組 織 學(xué) 切 片 技 術(shù) 大 多 數(shù) 的 生 物 材 料 ， 在 自 然 狀 態(tài) 下 是 不 適 合 顯 微 觀 察的 ， 也 無(wú) 法 看 到 其 內(nèi) 部 結(jié) 構(gòu) 。 因 為 材 料 較 厚 ， 光 線(xiàn) 不 易 透過(guò) ， 另 外 由 于 細(xì) 胞 內(nèi) 各 個(gè) 結(jié) 構(gòu) 的 折 射 率 相 差 很 小 ， 即 使 光線(xiàn) 可 透 過(guò) ， 也 難 以 辯 明 。 組 織 學(xué) 技 術(shù) 是 教 學(xué) 和 科 研 中 常 用 的 方 法 。 組 織 在 經(jīng) 過(guò)固 定 ， 脫 水 ， 透 明 ， 包 埋 等 手 續(xù) 后 ， 用 切 片 機(jī) 切 成 較 薄 的切 片 ， 再 經(jīng) 不 同 的 染 色 就 可 以 顯 示 不 同 細(xì) 胞 組 織 的 形 態(tài) 及其 中 某 些 化 學(xué) 成 份 含 量 的 變 化 ， 組 織 切 片 也 便 于 保 存 。 組 織 學(xué) 標(biāo) 本 的 制 作 技 術(shù) 是 組 織 學(xué) ， 胚 胎 學(xué) ， 生 物 學(xué) 、病 理 學(xué) 、 腫 瘤 學(xué) 、 法 醫(yī) 學(xué) 及 臨 床 診 斷 學(xué) 等 學(xué) 科 研 究 觀 察 細(xì)胞 、 組 織 的 生 理 、 病 理 形 態(tài) 變 化 的 一 種 主 要 手 段 。 組 織 學(xué) 技 術(shù) 包 括 ：l 組 織 學(xué) 制 片 技 術(shù)l 組 織 化 學(xué) 技 術(shù)l 熒 光 組 化 及 免 疫 組 化 技 術(shù)l 各 種 特 殊 顯 微 技 術(shù)l 電 鏡 組 織 學(xué) 技 術(shù)l 組 織 培 養(yǎng) 技 術(shù) 等 一 、 概 述 二 、 組 織 學(xué) 制 片 技 術(shù) 的 分 類(lèi) 組 織 學(xué) 制 片 技 術(shù) 有 很 多 不 同 的 制 片 方 法 ， 一 般 可 分 為 切片 法 與 非 切 片 法 兩 大 類(lèi) ：切 片 法 ： 石 蠟 切 片 、 火 棉 膠 切 片 、 冰 凍 切 片 等 。非 切 片 法 ： 鋪 片 、 涂 片 、 壓 片 、 磨 片 、 整 裝 片 等 。 即 不 用 切 片 機(jī) ， 不 經(jīng) 切 片 手 續(xù) 而 制 成 切 片 的 方 法， 根 據(jù) 材 料 性 質(zhì) 的 不 同 ， 有 不 同 的 處 理 方 法 ， 該 類(lèi) 方法 操 作 簡(jiǎn) 單 快 捷 ， 其 中 鋪 片 法 ， 封 藏 法 可 使 原 有 組 織結(jié) 構(gòu) 不 被 破 壞 ， 涂 片 法 ， 壓 片 法 彌 補(bǔ) 了 用 包 埋 ， 切 片法 所 不 可 能 觀 察 清 楚 的 不 足 ， 因 此 是 組 織 標(biāo) 本 制 備 中常 用 的 手 段 。 1、 非 切 片 法 1.1 涂 片 法 主 要 用 于 血 液 、 精 液 、 尿 液 、 痰 液 、 微 生 物 等 不 能切 片 的 液 態(tài) 顆 粒 性 材 料 ， 可 在 載 玻 片 上 涂 成 單 層 細(xì) 胞， 再 經(jīng) 固 定 ， 脫 水 ， 染 色 等 手 段 制 成 永 久 標(biāo) 本 。1.2 鋪 片 法 主 要 用 于 動(dòng) 、 植 物 組 織 的 表 皮 層 觀 察 ， 可 活 體 取 待觀 察 組 織 ， 用 尖 鑷 子 迅 速 將 組 織 平 鋪 在 載 玻 片 上 。 如 : 疏 松 結(jié) 締 組 織 鋪 片 標(biāo) 本 的 制 備 。 1.3 壓 片 法 一 些 較 幼 嫩 ， 柔 軟 的 材 料 可 將 其 置 載 玻 片 上 ， 用小 解 剖 刀 將 其 分 散 ， 加 染 料 一 滴 ， 再 蓋 上 蓋 玻 片 ， 用拇 指 垂 直 用 力 擠 壓 ， 使 組 織 散 成 一 薄 片 ， 再 進(jìn) 行 觀 察， 如 骨 骼 肌 運(yùn) 動(dòng) 終 版 的 制 備 。1.4 磨 片 (Ground section) 用 于 很 堅(jiān) 硬 的 組 織 ， 如 骨 和 牙 。 血 涂 片 骨 磨 片 疏 松 結(jié) 締 組 織 鋪 片 鋪 片上 皮 組 織 鋪 片 切 片 法 是 必 須 依 靠 切 片 機(jī) 將 組 織 切 成 薄 片 來(lái) 進(jìn) 行觀 察 的 方 法 。 為 了 能 清 晰 地 觀 察 到 組 織 結(jié) 構(gòu) 及 細(xì) 胞 形態(tài) ， 必 須 先 經(jīng) 過(guò) 一 系 列 步 驟 將 組 織 內(nèi) 滲 入 某 些 支 持 物質(zhì) ， 使 組 織 變 硬 以 利 于 切 成 薄 片 ， 根 據(jù) 所 用 支 持 劑 的種 類(lèi) 不 同 ， 主 要 分 為 石 蠟 切 片 法 ， 火 棉 膠 切 法 ， 冰 凍切 片 法 等 類(lèi) 型 ， 切 成 薄 片 后 還 需 要 脫 蠟 ， 染 色 ， 脫 水 ，透 明 等 步 驟 ， 將 其 制 成 永 久 標(biāo) 本 。 