第一篇專題十一生物技術(shù)實踐,考點31微生物的利用及在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)中的應(yīng)用,直擊考綱 1.微生物的分離和培養(yǎng)。 2.某種微生物數(shù)量的測定。 3.培養(yǎng)基對微生物的選擇作用。 4.利用微生物進(jìn)行發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其他方面的應(yīng)用。 5.從生物材料中提取某些特定的成分。 6.運用發(fā)酵加工食品的基本方法。 7.DNA的粗提取與鑒定。,靜悟提綱,核心點撥,欄目索引,題組特訓(xùn),靜悟提綱,1.微生物的培養(yǎng),(1)無菌技術(shù)：主要包括消毒和滅菌。 消毒方法：常用煮沸消毒法、巴氏消毒法。 常用滅菌方法：灼燒滅菌接種環(huán)、接種針等金屬器具；干熱滅菌主要針對玻璃器皿等；高壓蒸汽滅菌主要針對培養(yǎng)基等。,核心點撥,(2)倒平板操作 操作過程如圖所示，操作時要待培養(yǎng)基冷卻至50 左右時，在酒精燈火焰附近進(jìn)行。 制備固體培養(yǎng)基最后要將平板倒置，其主要目的是防止培養(yǎng)皿皿蓋上的水珠滴入培養(yǎng)基造成污染。,(3)平板劃線操作,(4)稀釋涂布平板法：先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。如圖所示：,2.某種微生物的分離與計數(shù) (1)分離選擇培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。 培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。 培養(yǎng)基中缺乏氮源時，可以分離得到固氮微生物。 當(dāng)培養(yǎng)基的某種營養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時，也具有分離效果。 改變微生物的培養(yǎng)條件，也可以達(dá)到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)能得到耐高溫的微生物。,(2)計數(shù) 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù) a.篩選菌株：利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基篩選菌株。 b.計數(shù)方法：活菌計數(shù)法和顯微鏡直接計數(shù)法。前者為了增強(qiáng)實驗的說服力和準(zhǔn)確性，需設(shè)置重復(fù)組，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計數(shù)。 c.過程：土壤取樣樣品的稀釋微生物的培養(yǎng)與觀察。,分解纖維素的微生物的分離 a.實驗原理,即：可根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。 b.流程：土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋涂布平板挑選菌落。,(3)鑒定方法,3.微生物在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)中的應(yīng)用,題組一微生物的培養(yǎng)和利用,1,2,3,4,5,1.苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對環(huán)境有嚴(yán)重危害。某學(xué)?？蒲行〗M準(zhǔn)備依據(jù)如圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選出苯酚高效降解菌株。據(jù)圖回答下列問題：,題組特訓(xùn),(1)甲圖中苯酚降解菌的富集培養(yǎng)基應(yīng)含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有_。,蛋白胨、苯酚,答案,解析,1,2,3,4,5,解析微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。對異養(yǎng)微生物來說，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營養(yǎng)要素成分時并不是起單一方面的作用。