《《動物細胞培養(yǎng)》PPT課件》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《《動物細胞培養(yǎng)》PPT課件（42頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

1、皮膚燒傷，如果創(chuàng)面很?。ú淮笥谟矌牛┲灰３智鍧崳踔辽疃葻齻?，也可能自愈。如果下層真皮受損面積較大，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自燒傷病人自身未燒傷的部位（自體植皮），也可取自其他活人或尸體（異體植皮）等。自體植皮是永久性的，取自其他人或動物的植皮是暫時性的，是在創(chuàng)面愈合過程中為保護創(chuàng)面而采取的措施，1014天后就要被身體排斥。,如果一個大面積燒傷的病人來說，自體皮膚有限，其他渠道的皮膚來源不足。如何才能獲得大量的自體健康皮膚？,動物細胞工程,,,,離體植物器官、組織或細胞,植物細胞工程常用的技術:,植物組織培養(yǎng)、植物細胞培養(yǎng) 、植物體細胞雜交,溫故而知新,細

2、胞次生 代謝產(chǎn)物,植物體細胞雜交,植物細胞A,植物細胞B,,,去細胞壁,原生質(zhì)體融合,,雜種細胞,,植物細胞融合,這個過程中涉及的原理是？,細胞膜的流動性 植物細胞的全能性,動物細胞工程,常用技術 動物細胞培養(yǎng) 動物組織培養(yǎng) 細胞核移植 體細胞克隆 動物細胞融合 單克隆抗體,動物細胞培養(yǎng)技術是其他動物細胞工程技術的基礎。,一、動物細胞與組織培養(yǎng) 1、概念：,是指在體外模擬動物體內(nèi)環(huán)境，將動物的細胞或組織在無菌、溫度適宜和營養(yǎng)充足的條件下培養(yǎng)，使其繼續(xù)生長、增殖并維持原有的結構和功能的技術。目的是獲得細胞或細胞代謝產(chǎn)物。,2、選料：,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，因為這些細胞生命

3、力旺盛，分裂能力強。,動物細胞培養(yǎng)過程：,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官,,細胞懸浮液,,10代細胞,,無限傳代,單個細胞,,加培養(yǎng)液,剪碎,胰蛋白酶,胰蛋白酶或膠原蛋白酶,4、有關概念,,原代培養(yǎng)：是指從供體獲取組織或細胞后的初次培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng)：將原代培養(yǎng)的細胞分離稀釋后轉入新的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。,細胞株：原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右，細胞生長停滯，大部分細胞衰老死亡，少數(shù)細胞存活到4050代，這種傳代細胞為細胞株。 細胞系：細胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細胞生長停滯狀態(tài)只有部分細胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。,細胞株和細

4、胞系的區(qū)別： 細胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。,貼壁生長：動物細胞在液體培養(yǎng)基中生長一段時間之后，大部分細胞會貼附在培養(yǎng)瓶的表面生長。 接觸抑制:細胞在培養(yǎng)瓶中貼壁生長，隨著細胞越來越多，當貼壁生長的細胞分裂生長到表面相互接觸時，就停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫做接觸抑制。,動物細胞培養(yǎng)過程：,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官,,細胞懸浮液,胰蛋白酶或膠原蛋白酶,,10代細胞,原代培養(yǎng),,無限傳代,單個細胞,,加培養(yǎng)液,遺傳物質(zhì)未改變,遺傳物質(zhì)改變,剪碎,胰蛋白酶,5、動物細胞培養(yǎng)條件：,1、無菌、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液） 2、營養(yǎng) （葡

5、萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。） 3、溫度和PH 溫度37左右 PH 7.2-7.4 4、氣體環(huán)境： O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）,保證細胞順利的生長增殖,問題：,1.為何要定期用胰蛋白酶使細胞從瓶壁上脫離下來？ 2.比較動物細胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的成分. 3.動物細胞培養(yǎng)是否能像植物細胞一樣 最終培養(yǎng)成新個體？,,獲得細胞,細胞的全能性,細胞株、細胞系,植物體,培養(yǎng)結果,或細胞分泌蛋白,快速繁殖、培育無病毒植株等,培養(yǎng)目的,葡萄糖、動物血清,蔗糖、植物激素,培養(yǎng)基特有成分,液體培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)基,培養(yǎng)基性質(zhì),細胞增殖,原理,動物細胞培養(yǎng),植物組織培養(yǎng)

