《《紅腺忍冬組培快繁技術規(guī)程》征求意見稿編制說明》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《《紅腺忍冬組培快繁技術規(guī)程》征求意見稿編制說明（13頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

1 廣西地方標準《 紅腺忍冬組培快繁技術規(guī)程 》 （征求意見稿）編制說明 一、 工作簡況 （一）任務來源 本標準是廣西壯族自治區(qū)質(zhì)量技術監(jiān)督局下達的 2016 年 第 六 批廣西地方標 準制定（修訂）項目計劃 （桂質(zhì)監(jiān)函 [2016] 324 號文） ，項目編號為 2016由廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生和計劃生育委員會提出，廣西衛(wèi)生標準化技術委員會歸口，廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 負責 起草。 （二）參與起草單位 廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 。 （三）主要起草人員名單及職務或職稱 二、編制標準意義 紅腺忍冬（ ，是《中國藥典》山銀花的來源植物之一，具有清熱解毒、疏散風熱的功效，用于治療癰腫疔瘡、喉痹、丹毒，熱毒血痢，風熱感冒，溫熱發(fā)病。紅腺忍冬為廣西地理標志性物 種，開發(fā)潛力巨大，其主根粗壯， 毛細根研 制 人 員 姓名 職務 /職稱 現(xiàn)從事專業(yè) 所在單位 項 目 負責人 師鳳華 副研究員 生物技術 廣西藥用植物園 主 要 參 加 人 員 譚木秀 研究 實習 員 生物技術 廣西藥用植物園 蒲祖寧 主任技師 種質(zhì)資源保存 廣西藥用植物園 郭曉云 副研究員 生物技術 廣西藥用植物園 李翠 助理研究員 生理生化 廣西藥用植物園 2 密如蛛網(wǎng)，枝條多，萌蘗能力強，具有良好的蓄水保土效益，對 喀斯特地貌的恢復具有重要意義。 但近年來紅腺忍冬野生資源數(shù)量迅速減少，難以滿足需求，需加快發(fā)展人工種植。而種子繁殖和枝條扦插成活率均不高，因此有必要通過建立起完整、高效、實用的紅腺忍冬組培快繁技術體系，加快繁殖速度，提高繁殖系數(shù)，為推廣紅腺忍冬組織培養(yǎng)苗優(yōu)良種質(zhì)大面積生產(chǎn)提供技術參考。 經(jīng)查閱《中華人民共和國國家標準批準發(fā)布公告》、《中華人民共和國行業(yè)標準備案公告》和《中華人民共和國地方標準備案公告》， 紅腺忍冬組培快 繁技術 尚無國家標準、行業(yè)標準或地方標準，因此，特進行 紅腺忍冬組培快繁 技術研究并據(jù)此制定 紅腺忍冬組培快繁技術 規(guī)程。 三、標準編制起草及研究過程 （一）前期 準備 工作 2012 年至 2015 年，在廣西壯族自治區(qū)科技廳課題 “ 金銀花木犀草苷生物合成相關基因克隆和轉(zhuǎn)化山銀花的研究 ” （項目任務書編號： 2012資助下，完成了山銀花的生態(tài)環(huán)境條件調(diào)查，開展了金銀花黃酮類生物合成途徑關鍵酶 和黃酮類化合物合成的影響研究、遺傳轉(zhuǎn)化體系研究等，在此基礎上，標準編制小組成員至今已完成 山銀花紅 腺忍冬種子發(fā)芽條件、 種子實生苗滅菌方法、培養(yǎng)基組分、激素水平、培養(yǎng)條件 、 不同組織芽誘導、 增殖繼代、芽誘導及 