灰樹花工廠化栽培和開發(fā)研究技術(shù)總結(jié),A前言B材料與方法C結(jié)果與討論,前言,灰樹花（Crifolafrondosa）是經(jīng)常發(fā)生于我國東北地區(qū)、高寒地帶的一種優(yōu)質(zhì)食用菌，有獨特的營養(yǎng)和風味?；覙浠ㄗ訉嶓w形似盛開的蓮花，扇形菌蓋重重疊，又名舞茸、粟子蘑、蓮花菇。鮮嫩的子實體香味濃郁，味道鮮美，口感極佳，其營養(yǎng)豐富，富含灰樹花多糖、維生素、多種必需氨基酸和微量元素，經(jīng)常食用可預防和治療肝臟系統(tǒng)及胃腸道疾病。同時在日本從子實體提取的灰樹花多糖用作抗癌藥品。,所以灰樹花是一種具有很高開發(fā)價值的珍稀食藥用菌。日本料理盛行此菇。灰樹花野生量極少，幾乎不能形成商品。1974年日本進行人工栽培獲得成功，80年代研究成功了工廠化周年性栽培。我國最早于1983年由浙江慶元引種栽培，目前仍保留在依靠自然條件栽培，一年一次的手工操作家庭作坊式生產(chǎn)水平。由于受氣溫影響，產(chǎn)量不穩(wěn)定，雜菌污染，嚴重導致成品率低、品質(zhì)差，無法同國際的同行業(yè)進行競爭。,目前國內(nèi)尚無工廠化栽培灰樹花的先例。本項目旨在開發(fā)研究灰樹花在食用菌新品種，通過引種和DNA種性鑒定及生物育種技術(shù)，選育出適于工廠化栽培的灰樹花品種，研究制訂安全、衛(wèi)生的標準化工廠化生產(chǎn)工藝。通過對鮮菇保鮮技術(shù)的研究、延長鮮菇的貯藏時間，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。同時進行灰樹花在品種生產(chǎn)示新，實現(xiàn)新時期農(nóng)民增收。,材料與方法,一、供試灰樹花品種資源二、灰樹花品種DNA提取及RAPD反應三、培養(yǎng)料配方四、栽培容器五、灰樹花菇生育條件六、原材料、產(chǎn)品的重金屬和農(nóng)藥殘留測定,供試灰樹花品種資源,供試杏鮑菇品種資源分別從日本、韓國、美國、臺灣、福建、等國家及地區(qū)收集、引進，共11個品種，編號為“灰1號”至“灰11號”。保藏培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200克，葡萄糖20克，瓊脂19-20克，水1000毫升，磷酸二氫鉀或磷酸氫二鉀2克。,灰樹花品種DNA提取及RAPD反應,選擇“灰2號”、“灰3號”、“灰4號”、“灰9號”、“灰14號”菌種，編號依次為1,2,3,4,5。菌株經(jīng)PDY液體培養(yǎng)后，過濾收集各個菌株的菌絲體，采用CTAB方法提取各菌株的DNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定，稀釋后進行RAPD。,DNAmarker選用上海鼎國生物技術(shù)發(fā)展中心DGL2000，共采用32個上海生工生物技術(shù)公司的RAPD隨機引物進行RAPD擴增，其中共有21個引物有擴增條帶。以其中的18個隨機擴增引物擴增的數(shù)據(jù)統(tǒng)計片段的有無，用NT-SYS程序中的Simqual軟件算出菌株間遺傳相關(guān)性；用平均連鎖聚類分析方法(UnweightedPairGroupMethodArithmeticClusteringUPGMA)進行聚類分析，構(gòu)建樹狀圖譜。,培養(yǎng)料配方試驗,一、木屑32.5%;棉籽殼32.5%;麩皮15%;玉米粉10%;泥土10%二、木屑37.5%棉籽殼37.5%;麩皮15%;玉米粉10%;保水劑適量三、玉米芯25%;棉籽殼25%;木屑25%;麩皮15%;玉米粉10%;保水劑適量,栽培容器試驗,大袋：4132cm中袋：4124cm小袋：4817cm大瓶：1100毫升小瓶：850毫升,灰樹花菇生育條件試驗培養(yǎng)條件生育條件,溫度：22-23C濕度：70-75%CO2：2500ppm光照：無培養(yǎng)時間：3035天,溫度：22-23C濕度：85-90%CO2：1500ppm光照：300LUX左右培養(yǎng)時間：1520天,原材料、產(chǎn)品的重金屬和農(nóng)藥殘留測定結(jié)果,隨機抽取灰樹花栽培的主要原材料玉米芯、棉籽殼、米糠、木屑送上海市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所測重金屬鉛、汞、砷及農(nóng)藥殘留六六六、滴滴涕含量，同時跟蹤檢測用上述原料栽培的灰樹花產(chǎn)品的重金屬鉛、汞、砷及農(nóng)藥殘留六六六、滴滴涕含量。