DE-BULKING技術(shù)在傳統(tǒng)中醫(yī)藥基礎(chǔ)產(chǎn)品科技開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用,主要內(nèi)容,一、前言 二、中藥現(xiàn)代化的目的 三、我國(guó)中藥現(xiàn)代化研究現(xiàn)狀 四、中藥現(xiàn)代化研究方法 五、現(xiàn)代中藥研究存在的問(wèn)題 六、De-bulking的概念、研究思路及優(yōu)點(diǎn) 五、總結(jié),一、前言,1 中醫(yī)藥已有4000多年的歷史，是醫(yī)藥應(yīng)用最古老但又是最有效的領(lǐng)域，為中華民族的繁衍昌盛做出了不可磨滅的貢獻(xiàn)。 2 傳統(tǒng)的中藥是復(fù)方，對(duì)科學(xué)家而言，對(duì)這些物質(zhì)的分離、純化以及表征一直是該領(lǐng)域科學(xué)家面臨的挑戰(zhàn)。 3 “De-bulking”是新近發(fā)展起來(lái)的技術(shù)，對(duì)中藥復(fù)方活性成分的提取更加有效。,二、中藥現(xiàn)代化目的,中藥現(xiàn)代化是要在繼承和發(fā)揚(yáng)中醫(yī)藥的優(yōu)勢(shì)和特色的基礎(chǔ)上，充分利用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的方法和手段，借鑒國(guó)際通行的醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，研究開(kāi)發(fā)能夠合法進(jìn)入國(guó)際醫(yī)藥市場(chǎng)的中藥產(chǎn)品，提高中藥在國(guó)際市場(chǎng)的競(jìng)爭(zhēng)能力。,中藥現(xiàn)代化的發(fā)展機(jī)遇,1、從化學(xué)合成物中篩選新藥難度越來(lái)越大（時(shí)間長(zhǎng)，費(fèi)用大） 2、天然藥物日益受到青睞 3、西方國(guó)家開(kāi)始接受天然復(fù)方藥物,中藥現(xiàn)代化必要性,面臨良好機(jī)遇： 回歸自然熱潮的興起 傳統(tǒng)中醫(yī)藥體系獨(dú)具優(yōu)勢(shì) 巨大的國(guó)內(nèi)外中藥及天然提取藥物市場(chǎng) 面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)： “洋中藥”搶占國(guó)際國(guó)內(nèi)市場(chǎng)：國(guó)際中成藥市場(chǎng)每年銷售額270億美元，其中，日本產(chǎn)品占80、韓國(guó)10、中國(guó)占3，國(guó)內(nèi)每年進(jìn)口洋中藥超過(guò)1億美元。 經(jīng)濟(jì)全球化和WTO帶來(lái)的挑戰(zhàn) 國(guó)內(nèi)產(chǎn)業(yè)存在諸多問(wèn)題,我國(guó)中藥現(xiàn)代化研究現(xiàn)狀,3、1999年10月由國(guó)家中醫(yī)藥管理局組織的“方劑關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題的基礎(chǔ)研究”通過(guò)論證，列入國(guó)家973計(jì)劃開(kāi)始啟動(dòng)，標(biāo)志著我國(guó)中藥現(xiàn)代化基礎(chǔ)研究在新的高度上開(kāi)展工作 但總體而言，我國(guó)中藥現(xiàn)代化的研究起步晚、基礎(chǔ)薄弱，資金投入嚴(yán)重不足，國(guó)際化水平較低。,四、中藥現(xiàn)代化研究方法,(一)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)是現(xiàn)代中藥研究的重點(diǎn) (二)中藥提取以得到有效成分是中藥生產(chǎn)工藝現(xiàn)代化的研究重點(diǎn),單味中藥化學(xué)成分的研究成果,“七五”、“八五”期間，在借鑒化學(xué)藥研究的經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上，對(duì)200多味常用中藥材進(jìn)行了系統(tǒng)研究，對(duì)單味中藥提取的單體或有效部位進(jìn)行藥效和臨床試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)了500多種活性單體。,單味中藥化學(xué)成分的研究成果,目前已有幾十種中藥單體和有效部位達(dá)到較高臨床治療水平。 