微生物常見的接種的方法有：平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種、劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落；稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。 培養(yǎng)基成分中的有機(jī)物均可以提供碳源，即蛋白胨、苯酚均可以作為碳源。,1,2,3,4,5,(2)將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸_，以達(dá)到獲得苯酚高效降解菌的目的。應(yīng)采用_ 法來進(jìn)行該菌種的計數(shù)與分離，統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目要_。,增加(升高),稀釋涂布平板,小,答案,解析,解析本實驗的目的是篩選苯酚降解菌株，因此將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸增加，以達(dá)到富集苯酚降解菌的目的。圖甲中采用的是稀釋涂布平板法，以便于菌落計數(shù)與分離，用這種方法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目要小，因為常常有兩個或多個菌體連在一起生長繁殖而形成一個菌落的情況。,1,2,3,4,5,(3)制備平板培養(yǎng)基時除了需要水、碳源、氮源、無機(jī)鹽和特殊營養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加_。培養(yǎng)基的滅菌方法為_。,瓊脂(凝固劑),高壓蒸汽滅菌,答案,解析,解析制備的平板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，除了需要水、碳源、氮源、無機(jī)鹽和特殊營養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加瓊脂作為凝固劑。培養(yǎng)基的滅菌方法為高壓蒸汽滅菌法。,1,2,3,4,5,(4)乙圖為連續(xù)劃線法示意圖，在該圖中_(填序號)區(qū)域最易獲得單菌落。如需要長期保存該菌種，應(yīng)采用甘油管藏的方法，保存溫度為_。,20 ,答案,解析,解析圖乙為平板劃線法，隨著劃線次數(shù)的增加，菌種進(jìn)一步被稀釋，因此圖中區(qū)域更易獲得單菌落。長期保存該菌種，應(yīng)采用甘油管藏的方法，保存溫度為20 。,1,2,3,4,5,1,2,3,4,5,2.外賣在方便了大家的同時也存在著食品安全隱患，今年濟(jì)南將啟動外賣“食安封簽”，同時在餐飲企業(yè)的衛(wèi)生測評指標(biāo)中增加“微生物控制指數(shù)”?；卮鹣铝袉栴}： (1)微生物接種最常用的兩種方法是_和稀釋涂布平板法。這兩種方法的所有操作都應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行，目的是_ _。用前種方法若要在五個區(qū)域劃線，共需灼燒接種環(huán)_次。,平板劃線法,避免周圍環(huán),境中微生物的污染,6,答案,解析,解析微生物接種最常用的兩種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。兩種方法均可用于菌種的分離純化，但若要對菌液中含有的活菌數(shù)進(jìn)行計數(shù)，則只能用稀釋涂布平板法，但這種方法得到的結(jié)果往往比實際結(jié)果偏低，原因是涂布時可能存在兩個或多個細(xì)菌連在一起而形成一個菌落。其計算方法是：單位菌液中含有的細(xì)菌數(shù)菌落數(shù)的平均值涂布菌液的體積稀釋倍數(shù)。 微生物接種最常用的兩種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。兩種方法的所有操作都應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行，目的是避免周圍環(huán)境中微生物的污染。每次接種前后接種環(huán)都需要灼燒滅菌，因此若要在五個區(qū)域劃線，共需灼燒接種環(huán)6次。,1,2,3,4,5,(2)用稀釋涂布平板法對細(xì)菌進(jìn)行計數(shù)時，所統(tǒng)計的菌落數(shù)往往會比實際數(shù)目偏小，原因是_ _。在5個平板上各接種稀釋倍數(shù)為103的菌液樣品0.1 mL，培養(yǎng)一段時間后，平板上的菌落數(shù)分別為48、50、52、54、330，則每升原菌液樣品中細(xì)菌數(shù)為_個。