考點(diǎn)32酶的應(yīng)用、DNA的粗提取與鑒定,第一篇專題十一生物技術(shù)實(shí)踐,靜悟提綱,1.構(gòu)建酶的應(yīng)用網(wǎng)絡(luò),核心點(diǎn)撥,(1)直接使用酶、固定化酶和固定化細(xì)胞的比較,(2)制備固定化酵母菌細(xì)胞的2點(diǎn)說明 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng) a.海藻酸鈉溶化時(shí)要用小火或間斷加熱，避免海藻酸鈉發(fā)生焦糊。 b.將溶化好的海藻酸鈉溶液先冷卻至室溫，再與酵母菌細(xì)胞混合，避免高溫殺死酵母菌細(xì)胞。 c.制備固定化酵母菌細(xì)胞時(shí)，應(yīng)將配制好的混合液用注射器緩慢滴加到CaC12溶液中，而不是注射，以免影響凝膠珠的形成。 海藻酸鈉溶液的濃度對(duì)包埋酵母菌細(xì)胞數(shù)量的影響 a.濃度過高，將很難形成凝膠珠。 b.濃度過低，形成的凝膠珠所包埋的酵母菌細(xì)胞的數(shù)量少。,2.DNA的粗提取與鑒定操作流程 材料的選?。哼x用DNA含量相對(duì)較高的生物組織 破碎細(xì)胞(以雞血為例)：雞血細(xì)胞加蒸餾水用玻璃棒 攪拌用紗布過濾收集濾液 去除雜質(zhì)：利用DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，通過控制 NaCl溶液的濃度去除雜質(zhì) ,DNA的析出：將處理后的溶液過濾，加入與濾液體積相等的、冷卻的體 積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液 DNA的鑒定：在溶有DNA的溶液中加入二苯胺試劑，混合均勻后將試管 置于沸水中加熱5 min，溶液變成藍(lán)色,DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中的“2、4、4”,題組特訓(xùn),題組一酶的應(yīng)用,1,2,3,4,5,1.(2018江蘇七市三模)下表是某校興趣小組以某品牌洗衣粉為材料進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)探究，相關(guān)敘述正確的是(多選),A.各組實(shí)驗(yàn)中洗滌物、水量相同可防止無(wú)關(guān)變量差異影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果 B.本研究的課題之一是探究某品牌加酶洗衣粉的最適洗滌溫度 C.在觀察污漬是否洗凈時(shí)，要先將洗滌物用清水漂洗幾次，晾干后再觀察 D.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明添加酶制劑和適當(dāng)升高洗滌溫度有利于提高去污效果,解析,1,2,3,4,5,答案,解析分析表格信息可知，該實(shí)驗(yàn)的自變量為洗滌溫度、加酶洗衣粉和普通洗衣粉，其他變量如水量、洗滌物等為無(wú)關(guān)變量，無(wú)關(guān)變量的變化會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，A正確，B錯(cuò)誤； 洗滌物用清水漂洗后可洗去附著在洗滌物上的污漬，晾干后更易觀察比較，C正確； 從表中信息可知添加酶制劑和適當(dāng)升高洗滌溫度有利于提高去污效果，D正確。,1,2,3,4,5,1,2,3,4,5,2.(2018江蘇蘇、錫、常、鎮(zhèn)三模)下列關(guān)于酶制劑和固定化酵母細(xì)胞的敘述，正確的是 A.從酶的固定方式看，吸附法比交聯(lián)法對(duì)酶活性影響大 B.可用海藻酸鈉包埋消化酶制成多酶片用于緩解消化不良癥狀 C.將海藻酸鈉凝膠珠用無(wú)菌水沖洗，主要目的是防止雜菌污染 D.探究不同加酶洗衣粉洗滌效果實(shí)驗(yàn)中，水溫和浸泡時(shí)間都屬于無(wú)關(guān) 變量,解析,答案,解析交聯(lián)法是將酶相互連接起來，而吸附法是將酶吸附在載體表面上，可見交聯(lián)法對(duì)酶活性影響較大，A錯(cuò)誤； 消化酶分子較小，易從包埋材料中漏出，因此一般不用包埋法固定消化酶，B錯(cuò)誤； 將海藻酸鈉凝膠珠用無(wú)菌水沖洗，主要目的是洗去CaCl2，C錯(cuò)誤； 探究不同加酶洗衣粉洗滌效果實(shí)驗(yàn)中，不同加酶洗衣粉是實(shí)驗(yàn)的自變量，而水溫和浸泡時(shí)間等都屬于無(wú)關(guān)變量，D正確。