)程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。(1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以_為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加_作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后，其菌落周?chē)闹甘緞⒆兂蒧色。(2)在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液0.1 mL，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過(guò)程采取的接種方法是_，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為_(kāi)108個(gè)；與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)較_。(3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個(gè)核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為_(kāi)，突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)含_個(gè)氨基酸。答案(1)尿素酚紅紅(2)稀釋涂布平板法1.75少(3)UGA115解析(1)脲酶能夠催化尿素分解為氨，故圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以尿素作為唯一氮源。由于尿素被分解成了氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高，使酚紅指示劑變紅色。(2)用于計(jì)數(shù)細(xì)菌菌落數(shù)的接種方法是稀釋涂布平板法，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)應(yīng)介于30300之間，故選擇細(xì)菌菌落數(shù)為156、178和191的平板計(jì)數(shù)，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為(156178191)/30.11051.75108。由于兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連接在一起時(shí)，往往統(tǒng)計(jì)的是一個(gè)菌落，故用此方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)偏少。(3)密碼子由三個(gè)相鄰的堿基組成，271個(gè)堿基和后面2個(gè)堿基一起共構(gòu)成91個(gè)密碼子，插入的70個(gè)核苷酸和后面2個(gè)堿基一起共構(gòu)成24個(gè)密碼子，緊隨其后是UGA，應(yīng)為終止密碼，翻譯結(jié)束，因此表達(dá)的蛋白質(zhì)含115個(gè)氨基酸。3(2014四川，10)有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長(zhǎng)期使用會(huì)污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖甲、乙所示。(1)微生物生長(zhǎng)繁殖所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、_四類(lèi)，該實(shí)驗(yàn)所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是_。(2)與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長(zhǎng)素和_，這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配制成_保存?zhèn)溆谩?3)純化菌株時(shí)，通常使用的劃線工具是_。劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿了菌，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無(wú)菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無(wú)菌落可能的操作失誤有_。(4)為探究苯磺隆的降解機(jī)制，將該菌種的培養(yǎng)液過(guò)濾離心，取上清液做圖乙所示實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)的假設(shè)是_，該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？