生根壯苗 等較優(yōu)的初代誘導技術方案等研究工作，基本掌握紅腺忍冬組培快繁技術，在核心期刊上發(fā)表相關文章1 篇： 紅腺忍冬種子沙培萌發(fā)條件和種子沙培苗滅菌方法的初步研究 [J]2015,38(5):899已申請相關專利 3 項：《紅腺忍冬無菌組培苗葉柄愈傷組織不定根誘導的方法（ （ 2016 年 4 月 29 日已發(fā)受權通知書）、《一種華南忍冬葉片不定芽的誘導方法（ （已進入答辯階段），《紅腺忍冬無菌組培苗葉柄不定芽誘導的方法（ 2015122400745570》已受理；為本標準的 制定實施奠 定了良好基礎。 （二 ）標準 編制起草 進度 1、 2016 年 1 月，收到廣西壯族自治區(qū)質(zhì)量技術監(jiān)督局為貫徹落實《廣西壯族自治區(qū)人民政府關于印發(fā)深化標準工作改革實施方案的通知》（桂政發(fā) [2015]51 號）精神而下達關于征集 2016 年廣西地方標準計劃項目的通知。 3 2、 2016 年 3 月，廣西壯族自治區(qū)藥用植物園向廣西壯族自治區(qū)質(zhì)量技術監(jiān)督局遞交了制定廣西地方標準《紅腺忍冬組培快繁技術 規(guī)程》的建議書和申請書。 3、 2016 年 5 月，廣西壯族自治區(qū)藥用植物園成立了以師鳳華為組長，譚木秀、蒲祖寧、郭曉云、李翠等 5 人組成的標準起草工作小組，該小組在前期研究工作的基礎上，對 紅腺忍冬組培快繁 關鍵技術進行了系統(tǒng)總結和集成，同時查閱了大量的國內(nèi)外文獻資料，確定了廣西地方標準《紅腺忍冬組培快繁技術規(guī)程》的主要技術核心內(nèi)容，形成了標準的基本構架。 4、 2016 年 6 月，經(jīng)過標準起草工作小組的充分討論及多次修改完善，最終完成了廣西地方標準《紅腺忍冬組培快繁技術規(guī)程（征求意見稿）》。 （三 ）標準研究過程 標準編制 小組成員多年從事 遺傳轉(zhuǎn)化及組培快繁 工作并熟練掌握其 技術， 成功 申請到 紅腺忍冬 相關項目并 做出一定的成績 ， 經(jīng) 前期試驗 已 成功 誘導 出 紅腺忍冬無菌 組培苗， 具備 一定的 工作基礎。 標準編制項目下達后，按照廣西區(qū)質(zhì)監(jiān)局關于編制標準工作的要求， 標準 編制小組 依照標準主題、要求對材料進行整理、收集和調(diào)研。 根據(jù)各 人研究方向進行分工 合作 ，開展 紅腺忍冬 資源的調(diào)查和采集 ， 針對試驗中出現(xiàn)的 紅腺忍冬帶腋芽莖段誘導無菌組培苗 難，及此初代誘導苗不易進行繼代 培養(yǎng) 、 組培苗繁殖系數(shù)低、易褐化、 易 死亡等問題 ， 在 不斷 試驗的同時咨詢了 相關 同行專家，反復 思考總結 、多方位 進行試驗篩選 ，確保標準 數(shù)據(jù) 準確 可靠性。 標準研究的試驗材料 來 自廣西 馬山 縣 弄拉 景區(qū)的 紅腺忍冬成熟漿果 ， 撥取其中成熟飽滿的種子進行種子發(fā)芽試驗，獲取種子實生苗，對 此實生苗進行外植體滅菌處理獲得無菌組培苗，進一步 進行 相關 篩選 試驗獲 得 不同組織 外植體 芽誘導、增殖 繼代 及生根 壯苗 的較佳試驗方案 ，建立 起 紅腺忍冬 組培苗快速繁殖技術體系。 四、標準編制原則、依據(jù) （一）制定本標準的目的是 規(guī)范 紅腺忍冬 組培苗 組培快繁 技術、 拓寬組培苗誘導來源、 提高 組培苗 繁殖系數(shù) 質(zhì)量 ， 實現(xiàn) 紅腺忍冬 組培苗 組培快繁 標準化。 （二）本標準的格式和編 寫方法執(zhí)行 規(guī)定。 （三）本標準的制定力求科學、準確、系統(tǒng)，內(nèi)容與當前廣西 紅腺忍冬組培快繁 的實際和社會經(jīng)濟狀況緊密結合，可操作性強。 （四）本標準規(guī)定了 紅腺忍冬 組培 快繁的術語和定義、取材與處理、 外植體不定 芽 4 誘導 、 繼代 增殖、生根壯苗、培養(yǎng)條件、信息記錄 。適用于組培苗生產(chǎn)公司和企業(yè)通過組織培養(yǎng)技術規(guī)范化生產(chǎn) 紅腺忍冬無菌 組培苗。 （五）本標準的編寫以 廣西壯族自治區(qū)科技廳課題 “ 金銀花木犀草苷生物合成相關基因克隆和轉(zhuǎn)化山銀花的研究 ” （項目任務書編號： 2012為研 究基礎， 紅腺忍冬 組 織 培 養(yǎng)技術相關 試驗 數(shù)據(jù)為基本 參考 依據(jù) 進行 編制 。 五、標準主要技術內(nèi)容 的確定 （一）范圍 本標準規(guī)定了紅腺忍冬（ 組培快繁的 術語和定義、取材與處理、外植體不定芽誘導、繼代增殖、生根壯苗、培養(yǎng)條件、信息記錄。 （二）規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應用必不可少。凡是注明日期的引用文獻，僅所注日期的版本適用于本文件；凡是不注明日期的引用文件，以其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 無 （三）主要技術內(nèi)容 1、材料與方法 材料 ： 廣西 馬山縣 中國 弄拉景區(qū)的紅腺忍冬成熟漿果 。 方法： （ 1）不同處理方式對紅腺忍冬種子發(fā)芽的影響 將當年 10 月底 11 月初采 集 的成熟漿果 一半直接將種子剝出進行播種，另一半漿果經(jīng) 4 ℃ 低溫貯藏 5 d 后 將 種子 剝出 ，經(jīng)發(fā)芽處理后進行播種，播種后均覆蓋一層 0.3 0 目篩的細河砂。種子的發(fā)芽處理如下：不浸泡 ， 清水浸泡 24 h， 自來水流水沖洗 24 h， 200 泡 24 h， 400 泡 24 h。 每一處理設 3 次重復，每一重復播種 50 粒種子， 每 天觀察并統(tǒng)計各處理種子發(fā)芽等相關情況。 種子發(fā) 芽能力指標 統(tǒng)計：萌發(fā) 以胚軸突破種皮為準，此時即為初次計數(shù)時間。自發(fā)芽開始之日起，每 天記錄萌發(fā)的正常幼苗數(shù)，挑出霉變種子，至無新萌發(fā)種子的天數(shù)為末次計數(shù)時間。以萌發(fā)啟動時間、萌發(fā)結束時間、萌芽持續(xù)時間、發(fā)芽率、發(fā)芽勢作為種子萌發(fā)試驗評價指標，具體算法如下： 萌發(fā)啟動時間：從播 種之日起至開始萌發(fā)之日所經(jīng)歷的天數(shù)。 5 萌發(fā)結束時間：從播 種之日起，經(jīng)過萌發(fā)期，至無新萌發(fā)種子 時 所經(jīng)歷的天數(shù)。 萌芽持續(xù)天數(shù)：從種子開始萌發(fā)之日起，至萌發(fā)結束之日，之間所經(jīng)歷的天數(shù)。 發(fā)芽率（ =（ n/N） ×100%（ n 為最終發(fā)芽數(shù)， N 為供試種子數(shù)）。 發(fā)芽勢（ =（ ） ×100%（ i 天種子發(fā)芽達到高峰時正常發(fā)芽的種子數(shù)，N 為供試種子數(shù)）。 （ 2）種子 實生 苗消毒滅菌處理 具 3 片以上真葉的種子實生苗 經(jīng)過消毒滅菌 處理 后轉(zhuǎn)接入培養(yǎng)基 1/2糖 30 g/L+瓊脂 6g/L +（ ） 中培養(yǎng) 。 消毒滅菌 設 6 個處理，每一處理 設 3 次重復，每一重復 接種 3 瓶，每瓶接種 2 株 ， 7d 后統(tǒng)計污染率和成活率等相關數(shù)據(jù)。 處理見表 1。 表 1 不同滅菌方法對紅腺忍冬種子實生 苗滅菌效果的影響 前處理方式 滅菌劑種類及 滅菌時間 75%酒精 (S)+苗原培養(yǎng)條件 滅菌方式 于超凈臺上直接用無菌水沖洗 0+ 0 密閉培養(yǎng)瓶中 連根整株取出，不滅菌，連根轉(zhuǎn)接 30+ 5 密閉培養(yǎng)瓶中 連根整株取出，僅對下胚軸以下部分進行滅菌，連根轉(zhuǎn)接 30+ 5 密閉培養(yǎng)瓶中 連根整株取出，整株全部滅菌，連根轉(zhuǎn)接 30+ 5 密閉培養(yǎng)瓶中 棄根，整體滅菌，整體轉(zhuǎn)接 洗潔精水刷洗 30+5 密閉培養(yǎng)瓶中 棄根，整體滅菌，整體轉(zhuǎn)接 30+ 5 開放花盆中 棄根，整體滅菌，整體轉(zhuǎn)接 （ 3） 不同種類細胞分裂素對紅腺忍冬不同部位愈傷組織誘導及成芽的影響 以苗齡為 40 生長健壯的 無菌 組培 生根苗的葉片、葉柄及 無芽 莖段三部位 為材料， 以 糖 30g/L+瓊脂 6g/L+ 為基本培養(yǎng)基，分別添加 、、 、 ， 共 12 個處理，每一處理 設 3 次重復，每一重復 接種 3 瓶，每瓶接種 8 個外植體，每周觀察一次 ， 于接種后起第 30 天、 60 天及 90天統(tǒng)計相關數(shù)據(jù)。 （ 4） 繼代 增殖培養(yǎng) 試驗一：不同濃度 6紅腺忍冬芽增殖 繼代及節(jié)間伸長的影響 以苗齡為 40 生長健壯的 無菌組培 生根 苗芽為材料， 以 糖 30g/L+瓊脂6g/L+ 為基本培養(yǎng)基，分別添加 60、 ， 6 另設 糖 30g/L+瓊脂 6g/L+ 6 + 為平行對照 ； 每一處理 設 3 次重復，每一重復 接種 3 瓶，每瓶接種 2 株芽苗 ， 于接種后 第 30 天、 60 天及 90 天統(tǒng)計相關數(shù)據(jù)。 試 驗二 ：不同濃度 紅腺忍冬無菌苗繼代增殖及節(jié)間伸長的影響 以苗齡為 40 生長健壯的 無菌組培 生根 苗芽為 材料， 以 糖 30g/L+瓊脂6g/L++6 為基本培養(yǎng)基，分別添加 0、 ，共 9 個處理 ， 每一處理 設 3 次重復，每一重復 接種 3 瓶，每瓶接種 2 株芽苗 ， 于接種后 第 30 天、 60 天及 90 天統(tǒng)計相關數(shù)據(jù)。 （ 5）不同種類生長素對不同來源材料的紅腺忍冬生根壯苗的影響 以苗齡為 40 生長健壯的 無菌組培 生根 苗芽為 材料， 以 1/2糖 30g/L +瓊脂 6g/L 為基本培養(yǎng)基，分別添加 、 、 ， 未 添加生長素的組合為對照，同時以從帶腋芽莖段為外植體誘導出的初代無菌誘導苗接入 處理為平行對照， 共 5 個處理， 每一處理 設 3 次重復，每一重復 接種 3 瓶，每瓶接種 2株芽苗 ， 于接種第 30d 及第 60d 時統(tǒng)計相關數(shù)據(jù)。 2、結果與分析 （ 1）不同處理方式對紅腺忍冬種子發(fā)芽的影響 由 下表 2 可 知 ， 不同處理方對紅腺忍冬種子的萌發(fā)啟動時間、萌發(fā)結束時間、發(fā)芽持續(xù)時間、發(fā)芽率及發(fā)芽勢的影響程度均不同。 