6、,比較項目,2、植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較,6、動物細胞培養(yǎng)技術的應用,1、獲得細胞產(chǎn)物，如蛋白質(zhì)生物 制品病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等,2、器官移植的培養(yǎng),3、獲得細胞用于檢測有毒物質(zhì),1、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細胞（） A細胞系 B細胞株 C原代細胞 D傳代細胞,2、動物細胞工程技術的基礎是 ----- （ ） A.動物細胞融合 B.單克隆抗體 C.胚胎移植 D.動物細胞培養(yǎng),A,D,3、為了使用于培養(yǎng)的動物組織細胞分散開以便配制成一定濃度的細胞懸浮液，選取來的動物組織應選用下列哪種物質(zhì)處理（ ） A.胃蛋白酶 B.胰蛋白酶 C.鹽酸 D.胰脂肪酶,教學反

7、饋,B,4、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞 （ ）A.容易產(chǎn)生各種變異 B具有更強的全能性C.取材十分方便 D分裂增殖的能力強,D,5、在動物細胞培養(yǎng)的有關敘述中，正確的是（ ） A動物細胞培養(yǎng)的目的就是為了獲得大量的細胞分泌蛋白 B動物細胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶處理使細胞分散 C細胞遺傳物質(zhì)的改變發(fā)生于原代培養(yǎng)過程中 D培養(yǎng)至50代后繼續(xù)傳代的細胞是細胞株 6、在動物細胞培養(yǎng)中有部分細胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱之為（ ） A原代培養(yǎng) B傳代培養(yǎng) C細胞株 D細胞系,B,D,7、下列與動物細胞培養(yǎng)

8、有關的表述中，不正確的是（ ） A培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清 B原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右便會出現(xiàn)生長停滯 C動物細胞培養(yǎng)一般能夠傳到4050代，但其遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變 D動物細胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質(zhì)和獲得大量自身健康細胞,C,8、下圖是動物細胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據(jù)此圖回答,(1)容器A中放置的是動物器官或組織。它一般取自___________。 (2)容器A中的動物器官或組織首先要進行的處理是__________，然后用 酶處理，這是為了使細胞分散開來。這樣做的目的是_______________. (3)培養(yǎng)首先在B瓶中進行。瓶中的培養(yǎng)基成分有

9、_______ ___等。在此瓶中培養(yǎng)一段時間后，一般傳到第 代，有許多細胞衰老死亡，到這時的培養(yǎng)稱為___________. (4)為了把B瓶中的細胞分裝到C瓶中，用_____ 處理，然后配置成___________，再分裝。 (5)在C瓶中正常培養(yǎng)了一段時間后，發(fā)現(xiàn)細胞全部死亡。原因是_________________________。,幼齡動物的器官或組織、動物胚胎,剪碎,胰蛋白,使每個細胞能與培養(yǎng)液接觸,葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清,10,原代培養(yǎng),胰蛋白酶,細胞懸浮液,細胞沒有發(fā)生癌變,二 動物細胞核移植和動物體細胞克隆,1 概念,將某種動物細胞的細胞核移入同種

10、或者異種動物的去除細胞核的成熟卵細胞內(nèi)的技術。,動物體細胞克隆,是將供體細胞的細胞核與受體去核卵細胞的細胞質(zhì)進行人工組合，借助卵細胞的發(fā)育能力，經(jīng)過培養(yǎng)發(fā)育成胚胎進而形成個體的技術。其中的關鍵技術是細胞核移植技術。 用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物,動物細胞核移植,多利羊的產(chǎn)生過程：,,另一頭綿羊的子宮,2 過程,供體動物的組織,,細胞培育,供體細胞核,卵細胞,,去核,去核卵細胞,,注入,重組細胞,,分裂,重組胚胎,,胚胎移植,代孕母牛,,新個體,,,用卵細胞的原因？,細胞已經(jīng)發(fā)育成熟;細胞核較易取出；有重組和發(fā)育所需的因子便于發(fā)育成胚胎,受體卵母細胞為什么要先去核？,為了使克隆動物的遺傳

11、物質(zhì)(核內(nèi))全部來自供體動物的細胞；保證獲得其遺傳特性。,克隆是100%的復制嗎？,不是，克隆動物的核內(nèi)DNA跟供體動物的體細胞一樣，但其細胞質(zhì)的DNA則來源于受體卵母細胞。此外，動物的行為，習性受還環(huán)境的影響，可能與供體動物不同。,二 動物細胞核移植和克隆動物,1、 應用前景,保護瀕危物種增加動物 的存活數(shù)量,用于組織器官的移植，皮膚移植,2 存在的問題,成功率不高,克隆動物存在健康、生理缺陷、遺傳缺陷等,三 動物細胞融合,1 概念,指在一定條件下2個或多個動物細胞融合形成一個細胞的過程,融合后形成的具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息的細胞為雜交細胞。,2 過程,不同的兩個細胞,,滅活病毒,或

