幽門螺旋桿菌尿素酶抗體檢測操作程序（膠體金法）1.目的用于定性檢測人血液樣本中的胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體，可用于臨床輔助診斷消化道胃幽門螺旋桿菌感染。2.范圍適用于臨床對幽門螺旋桿菌尿素酶抗體的檢測。3. 檢驗原理 試劑盒應(yīng)用滲濾式間接法原理，將幽門螺旋桿菌尿素酶固定在硝酸纖維素膜載體上，待檢血清中幽門螺旋桿菌尿素酶抗體IgGY與抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，加入膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體與復(fù)合物結(jié)合，根據(jù)是否形成肉眼可見的紅色圓斑（T端），判斷結(jié)果。硝酸纖維素膜上的質(zhì)控區(qū)固定有兔抗鼠IgG,加入膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體后與之結(jié)合形成紅色圓斑（C端）。4.主要組成成分4.1 反應(yīng)板：4.2cm×2.8cm×0.7cm上下對合、中央有直徑為0.9±0.05cm小孔的塑料小盒，其內(nèi)主要為固定有油門螺旋桿菌尿素酶抗原的硝酸纖維素膜和吸水材料4.2 試劑：0.02mol/L PH 7.4 PBS溶液，內(nèi)含吐溫-20.4.3 試劑：主要含有膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體、穩(wěn)定劑和防腐劑。5.儲存條件及有效期 產(chǎn)品應(yīng)儲存在2-8條件中，不能冷凍；有效期9個月。拆封后未用完的反應(yīng)板應(yīng)放入密封袋2-8保存，應(yīng)在一個月內(nèi)用完。6. 樣本要求6.1 樣本采集：按照臨床采血技術(shù)規(guī)范操作采集靜脈血，采集的靜脈血置室溫30分鐘或37水浴15-20分鐘后，低速離心（2000轉(zhuǎn)/分-3000轉(zhuǎn)/分）5-10分鐘，分離血清。6.2 樣本保存：若分離后的血清不能及時檢測，應(yīng)將樣本保存在2-8條件下，若保存時間超過7天，則需將樣本保存在-20以下并避免反復(fù)凍融，以免抗體效價降低。6.3 當(dāng)明顯溶血（血紅蛋白濃度1.96g/L）、黃疸（膽紅素濃度40.1umol/L）、高血脂（甘油三酯濃度7.0mmol/L），影響血清的滲透性并明顯增加反應(yīng)膜的背景顏色，對結(jié)果的判斷有影響，此類標(biāo)本不宜使用。7.檢測步驟7.1 滴加二滴試劑于反應(yīng)板孔中，待完全滲入；7.2 滴加100ul血清于反應(yīng)板孔中，待完全滲入；7.3 滴加二滴試劑于反應(yīng)板孔中，待完全滲入；7.4 滴加二滴試劑于反應(yīng)板孔中，待完全滲入；7.5 滴加二滴試劑于反應(yīng)板孔中，待完全滲入；7.6 操作完成后5分鐘內(nèi)判斷結(jié)果。8.檢測結(jié)果的判斷陽性：反應(yīng)板孔中C端出現(xiàn)紅色圓斑，T端出現(xiàn)紅色圓斑，為幽門螺旋桿菌尿素酶抗體陽性。陰性：反應(yīng)板孔中C端出現(xiàn)紅色圓斑，T端不出現(xiàn)紅色圓斑，為幽門螺旋桿菌尿素酶抗體陰性。失效：反應(yīng)板孔中C端不出現(xiàn)紅色圓斑，或C、T端均不出現(xiàn)紅色圓斑，表示失效?？赡苁怯捎诓僮鞑徽_或試劑盒失效，應(yīng)重試。9.參考范圍 正常:陰性 異常:陽性。10.臨床意義10.1 本方法僅用于定性檢測人血液中的胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體。10.2 陽性結(jié)果僅表明：胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體的存在，但不能作為胃幽門螺旋桿菌感染的唯一判斷標(biāo)準(zhǔn)，確診應(yīng)結(jié)合臨床癥狀及其他診斷技術(shù)。