青蒿素:治療瘧疾 黃連素: 治療腸道感染性 雷公藤皂甙: 治療自身免疫性疾病紅斑狼瘡 鶴草酚:驅(qū)絳蟲(chóng)藥 紫杉醇、喜樹(shù)堿和長(zhǎng)春堿:抗腫瘤藥 銀杏黃酮甙和銀杏內(nèi)酯:治療腦缺血及外周血管病 毛冬青甲素:抗血栓藥(OK),復(fù)方中藥化學(xué)成份的研究,以單味中藥中的一種或幾種有效成份作為定性定量指標(biāo)進(jìn)行研究 以中藥復(fù)方有效部位進(jìn)行研究,現(xiàn)代中藥研究存在的問(wèn)題,單味藥有效成分的研究主要是借鑒化學(xué)藥研究的經(jīng)驗(yàn)，與傳統(tǒng)中醫(yī)理論相差甚遠(yuǎn)，不能算嚴(yán)格意義上的中藥，已走入植物藥或天然藥的范疇。 復(fù)方是中醫(yī)用藥的主要形式，是中藥有別于化學(xué)藥的重要特點(diǎn)。,現(xiàn)代中藥研究存在的問(wèn)題,中藥復(fù)方具有兩大特性即化學(xué)成分高度復(fù)雜性和治療整體性。只對(duì)復(fù)方中幾味中藥的個(gè)別成分進(jìn)行定性、定量分析研究，既難以保證整個(gè)復(fù)方的療效和質(zhì)量，也無(wú)法說(shuō)清藥效物質(zhì)（化學(xué)成分）與作用機(jī)理的關(guān)系。 有效成分并不能代表和反映中藥復(fù)方多組分協(xié)同作用的本質(zhì)。延引西方國(guó)家單味天然藥物研究思路，忽略了中醫(yī)整體觀和辨證論治理論,現(xiàn)代中藥研究存在的問(wèn)題,在現(xiàn)階段及現(xiàn)有技術(shù)條件下，無(wú)法確定中藥中的所有有效成分，而在中藥煎煮過(guò)程中是否有新的有效成分產(chǎn)生以及中藥各有效成分在體內(nèi)的吸收代謝及其相互作用無(wú)法用有效成分的概念進(jìn)行表達(dá)。 提取的有效成分難以代表原中藥復(fù)方的中醫(yī)臨床療效指證（EI）。,De-bulking的概念、研究思路及優(yōu)點(diǎn),De-bulking的概念 De-bulking的研究思路 De-bulking研究方法的優(yōu)點(diǎn) De-bulking技術(shù)在中藥復(fù)方研究中的應(yīng)用實(shí)例,De-bulking的概念,中藥De-bulking是指按中醫(yī)臨床指標(biāo)(Effective Indicators,EI)和現(xiàn)代藥理相結(jié)合，應(yīng)用現(xiàn)代分離分析方法，消除無(wú)效物質(zhì)，將中藥復(fù)方制成高度濃縮物的制備方法，從而使大多數(shù)中藥復(fù)方精制成相當(dāng)原處方藥材量小于5%、有效物質(zhì)最大限度富集、充分體現(xiàn)中藥復(fù)方多組分協(xié)同作用本質(zhì)的高度濃縮物，使臨床用藥量大幅度降低，臨床療效和用藥安全性提高。,De-bulking的研究思路,工藝研究 EI建立 中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),臨床有效及安全的中藥復(fù)方,建立組成藥的品種來(lái)源、中西藥理及病理依據(jù)、品質(zhì)控制的指標(biāo)。 建立一般臨床劑量。,建立基于中藥臨床效能指標(biāo)（EI-1）包括癥狀、物理、化學(xué)、病理、生物的指標(biāo)（EI-1） 建立一般臨床劑量。,傳統(tǒng)水煎法提取濃縮物（Substrate-A）。 確立濃縮物質(zhì)的物理及化學(xué)指標(biāo)、組成、特征及與原方之重量比。,小規(guī)模臨床驗(yàn)證。將效果與EI-1比較。 推算可達(dá)EI-1所應(yīng)用的劑量。 測(cè)試與確定基本毒性不大于原方。,參考已有的知識(shí)，假設(shè)2-3個(gè)研究方案，每方案的目標(biāo)為經(jīng)進(jìn)一步提取，分離出約等于Substrate-A 30-50%重量的無(wú)效物質(zhì)。保留預(yù)計(jì)為有效的部分（Substrate-B1,B2,B3,），確立濃縮物（預(yù)計(jì)有效及無(wú)效部分）的物理及化學(xué)性質(zhì)、組成、特征及與原方的重量比。,根據(jù)小規(guī)模臨床驗(yàn)證的結(jié)果和數(shù)據(jù)，參照EI-1 確定哪一個(gè)Substrate效能最佳，與原方EI-1最接近。 如沒(méi)有一種Substrate的EI與EI-1相似或相近。審閱及估計(jì)何種物質(zhì)不應(yīng)去掉。設(shè)計(jì)1-3個(gè)新的分離方案去除無(wú)效成分。用小規(guī)模臨床驗(yàn)證濃縮物（Substrate-C1,C2,C3）重復(fù)此步驟至能找出適當(dāng)有效之濃縮物為止。,重復(fù)上述步驟，追求更高的濃縮度,Substrate-B1,Substrate-B2,Substrate-B3,推算可達(dá)EI-1所應(yīng)用的劑量，測(cè)試并確立基本毒性不大于原方，確定臨床應(yīng)用劑量,建立完整的提取工藝，建立產(chǎn)品檢驗(yàn)方法及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。