12、PEG,雜交細胞,3 意義,克服遠緣雜交的不親和性,誘導動物細胞融合的方法,動物細胞融合的用途：,制備單克隆抗體,：仙臺病毒,,,紫外線,喪失感染活性（不感染細胞）,保留融合活性（誘導細胞融合）,,物理法 化學法（PEG） 生物法,,,四 單克隆抗體,抗體：,由效應B淋巴細胞產(chǎn)生的，主要成分是球蛋白，一種效應B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體,單克隆抗體概念的理解：,單克隆抗體：由這些細胞群產(chǎn)生的化學性質(zhì)單 一、特異性強的抗體,單克隆:由單個效應B細胞通過無性繁殖獲得細胞群,原始的方法：,獲得抗體，特異性差，純度低。,想獲得單一抗體：,必須用單個B淋巴細胞進行無性繁殖，通過克隆形成細胞群。,問

13、題：,怎樣才能獲得單克隆抗體？,我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的？ 有什么方法能使B細胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細胞無限增殖能力同時具備呢？,體外培養(yǎng)的條件下，一個B淋巴細胞是不可能無限增值的，如何使單個淋巴細胞增殖呢？,設計方案： 一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體 小鼠骨髓瘤細胞能無限增殖,,雜種細胞,目的:制備單克隆抗體. 原理：,B淋巴細胞能產(chǎn)生抗體，骨髓瘤細胞能無限增殖，雜交瘤細胞既能產(chǎn)生抗體又能無限增殖。,單克隆抗體制備過程,,誘導細胞融合、篩選,足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細胞群,,,單克隆抗體,誘導其融合的方法有哪些？,？,？,抗原,

14、效應 B細胞,篩選,篩選,雜交瘤細胞,（1）為什么用小鼠骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合？ 融合形成雜交瘤細胞的特點？,思考：,（2）單克隆抗體制備過程中應用哪些細胞工程技 術手段？,（3）制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選？,細胞膜的流動性； 雜交瘤細胞既能大量繁殖，又可以產(chǎn)生單一抗體,動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)技術,第一次篩選出雜交瘤細胞； 第二次篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞,（4）為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B細胞融合？,這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領，因而可以獲得大量單克隆抗體,單克隆抗體的應用,與常規(guī)抗體相比，單克隆

15、抗體產(chǎn)量高，特異性強，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。,1、作為診斷試劑,2、用于治療疾病和運載藥物 作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導彈”治療腫瘤,植物、動物細胞融合的比較,,,,,下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌的抗體實驗方案,,制備單克隆抗體,B淋巴細胞,抗體,細胞融合,滅活病毒,雙親細胞,分泌抗體,無限增殖,1、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細胞是 --------------------（ ） A細胞系 B細胞株 C原代細胞 D傳代細胞,2、動物細胞工程技術的基礎是 ------（） A.動物細胞融合 B.單克隆抗體 C.胚胎移植 D.動物

16、細胞培養(yǎng),A,D,3、動物細胞融合的目的中最重要的是（ ） A.克服遠緣雜交不親和 B. 制備單克隆抗體 C.培育新品種 D.生產(chǎn)雜種細胞 4、動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較中，正確的是（ ） 誘導融合的方法完全相同 B.所用的技術手段基本相同 C. 所采用的原理完全相同 D. 都能形成雜種細胞,B,D,5、 單克隆抗體制備過程中培育的雜交細胞是（ ） A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞與肝細胞融合 B.由小鼠一個B淋巴細胞誘導融合而成 C.由小鼠一個B淋巴細胞與肌瘤細胞誘導融合而成 D.由小鼠一個B淋巴細胞與骨髓瘤細胞誘導融合而成,D,6、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞 （ ） A.容易產(chǎn)生各種變異 B具有更強的全能性 C.取材十分方便 D分裂增殖的能力強,D,7、科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓疤細胞融合的是（ ） A.經(jīng)過免疫的B淋巴細胞 B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細胞 D.沒經(jīng)過免疫的淋巴細胞,A,再見,