2、 切 片 法 石 蠟 切 片 是 最 基 本 的 切 片 技 術(shù) ， 冰 凍 切 片和 超 薄 切 片 等 都 是 在 石 蠟 切 片 基 礎(chǔ) 上 發(fā) 展 起 來(lái)的 。 現(xiàn) 以 石 蠟 切 片 為 例 ， 介 紹 切 片 標(biāo) 本 的 制 備方 法 。 組 織 學(xué) 制 片 步 驟 ： 取 材 固 定 沖 洗 脫 水 透 明 浸 蠟 包 埋 修 塊 切 片 貼 片 烤 片 染 色 封 片 觀 察 結(jié) 果 根 據(jù) 不 同 的 實(shí) 驗(yàn) 目 的 ， 選 擇 相 應(yīng) 的 材 料 ， 材 料 要 求新 鮮 、 準(zhǔn) 確 、 完 整 ， 材 料 要 避 免 擠 壓 、 挫 傷 、 干 枯 。 所 采 集 材 料 應(yīng) 立 即 放 入 固 定 劑 ， 并 編 號(hào) ， 注 明 采 集時(shí) 間 、 地 點(diǎn) 、 名 稱(chēng) 、 組 織 部 位 ， 所 取 組 織 塊 要 大 小 適 當(dāng) ，即 要 能 說(shuō) 明 問(wèn) 題 ， 又 要 考 慮 固 定 劑 的 穿 透 能 力 。 一 般 組 織 學(xué) 取 材 稍 大 ， 細(xì) 胞 學(xué) 取 材 稍 小 ， 動(dòng) 物 組 織取 材 要 稍 大 ， 植 物 組 織 取 材 稍 小 。2.1 取 材 手 術(shù) 切 除 標(biāo) 本 ， 各 種 活 檢 穿 刺 標(biāo) 本 和 尸 體 解 剖 標(biāo) 本 。u 手 術(shù) 切 除 標(biāo) 本 的 取 材 ： 病 灶 在 組 織 中 的 分 布 常 存 在 不 均 一 性 ， 取 材 要 有 代 表 性 ， 取 材 部 位要 兼 顧 ： 主 要 病 灶 ， 病 灶 與 正 常 組 織 交 界 處 ， 遠(yuǎn) 離 病 灶 的 正 常 組 織 。 組 織 大 小 ： 長(zhǎng) 1cm 寬 1cm 厚 0.2 0.3cm。u 各 種 組 織 的 活 檢 取 材 ： 活 檢 取 材 體 積 小 ， 取 材 困 難 ， 不 易 取 到 主 要 病 灶 ， 因 此 對(duì) 標(biāo) 本 的 處理 應(yīng) 特 別 慎 重 ， 及 時(shí) 固 定 ， 包 埋 時(shí) 要 平 整 。2.1.1 人 體 組 織 標(biāo) 本 的 取 材 2.1.2 動(dòng) 物 組 織 標(biāo) 本 的 取 材 動(dòng) 物 的 處 死 方 式 一 般 為 活 殺 ， 組 織 標(biāo) 本 來(lái) 源 較 新 鮮 ，10min內(nèi) 即 可 完 成 固 定 和 冷 凍 保 存 ， 腦 組 織 和 神 經(jīng) 組 織 應(yīng) 采用 灌 注 固 定 后 ， 再 進(jìn) 行 后 固 定 。制 片 所 需 的 材 料 要 求 越 新 鮮 越 好 ， 尤 其 是 細(xì) 胞 學(xué) 方 面的 研 究 對(duì) 材 料 的 新 鮮 程 度 要 求 更 嚴(yán) 。 因 此 ， 要 從 活 的 動(dòng) 物體 上 采 取 材 料 ， 在 一 般 情 況 下 ， 要 對(duì) 動(dòng) 物 施 行 麻 醉 ， 然 后再 割 取 材 料 加 以 固 定 。 所 用 的 麻 醉 藥 品 ， 必 須 以 不 影 響 細(xì)胞 結(jié) 構(gòu) 為 原 則 。 u 動(dòng) 物 的 選 擇 動(dòng) 物 的 選 擇 是 組 織 切 片 取 材 的 第 一 步 ,在 組 織 學(xué)中 以 人 的 組 織 為 理 想 ， 但 人 的 組 織 不 易 得 到 ， 根 據(jù) 研究 的 需 要 ， 大 都 以 動(dòng) 物 的 組 織 來(lái) 代 替 。 有 些 動(dòng) 物 的 組織 器 官 比 人 的 組 織 更 為 典 型 ， 如 ： 豬 的 肝 臟 ； 豚 鼠 胰腺 、 內(nèi) 耳 ； 貓 的 肋 間 肌 顯 示 運(yùn) 動(dòng) 終 板 ； 兔 的 皮 下 組 織和 腸 系 膜 作 活 體 染 色 較 為 理 想 等 。 u 動(dòng) 物 的 處 死（ 1） 吸 入 麻 醉 法 ： 將 浸 透 乙 醚 的 棉 花 放 入 玻 璃 缸 內(nèi) ,將 動(dòng) 物 放 入 玻 璃 缸 內(nèi) ,蓋 上 玻 璃 蓋 ，觀 察 動(dòng) 物 麻 醉 情 況 ， 放 血 處 死 ， 此 法 用 于 小 動(dòng) 物 。（ 2） 注 射 麻 醉 法 ： 用 3%戊 巴 比 妥 鈉 按 每 公 斤 體 重 1 2ml靜 脈 注 射 或 腹 腔 注 射 ， 麻 醉 后 立 即 放 血 處 死 ， 此 法 用 于 大 動(dòng) 物 。（ 3） 直 接 處 死 法 ： 用 金 屬 器 械 猛 擊 動(dòng) 物 的 后 腦 部 或 直 接 斷 頭 放 血 處死 ， 此 法 適 合 于 小 動(dòng) 物 。 