1 第二課時(shí)純化大腸桿菌 2 微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)（ 知 識(shí) 點(diǎn) 總 結(jié) ） 3 復(fù) 習(xí) 題1、 甲 、 乙 、 丙 是 三 種 微 生 物 ， 下 表 、 、 是 用 來 培 養(yǎng) 微生 物 的 三 種 培 養(yǎng) 基 。 甲 、 乙 、 丙 都 能 在 中 正 常 生 長 繁 殖 ； 甲能 在 中 正 常 生 長 繁 殖 ， 而 乙 和 丙 都 不 能 ； 乙 能 在 中 正 常 生長 繁 殖 ， 甲 、 丙 都 不 能 。 下 列 說 法 正 確 的 是 ：粉 狀 硫10g K2HPO44g FeSO40.5g 蔗 糖10g （ NH） 2SO40.4g H2O 100mL MgSO49.25g CaCI20.5g + + + + - + + + + + + - + + + + + + + + + + + +A、 甲 乙 丙 都 是 異 養(yǎng) 微 生 物B 、 甲 乙 都 是 自 養(yǎng) 微 生 物 、 丙 是 異 養(yǎng) 微 生 物C、 甲 是 固 氮 微 生 物 、 乙 是 自 養(yǎng) 微 生 物 、 丙 是 異 養(yǎng) 微 生 物 D、 甲 是 異 養(yǎng) 微 生 物 、 乙 是 固 氮 微 生 物 、 丙 是 自 養(yǎng) 微 生 物 4 復(fù) 習(xí) 題2、 培 養(yǎng) 基 、 培 養(yǎng) 皿 、 接 種 環(huán) 、 實(shí) 驗(yàn) 操 作 者 的 雙 手 、空 氣 、 牛 奶 所 采 用 的 滅 菌 、 消 毒 方 法 依 次 是 ： 化 學(xué) 消 毒 灼 燒 滅 菌 干 熱 滅 菌 紫 外 線 滅 菌 高 壓 蒸 汽 滅 菌 巴 氏 消 毒 法 A、 B、 C、 D、 5 三 、 純 化 大 腸 桿 菌接 種 大 腸 桿 菌 于 培 養(yǎng) 基 上 ， 經(jīng) 過 培 養(yǎng) 使 其 形 成 由 單個(gè) 細(xì) 胞 繁 殖 形 成 的 子 細(xì) 胞 群 體 ， 即 菌 落 。 6 在 火 焰 旁 右 手 拿 錐 形 瓶 ， 左 手 拔 出 棉 塞 ； 右 手 拿 錐 形 瓶 ， 使 錐 形 瓶 的 瓶 口 迅 速 通 過 火焰 ； 左 手 將 培 養(yǎng) 皿 打 開 一 條 縫 隙 ， 右 手 將 培 養(yǎng) 基倒 入 培 養(yǎng) 皿 ， 立 刻 蓋 上 皿 蓋 。 待 平 板 冷 卻 凝 固 后 ， 將 平 板 倒 過 來 放 置 。 7 Q1.培 養(yǎng) 基 高 壓 蒸 汽 滅 菌 后 ， 需 冷 卻 到 _ 左 右 時(shí) ，才 能 倒 平 板 。 用 什 么 辦 法 來 估 計(jì) 培 養(yǎng) 基 的 溫 度 ？_Q2.操 作 時(shí) 錐 形 瓶 口 通 過 酒 精 燈 火 焰 的 目 的 是 ： _Q3.將 平 板 倒 置 的 目 的 是 ：_Q4.在 倒 平 板 過 程 中 ， 將 培 養(yǎng) 基 濺 在 皿 蓋 與 皿 底 之 間的 部 位 ， 這 個(gè) 平 板 還 能 用 來 培 養(yǎng) 微 生 物 嗎 ？ 為 什 么 ？ _ 8 原 理 ：通 過 接 種 環(huán) 在 瓊 脂 固 體 培 養(yǎng) 基 表 面 連 續(xù) 劃 線 的 操作 ， 將 聚 集 的 菌 種 逐 步 稀 釋 分 散 到 培 養(yǎng) 基 表 面 。 