低溫處理的種子平均發(fā) 芽率及平均發(fā)芽勢優(yōu)于未經(jīng)低溫 的 處理， 并且 種子發(fā)芽持續(xù)時間 縮短 ； 溶液浸 泡的處理 種子發(fā)芽率與發(fā)芽勢均高于其它處理，發(fā)芽持續(xù)時間縮短明顯 ， 以處理 00 浸泡的平均發(fā)芽率和平均發(fā)芽勢最 高， 發(fā)芽早，發(fā)芽持續(xù)時間短 ； 是否經(jīng)過 清水浸泡或流水沖洗對種子平均發(fā)芽率的影響不大 ，但 流水沖洗 能縮短 種子發(fā)芽持續(xù)時間 。 綜合可知，以溶液 對 經(jīng) 4℃ 低溫 儲藏 5 子 浸泡 24 子發(fā)芽 的較佳 處理 。 表 2 不同處理方式對紅腺忍冬種子發(fā)芽 的影響 處理方式 萌發(fā)啟動時間 / d 萌發(fā)結束時 間 / d 發(fā)芽持續(xù)時間 / d 平均發(fā)芽率 / % 平均發(fā)芽勢 / % 未經(jīng) 4℃ 儲藏 不浸泡 4℃ 低 溫 儲 不浸泡 7 藏 5d 自來水流水沖洗 24h 浸泡 24h 00 浸泡 24h 00 浸泡 24h 2）不同滅菌方法對紅腺忍冬種子實生苗滅菌效果的影響 由 下 表 3 可知， 6 個處理的種子 實生 苗成活率均為 100%，但不同滅菌方式對紅腺忍冬種子沙培 實生 苗滅菌效果差異顯著： 經(jīng) 洗潔精水刷洗 ；棄根轉(zhuǎn)接的效果優(yōu)于連根轉(zhuǎn)接， 經(jīng) 開放式沙基培養(yǎng) 的實生苗外植體轉(zhuǎn)接的平均污染率和苗生長狀況均 優(yōu)于封閉式的沙基培養(yǎng)。 由此可 知 ，對開放沙基培養(yǎng)的 實生 種子 苗下胚軸以上部分用洗潔精水刷洗 沖洗之后進行 75%酒精 (30 S)+ 菌處理的滅菌效果最好。 表 3 不同滅菌方法對紅腺忍冬種子沙培苗滅菌效果的影響 清潔 方式 滅菌及轉(zhuǎn)接 方式 平均污染率 / % 平均成活率 / % 苗生長狀況 于超凈臺上直接用無菌水沖洗 連根整株取出，不滅菌，連根轉(zhuǎn)接 連根整株取出，僅對下胚軸以下部分進行滅菌，連根轉(zhuǎn)接 連根整株取出，整株全部滅菌，連根轉(zhuǎn)接 棄根，整體滅菌，整體轉(zhuǎn)接 + 洗潔精水刷洗 棄根，整體滅菌，整體轉(zhuǎn)接 + 棄根，整體滅菌，整體轉(zhuǎn)接 ++ 注：同列不同小寫字母表示有顯著性差異， P﹤ 列不同大寫字母表示有極顯著性差異，P﹤ -：差； +：好； ++：較好； +++：最好 （ 3） 不同種類細胞分裂素對紅腺忍冬 不同部位愈傷組織 誘導及 成芽的影響 據(jù)下表 4 可知， 愈傷組織誘導效果： 、 、 、 4 種細胞分裂素中均可將 紅腺忍冬葉片、葉柄及無腋芽莖段 3 種外植體 誘導出愈傷組織 ； 在細胞分裂素 、 及 3 個處理中 ， 3種外植體 愈傷組織 誘導率 均 為：無腋芽莖段＞葉柄＞ 葉片 ， 在 L 處理 ：葉片＞無腋芽莖段 ＞ 葉柄 ； 就同一部位 不同細胞分裂素 而言 ， 各 部位 愈傷組織誘導率高低為 8 （以 3 次統(tǒng)計的平均數(shù) 為依據(jù) ） ：葉片： 柄和無腋芽莖段均為： 愈傷 組織 不定芽誘導 效果： 除 ，其它 3 種細胞分裂素 能誘導出不定芽。 3 種細胞分裂素對 3 部位不定芽誘導率高低及芽質(zhì)量效果均為： 及 2 個處理 均能將 這 3 種外植體 誘導出不定芽 ， 且這 3 部位誘導率大小 及芽質(zhì)量 高低 均為無腋芽莖段＞葉柄＞葉片 ； 3 部位 在各 時期 芽誘導率均 表現(xiàn) 為 處理只能將葉片和無腋芽莖段 導出不定芽 ， 其中葉片 的芽 誘導率 較高 。 