為什么？_。答案(1)氮源和無(wú)機(jī)鹽只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長(zhǎng)繁殖(2)細(xì)胞分裂素母液(3)接種環(huán)接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開(kāi)始(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)不合理，缺少空白對(duì)照解析(1)微生物生長(zhǎng)繁殖需要的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽四類(lèi)。根據(jù)題意可知，土壤中某些微生物有降解苯磺隆的能力，該實(shí)驗(yàn)的目的是探索其降解機(jī)制，因此，需要分離出有降解苯磺隆能力的土壤中的某些微生物，故選擇培養(yǎng)時(shí)為了排除其他碳源的干擾，培養(yǎng)基中唯一碳源只能是苯磺隆。(2)與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基需要添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，用于調(diào)節(jié)植物細(xì)胞再分化；這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配制成母液保存?zhèn)溆谩?3)純化菌株時(shí)，通常使用的劃線工具是無(wú)菌接種環(huán)。劃線的平板培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)第一劃線區(qū)域的劃線上不間斷地長(zhǎng)滿了菌，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無(wú)菌落，而其他劃線上有菌落。造成此現(xiàn)象的原因可能有兩個(gè)：一是接種環(huán)灼燒后未冷卻，菌種接觸到高溫的接種環(huán)而死亡；二是劃第二劃線區(qū)域第一條線時(shí)未從第一區(qū)域末端開(kāi)始。(4)根據(jù)圖乙所示實(shí)驗(yàn)中的上清液加入蛋白酶溶液推測(cè)，實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖翘骄磕康木晔欠衲芊置诮到獗交锹〉牡鞍踪|(zhì)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不合理之處是缺少不加蛋白酶溶液、其他條件同圖乙的空白對(duì)照?？枷蚨鹘y(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用4(2016江蘇，7)下列關(guān)于中學(xué)“腐乳的制作”實(shí)驗(yàn)，敘述正確的是()A加鹽主要是為了調(diào)節(jié)水分，利于毛霉生長(zhǎng)B加料酒主要是為了滅菌，避免腐乳變質(zhì)C發(fā)酵過(guò)程中起主要作用的是乳酸桿菌D實(shí)驗(yàn)室制作的腐乳不宜直接食用答案D解析加鹽主要是為了抑制微生物生長(zhǎng)，防止豆腐腐敗變質(zhì)，A錯(cuò)誤；加料酒主要為了使腐乳具有獨(dú)特的香味，B錯(cuò)誤；發(fā)酵過(guò)程中起主要作用的是毛霉，C錯(cuò)誤；實(shí)驗(yàn)室制作的腐乳可能滅菌不徹底，不宜直接食用，D正確。5紅方是腐乳的一種。請(qǐng)回答與其制作有關(guān)的下列問(wèn)題：(1)補(bǔ)充制作紅方的實(shí)驗(yàn)流程：_加鹽腌制_密封腌制。(2)在實(shí)驗(yàn)流程中，首先將豆腐塊平放在籠屜內(nèi)，籠屜中的溫度應(yīng)控制在_，并保持一定的_。5天后豆腐塊表面布滿毛霉菌絲，這些毛霉來(lái)自空氣中的_。(3)在實(shí)驗(yàn)流程操作中，向長(zhǎng)滿毛霉的豆腐塊加鹽，其作用是析出豆腐中的水分，使豆腐塊變硬。同時(shí)，鹽還能_，避免豆腐塊腐敗變質(zhì)。(4)在實(shí)驗(yàn)流程用到的輔料中，鹵湯是由_及各種_配制而成的。此外，紅方因加入了_而呈深紅色。答案(1)豆腐上長(zhǎng)出毛霉加鹵湯裝瓶(2)1518濕度毛霉孢子(3)抑制微生物的生長(zhǎng)(4)酒香辛料紅曲解析(1)制作紅方的實(shí)驗(yàn)流程：豆腐上長(zhǎng)出毛霉加鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制。(2)在實(shí)驗(yàn)流程豆腐上長(zhǎng)出毛霉中，首先將豆腐塊平放在籠屜內(nèi)，籠屜中的溫度應(yīng)控制在1518 ，并保持一定的濕度。5天后豆腐塊表面布滿毛霉菌絲，這些毛霉來(lái)自空氣中的毛霉孢子。(3)在實(shí)驗(yàn)流程加鹽腌制操作中，向長(zhǎng)滿毛霉的豆腐塊加鹽，其作用是析出豆腐中的水分，使豆腐塊變硬。