,結(jié)果與分析,一、灰樹花品種資源的收集、選育二、灰樹花工廠化栽培生產(chǎn)培養(yǎng)料配方研究三、灰樹花工廠化栽培容器研究四、灰樹花生長發(fā)育過程中所需的生活條件五、灰樹花工廠化生產(chǎn)病蟲害防治技術(shù)研究六、灰樹花產(chǎn)品安全衛(wèi)生質(zhì)量及保鮮技術(shù)七、灰樹花品種生產(chǎn)示范,灰樹花品種資源的收集、選育,表1：不同灰樹花品種栽培比較,圖一：隨機引物7擴增的灰樹花不同品種的DNA指紋圖譜,從左到右依次DNAmarker，菌株1,菌株2,菌株3,菌株4,菌株5分子量標記依次為2kb，1600bp，1000bp，750bp,500bp，250bp,100bp,圖二：隨機引物8擴增的灰樹花不同品種的DNA指紋圖譜,從左到右依次DNAmarker，菌株5,菌株4,菌株3,菌株2,菌株1分子量標記依次為2kb，1600bp，1000bp，750bp,500bp，250bp,100bp,圖三：隨機引物42擴增的灰樹花不同品種的DNA指紋圖譜,從左到右依次DNAmarker，菌株1,菌株2,菌株3,菌株4,菌株5分子量標記依次為2kb，1600bp，1000bp，750bp,500bp，250bp,100bp,圖四：不同灰樹花品種DNA遺傳相關(guān)性聚類樹狀圖譜,灰樹花工廠化栽培生產(chǎn)培養(yǎng)料配方研究,表2：不同培養(yǎng)料配方的灰樹花產(chǎn)質(zhì)量,灰樹花工廠化栽培容器研究,表3:不同大小的聚丙烯塑袋栽培灰樹花的產(chǎn)量,表4:不同大小的聚丙烯塑瓶栽培灰樹花的產(chǎn)量,灰樹花生長發(fā)育過程中所需的生活條件,溫度：菌絲體生長：23+1；原基形成子實體生長（開片）1617濕度：菌絲體生長：培養(yǎng)料含水量63+2%；空氣相對濕度70%左右。原基形成：空氣相對濕度8085%；子實體生長（開片）：空氣相對濕度8590%CO2濃度：菌絲體生長3000ppm以下；原基形成子實體生長（開片）1000ppm以下，原基形成：子實體生長（開片）：1000ppm以內(nèi)。CO2濃度過高，開片不良，易造成鹿角狀畸形子實體。光照：菌絲體生長不需要光照；菌絲體長滿容器后50100勒克司，弱光誘導7天左右。原基形成300勒克司左右；子實體生長（開片）5001000勒克司。光照不足，光照色澤淡，產(chǎn)量低。,灰樹花工廠化生產(chǎn)病蟲害防治技術(shù)研究,通過采用脈動式真空高壓蒸汽滅菌技術(shù)，徹底殺滅培養(yǎng)基質(zhì)中的病原菌，大大改善了固體培養(yǎng)料滅菌的效果使菌種生產(chǎn)成品率大大提高。采用低溫等離子空氣滅菌技術(shù)及空氣層流凈化技術(shù)，在生產(chǎn)工序中主要的場所，科學合理放置5臺等離子動態(tài)空氣潔凈器，不僅能直接達到滅菌除塵的目的，并能去除空氣中有害、有毒氣體和異物，在機器開啟的情況下，能夠進行正常作業(yè)，無須采用熏蒸和其他化學消毒方法。不僅保證了接種的成品率，而且保障操作人員安全衛(wèi)生。,因為灰樹花的工廠化生產(chǎn)在國內(nèi)尚無先例，我們經(jīng)過反復試驗證明：在灰樹花黑色蜂窩狀原基形成之前，是感染空氣中細菌和綠霉菌污染的關(guān)鍵時間，為此我們利用灰樹花生育階段的生長優(yōu)勢并給以最適應灰樹花生長發(fā)育的條件，在灰樹花菌絲體生長階段完成之后，適時進行弱誘導，使之菌絲墊形成特色并充分扭結(jié)成黑色蜂窩狀原基后，打開瓶蓋給予充足的空氣。栽培過程中,通過調(diào)節(jié)栽培室空氣濕度控制工藝，有效地降低了10%左右的雜菌侵染率。,灰樹花產(chǎn)品安全衛(wèi)生質(zhì)量及保鮮技術(shù),表5主要材料及產(chǎn)品檢驗結(jié)果,灰樹花品種生產(chǎn)示范,選擇上海郊區(qū)的南匯匯侖食用菌公司作為生產(chǎn)示范基地，分別于2003年和2004年進行了袋栽灰樹花工廠化生產(chǎn)技術(shù)示范。生產(chǎn)示范試驗基地菇房設(shè)施采用了彩鋼板夾芯保溫菇房，并配備了溫度、濕度、光照、通氣自動控制系統(tǒng)，超聲波加濕器，制冷及加熱系統(tǒng)。栽培容器采用透氣聚丙烯塑料袋。進行了二次生產(chǎn)示范試驗。試驗選用“灰3號”菌種，配方2，生產(chǎn)2760袋。在適宜灰樹花生長的溫度、濕度、光照、通氣條件下培養(yǎng)、出菇，示范試驗結(jié)果灰樹花原基分化率為90%，平均每袋產(chǎn)量達到250克，達到了預期目標。,