也可根據(jù)問診結(jié)果，3-6個月內(nèi)沒有進(jìn)行根除治療者，陽性結(jié)果即為現(xiàn)癥感染；3-6個月內(nèi)有進(jìn)行根除治療者，陽性結(jié)果為疑似感染，需進(jìn)行其它方法檢測，或過一段時間進(jìn)行重復(fù)檢測。10.3 病人曾經(jīng)感染過幽門螺旋桿菌，其抗體也在較長時間存在于體內(nèi)，因此抗體陽性結(jié)果并不能說明病人正感染著幽門螺旋桿菌。10.4 陰性結(jié)果表明：樣本中檢測不到幽門螺桿菌抗體，但不能完全排除胃幽門螺旋桿菌感染的可能性，可能是胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體沒有出現(xiàn)或是抗體水平過低不能被本試劑盒檢測出來。也可根據(jù)問診結(jié)果，3-6個月內(nèi)有進(jìn)行治療者，陰性結(jié)果即為根除治療成功；3-6個月內(nèi)未進(jìn)行根除治療者，陰性結(jié)果即為未感染幽門螺桿菌。11.檢驗方法的局限性11.1 本試劑僅用于檢測幽門螺旋桿菌尿素酶抗體而非直接檢測幽門螺旋桿菌，因而陽性結(jié)果并不能確診是幽門螺旋桿菌感染。檢測結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨(dú)作為確診或排除病例的依據(jù)，為達(dá)到診斷目的，對患者狀況的診斷應(yīng)結(jié)合患者臨床體征與癥狀和其他的檢測結(jié)果綜合分析。11.2 抗體含量低的血清樣本，不能被檢測出來是可能的。部分幽門螺旋桿菌感染的患者，不產(chǎn)生抗體或產(chǎn)生少量的抗體。此時，可能顯示陰性結(jié)果。11.3 當(dāng)檢測結(jié)果與臨床不符時，應(yīng)用培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)或用其他方法確診。11.4 感染初期，IgG未產(chǎn)生或滴度很低會導(dǎo)致陰性結(jié)果，應(yīng)提示患者在7-14天內(nèi)復(fù)查，復(fù)查時同時平行檢測上次采集的標(biāo)本以確認(rèn)是否出現(xiàn)血清學(xué)轉(zhuǎn)陽或滴度明顯升高。11.5 免疫功能受損或接受免疫抑制治療的患者，其血清學(xué)抗體檢測的參考價值有限。12.產(chǎn)品性能指標(biāo)12.1 滲透時間：膜的滲透時間小于60秒。12.2 符合率：陽性符合率和陰性符合率為100%。12.3 批內(nèi)精密度：陽性參考品和陰性參考品檢測的重復(fù)性為100%。12.4 批間精密度：陽性參考品和陰性參考品檢測的重復(fù)性為100%。12.5 最低檢出限：陽性參考品用陰性參考品進(jìn)行倍比稀釋至1:2作為最低檢出限。12.6 交叉反應(yīng)：本試劑盒的檢測與解脲支原體抗體陽性血清存在交叉反應(yīng)，未發(fā)現(xiàn)與以下病原體抗體陽性血清存在交叉反應(yīng)：乙肝病毒、丙肝病毒、克萊伯氏菌。12.7 干擾試驗：樣本中含有EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉等抗凝劑時不影響結(jié)果，當(dāng)RF濃度高于350IU/ml時，有假陽性出現(xiàn)，ANA、ENA自身抗體，通常不影響試驗結(jié)果。血清中膽紅素、血紅蛋白、血脂在通常情況下不會影響試驗結(jié)果，但當(dāng)它們的濃度分別超過40.1umol/L、1.96g/L、7.0mmol/L將干擾結(jié)果觀察，此類標(biāo)本不宜使用。13.注意事項13.1 本品僅供體外檢測之用。13.2 在盒簽標(biāo)明的有效期內(nèi)使用。13.3 血液收集后盡快分離血清或血漿避免溶血，只有清亮的非溶血樣本可用。13.4 請將低溫保存的血清或血漿樣本恢復(fù)到室溫后使用，不要反復(fù)凍融。13.5試驗中所有樣品均應(yīng)作為傳染性物品處理。13.6檢測線的顏色強(qiáng)度隨樣品中幽門螺桿菌尿素酶抗體濃度的變化而變化，但不宜用于檢測幽門螺桿菌尿素酶抗體的濃度。14.參考文獻(xiàn):14.1 尚紅，王毓三，申子瑜主編全國臨床檢驗操作規(guī)程14.2 三明博峰生物科技有限公司幽門螺旋桿菌尿素酶抗體檢測使用說明書4參考分析#