,當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上只能觀察到,一個菌落,5.1108,答案,解析,解析用稀釋涂布平板法對細(xì)菌進(jìn)行計數(shù)時，當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上只能觀察到一個菌落，所以統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目小。觀察數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)330與其他數(shù)值相比明顯偏高，證明此平板已被污染，此數(shù)值應(yīng)該舍棄，其他四個培養(yǎng)基上平均數(shù)(48505254)/451，所以每升水樣中活菌數(shù)為511030.11035.1108(個)。,1,2,3,4,5,(3)為防止人員感染和污染環(huán)境，實驗人員離開實驗室時，一定要做的事情有_、_ _。,洗手(或用酒精對手消毒等),對使用過的培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理后,再丟棄,答案,解析,解析實驗人員離開實驗室時，一定要洗手(用酒精對手消毒等)，以防止被微生物感染，對使用過的培養(yǎng)基丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境。,1,2,3,4,5,解析腐乳制作有多種微生物參與，其中起主要作用的是毛霉。毛霉屬于真核生物，而乳酸菌屬于原核生物，因此毛霉與乳酸菌在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別是：毛霉有核膜包被的細(xì)胞核，而乳酸菌沒有。,題組二傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用 3.腐乳是我國古代勞動人民創(chuàng)造出的一種經(jīng)過微生物發(fā)酵的大豆食品。它“聞著臭，吃著香”且易于消化吸收，深受大眾喜愛，其制作方法廣為流傳。請回答下列有關(guān)問題： (1)現(xiàn)代科學(xué)研究表明，許多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，其中起主要作用的是_，它與乳酸菌在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別是_ _。,1,2,3,4,5,毛霉,毛霉有核膜包被的細(xì),胞核而乳酸菌沒有,答案,解析,(2)腐乳易被人體吸收是因為豆腐中的成分發(fā)生了如下變化：_ _ _。,豆腐中的蛋,白質(zhì)在蛋白酶的催化下分解成小分子肽和氨基酸，豆腐中的脂肪在脂肪,酶的催化下分解成甘油和脂肪酸,解析腐乳易被人體吸收是因為豆腐中的成分發(fā)生了如下變化：豆腐中的蛋白質(zhì)在蛋白酶的催化下分解成小分子肽和氨基酸；豆腐中的脂肪在脂肪酶的催化下分解成甘油和脂肪酸。,答案,解析,1,2,3,4,5,(3)在腐乳制作過程中會加鹽腌制，加鹽的作用是_ _。 越接近瓶口加鹽量越多的原因是_。,析出豆腐中的水分使,豆腐變硬，抑制微生物的生長避免豆腐變質(zhì),越接近瓶口，雜菌污染的可能性越大,解析制作腐乳的過程中，加鹽可以析出豆腐中的水分使豆腐塊變硬，在后期的制作過程中不會過早酥爛；同時，鹽能抑制微生物的生長，避免豆腐塊腐敗變質(zhì)。越接近瓶口，雜菌污染的可能性越大，因此要隨著豆腐層的加高增加鹽的用量。,答案,解析,1,2,3,4,5,(4)防止雜菌污染是制作腐乳過程中的一項重要的操作，請再列舉一項防止雜菌污染的操作：_。,裝瓶時操作要迅速、小心,解析在腐乳制作過程中為防止雜菌污染，用來腌制腐乳的玻璃瓶洗刷干凈后要用沸水消毒，除此之外，裝瓶時操作要迅速、小心；整齊地擺放好豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封；封瓶時，最好將瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。,答案,解析,1,2,3,4,5,(5)在腐乳制作過程中會遇到許多問題，請你提出一個科學(xué)合理且可供研究的課題。 _。,探究制作腐乳的最佳濕度,解析在腐乳制作過程中，鹽的濃度、溫度、濕度等都會影響腐乳的品質(zhì)，因此可供研究的課題有：探究制作腐乳的最佳濕度、探究制作腐乳的最佳溫度等。,答案,解析,1,2,3,4,5,4.用百香果作材料制成的果醋具有緩解壓力、消除疲勞、延緩衰老、預(yù)防動脈硬化、養(yǎng)顏美容的功效。如圖為百香果醋的制作流程圖，請回答下列相關(guān)問題：,1,2,3,4,5,(1)過程的釀造原理是先使酵母菌進(jìn)行_，以增加酵母菌的數(shù)量，然后通過_獲得果酒。