,1,2,3,4,5,3.(2018南通考前卷)某科研小組采用80 水浴溶化海藻酸鈉，固定黑曲霉孢子(含-葡萄糖苷酶)，并進(jìn)行相關(guān)催化實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)分析回答問題： (1)此實(shí)驗(yàn)過程中采用80 水浴代替小火或者間斷加熱法溶化海藻酸鈉，其優(yōu)點(diǎn)是_ _。溶化的海藻酸鈉加入黑曲霉孢子懸浮液前一定要進(jìn)行_處理，海藻酸鈉的最終質(zhì)量分?jǐn)?shù)需控制在3%，原因是_ _。,1,2,3,4,5,答案,解析,80 水浴加熱能準(zhǔn)確控制溫度，溶化過程不會(huì)出現(xiàn)焦糊，且溶化時(shí)間短,冷卻,海藻酸鈉濃度太高,不易形成凝膠珠，濃度太低包埋的黑曲霉孢子少,解析此實(shí)驗(yàn)過程中采用80 水浴代替小火或者間斷加熱法溶化海藻酸鈉，其優(yōu)點(diǎn)是80 水浴加熱能準(zhǔn)確控制溫度，溶化過程不會(huì)出現(xiàn)焦糊，且溶化時(shí)間短。溶化的海藻酸鈉加入黑曲霉孢子懸浮液前一定要進(jìn)行冷卻處理，以免殺死黑曲霉孢子。海藻酸鈉的最終質(zhì)量分?jǐn)?shù)需控制在3%的原因是海藻酸鈉濃度太高不易形成凝膠珠，濃度太低包埋的黑曲霉孢子少。,1,2,3,4,5,(2)實(shí)驗(yàn)過程中，初形成的凝膠珠放在CaCl2溶液中靜置30 min，目的是_。,形成穩(wěn)定的網(wǎng)狀凝膠結(jié)構(gòu),解析實(shí)驗(yàn)過程中，初形成的凝膠珠放在CaCl2溶液中靜置30 min的目的是形成穩(wěn)定的網(wǎng)狀凝膠結(jié)構(gòu)。,答案,解析,1,2,3,4,5,(3)-葡萄糖苷酶能催化大豆苷水解為大豆苷元，pH和溫度對(duì)游離孢子和固定化凝膠珠中-葡萄糖苷酶活性影響的結(jié)果如圖表所示，由圖表可知：研究pH和溫度對(duì)葡萄糖苷酶活性影響時(shí)，溫度和pH應(yīng)分別控制為_、_；與游離孢子相比，固定化凝膠珠中-葡萄糖苷酶的pH適宜范圍_，熱穩(wěn)定性_。,30 ,4.8,增大,提高,答案,1,2,3,4,5,解析,1,2,3,4,5,解析分析表格可知，當(dāng)處理溫度為30 時(shí)，游離孢子和固定化凝膠珠的轉(zhuǎn)化率均最高，隨溫度的升高，游離孢子的轉(zhuǎn)化率降低的幅度較固定化凝膠珠的轉(zhuǎn)化率降低的幅度大；分析曲線圖可知，當(dāng)pH為4.8時(shí)，游離孢子和固定化凝膠珠的轉(zhuǎn)化率均最高，pH高于或低于4.8時(shí)，游離孢子的轉(zhuǎn)化率降低的幅度較固定化凝膠珠的轉(zhuǎn)化率降低的幅度大?？梢?，研究pH和溫度對(duì)葡萄糖苷酶活性影響時(shí)，溫度和pH應(yīng)分別控制為30 、4.8。與游離孢子相比，固定化凝膠珠中-葡萄糖苷酶的pH適宜范圍增大，熱穩(wěn)定性提高。,1,2,3,4,5,題組二DNA技術(shù) 4.某同學(xué)用洋蔥進(jìn)行DNA粗提取和鑒定實(shí)驗(yàn)，下列操作錯(cuò)誤的是 A.加入洗滌劑后用力進(jìn)行快速、充分的研磨 B.用蛋白酶純化過濾后的研磨液中的DNA C.加入酒精后用玻璃棒輕緩攪拌 D.加二苯胺試劑搖勻后沸水浴加熱,1,2,3,4,5,解析破碎植物細(xì)胞時(shí)，加入洗滌劑后，動(dòng)作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟的操作，A錯(cuò)誤。,解析,答案,5.某生物興趣小組開展DNA粗提取的相關(guān)探究活動(dòng)，具體步驟如下。 材料處理：稱取新鮮的花菜、辣椒和蒜黃各2份，每份10 g。剪碎后分成兩組，一組置于20 、另一組置于20 條件下保存24 h。 