2.1.3 組 織 取 材 注 意 事 項(xiàng)1.組 織 要 求 離 體 后 30min內(nèi) 浸 入 固 定 液 ， 尤 其 是 開(kāi) 展 分 子 生 物 學(xué) 研 究 。動(dòng) 物 放 血 處 死 后 立 即 取 材 ， 最 好 在 心 臟 還 在 跳 動(dòng) 時(shí) 立 即 取 材 ， 馬上 投 入 固 定 液 中 ；2.注 意 防 止 人 為 因 素 的 影 響 切 取 組 織 的 刀 剪 必 須 鋒 利 ， 刀 要 足 夠 長(zhǎng) 。 切 分 組 織 塊 時(shí) ， 不可 來(lái) 回 切 割 。 夾 取 組 織 時(shí) ， 鑷 子 要 輕 ， 切 勿 擠 壓 。 以 免 損 傷 組 織 ；3.組 織 塊 的 大 小 厚 為 0.2 0.5cm， 大 小 可 根 據(jù) 需 要 而 定 。 柔 軟 組 織 不 易 切 小 ,可 先 取 稍 大 的 組 織 塊 固 定 2 3h， 等 組 織 稍 硬 后 再 切 成 薄 的 小 塊繼 續(xù) 固 定 。 4.取 材 應(yīng) 注 意 清 潔 ， 組 織 塊 上 如 有 血 液 、 污 物 和 粘 液 沾 著 ， 應(yīng) 用生 理 鹽 水 洗 滌 后 再 入 固 定 液 。5.取 材 時(shí) 間 ： 原 則 上 ， 應(yīng) 盡 快 取 材 ， 但 比 較 大 的 手 術(shù) 標(biāo) 本 如 胃 、肺 、 腸 等 器 官 ， 最 好 先 固 定 后 取 材 。6.注 意 確 定 取 材 部 位 和 包 埋 切 面 的 方 向 ， 切 除 不 需 要 的 部 分 。7.明 確 編 號(hào) ， 登 記 新 鮮 的 組 織 被 割 取 后 ,由 于 細(xì) 胞 內(nèi) 酶 的 作 用 和 細(xì) 菌 的繁 殖 ， 可 引 起 組 織 的 自 溶 和 腐 敗 。 因 此 ， 割 取 組 織 塊 后 ，應(yīng) 立 即 采 用 一 種 方 法 ， 將 組 織 盡 可 能 保 持 原 有 的 形 態(tài) 結(jié)構(gòu) ， 且 有 利 于 保 存 和 適 于 制 片 的 操 作 ， 這 一 步 驟 稱(chēng) 為 固定 。 化 學(xué) 固 定 法 就 是 用 化 學(xué) 試 劑 配 制 成 固 定 液 使 組 織 固定 。 固 定 是 制 片 極 為 關(guān) 鍵 的 一 個(gè) 步 驟 ， 制 片 質(zhì) 量 的 優(yōu) 劣 ，除 與 材 料 的 新 鮮 程 度 有 關(guān) 外 ， 還 取 決 于 最 初 的 固 定 是 否適 當(dāng) 和 完 全 。2.2 組 織 標(biāo) 本 的 固 定 防 止 組 織 自 溶 和 腐 敗 ； 使 細(xì) 胞 內(nèi) 的 蛋 白 質(zhì) 、 糖 、 脂 肪 等 各 種 成 分 沉 淀 保 存 下 來(lái) 從 而保 存 細(xì) 胞 的 各 種 組 成 成 分 使 其 保 持 與 生 活 時(shí) 相 近 似 的 形 態(tài) 和結(jié) 構(gòu) ； 因 沉 淀 及 凝 固 的 關(guān) 系 ， 使 細(xì) 胞 內(nèi) 不 同 的 成 分 產(chǎn) 生 不 同 的 折 光率 ， 造 成 光 學(xué) 上 的 差 別 使 原 來(lái) 在 生 活 情 況 下 看 不 清 楚 的 結(jié) 構(gòu)變 得 清 晰 易 見(jiàn) ， 且 有 的 固 定 劑 還 有 助 染 作 用 (如 醋 酸 、 苦 味酸 )， 從 而 使 細(xì) 胞 各 部 易 于 染 色 ； 固 定 劑 還 兼 有 硬 化 作 用 ， 使 柔 軟 組 織 硬 化 而 不 易 變 形 ， 有 利于 操 作 。 u 固 定 的 目 的 和 作 用 在 于 ： （ 1） 小 塊 組 織 固 定 ： 從 人 體 或 動(dòng) 物 取 出 組 織 ， 切 成 小 塊 投 入 固定 液 中 固 定 。（ 2） 局 部 注 射 固 定 ： 某 些 組 織 和 器 官 其 固 定 液 不 易 滲 透 或 滲 透較 慢 ， 滲 透 不 均 勻 ， 還 有 些 器 官 為 保 持 外 型 或 卷 縮 ， 可 采取 局 部 注 射 固 定 方 法 ， 固 定 4 6小 時(shí) 后 ， 再 將 組 織 切 成 小塊 繼 續(xù) 投 入 固 定 液 中 固 定 。（ 3） 整 體 注 射 固 定 ： 此 法 主 要 用 于 科 研 和 大 體 解 剖 ， 亦 可 用 于組 織 學(xué) 教 學(xué) 制 片 。u 固 定 的 方 法 固 定 液 的 種 類(lèi) 很 多 。 可 分 為 兩 大 類(lèi) ： 單 純 固 定 液 和混 合 固 定 液 。單 純 固 定 液 ： 是 用 一 種 化 學(xué) 試 劑 作 為 固 定 液 ， 如 乙醇 、 甲 醛 溶 液 、 冰 醋 酸 等 ,它 們 只 是 對(duì) 細(xì) 胞 的 某 種 成 分 固定 得 較 好 ； 不 能 將 細(xì) 胞 所 有 的 成 分 都 保 存 下 來(lái) 。 