《生物顯微技術(shù)第五章原位雜交》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《生物顯微技術(shù)第五章原位雜交（42頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

1、 定義：特定標(biāo)記的已知序列的核酸作為探針與細(xì)胞或組織切片中的核酸進(jìn)行雜交并對標(biāo)記的探針進(jìn)行檢測的方法稱為原位雜交。 Detection of DNA by nucleic acid hybridization 探針的標(biāo)記 缺刻平移法標(biāo)記DNA探針DNA Nick translation DNA Random primed labeling 雜交：55 C，16小時以上雜交液：5 SSC 50%甲酰胺 0.02%BSA 250 g/ml Trna 10%硫酸葡聚糖 1 g/ml 變性探針 雜交后處理：50%甲酰胺 5 SSC， 15min 1，55 C50%甲酰胺 2SSC， 30min 1，5

2、5 C50%甲酰胺 0.2SSC，30min 2，55 C0.2SSC， 5min 1，室溫Buffer1 5min 1，室溫1% Blooking 1hr 室溫0.5% Blooking +堿性磷酸酶標(biāo)記的抗地高辛抗體 1：5000 4 C 過夜 Buffer1 10min 3，室溫Buffer3 5min 1， 室溫加顯色液，黑暗室溫靜止顯色。顯色液： Buffer3 中含 0.33 mg/ml NBT（氮藍(lán)四唑） 0.165 mg/ml BCIP（5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽） 2mM Levamisole觀察出現(xiàn)信號后，去掉顯色液，甲基綠對染照相，保存。 原位雜交中注意的問題：雜交前處理要嚴(yán)格避免RNA酶的污染。雜交前后的儀器、器皿、藥品要分開使用。雜交前使用的器皿、試劑嚴(yán)格處理。雜交前操作帶手套。