,A-2,A-1,A-3,A-4,C-1,C-2,B,E,F,中藥復(fù)方De-bulking研究思路 ：,EI建立,中藥EI的建立是中藥De-bulking理論得以順利實(shí)施的保證。 問(wèn)題： (1) 中藥藥效的評(píng)價(jià)，主要還是依靠整體實(shí)驗(yàn)而缺乏局部和微區(qū)的評(píng)價(jià)手段，評(píng)價(jià)指標(biāo)隨意性大，缺乏定量和客觀標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)，方法也不夠規(guī)范，阻礙了中藥現(xiàn)代化研究的進(jìn)程。 (2) 中藥治病以“癥”為對(duì)象，但目前對(duì)“癥”的把握僅僅是中醫(yī)醫(yī)生根據(jù)自己的經(jīng)驗(yàn)，而不同的病人“癥”的輕重也會(huì)有差異，如何建立統(tǒng)一的EI指標(biāo)尚存在很大困難。,EI建立,香港理工大學(xué)將中西醫(yī)的EI結(jié)合起來(lái)對(duì)中藥的藥效進(jìn)行研究,取得了很好的效果。 處方 丹 參 5000g 西洋參 1000g 麥 冬 2000g 甘 草 1000g 五味子 1000g 牛 膝 5000g,例子：,治療冠心病的有效復(fù)方 西醫(yī)的EI已很好的建立起來(lái)，如可通過(guò)心肌營(yíng)養(yǎng)血流量、急性心肌缺血、耐缺氧能力、血脂以及免疫功能變化等指標(biāo)評(píng)價(jià)其藥效； 中醫(yī)EI的研究正在進(jìn)行之中，重點(diǎn)考察該方對(duì)胸痛胸悶、心悸氣短、神倦乏力、易出汗、面色紫暗、舌淡紫或舌紅少苔、脈弱而澀等癥狀的改善能力，從而建立該方的EI指標(biāo)。,中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),在De-bulking過(guò)程中，為保證中藥的有效性、可靠性和穩(wěn)定性，對(duì)復(fù)方水提物采用HPLC或CE進(jìn)行分離、分析，得到水提物化學(xué)成分的色譜圖（指紋圖譜）。 用HPLC/MS進(jìn)行各成份鑒定后，指紋圖譜可作定性鑒別用，同時(shí)選擇四、五種特征成份峰作為定量指標(biāo)。以終產(chǎn)品中這些特征成分的含量作為控制質(zhì)量的指標(biāo)。,De-bulking研究方法的優(yōu)點(diǎn),（1） 由于無(wú)效物質(zhì)的消除，使有效物質(zhì)高度富集，臨床用藥量大幅度降低。因此，能提高中藥復(fù)方的臨床療效和用藥安全性。 （2） 由于無(wú)效物質(zhì)的消除是以中藥復(fù)方整體為出發(fā)點(diǎn)，因此，濃縮物充分代表和反映了中醫(yī)辨證論治和整體觀的用藥理論和原則。 （3） 無(wú)效物質(zhì)的消除以其無(wú)藥效為指標(biāo)，最大限度地富集保留了藥效物質(zhì)，因此，充分體現(xiàn)了中藥復(fù)方多組分協(xié)同作用的本質(zhì)。,De-bulking技術(shù)在中藥復(fù)方研究中的應(yīng)用實(shí)例,在過(guò)去約3年時(shí)間里，香港理工大學(xué)與北京化工大學(xué)共同申請(qǐng)香港創(chuàng)新工業(yè)署基金1300萬(wàn)港元（化工大學(xué)負(fù)責(zé)300萬(wàn)港元），以De-bulking理論為指導(dǎo)，結(jié)合新興的分離技術(shù)，對(duì)4個(gè)傳統(tǒng)驗(yàn)方進(jìn)行二次開(kāi)發(fā)，得到的濃縮粉僅為原方生藥量的13%，目前正進(jìn)行4個(gè)驗(yàn)方EI的建立，并與水提濃縮物的EI進(jìn)行比較，以進(jìn)一步優(yōu)化工藝。,總 結(jié),復(fù)方是中藥的精華，在現(xiàn)有條件下，僅從中藥的物質(zhì)基礎(chǔ)研究中藥的藥效并進(jìn)行中藥現(xiàn)代化的研究仍存在很大困難，傳統(tǒng)的提取分離以得到有效成分的研究方法未必是中藥現(xiàn)代化的最合適途徑。,總 結(jié),中藥De-bulking理論從復(fù)方整體進(jìn)行考慮，提出脫除無(wú)效物質(zhì)的概念，以中藥臨床EI為依據(jù)進(jìn)行中藥的提取與純化，并以多個(gè)有效成分作為中藥的質(zhì)量指標(biāo)，為中藥研究提供了新的思路。該法是在傳統(tǒng)中醫(yī)理論指導(dǎo)下的中藥研究，是對(duì)中國(guó)中醫(yī)中藥文化的繼承和發(fā)揚(yáng)。盡管這方面的研究剛剛起步，研究結(jié)果已展現(xiàn)了較好的前景。,