如 升 汞固 定 蛋 白 質(zhì) 、 冰 醋 酸 固 定 核 蛋 白 、 無(wú) 水 乙 醇 可 固 定 糖 原等 ， 單 純 固 定 液 有 一 定 局 限 性 。 混 合 固 定 液 ： 是 用 幾 種 化 學(xué) 試 劑 ， 按 一 定 的 比 例 混合 配 制 而 成 的 ， 由 于 各 種 試 劑 的 優(yōu) 缺 點(diǎn) 互 相 彌 補(bǔ) ， 因 此可 產(chǎn) 生 較 好 的 效 果 。u固 定 液 的 選 擇 （ 1） 甲 醛 固 定 液 ： 是 一 種 還 原 劑 ， 呈 酸 性 ， 原 液 濃 度 為 37% 40%， 配 成固 定 液 的 濃 度 為 4%， 習(xí) 慣 上 稱(chēng) 為 10%， 配 制 時(shí) 取 甲 醛 原 液10ml， 加 蒸 餾 水 （ D.W） 或 緩 沖 液 至 100ml， 為 甲 醛 固 定 液（ 10 福 爾 馬 林 ） 。 甲 醛 滲 透 力 強(qiáng) ， 固 定 均 勻 。 但 脫 水 后 有 較 大 收 縮 ， 在某 些 方 法 中 要 求 中 性 甲 醛 ， 可 在 原 裝 瓶 內(nèi) 放 入 碳 酸 鎂 ， pH為 7.6， 能 長(zhǎng) 期 保 持 中 性 。 甲 醛 固 定 后 ， 通 常 需 在 流 水 中 沖洗 24-48小 時(shí) ,否 則 影 響 染 色 效 果 。 (2) 4 多 聚 甲 醛 固 定 液 最 好 是 動(dòng) 物 經(jīng) 灌 注 固 定 取 材 后 ， 繼 續(xù) 固 定 2-24h。 該 固 定 劑 較 為溫 和 ， 適 用 于 組 織 標(biāo) 本 的 長(zhǎng) 期 保 存 。(3) Bouin S液 苦 味 酸 飽 和 水 溶 液 75ml 甲 醛 25ml 冰 醋 酸 5ml 是 常 用 的 良 好 固 定 液 ， 滲 透 速 度 快 ， 收 縮 小 ， 組 織 固 定 均 勻 ，不 使 組 織 變 硬 變 脆 ， 保 持 結(jié) 構(gòu) 完 整 ， 適 合 于 各 種 胚 胎 連 續(xù) 切 片 ， 對(duì)于 肝 、 皮 、 胰 腺 特 殊 染 色 效 果 好 。 固 定 為 12 24小 時(shí) ， 但 固 定 過(guò) 久 ， 對(duì) 堿 性 染 料 著 色 不 利 。 （ 4） Carnoy氏 液 純 酒 精 60ml 氯 仿 30ml 冰 醋 酸 10ml 此 固 定 液 滲 透 速 度 快 ， 2mm以 下 小 塊 組 織 固 定 時(shí) 間2 4小 時(shí) ， 它 是 細(xì) 胞 極 好 的 固 定 液 ， 適 合 于 細(xì) 胞 分 裂 、RNA、 DNA及 糖 元 等 固 定 。 固 定 后 直 接 入 純 酒 精 脫 水 。 (5) PLP固 定 液 ： 過(guò) 碘 酸 -賴(lài) 氨 酸 -多 聚 甲 醛 固 定 液 。 該 固 定 劑 較 適 合 于 富 含糖 類(lèi) 組 織 ， 對(duì) 超 微 結(jié) 構(gòu) 及 許 多 抗 原 的 抗 原 性 保 存 較 好 。(6) Methacarn固 定 液 甲 醇 60ml， 氯 仿 30ml， 醋 酸 10ml， 混 均 后 4 保 存 備 用 ， 對(duì)核 內(nèi) 抗 原 的 保 存 效 果 較 好 。(7)丙 酮 及 醇 類(lèi) 固 定 劑 丙 酮 、 乙 醇 類(lèi) 固 定 劑 其 固 定 原 理 主 要 是 對(duì) 蛋 白 質(zhì) 的 沉 淀 而發(fā) 生 固 定 作 用 。 酒 精 是 一 種 還 愿 劑 ， 用 于 組 織 固 定 以 95%的 濃 度為 宜 ， 酒 精 固 定 后 的 組 織 細(xì) 胞 核 著 色 不 良 ， 一 般 用 于 糖 元 的 固 定 。 甲 醇 、 丙 酮 常 用 于 細(xì) 胞 固 定 。 u 注 意 事 項(xiàng) ：1. 根 據(jù) 材 料 的 性 質(zhì) 和 制 片 的 目 的 選 擇 固 定 液 。2. 一 般 固 定 液 都 以 新 配 為 好 ， 有 些 混 合 固 定 液 的 成 份 之 間 會(huì) 發(fā) 生 氧化 還 原 作 用 ， 一 定 要 在 使 用 前 才 混 合 。 配 好 后 應(yīng) 貯 存 在 陰 涼 處 ，不 宜 放 在 日 光 下 ， 以 免 引 起 化 學(xué) 變 化 ， 失 去 固 定 作 用 。 3. 固 定 材 料 時(shí) ， 固 定 液 必 須 充 足 ， 一 般 為 材 料 塊 的 20-30倍 ， 有 些水 分 多 的 材 料 ， 中 間 應(yīng) 更 換 1-2次 固 定 液 。 4. 材 料 固 定 完 畢 后 ， 保 存 于 嚴(yán) 密 緊 塞 或 加 蓋 的 容 器 里 ， 同 時(shí) 在 容 器外 上 標(biāo) 簽 ， 以 免 相 互 混 淆 。5. 標(biāo) 簽 上 注 明 固 定 液 、 材 料 來(lái) 源 、 日 期 等 。 標(biāo) 簽 上 的 文 字 ， 應(yīng) 用 黑色 鉛 筆 或 繪 圖 黑 墨 水 書(shū) 寫(xiě) 。 