1970年，有兩位科學家 做了一個著名的實驗： 人鼠細胞融合的實驗， 以證明細胞膜上的蛋白 質分子是運動的。,人鼠細胞是怎樣實現(xiàn)融合的？動物細胞融合有什么實踐意義呢？,w,w,動物細胞融合與 單克隆抗體,一、動物細胞融合,有些細胞的融合是正常的生命活動。如精子與卵細胞的結合。,思考2：細胞融合過程中使用的病毒不滅活行嗎？,不滅活的病毒會感染細胞，而不能誘導細胞融合。,思考1：為什么滅活的病毒能作誘導劑？,一、動物細胞融合,P52：生物資料卡,誘導動物細胞融合的過程：閱讀書本圖2-23,w,2、誘導融合的因素 生物法：滅活的病毒誘導融合.(常用滅活的仙臺病毒誘導動物細胞融合）。 化學法：聚乙二醇（PEG）誘導融合. 物理法：電激融合,病毒顆粒黏 附細胞表面,細胞膜連接,細胞膜被 病毒顆粒穿通,細胞融合、形成雜種細胞,一、動物細胞融合（細胞雜交） （P52）,1.概念：,指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程。,2.結果：,形成含有2或多個細胞遺傳物質的單核雜交細胞,3.融合原理：,細胞膜的流動性,4.誘導方式,物理法：離心、振動、電激,化學法：聚乙二醇（PEG),生物法：滅活的病毒,5.意義：,突破有性雜交局限，使遠緣雜交成為可能 廣泛應用多個領域 重要用途：制備單克隆抗體,w,二、單克隆抗體,回憶1：什么是抗體？,回憶2：抗體是怎么產(chǎn)生的？是主要分布在哪里？,回憶3：抗體有什么作用？,主要分布在：血清,凝聚或殺死相應的病原體,抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā) 生特異性結合的具有免疫功能的球蛋白。,二、單克隆抗體,閱讀書本圖p5253回答以下問題,1、獲得抗體的傳統(tǒng)方法是怎么樣的？這種方法有什么缺點？,方法：把某種抗原反復注射到動物體內，然后從動物血清中分離出所需的抗體。,缺點： 產(chǎn)量低，純度低，特異性差。,每一個B淋巴細胞只分泌一種化學性質單一，特異性強的抗體。 如果利用單個B淋巴細胞進行無性繁殖（克?。?，形成細胞群，這樣的細胞群就有可能產(chǎn)生出化學性質單一、特異性強的抗體單克隆抗體。,問題： 怎樣獲得化學性質單一、特異性強的抗體呢？,光純還不行,還要大量.怎么辦? 但，有問題: 想想看，什么細胞能無限繁殖呢? 怎么獲得能產(chǎn)生抗體又能無限增殖的細胞呢？,用單個B淋巴細胞進行動物細胞培養(yǎng)(克隆)就可以產(chǎn)生大量抗體了.,B淋巴細胞是不能無限繁殖的.怎么辦?,癌細胞. 但它不能產(chǎn)生抗體.,癌細胞能無限繁殖,但不能產(chǎn)生抗體.B淋巴細胞能產(chǎn)生抗體,但不能大量繁殖.將兩個細胞融合即可得到既能產(chǎn)生抗體又能無限增值的細胞,w,如何誘導融合？,用滅活的病毒或加入聚乙二醇（PEG）,如何得到B淋巴細胞？,制備單克隆抗體的過程P53，圖2-24,注射特定的抗原蛋白,細胞兩兩融合后，有哪些類型？,B-B B-瘤(雜交瘤細胞) 瘤-瘤,（4）第二次刷選的結果（目的）是什么？,能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞,（3）如何將雜交瘤細胞（B-瘤）刷選出來？,制備單克隆抗體的過程P53，圖2-24,選擇培養(yǎng)基選出雜交瘤細胞,（5)如何得到大量的單克隆抗體？,體內培養(yǎng) 體外培養(yǎng),單克隆抗體的優(yōu)點:,特異性強、靈敏度高,雜交瘤細胞（B-瘤細胞）,足量單一類型 雜交瘤細胞,單克隆抗體制備流程圖,單克隆抗體的優(yōu)點：,純度高,特異性強,靈敏度高,產(chǎn)量大,選擇性培養(yǎng)基,注射特定 抗原蛋白,圖中B為_過程， 常用_作為誘導劑 ，該細胞繼承_的遺傳特性，既能_,又能_ 。,1.下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌的抗體實驗方案,該實驗方案的 目是 ；,A是從小鼠的脾臟中取得_ ,該細胞能夠產(chǎn)生 ；,制備單克隆抗體,B淋巴細胞,專一抗體,細胞融合,滅活病毒,雙親細胞,分泌專一抗體,無限增殖,4、單抗隆抗體的應用,作為診斷試劑,定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病,用于體外診斷人類和動植物疾病及病原鑒定，純度高、特異性強，具有準確、高效、簡易、快速的優(yōu)點。,用于治療疾病和運載藥物,利用同位素標記單抗，在特定組織成像,制成生物導彈，將藥物定向帶到癌細胞所在的位置，在原位殺死癌細胞，療效高、副作用小。,單克隆抗體的優(yōu)點： 特異性強，靈敏度高，并可以大量制備。,w,動物細胞融合,單克隆 抗體制備,過程：,原理：細胞膜的流動性,意義：突破有性雜交局限，使遠緣雜交成為可能,應用：主要用于制備單克隆抗體,制備過程：,特點：特異性強,靈敏度高,產(chǎn)量大,應用：用作診斷試劑，治療疾病和運載藥物,小結：,1只能使動物細胞融合的常用誘導方法（ ） APEG B滅活的病毒 C電刺激 D離心 2、“生物導彈”是指 （ ） A.單克隆抗體 B.雜交瘤細胞 C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞 D.在單抗上連接抗癌藥物,B,練習,D,3. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞 誘導融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，在 這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是（ ） 淋巴細胞 小鼠骨髓瘤細胞 B淋巴細胞自身融合細胞 小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞 雜交瘤細胞 A B C D,C,5.下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌的實驗方案,制備單克隆抗體,不能，沒有注射抗原，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細胞。,(1)該實驗方案的目的是：,(2)該方案能達到預期效果嗎？為什么？,(3)A是從小鼠的脾臟中取得_ 該細胞能夠產(chǎn)生_ 。,(4).圖中B為_過程，常用_誘導，該細胞繼承雙親細胞的遺傳特性，既能_ _,又能_。,B淋巴細胞,抗體,細胞融合,滅活的病毒,分泌專一抗體,迅速大量增殖,