9 灼 燒 接 種 環(huán) 冷 卻 劃 線 （ 第 一 區(qū) 域 ）蘸 取 菌 液灼 燒 接 種 環(huán) 冷 卻 劃 線 （ 第 二 區(qū) 域 ）灼 燒 接 種 環(huán) 冷 卻 劃 線 （ 第 三 區(qū) 域 ）灼 燒 接 種 環(huán) 冷 卻 劃 線 （ 第 四 區(qū) 域 ）灼 燒 接 種 環(huán) 冷 卻 劃 線 （ 第 五 區(qū) 域 ） 灼 燒 接 種 環(huán)平 板 倒 置 放 置 培 養(yǎng) 10 第 一 區(qū) 域第 二 區(qū) 域第 三 區(qū) 域第 四 區(qū) 域第 五 區(qū) 域 11 Q2： 每 次 劃 線 前 灼 燒 接 種 環(huán) 的 目 的 ：Q3： 劃 線 結(jié) 束 后 灼 燒 接 種 環(huán) 的 目 的 ：答 案 ： 避 免 接 種 環(huán) 上 可 能 存 在 的 微 生 物 污 染 培 養(yǎng) 基答 案 ： 殺 死 上 次 劃 線 結(jié) 束 后 殘 留 的 菌 種答 案 ： 及 時(shí) 殺 死 接 種 環(huán) 上 殘 留 的 菌 種 ， 避 免 污 染 環(huán) 境 和 操 作 者 。Q1： 第 一 步 灼 燒 接 種 環(huán) 的 目 的 ： 12 稀 釋 涂 布 平 板 接 種原 理 ：將 菌 液 進(jìn) 行 一 系 列 梯 度 稀 釋 ， 并 將 不 同 稀 釋 度菌 液 分 別 涂 布 到 瓊 脂 固 體 培 養(yǎng) 基 上 進(jìn) 行 培 養(yǎng) 。當(dāng) 稀 釋 倍 數(shù) 足 夠 高 時(shí) ， 即 可 獲 得 單 個(gè) 細(xì) 菌 形 成的 標(biāo) 準(zhǔn) 菌 落 。 13 1、 梯 度 稀 釋2、 涂 布 平 板 稀 釋 涂 布 平 板 接 種 14 結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1、 培 養(yǎng) 基 制 備 成 功 的 標(biāo) 準(zhǔn)2、 接 種 操 作 成 功 的 標(biāo) 準(zhǔn)如 果 未 接 種 的 培 養(yǎng) 基 在 恒 溫 箱 中 保 溫 12天 后 無 菌 落 生 長 ，說 明 培 養(yǎng) 基 配 制 是 成 功 的 ， 否 則 實(shí) 驗(yàn) 失 敗 ， 需 重 新 配 制 。如 果 培 養(yǎng) 基 上 生 長 的 菌 落 顏 色 、 性 狀 、 大 小 基 本 一 致 ，并 符 合 大 腸 桿 菌 菌 落 的 特 點(diǎn) ， 則 說 明 操 作 是 符 合 要 求 的 。如 果 培 養(yǎng) 基 上 出 現(xiàn) 了 其 他 菌 落 ， 則 說 明 接 種 過 程 中 ， 無 菌操 作 還 未 達(dá) 到 要 求 ， 實(shí) 驗(yàn) 失 敗 ， 需 分 析 原 因 ， 再 次 實(shí) 驗(yàn) 。 15 1、 臨 時(shí) 保 藏 ： 適 用 于 頻 繁 使 用 的 菌 種 。 將 菌種 接 種 到 固 體 斜 面 培 養(yǎng) 基 ， 在 適 宜 的 溫 度下 培 養(yǎng) 。 當(dāng) 菌 落 長 成 后 ， 將 試 管 置 于 4 的冰 箱 中 保 藏2、甘油冷凍管保藏：適 用 于 需 長 期 保 存 的 菌種 。 在 3mL甘 油 瓶 中 ， 裝 入 1mL甘 油 滅 菌 。將 1mL培 養(yǎng) 的 菌 液 轉(zhuǎn) 移 到 甘 油 瓶 中 ， 與 甘 油充 分 混 勻 ， 放 -20 的 冷 凍 箱 中 保 藏 16 純化大腸桿菌（ 實(shí) 驗(yàn) 過 程 ）