2.3 組 織 脫 水 、 透 明脫 水 (Dehydration): 由 于 石 蠟 不 溶 于 水 ， 因 而 ， 組 織 經(jīng) 固 定 和 水 洗 后 含大 量 水 分 ， 需 先 用 乙 醇 類(lèi) 試 劑 進(jìn) 行 脫 水 。 脫 水 是 用 一 種既 能 與 水 又 能 與 透 明 液 混 合 的 液 體 來(lái) 逐 漸 置 換 樣 品 中 游離 的 水 。 如 用 濃 度 逐 漸 升 高 的 酒 精 (70-100%)將 組 織 中的 水 完 全 置 換 出 來(lái) 。 現(xiàn) 最 常 采 用 的 脫 水 劑 是 乙 醇 ， 進(jìn) 行 梯 度 脫 水 ， 此 外 ， 丙 酮 、 正 丁 醇 、 松 脂 醇 等 也 可 作 為 脫 水 劑 。 脫 水 的 時(shí) 間 ，可 根 據(jù) 組 織 的 類(lèi) 型 ， 大 小 而 定 。 脫 水 的 過(guò) 程 ：50%乙 醇 70%乙 醇 80% 90% 100% 100%乙 醇脫 水 應(yīng) 逐 步 進(jìn) 行 ， 否 則 將 引 起 組 織 強(qiáng) 烈 的 收 縮 或 變 形， 在 經(jīng) 無(wú) 水 乙 醇 處 理 時(shí) ， 應(yīng) 保 證 試 劑 的 純 度 。 u注 意 事 項(xiàng) ：1. 在 低 濃 度 或 純 酒 精 中 ， 每 級(jí) 停 留 不 宜 太 長(zhǎng) ， 否 則 易 使 組織 變 軟 ， 助 長(zhǎng) 材 料 的 解 體 。 2. 在 高 濃 度 或 純 酒 精 中 ， 每 級(jí) 停 留 的 時(shí) 間 也 不 宜 太 長(zhǎng) ， 否則 會(huì) 使 組 織 變 脆 ， 影 響 切 片 。 3. 如 需 過(guò) 夜 ， 應(yīng) 停 留 在 70%酒 精 中 。 4. 脫 水 必 須 徹 底 ， 否 則 不 易 透 明 ， 甚 至 使 透 明 劑 內(nèi) 出 現(xiàn) 白色 混 濁 現(xiàn) 象 透 明 （ Clearing） : 脫 水 后 ， 組 織 內(nèi) 含 有 大 量 的 乙 醇 。 由 于 石 蠟 不 溶 于 水 ，也 不 溶 于 醇 類(lèi) 試 劑 。 因 此 ， 必 須 用 一 種 既 能 與 乙 醇 又 能 與包 埋 介 質(zhì) 互 溶 的 液 體 來(lái) 置 換 樣 品 中 的 乙 醇 ， 從 而 為 最 終 的包 埋 創(chuàng) 造 一 個(gè) 有 利 的 條 件 ， 該 過(guò) 程 即 透 明 。 現(xiàn) 采 用 的 透 明劑 一 般 是 二 甲 苯 ， 甲 苯 ， 氯 仿 等 。 二 甲 苯 是 使 用 最 廣 泛 的 一 種 透 明 劑 ， 它 具 有 滲 透 力 強(qiáng) ，溶 解 石 蠟 量 大 ， 又 易 揮 發(fā) 的 優(yōu) 點(diǎn) ， 其 缺 點(diǎn) 是 易 使 組 織 收 縮 ，變 硬 ， 變 脆 ， 因 此 透 明 時(shí) 間 應(yīng) 根 據(jù) 組 織 塊 大 小 及 質(zhì) 地 酌 情而 定 注 意 事 項(xiàng) ： 1.使 用 透 明 劑 時(shí) ， 要 隨 時(shí) 蓋 緊 蓋 子 ， 以 免 空 氣 中 的 水 分進(jìn) 入 。 2.更 換 每 級(jí) 透 明 劑 ， 動(dòng) 作 要 迅 速 ， 一 方 面 為 了 不 使 材 料塊 干 涸 ， 另 一 方 面 能 避 免 吸 收 濕 氣 。 3.在 透 明 過(guò) 程 中 ， 如 果 材 料 周 圍 出 現(xiàn) 白 色 霧 狀 ， 說(shuō) 明 材料 中 的 水 未 被 脫 凈 ， 應(yīng) 退 回 純 酒 精 中 重 新 脫 水 ， 然 后再 透 明 。 浸 蠟 （ Infiltration） :目 的 ： 除 去 組 織 中 的 透 明 劑 （ 如 二 甲 苯 等 ） ， 使 石 蠟 滲 透 到 組 織 內(nèi)部 達(dá) 到 飽 和 程 度 以 便 包 埋 。方 法 ： 將 完 成 透 明 步 驟 的 組 織 塊 浸 入 透 明 劑 與 石 蠟 混 合 液 中 ， 不 斷提 高 石 蠟 的 比 例 ， 直 至 用 液 態(tài) 石 蠟 完 全 置 換 出 組 織 塊 中 的 透 明 劑 ，最 后 ， 組 織 細(xì) 胞 內(nèi) 被 大 量 石 蠟 支 撐 ， 室 溫 時(shí) 石 蠟 凝 固 成 固 態(tài) ， 使 組織 能 用 于 石 蠟 切 片 。2.4 浸 蠟 注 意 事 項(xiàng) ： 1. 盡 量 保 持 在 較 低 溫 度 中 進(jìn) 行 ， 以 石 蠟 不 凝 固 為 度 ； 透 蠟 溫 度 要 恒 定 ， 不 可 忽 高 忽 低 ； 2. 操 作 要 迅 速 ， 力 求 在 最 短 的 時(shí) 間 內(nèi) 完 成 石 蠟 透 入 過(guò)程 ， 以 免 引 起 組 織 變 硬 、 變 脆 、 收 縮 等 。 3. 透 蠟 時(shí) 間 根 據(jù) 組 織 的 薄 厚 、 大 小 來(lái) 進(jìn) 行 。 