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1970年，有兩位科學(xué)家 做了一個著名的實驗： 人—鼠細(xì)胞融合的實驗， 以證明細(xì)胞膜上的蛋白 質(zhì)分子是運動的。,人—鼠細(xì)胞是怎樣實現(xiàn)融合的？動物細(xì)胞融合有什么實踐意義呢？,w,w,動物細(xì)胞融合與 單克隆抗體,,一、動物細(xì)胞融合,有些細(xì)胞的融合是正常的生命活動。如精子與卵細(xì)胞的結(jié)合。,思考2：細(xì)胞融合過程中使用的病毒不滅活行嗎？,不滅活的病毒會感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。,思考1：為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑？,一、動物細(xì)胞融合,P52：生物資料卡,誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的過程：閱讀書本圖2-23,w,2、誘導(dǎo)融合的因素 生物法：滅活的病毒誘導(dǎo)融合.(常用滅活的仙臺病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合）。 化學(xué)法：聚乙二醇（PEG）誘導(dǎo)融合. 物理法：電激融合,病毒顆粒黏 附細(xì)胞表面,細(xì)胞膜連接,細(xì)胞膜被 病毒顆粒穿通,細(xì)胞融合、形成雜種細(xì)胞,,,,一、動物細(xì)胞融合（細(xì)胞雜交） （P52）,1.概念：,指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程。,2.結(jié)果：,形成含有2或多個細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單核雜交細(xì)胞,3.融合原理：,細(xì)胞膜的流動性,,,4.誘導(dǎo)方式,,物理法：離心、振動、電激,化學(xué)法：聚乙二醇（PEG),生物法：滅活的病毒,5.意義：,突破有性雜交局限，使遠緣雜交成為可能 廣泛應(yīng)用多個領(lǐng)域 重要用途：制備單克隆抗體,w,二、單克隆抗體,回憶1：什么是抗體？,回憶2：抗體是怎么產(chǎn)生的？是主要分布在哪里？,回憶3：抗體有什么作用？,主要分布在：血清,凝聚或殺死相應(yīng)的病原體,抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā) 生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。,二、單克隆抗體,閱讀書本圖p52—53回答以下問題,1、獲得抗體的傳統(tǒng)方法是怎么樣的？這種方法有什么缺點？,方法：把某種抗原反復(fù)注射到動物體內(nèi)，然后從動物血清中分離出所需的抗體。,缺點： 產(chǎn)量低，純度低，特異性差。,每一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強的抗體。 如果利用單個B淋巴細(xì)胞進行無性繁殖（克?。?，形成細(xì)胞群，這樣的細(xì)胞群就有可能產(chǎn)生出化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體——單克隆抗體。,問題： 怎樣獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體呢？,?光純還不行,還要大量.怎么辦? ?但，有問題: ?想想看，什么細(xì)胞能無限繁殖呢? ?怎么獲得能產(chǎn)生抗體又能無限增殖的細(xì)胞呢？,用單個B淋巴細(xì)胞進行動物細(xì)胞培養(yǎng)(克隆)就可以產(chǎn)生大量抗體了.,B淋巴細(xì)胞是不能無限繁殖的.怎么辦?,癌細(xì)胞. 但它不能產(chǎn)生抗體.,癌細(xì)胞能無限繁殖,但不能產(chǎn)生抗體.B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生抗體,但不能大量繁殖.將兩個細(xì)胞融合即可得到既能產(chǎn)生抗體又能無限增值的細(xì)胞,w,,⑵如何誘導(dǎo)融合？,用滅活的病毒或加入聚乙二醇（PEG）,⑴如何得到B淋巴細(xì)胞？,制備單克隆抗體的過程——P53，圖2-24,注射特定的抗原蛋白,⑶細(xì)胞兩兩融合后，有哪些類型？,B-B B-瘤(雜交瘤細(xì)胞) 瘤-瘤,,（4）第二次刷選的結(jié)果（目的）是什么？,能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞,（3）如何將雜交瘤細(xì)胞（B-瘤）刷選出來？,制備單克隆抗體的過程——P53，圖2-24,選擇培養(yǎng)基——選出雜交瘤細(xì)胞,（5)如何得到大量的單克隆抗體？,體內(nèi)培養(yǎng) 體外培養(yǎng),單克隆抗體的優(yōu)點:,特異性強、靈敏度高,雜交瘤細(xì)胞（B-瘤細(xì)胞）,足量單一類型 雜交瘤細(xì)胞,單克隆抗體制備流程圖,,單克隆抗體的優(yōu)點：,純度高,特異性強,靈敏度高,產(chǎn)量大,選擇性培養(yǎng)基,注射特定 抗原蛋白,⑶圖中B為________過程， 常用_________作為誘導(dǎo)劑 ，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________ 。,,,,1.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實驗方案,,⑴該實驗方案的 目是 ；,⑵A是從小鼠的脾臟中取得_______ ,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生 ；,,制備單克隆抗體,B淋巴細(xì)胞,專一抗體,細(xì)胞融合,滅活病毒,雙親細(xì)胞,分泌專一抗體,無限增殖,4、單抗隆抗體的應(yīng)用,①作為診斷試劑,②定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病,用于體外診斷人類和動植物疾病及病原鑒定，純度高、特異性強，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點。,③用于治療疾病和運載藥物,利用同位素標(biāo)記單抗，在特定組織成像,制成生物導(dǎo)彈，將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在的位置，在原位殺死癌細(xì)胞，療效高、副作用小。,單克隆抗體的優(yōu)點： 特異性強，靈敏度高，并可以大量制備。,w,動物細(xì)胞融合,單克隆 抗體制備,,過程：,原理：細(xì)胞膜的流動性,意義：突破有性雜交局限，使遠緣雜交成為可能,應(yīng)用：主要用于制備單克隆抗體,,制備過程：,特點：特異性強,靈敏度高,產(chǎn)量大,應(yīng)用：用作診斷試劑，治療疾病和運載藥物,小結(jié)：,1．只能使動物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法（ ） A．PEG B．滅活的病毒 C．電刺激 D．離心 2、“生物導(dǎo)彈”是指 （ ） A.單克隆抗體 B.雜交瘤細(xì)胞 C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞 D.在單抗上連接抗癌藥物,B,練習(xí),D,3. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞 誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在 這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ） ①淋巴細(xì)胞 ②小鼠骨髓瘤細(xì)胞 ③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞 ④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 ⑤雜交瘤細(xì)胞 A． ②④ B．①③⑤ C． ①②③④ D．②③,C,,5.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實驗方案,制備單克隆抗體,不能，沒有注射抗原，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞。,(1)該實驗方案的目的是：,,(2)該方案能達到預(yù)期效果嗎？為什么？,(3)A是從小鼠的脾臟中取得__________ 該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______ 。,(4).圖中B為________________過程，常用_________________誘導(dǎo)，該細(xì)胞繼承雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能__ ________,又能___________。,B淋巴細(xì)胞,抗體,細(xì)胞融合,滅活的病毒,分泌專一抗體,迅速大量增殖,,