,有氧呼吸,無氧呼吸,解析在果酒發(fā)酵過程中首先讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量繁殖，再進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生酒精。,答案,解析,(2)釀制百香果酒時，并不需要對百香果進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理，這是因為在_的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物因無法適應(yīng)這一環(huán)境而受到抑制。過程往往不能長時間密封，原因是_。,缺氧、呈酸性,酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生CO2，會使得裝置氣壓增大,答案,解析,1,2,3,4,5,解析釀制百香果酒時，在缺氧、呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物因無法適應(yīng)這一環(huán)境而受到抑制，所以不需要對百香果進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理。酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生酒精和CO2，CO2會使裝置氣壓增大，應(yīng)及時放氣。,1,2,3,4,5,(3)過程適宜的溫度為_。溫度過高時，醋酸菌代謝減慢甚至死亡，根本原因是_。,3035 ,溫度過高，影響酶的活性,解析醋酸菌的最適生長溫度為3035 ，溫度主要影響酶的活性。,答案,解析,1,2,3,4,5,(4)過程轉(zhuǎn)入過程前，除改變溫度外，還需調(diào)整的發(fā)酵條件是_。要鑒定百香果醋是否釀制成功，除可以通過觀察菌膜、嘗、嗅之外，還可以通過檢測和比較_做進(jìn)一步的鑒定。,通入無菌空氣,醋酸發(fā)酵前后的pH,解析醋酸菌是需氧型細(xì)菌，發(fā)酵時需要通入無菌空氣。可以通過檢測和比較醋酸發(fā)酵前后的pH來進(jìn)一步鑒定果醋是否釀制成功。,答案,解析,1,2,3,4,5,5.泡菜制作簡單，易于儲存，開胃提神，醒酒去膩，老少適宜，是家喻戶曉的一種佐餐菜肴。以下是有關(guān)泡菜制作的一些問題，請分析回答： (1)制備泡菜的鹽水中鹽與清水的質(zhì)量比約為_，鹽水需煮沸并冷卻后才可使用，原因是_ _。,1,2,3,4,5,解析制備泡菜的鹽水中鹽與清水的質(zhì)量比約為14，鹽水加熱煮沸是為了殺滅雜菌，冷卻之后使用是為了避免高溫殺死乳酸菌，保證乳酸菌等微生物的生命活動不受影響。,答案,解析,14,加熱煮沸是為了殺滅雜菌，冷卻之后使用是為了保證乳酸菌等微生物的生命活動不受影響,(2)在泡菜腌制過程中經(jīng)常向壇口邊緣的水槽中補充水分，目的是提供_環(huán)境。在發(fā)酵初期會有氣泡從壇沿水槽內(nèi)的水中間歇性溢出，這些氣泡來源于_。,無氧,微生物呼吸作用產(chǎn)生的氣體和泡菜壇中剩余的空氣,解析在泡菜腌制過程中向壇口邊緣的水槽中補充水分的目的是隔絕空氣，提供乳酸菌發(fā)酵的無氧環(huán)境。在發(fā)酵初期微生物呼吸作用產(chǎn)生的二氧化碳和泡菜壇中剩余的空氣由于發(fā)酵壇內(nèi)溫度升高會從壇沿水槽內(nèi)的水中溢出。,答案,解析,1,2,3,4,5,(3)發(fā)酵后期，乳酸含量繼續(xù)增加，當(dāng)達(dá)到1.2%以上時，發(fā)酵速率漸漸變緩甚至停止，主要原因是_。,pH過低抑制了乳酸菌的生長,解析發(fā)酵后期，當(dāng)乳酸含量達(dá)到1.2%以上時，pH過低會抑制乳酸菌的生長，導(dǎo)致發(fā)酵速率漸漸變緩甚至停止。,答案,解析,1,2,3,4,5,(4)若制作的泡菜“咸而不酸”，最可能的原因是_ _。,鹽過多抑制了乳酸菌,發(fā)酵,解析鹽過多會抑制乳酸菌發(fā)酵，會導(dǎo)致制作的泡菜“咸而不酸”。,答案,解析,1,2,3,4,5,(5)發(fā)酵過程中會產(chǎn)生亞硝酸鹽，亞硝酸鹽在特定條件下會轉(zhuǎn)變成致癌物_，所以在發(fā)酵過程中應(yīng)定期測定亞硝酸鹽的含量，以把握取食泡菜的最佳時機(jī)。檢測亞硝酸鹽含量的方法是_，在檢測泡菜中亞硝酸鹽含量的實驗中，必須先制備已知濃度的_，將顯色反應(yīng)后的樣品與其進(jìn)行比對。,亞硝胺,比色法,標(biāo)準(zhǔn)顯色液,解析亞硝酸鹽在特定條件下會轉(zhuǎn)變成亞硝胺，可引起基因突變導(dǎo)致癌癥。檢測泡菜中亞硝酸鹽含量的方法是比色法，檢測時必須先制備已知亞硝酸鹽濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液。,答案,解析,1,2,3,4,5,