透 蠟 應(yīng) 在恒 溫 箱 內(nèi) 進(jìn) 行 ， 并 保 持 箱 內(nèi) 溫 度 在 5560 左 右 ，注 意 溫 度 不 要 過(guò) 高 ， 以 免 組 織 發(fā) 脆 。 水 和 酒 精 可 以 相 溶 。 酒 精 和 二 甲 苯 相 溶 。 二 甲 苯 和 石 蠟 可 以 相 溶 。 因 為 以 上 相 鄰 步 驟 所 使 用 的 液 體 均 可 以 互 溶 ， 所 以保 證 每 一 步 驟 液 體 能 置 換 完 全 。 水 和 二 甲 苯 不 能 相 溶 ， 乙 醇 和 石 蠟 不 能 相 溶 ， 所 以如 果 有 一 個(gè) 步 驟 的 處 理 不 徹 底 ， 殘 留 的 液 體 帶 到 下 一 個(gè)步 驟 將 不 能 互 溶 ， 最 終 帶 到 滲 蠟 步 驟 中 ， 成 為 細(xì) 小 的 空洞 ， 以 至 不 能 成 為 質(zhì) 地 致 密 的 石 蠟 塊 ， 也 就 切 不 成 良 好的 切 片 。我 們 可 以 看 到 ： 2.5 包 埋 將 透 蠟 的 組 織 連 同 熔 化 的 石 蠟 ， 一 起 倒 入 包 埋 盒 內(nèi) ， 然 后 包 埋盒 底 部 接 觸 冷 水 中 ， 使 其 立 刻 降 溫 凝 固 成 蠟 塊 。 用 于 包 埋 的 石 蠟 的 熔 點(diǎn) 在 5060 之 間 ， 包 埋 時(shí) 應(yīng) 根 據(jù) 組 織 材 料 、切 片 厚 度 、 氣 候 條 件 等 因 素 ， 選 擇 不 同 熔 點(diǎn) 的 石 蠟 。 一 般 動(dòng) 物 材 料常 用 的 石 蠟 熔 點(diǎn) 為 5256 。 操 作 過(guò) 程 ： 包 埋 時(shí) ， 將 紙 盒 放 在 已 經(jīng) 加 熱 的 溫 臺(tái) 上 ， 從 溫 箱 中 取 出 盛 放 純石 蠟 的 蠟 杯 ， 倒 入 包 埋 用 的 紙 盒 中 ， 取 出 存 放 材 料 的 蠟 杯 3， 迅 速 輕輕 地 用 鑷 子 夾 取 材 料 平 放 于 紙 盒 底 部 （ 注 意 切 面 朝 下 放 置 ） ， 再 用溫 鑷 子 輕 輕 撥 動(dòng) 材 料 ， 使 之 排 列 整 齊 。 待 石 蠟 完 全 凝 固 （ 約 30min） 后 即 可 取 出 備 用 。 常 規(guī) 石 蠟 包 埋 過(guò) 程l (1)固 定 ： 10%福 爾 馬 林 24h 48h， 流 水 沖 洗l (2)脫 水 ： 75 、 85 乙 醇 ， 95 乙 醇 、 ， 無(wú) 水 乙 醇 、 、 。l (3)透 明 ： 二 甲 苯 、 二 甲 苯 、 二 甲 苯 l (4)浸 蠟 ： 二 甲 苯 /石 蠟 、 石 蠟 、 石 蠟 l (5)石 蠟 包 埋 ： 修 蠟 塊 ， 標(biāo) 號(hào) 修 塊 ： 切 片 前 需 修 整 蠟 塊 ， 即 將 包 埋 好 的 一 大 塊 蠟 塊 切開(kāi) ， 使 每 一 小 塊 都 含 有 一 塊 組 織 ， 從 切 面 看 組 織周 圍 的 石 蠟 相 等 。固 著 ： 將 修 好 的 蠟 塊 粘 在 大 小 適 宜 的 樣 品 臺(tái) 上 ， 以 便 于固 定 在 切 片 機(jī) 上 。切 片 ： 一 手 持 毛 筆 ， 一 手 轉(zhuǎn) 動(dòng) 切 片 機(jī) ， 切 片 的 蠟 片 連 成一 長(zhǎng) 條 蠟 帶 。 切 下 的 蠟 帶 放 在 一 干 凈 黑 紙 上 。貼 片 ： 用 小 刀 根 據(jù) 需 要 切 成 數(shù) 段 ， 分 別 用 粘 片 劑 貼 在 干凈 載 玻 片 上 。 在 恒 溫 展 片 臺(tái) 上 展 平 ， 烘 干 。 2.6 切 片 切 片 : 用 切 片 機(jī) 將 組 織 切 成 510m厚 的 蠟 片 ， 然 后 將 其 放 到溫 水 上 ， 待 其 完 全 展 開(kāi) 后 ， 裱 到 有 粘 附 劑 的 載 玻 片 上 。 u 切 片 前 的 準(zhǔn) 備 工 作(1)載 玻 片 的 清 潔 ： 市 售 載 玻 片 需 經(jīng) 清 潔 液 泡 24h， 流 水 沖 洗 ， 系 列 乙 醇 浸 泡 ，涼 干 涂 粘 合 劑 。 如 需 開(kāi) 展 原 位 雜 交 ， 還 需 將 玻 片 240 烤 2h。(2)切 片 粘 合 劑 的 種 類(lèi) 多 聚 賴(lài) 氨 酸 （ 分 子 量 300KD） ： 0.5%濃 度 。 APES試 劑 （ 3-氨 基 、 丙 基 三 氧 基 硅 烷 ） ： 干 凈 載 玻 片 丙 酮 5min APES（ 1ml+ 50ml丙 酮 ） ： 用 鑷 子夾 住 浸 入 APES試 劑 1 3次 純 丙 酮 洗 二 次 干 燥 玻 片 用 鋁 箔 包好 ， 室 溫 或 4 保 存 備 用 。 鉻 礬 明 膠 液 ： 鉻 礬 0.5g 明 膠 5g H 2O 1000ml 蛋 白 甘 油 ： u 切 片 要 求 及 注 意 事 項(xiàng) ：(1)切 片 刀 要 快 ， 切 片 厚 5 10 m。(2)切 片 按 序 貼 在 玻 片 的 下 1/3。(3)52 60 烤 片 。