另外， 葉片、葉柄及不帶芽莖段 3 部位在 4 種培養(yǎng)基中誘導出的愈組均為顆粒狀、質(zhì)地硬、無水漬；愈傷組織顏色變化趨勢均隨著培養(yǎng)時間遞增而呈米白色 深綠色 褐化現(xiàn)象。 綜合可 見 ， 愈傷組織誘導效果：優(yōu)選組合為：無腋芽莖段在培養(yǎng)基 糖 30g/L+瓊脂 6g/L++ 中的 愈傷組織 誘導效果最佳 ，培養(yǎng)至第 30d 時，誘導率高達 培養(yǎng)至第 90d 時，愈傷組織直徑達 不定芽誘導效果：以無 腋芽 莖段 在培養(yǎng)基 糖 30g/L+瓊脂 6g/L++ 中的 不定芽誘導 效果最佳 ，培養(yǎng)至第 60d 時，平均芽數(shù)達 質(zhì)量最佳 ， 培養(yǎng)至第 90d 時， 不定芽誘導率 可 達 表 4 不同種類細胞分裂素對紅腺忍冬不同部位愈傷組織誘導及成芽的影響 培養(yǎng)基種類及濃度（ ） 接種部位及接種量（個） 培養(yǎng)天數(shù)（ d） 出愈率（ %） 成活率（ %） 愈組大小Φ(芽誘導率（ %） 總芽數(shù)（個） 平均芽數(shù) 芽質(zhì)量 片 30 60 90 葉柄 30 60 90 ++ 無腋芽莖段 30 60 + 90 + 片 30 60 + 9 90 ++ 葉柄 30 60 + 90 ++ 無腋芽莖段 30 60 ++ 90 ++ 片 30 60 90 葉柄 30 60 90 無腋芽莖段 30 60 90 片 30 60 90 葉柄 30 60 90 無腋芽莖段 30 60 ++ 90 ++ 注：平均芽數(shù) =芽總數(shù)（個） /出芽的外植體總數(shù)（個） ；芽質(zhì)量： +：一般， ++：較好， +++：最佳 （ 4）繼代增殖培養(yǎng) 試驗一：不同濃度 6紅腺忍冬芽增殖繼代及節(jié)間伸長的影響 據(jù)下表 5 可知， 同一處理中，隨著 培養(yǎng) 時間的增加，芽增殖倍數(shù)、芽平均高度、芽節(jié)間長度及芽平均葉片數(shù)均呈逐漸上升趨勢， 接種后第 30d、 60d、和 90d 這 3 個時間點的統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示， 芽增殖倍數(shù)均以處理 + 6 最高，分別為： 及 ；對 芽平均高度、芽節(jié)間平均長度及芽平均葉片數(shù)誘導較好的處理為 + 6 及 + 6 ， 6 的處 10 理 芽健壯度最佳； 的 芽增殖誘導及芽高度有明顯的促進作用。 表 5 不同濃度 6紅腺忍冬芽增殖繼代及節(jié)間伸長的影響 ) 6) 培養(yǎng)時間（ d） 芽增殖倍數(shù)（ t） 芽平均高度 (芽節(jié)間平均長度（ 芽平均葉片數(shù) (p) 顏色 健壯度 30 綠 + 60 + 90 綠 ++ 0 1． 40 綠 + 60 + 90 ++ 0 綠 + 60 綠 ++ 90 ++ 0 綠 ++ 60 綠 ++ 90 綠 + 0 綠 ++ 60 綠 +++ 90 +++ 0 綠 +++ 60 綠 +++ 90 +++ 0 綠 + 60 ,00 綠 ++ 90 +++ 0 綠 +++ 60 綠 +++ 90 ++ 注： +：一般， ++：較好， +++：最好 實驗二：不同濃度 紅腺忍冬無菌苗繼代增殖及節(jié)間伸長的影響 由下表 6 可見， 在 范圍內(nèi)， 隨著 度的升高，紅腺忍冬芽增殖倍數(shù)呈上升趨勢， 處理 ++ 的芽增殖倍數(shù)最高，為 1 倍（ 30d）、 （ 60d）、 （ 90d）。 