多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段 分享資料
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多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段 分享資料
12l通過(guò)本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)PCR反應(yīng)的基本原理與實(shí)驗(yàn)技術(shù)。3l聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)，是一種在體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列的方法，故又稱為基因的體外擴(kuò)增法。l在待擴(kuò)增的DNA片斷兩側(cè)和與其兩側(cè)互補(bǔ)的兩個(gè)寡核苷酸引物，經(jīng)變性、退火和延伸若干個(gè)循環(huán)后，DNA擴(kuò)增2n倍。4l1.變性：在加熱或堿性條件下可使DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，形成單鏈DNA，稱之為變性。l2.退火：是模板與引物的復(fù)性。引物是與模板某區(qū)序列互補(bǔ)的一小段DNA片段。l3.延伸：從結(jié)合在特定DNA模板上的引物為出發(fā)點(diǎn)，將四種脫氧核苷酸以堿基配對(duì)形式按53的方向沿著模板順序合成新的DNA鏈。56789101112ParameterConcentrationTemplatepHdNTPsGelatinPrimersMg2+oncentrationEnzymeTotal volume10 attomoles(1106 molecules)8.4（10mM Tris-Hcl）200 M(each one)100 g/ml(optional)0.5 M(each one);(0.11.0M)0.5mM 10mM1 unit25100l13電泳儀電泳儀1415PCR儀儀1617移液器移液器18l1、DNA模板l2、4種dNTPl3、引物1、引物2l4、Taq酶l5、瓊脂糖l6、DNA相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物l7、吸頭、50ul PCR管19l10PCR緩沖液(含Mg2)l4dNTP(每種1mmol)lTag酶 1U/ullDNA模板l引物1:5-GGGGAATTCATGGTGAGCAAGGGC-3l引物2:5-GACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGC-3 l引物溶液濃度 10pmol/ul20l1在0.5ml RCR管內(nèi)配置20ul反應(yīng)體系：CK(ul)1#(ul)模板01引物10.40.4引物20.40.410 PCR Buffer22Taq酶0.50.5dNTPs0.40.4ddH2O14.315.3Total20202122l要求：l1、寫出本實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒃?；l2、實(shí)驗(yàn)器材及實(shí)驗(yàn)步驟；l3、列出實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖并分析原因。23PCR結(jié)果。1、對(duì)照(無(wú)模板)；26、PCR產(chǎn)物（5ul樣品）24Thank you!
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