(4)編 號(hào)(5)切 片 可 在 4 保 存 數(shù) 年 （ 石 蠟 切 片 ）(6)冰 凍 切 片 后 需 涼 干 后 立 即 固 定(7)冰 凍 切 片 分 固 定 和 新 鮮 組 織 ， 固 定 組 織 需 經(jīng) 庶 糖 處 理 24h后 冰凍 切 片 。 組 織 學(xué) 制 片 技 術(shù) 雖 是 生 物 學(xué) 中 很 基 本 的 操 作 技 術(shù) ，但 由 于 生 物 材 料 的 個(gè) 體 差 異 ， 化 學(xué) 試 劑 的 多 樣 性 ，因 此 操 作 技 術(shù) 相 當(dāng) 細(xì) 致 而 復(fù) 雜 ， 方 法 也 很 多 ， 每 一步 驟 的 失 誤 都 可 導(dǎo) 致 整 體 的 失 敗 ， 因 此 需 要 耐 心 細(xì)致 ， 不 斷 總 結(jié) 經(jīng) 驗(yàn) ， 才 能 得 到 較 好 的 結(jié) 果 。 2.7 染 色u 根 據(jù) 來(lái) 源 分 (l)天 然 染 色 劑 此 類(lèi) 染 色 劑 是 從 動(dòng) 、 植 物 體 中 提 取 的 ， 為 天 然 產(chǎn) 物 ， 產(chǎn) 量 少 。目 前 常 用 的 有 蘇 木 精 、 洋 紅 、 地 衣 紅 和 靛 藍(lán) 等 。 其 中 最 常 用 的 為蘇 木 精 和 洋 紅 。 (2)合 成 染 色 劑 全 是 由 芳 香 環(huán) 或 具 有 芳 香 性 的 雜 環(huán) 化 合 物 所 構(gòu) 成 。 最 早 是 由煤 焦 油 蒸 餾 產(chǎn) 物 合 成 而 得 的 ， 所 以 又 稱(chēng) 為 煤 焦 油 染 料 。 除 上 述 兩 類(lèi) 外 ， 在 生 物 染 色 中 還 使 用 一 些 無(wú) 機(jī) 化 合 物 ， 如 硝酸 銀 、 氯 化 金 、 鋨 酸 等 。 2.7.1 染 色 劑 的 分 類(lèi) u 根 據(jù) 用 途 分 為 ： (l)細(xì) 胞 核 染 色 劑 用 于 細(xì) 胞 核 的 染 色 劑 有 天 然 染 色 劑 的 蘇 木 精 、 洋 紅 以 及 合成 染 色 劑 中 的 番 紅 、 結(jié) 品 紫 、 硫 堇 、 甲 苯 胺 藍(lán) 、 甲 基 綠 、 美 藍(lán) 、孔 雀 綠 和 焦 油 紫 等 。(2)細(xì) 胞 質(zhì) 染 色 劑 用 于 細(xì) 胞 質(zhì) 的 染 色 劑 有 合 成 染 色 劑 中 的 曙 紅 、 亮 綠 、 橘 黃 G、酸 性 品 紅 、 苦 味 酸 和 水 溶 性 苯 胺 藍(lán) 等 。(3)脂 質(zhì) 染 色 劑 用 于 顯 示 脂 質(zhì) 的 染 色 劑 有 合 成 染 色 劑 中 的 蘇 丹 III、 蘇 丹 Iv、硫 酸 尼 羅 藍(lán) 及 油 紅 等 。 u 根 據(jù) 染 色 劑 的 化 學(xué) 性 質(zhì) 分 為 ： 堿 性 染 色 劑 、 酸 性 染 色 劑 和 中 性 染 色 劑 。 堿 性 、 酸 性 和 中 性 染 色 劑 都 是 由 一 種 酸 和 一 種 堿 所 構(gòu)成 的 鹽 類(lèi) 。 堿 性 染 色 劑 和 酸 性 染 色 劑 的 主 要 區(qū) 別 ， 就 在 于 染 色 劑的 主 要 有 色 部 分 是 陽(yáng) 離 子 還 是 陰 離 子 。 若 染 色 劑 電 離 后 ，其 分 子 的 主 要 部 分 成 陽(yáng) 離 子 為 堿 性 染 色 劑 ； 若 電 離 后 ， 其分 子 的 主 要 部 分 為 陰 離 子 即 為 酸 性 染 色 劑 。 u 染 色 的 物 理 作 用 此 理 論 認(rèn) 為 組 織 細(xì) 胞 的 染 色 主 要 是 依 靠 下 列 三 種 物 理 作 用的 一 種 或 全 部 ， 使 染 色 劑 進(jìn) 入 組 織 或 細(xì) 胞 內(nèi) 。 (1)毛 細(xì) 管 作 用 及 滲 透 作 用 但 染 色 劑 與 組 織 細(xì) 胞 沒(méi) 有 牢 固的 結(jié) 合 (2)吸 收 作 用 又 稱(chēng) 溶 解 學(xué) 說(shuō) 。 這 種 學(xué) 說(shuō) 認(rèn) 為 組 織 細(xì) 胞 所 以能 被 染 色 ， 主 要 是 吸 收 作 用 所 致 。 組 織 吸 收 染 色 劑 ， 牢 固 的 結(jié)合 。 組 織 的 著 色 與 溶 液 的 顏 色 相 同 。2.7.2染 色 原 理 (3)吸 附 作 用 吸 附 作 用 是 固 體 物 質(zhì) 的 特 性 ， 即 較 大 的物 體 能 從 周 圍 溶 液 (染 液 )中 吸 附 一 些 小 顆 粒 (化 合 物 或離 子 )到 自 身 的 特 性 。 細(xì) 胞 中 各 種 蛋 白 質(zhì) 或 膠 體 有 不 同的 吸 附 面 ， 因 此 能 選 擇 性 地 吸 收 不 同 的 離 子 ， 即 某 種蛋 白 質(zhì) 對(duì) 某 種 染 色 劑 有 吸 附 作 用 ,而 對(duì) 別 種 染 色 劑 無(wú) 吸附 作 用 ， 這 就 可 以 解 釋 鑒 別 染 色 現(xiàn) 象 。 