DNA粗提?。旱谝徊剑簩⑸鲜霾牧戏謩e放入研缽中，各加入15 mL研磨液，充分研磨。用兩層紗布過濾，取濾液備用。 第二步：先向6只小燒杯中分別注入10 mL濾液，再加入20 mL體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精溶液，然后用玻璃棒緩緩地向一個(gè)方向攪拌，使絮狀物纏繞在玻璃棒上。,1,2,3,4,5,第三步：取6支試管，分別加入等量的質(zhì)量濃度為2 molL1 NaCl溶液溶解上述絮狀物。 DNA檢測(cè)：在上述試管中各加入4 mL二苯胺試劑，混合均勻后，置于沸水浴中加熱5 min，待試管冷卻后比較溶液的顏色深淺，結(jié)果(如表)。,注：“”越多表示顏色越深。,1,2,3,4,5,分析上述實(shí)驗(yàn)過程，回答下面的問題： (1)該探究性實(shí)驗(yàn)的課題名稱是：_ _。,探究不同材料和不同保存溫度對(duì)DNA,提取量的影響,解析由表格可知，該實(shí)驗(yàn)的自變量是不同材料和不同保存溫度，因此該探究性實(shí)驗(yàn)課題的名稱是探究不同材料和不同保存溫度對(duì)DNA提取量的影響。,解析,答案,1,2,3,4,5,(2)第二步中“緩緩地”攪拌，這是為了減少_。,DNA斷裂,解析第二步中“緩緩地”攪拌，這是為了減少DNA斷裂。,解析,答案,1,2,3,4,5,(3)表中的顏色為_色，顏色的深淺代表了_。,藍(lán),DNA含量的多少,解析在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色。因此，表中的顏色應(yīng)該為藍(lán)色，顏色的深淺代表DNA含量的多少。,解析,答案,1,2,3,4,5,(4)DNA檢測(cè)時(shí)需在沸水浴中加熱的目的是_，同時(shí)說明DNA對(duì)高溫有較強(qiáng)的_。,加速顏色反應(yīng),耐受性,解析DNA檢測(cè)時(shí)需在沸水浴中加熱的目的是加速顏色反應(yīng)，同時(shí)說明DNA對(duì)高溫有較強(qiáng)的耐受性。,解析,答案,1,2,3,4,5,(5)根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得出結(jié)論并分析。 結(jié)論1：與20 相比，相同實(shí)驗(yàn)材料在20 條件下保存，DNA的提取量較多。 結(jié)論2：_ _。,等質(zhì)量的不同實(shí)驗(yàn)材料，在相同的保存溫度下，從蒜黃中提取的DNA量最多,解析根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知：等質(zhì)量的不同實(shí)驗(yàn)材料，在相同的保存溫度下，從蒜黃中提取的DNA量最多。,解析,答案,1,2,3,4,5,針對(duì)結(jié)論1，請(qǐng)?zhí)岢龊侠淼慕忉專篲 _。,低溫抑制了相關(guān)酶的活性，DNA降,解速度較慢,解析因?yàn)榈蜏匾种屏讼嚓P(guān)酶的活性，使DNA降解速度減慢，所以與20 相比，相同實(shí)驗(yàn)材料在20 條件下保存，DNA的提取量較多。,解析,答案,1,2,3,4,5,(6)氯仿密度大于水，能使蛋白質(zhì)變性沉淀，與水和DNA均不相溶，且對(duì)DNA影響極小。為了進(jìn)一步提高DNA純度，依據(jù)氯仿的特性，在DNA粗提取第三步的基礎(chǔ)上繼續(xù)操作的步驟是：_ _，然后用體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精溶液使DNA析出。,將第三步獲得的溶液與等量的氯仿充分混合，靜置一段時(shí)間，吸取上清液,解析氯仿密度大于水，能使蛋白質(zhì)變性沉淀，與水和DNA均不相溶，且對(duì)DNA影響極小，所以為了進(jìn)一步提高DNA純度，可將第三步獲得的溶液與等量的氯仿充分混合，靜置一段時(shí)間，吸取上清液，然后用體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精溶液使DNA析出。,解析,答案,1,2,3,4,5,