《甘肅省武威市高中生物 第2章 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 2.2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)課件 新人教版選修1 .ppt》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《甘肅省武威市高中生物 第2章 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 2.2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)課件 新人教版選修1 .ppt（32頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù),一、研究思路,1、PCR技術(shù)及提示,2、實(shí)驗(yàn)室微生物的篩選原理（P21）,3、選擇培養(yǎng)基（閱讀配方）,（一） 篩 選 菌 株,人為提供有利于目的菌株的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。,在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基。,能分解尿素的細(xì)菌的篩選 閱讀教材22頁(yè)第一大段相關(guān)內(nèi)容，并思考回答下列問(wèn)題：,1.在培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長(zhǎng)提供碳源和氮源的分別是是什么物質(zhì)？,碳源是葡萄糖，氮源是尿素。,2.分析該配方的培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有篩選作用？如果有，又是如何進(jìn)行篩選

2、的？,有篩選作用。尿素是培養(yǎng)基中的唯一氮源，因此，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)。,答：不一定，有些微生物可以利用其他微生物的代謝產(chǎn)物生長(zhǎng)繁殖，因此能夠在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物不一定是所需要的微生物，還需要進(jìn)一步的驗(yàn)證。,？,3.只要能夠在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物是否就是所需要的微生物？,統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的理論依據(jù)是： 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。因此，恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，通常將幾個(gè)稀釋度下的菌液都涂布在平板上，培養(yǎng)后再選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。,（二） 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目,思考題,1.想一

3、想，如何從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)？,答：統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進(jìn)行計(jì)算。,實(shí)例分析,第一同學(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒(méi)有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說(shuō)服力。 第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問(wèn)題，涂布了三個(gè)平板，但是其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與2個(gè)相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值。,實(shí)例啟示,1、在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)，一定要涂布至少3個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力和準(zhǔn)確性 2、在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否一致，結(jié)果不一致，意味著操作有誤，

4、需要重新實(shí)驗(yàn)。,微生物數(shù)量測(cè)定方法,1、稀釋涂布平板法間接技術(shù)方法 （注：菌落數(shù)往往比活菌數(shù) ）,2、顯微鏡計(jì)數(shù)直接計(jì)數(shù),（三）設(shè)置對(duì)照（資料分析）,1、設(shè)置對(duì)照的目的 2、對(duì)照實(shí)驗(yàn)概念,資料分析,A同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同，可能的解釋有兩種。 一是由于土樣不同； 二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。,究竟是哪個(gè)原因，可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)證明。,另一種方案： 將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。,實(shí)驗(yàn)方案有兩種,一種方案： 可以由其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí) 驗(yàn)，如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A無(wú)誤；如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基

5、的配制有問(wèn)題。,四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),實(shí)驗(yàn)的具體操作步驟如下: 資料一.土壤取樣 從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣。先鏟去表層土3 cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。,實(shí)驗(yàn)名稱：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù),（實(shí)驗(yàn)案例 ）,,在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對(duì)照，用來(lái)判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。,制備培養(yǎng)基： 準(zhǔn)備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基。,將10 g土樣加入盛有90 mL無(wú)菌生理鹽水的錐形瓶中，充分搖勻，吸取上清液1 mL，轉(zhuǎn)移至盛有9 mL的生理鹽水的無(wú)菌大試管中，依次等比稀釋至107稀釋度，并按照由10710

6、3稀釋度的順序分別吸取0.1 mL進(jìn)行平板涂布操作。按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管。,資料 二.樣品的稀釋,由于初次實(shí)驗(yàn)，對(duì)于稀釋的范圍沒(méi)有把握，因此選擇了一個(gè)較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為103107。,為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和測(cè)定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？,答：這是因?yàn)橥寥乐懈黝愇⑸锏臄?shù)量是不同的，例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細(xì)菌數(shù)約為2 185萬(wàn)，放線菌數(shù)約為477萬(wàn)，霉菌數(shù)約為23.1萬(wàn)。因此，為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，同時(shí)還應(yīng)當(dāng)有針對(duì)性地提供選擇培養(yǎng)的條件。,思

7、考題,將涂布好的培養(yǎng)皿放在30 溫度下培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，會(huì)有不同的菌落產(chǎn)生。 比較牛肉膏培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)等，并做好記錄。 挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接入含酚紅培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否產(chǎn)生如課本中圖2-10的顏色反應(yīng)。如果有則說(shuō)明該選擇培養(yǎng)基中確實(shí)含有能分解尿素的細(xì)菌。,資料三.微生物的培養(yǎng)與觀察,5.細(xì)菌的計(jì)數(shù),當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在同一稀釋度下，至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。,五、操作提示,,無(wú)菌操作,做好標(biāo)記,規(guī)劃時(shí)間,六、課題成果與評(píng)價(jià),（一）培養(yǎng)物中是否

8、有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落,對(duì)照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過(guò)程中沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基沒(méi)有被雜菌污染。牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說(shuō)明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。,如果學(xué)生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果應(yīng)該接近。如果結(jié)果相差太遠(yuǎn)，需要進(jìn)一步分析產(chǎn)生差異的原因。,（二）樣品的稀釋操作是否成功,如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30300的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。,（三）重復(fù)組的結(jié)果是否一致,2提示：反芻動(dòng)物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會(huì)死亡，因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準(zhǔn)

9、備選擇培養(yǎng)基外，還應(yīng)參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。,課后練習(xí)P26,伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基是鑒別培養(yǎng)基，可以用來(lái)檢測(cè)自來(lái)水中的大腸桿菌是否超標(biāo)，因?yàn)榈拇x產(chǎn)物與伊紅美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色并帶有金屬光澤，使大腸桿菌的菌落顯示出來(lái)，并沒(méi)有促進(jìn)大腸桿菌的生長(zhǎng)和抑制其他微生物的生長(zhǎng)。,例如：鑒別大腸桿菌培養(yǎng)基,大腸桿菌呈 黑色中心 ,有或無(wú)金屬光澤,大腸桿菌在伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)上典型特征,本課題知識(shí)小結(jié):,1.尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培養(yǎng)基時(shí)2 A、葡萄糖在培養(yǎng)基中越多越好 B、尿素分解菌有固氮能力，故培養(yǎng)基中只需無(wú)機(jī)氮 C、尿素在培養(yǎng)基中越少越好 D、尿素分解菌無(wú)固氮能力，故培養(yǎng)基中的尿素為化合態(tài)氮,,多思多得！,2.下列屬于菌落特征的是（ ）2 菌落的形狀 菌落的大小 菌落的多少 隆起程度 顏色 有無(wú)莢膜 A. B. C. D.,,