同時(shí)，鹽還能抑制微生物的生長(zhǎng)，避免豆腐塊腐敗變質(zhì)。(4)在實(shí)驗(yàn)流程加鹵湯裝瓶用到的輔料中，鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的。此外，紅方因加入了紅曲而呈深紅色。6葡萄酒和葡萄醋深受人們的喜愛(ài)。請(qǐng)根據(jù)利用葡萄汁生產(chǎn)葡萄酒和葡萄醋的實(shí)驗(yàn)，回答下列問(wèn)題：(1)某實(shí)驗(yàn)小組嘗試使用罐頭瓶在常溫(213) 下制作葡萄酒。開(kāi)始時(shí)，向消過(guò)毒的罐頭瓶中加入新鮮的葡萄汁。葡萄汁裝入瓶中時(shí)，要留出大約的空間，酵母菌進(jìn)行呼吸作用的方式有_。在以后的過(guò)程中，每隔12 h左右，要將瓶蓋擰松一次(不是打開(kāi)瓶蓋)，此后再擰緊。擰緊瓶蓋時(shí)，酵母菌進(jìn)行呼吸作用方式的總反應(yīng)式是_。(2)從野生酵母菌群中分離純化酵母菌，常使用的接種方法是平板劃線法和_兩種。若要想計(jì)數(shù)酵母菌活菌的個(gè)數(shù)，使所得的估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作和多次重復(fù)外，還應(yīng)經(jīng)過(guò)_的過(guò)程，保證待測(cè)樣品的濃度比較合適。(3)在果汁加工過(guò)程中，可添加_酶來(lái)提高出汁率和清澈度。葡萄的皮、子中含有原花青素、葡萄皮紅素和大量葡萄風(fēng)味物質(zhì)等，這些物質(zhì)易溶于乙醇和乙酸乙酯中，因此，常采用_的方法來(lái)分離提取。(4)醋酸菌是生產(chǎn)葡萄醋必用的菌種，可以從食醋中分離得到純化的醋酸菌。擴(kuò)大培養(yǎng)醋酸菌時(shí)，為了防止培養(yǎng)皿皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基上造成污染，一般是等待平板冷卻凝固后將_進(jìn)行培養(yǎng)。(5)酵母菌和醋酸菌中，屬于原核生物的是_。答案(1)有氧呼吸和無(wú)氧呼吸C6H12O62CO22C2H5OH能量(2)稀釋涂布平板法稀釋(或梯度稀釋)(3)纖維素酶、果膠萃取(4)平板倒置(5)醋酸菌解析(1)酵母菌進(jìn)行呼吸作用的方式有有氧呼吸和無(wú)氧呼吸。擰緊瓶蓋，酵母菌進(jìn)行無(wú)氧呼吸，總反應(yīng)式是：C6H12O62CO22C2H5OH能量。(2)從野生酵母菌群中分離純化酵母菌，常使用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法兩種。若要想計(jì)數(shù)酵母菌活菌的個(gè)數(shù)，使所得的估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作和多次重復(fù)外，還應(yīng)經(jīng)過(guò)系列稀釋(或梯度稀釋)的過(guò)程，保證待測(cè)樣品的濃度比較合適。(3)在果汁加工過(guò)程中，可添加纖維素酶、果膠酶來(lái)提高出汁率和清澈度。葡萄的皮、子中含有原花青素、葡萄皮紅素和大量葡萄風(fēng)味物質(zhì)等，這些物質(zhì)易溶于乙醇和乙酸乙酯中，因此，常采用萃取的方法來(lái)分離提取。(4)擴(kuò)大培養(yǎng)醋酸菌時(shí)，為了防止培養(yǎng)皿皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基上造成污染，一般是等待平板冷卻凝固后將平板倒置進(jìn)行培養(yǎng)。(5)醋酸菌是原核生物，酵母菌是真核生物。7生物技術(shù)在日常生活中應(yīng)用非常廣泛，回答下列與生物技術(shù)有關(guān)的問(wèn)題：(1)泡菜不能急著吃，是因?yàn)榕莶酥谱鬟^(guò)程中會(huì)產(chǎn)生亞硝酸鹽，實(shí)驗(yàn)室常采用_法來(lái)檢測(cè)泡菜中亞硝酸鹽的含量，亞硝酸鹽在適宜條件下可以和相關(guān)試劑反應(yīng)生成_色染料。(2)各地制作腐乳的原料和菌種相同，但風(fēng)味迥異，主要是通過(guò)控制_來(lái)實(shí)現(xiàn)的。(3)制作果醋和葡萄糖酒使用的微生物在結(jié)構(gòu)上不同，主要是前者_(dá)。答案(1)比色玫瑰紅(2)發(fā)酵的條件(3)無(wú)成形的細(xì)胞核或無(wú)核膜解析(1)實(shí)驗(yàn)室常采用比色法來(lái)檢測(cè)泡菜中亞硝酸鹽的含量，亞硝酸鹽在鹽酸酸化條件下可以和對(duì)氨基苯磺酸反應(yīng)生成玫瑰紅色染料。(2)各地腐乳風(fēng)味迥異，在原料和菌種相同時(shí)，可通過(guò)控制發(fā)酵的條件制作出不同風(fēng)味的腐乳。(3)制作果醋時(shí)使用的醋酸菌是原核生物，由原核細(xì)胞組成，沒(méi)有成形的細(xì)胞核；制作果酒時(shí)的菌種酵母菌為真核生物，由真核細(xì)胞組成，有成形的細(xì)胞核。