同濃度對紅腺忍冬節(jié)間平均長度和芽平均葉片數(shù) 的影響不大。 表 6 不同濃度 紅腺忍冬無菌苗繼代增殖及節(jié)間伸長的影響 ) 培養(yǎng)時間（ d） 芽增殖倍數(shù)（ t） 芽平均高度 (芽節(jié)間平均長度（ 芽平均葉片數(shù) (p) 顏色 健壯度 （ 30 綠 ++ 60 +++ 90 綠 ++ 0 綠 + 60 ++ 90 綠 ++ 0 綠 ++ 60 +++ 90 綠 ++ 0 綠 ++ 60 ++ 90 綠 ++ 0 綠 + 60 ++ 90 綠 ++ 0 綠 ++ 60 ++ 90 綠 ++ 0 綠 ++ 60 ++ 90 綠 ++ 0 綠 + 60 +++ 90 綠 ++ 0 綠 + 60 ++ 90 綠 ++ 注： +：一般， ++：較好， +++：最好。 12 （ 6）不同種類生長素對 不同 來源 材料 的 紅腺忍冬生根壯苗的影響 據(jù)下表 7 可知， 生長素對紅腺忍冬組培苗生根效果起 不可或缺的 關鍵 作用， 未添加生長素的 處理 培養(yǎng)至第 60d 時仍未 生根 ，繼續(xù)追蹤觀察，未見生根 ； 就 同一濃度不同種類生長素培養(yǎng) 種子 繼 代組培 苗而言， 生根率、平均根數(shù)及平均根長等各方面生根效果優(yōu)略次序均為： ＞ ＞ ， 且 處理能在短期內(nèi)促進生根，培養(yǎng) 30d 生根率可達 100%，優(yōu)于其它處理，但 卻不利于 腋芽初代誘導苗的生根，培養(yǎng)至第 60d 時 腋芽初代誘導苗 仍未生根， 繼續(xù)培養(yǎng) 則 出現(xiàn)底端愈傷組織膨大，葉片及頂芽泛黃最終 導致枯萎死亡。 綜上， 紅腺忍冬組培 無菌 生根 苗 的優(yōu)選 材料 ： 種子實生無菌 組培 苗芽，優(yōu)選生根培養(yǎng)基： 1/2糖 30g/L+瓊脂 6g/L+。 表 7 不同種類生長素對不同 來源材料 的紅腺忍冬生根壯苗的影響 生長素種類及濃度 () 材料來源 培養(yǎng)天數(shù)（ d） 生根率（ %） 平均根數(shù) （條 /株） 平均根長 （ 根生長狀況 — 種子繼代組培苗 30 60 芽初代誘導苗 30 60 子繼代組培苗 30 白 深綠 ，較粗壯，側根多，質(zhì)量較佳 60 子繼代組培苗 30 白 深綠，較細長，側根少，質(zhì)量好 60 子繼代組培苗 30 白 深綠，較細長，側根少，質(zhì)量一般 60 、與現(xiàn)行法律法規(guī)和標準 關系 本標準（征求意見稿）是依據(jù)《中華人民共和國標準化法》、《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》、《 廣西中藥材標準》等國家相關的法規(guī)和強制性標準的基礎上結合地方實際情況制定出來的，因此與現(xiàn)行法律、法規(guī)及強制性標準無沖突。 七、 實施標準的要求和建議 13 標準必須是在遵循法律法規(guī)及國家相關標準的前提下，綜合 組培 生產(chǎn)企業(yè)的實際要求制定，標準必須具有法律依據(jù)及可操作性。 八、 參考文獻 [1] 285 農(nóng)藥安全使用標準 [2] 國家藥典委員會 一部 [S]化學工業(yè)出版社 , 2005. 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