u 染 色 的 化 學(xué) 作 用 化 學(xué) 作 用 的 主 要 理 論 根 據(jù) 是 染 色 劑 的 性 質(zhì) 可 分 為 酸 性 、 堿性 和 中 性 染 色 劑 ， 而 動(dòng) 、 植 物 的 細(xì) 胞 內(nèi)般 也 可 區(qū) 分 為 酸 性 (陰 離子 )和 堿 性 (陽(yáng) 離 子 )部 分 。 當(dāng) 堿 性 染 色 劑 溶 液 中 的 有 色 部 分 成 為 陽(yáng)離 子 時(shí) ， 就 能 與 細(xì) 胞 的 陰 離 子 (酸 件 部 分 )較 牢 固 地 結(jié) 合 ， 當(dāng) 酸 性染 色 劑 溶 液 中 的 有 色 部 分 成 為 陰 離 子 時(shí) ， 就 能 與 細(xì) 胞 內(nèi) 的 陽(yáng) 離 子(堿 性 部 分 )較 牢 固 地 結(jié) 合 。 例 如 ， 細(xì) 胞 核 ， 尤 其 是 核 內(nèi) 的 染 色 質(zhì) ， 主 要 由 核 酸 組 成 ， 是酸 性 的 組 成 成 分 故 和 堿 性 染 色 劑 (蘇 木 精 )的 親 和 力 很 強(qiáng) ， 易 于著 色 。 細(xì) 胞 質(zhì) 含 堿 性 物 質(zhì) ， 故 和 酸 性 染 色 劑 (伊 紅 )的 親 和 力 很 大 ， 易 于 著 色 。 HE染 色 基 本 技 術(shù) 蘇 木 素 與 伊 紅 對(duì) 比 染 色 法 （ 簡(jiǎn) 稱(chēng) HE對(duì) 染 法 ）是 組 織 切 片 最 常 用 的 染 色 方 法 。 這 種 方 法 適 用 范圍 廣 泛 ， 對(duì) 組 織 細(xì) 胞 的 各 種 成 分 都 可 著 色 ， 便 于全 面 觀 察 組 織 構(gòu) 造 ， 而 且 適 用 于 各 種 固 定 液 固 定的 材 料 ， 染 色 后 不 易 褪 色 可 長(zhǎng) 期 保 存 。 經(jīng) 過(guò) HE染 色 ， 細(xì) 胞 核 被 蘇 木 素 染 成 藍(lán) 紫 色 ， 細(xì) 胞 質(zhì) 被 伊紅 染 色 呈 粉 紅 色 。 一 、 石 蠟 切 片 脫 蠟 至 水 在 染 色 前 ， 需 要 脫 蠟 入 水 ， 因 為 染 料 是 水 溶 性 的 。冰 凍 切 片 從 -80 取 出 ， 涼 干 或 電 吹 風(fēng) 吹 干 后 可 直 接 進(jìn)行 染 色 。 石 蠟 切 片 需 經(jīng) 如 下 脫 蠟 ： 脫 蠟 步 驟 ：二 甲 苯 10min， 37二 甲 苯 10min， 37無(wú) 水 乙 醇 2min，無(wú) 水 乙 醇 2min， 95 乙 醇 2min，85 乙 醇 2min，75 乙 醇 2min，流 水 沖 洗 。 二 、 染 色 染 色 (Stai ni ng): 染 料 可 以 將 微 觀 結(jié) 構(gòu) 顯示 不 同 的 顏 色 以 便 觀 察 鑒 別 。 染 色 方 法 即 蘇 木 精 和 伊 紅 染 色 （ 簡(jiǎn) 稱(chēng) H E 染 色 ） 蘇 木 精 (hematoxylin)：紫 藍(lán) 色 ， 堿 性 染 料 ， 可 使 細(xì) 胞 核 和 胞 質(zhì) 內(nèi) 的 嗜 堿性 物 質(zhì) （ RER、 游 離 核 糖 體 ） 著 藍(lán) 紫 色 。伊 紅 (eosin)：紅 色 ， 酸 性 染 料 ， 可 使 細(xì) 胞 質(zhì) 基 質(zhì) 、 溶 酶 體 等 大多 數(shù) 細(xì) 胞 器 ， 以 及 細(xì) 胞 間 質(zhì) 內(nèi) 的 膠 原 纖 維 等 著 紅色 。 1、 普 通 染 色 染 色 方 法 HE染 色蘇 木 精 伊 紅嗜 堿 性 結(jié) 構(gòu) ：細(xì) 胞 核粗 面 內(nèi) 質(zhì) 網(wǎng)游 離 核 糖 體 等 嗜 酸 性 結(jié) 構(gòu) ：細(xì) 胞 質(zhì) 基 質(zhì)溶 酶 體 、 線(xiàn) 粒體 等 細(xì) 胞 器膠 原 纖 維 等 在 染 色 后 ， 重 新 進(jìn) 入 酒 精 和 二 甲 苯 ， 最 后 用中 性 樹(shù) 膠 封 片 ， 以 便 長(zhǎng) 期 保 存 。* 切 片 : 固 定 梯 度 酒 精 上 行 二 甲 苯 石 蠟 。* 染 色 : 石 蠟 二 甲 苯 梯 度 酒 精 下 行 水 。* 保 存 : 水 梯 度 酒 精 二 甲 苯 中 性 樹(shù) 膠 。 最 常 用 的 染 料 是 蘇 木 素 (Hematoxyli n, H)和 伊 紅 (Eosi n, E)。* 蘇 木 素 是 堿 性 染 料 ， 藍(lán) 紫 色 ， 可 以 使 細(xì) 胞 核 等 著 色 。 被 蘇 木素 著 色 的 結(jié) 構(gòu) 本 身 為 酸 性 ， 具 有 嗜 堿 性 (Basophi li c)。 * 伊 紅 是 酸 性 染 料 ， 粉 紅 色 。 可 以 將 大 多 數(shù) 細(xì) 胞 的 細(xì) 胞 質(zhì) 染 成紅 色 。 被 伊 紅 著 色 的 結(jié) 構(gòu) 本 身 為 堿 性 ， 具 有 嗜 酸 性(Aci dophi li c)。* 不 易 被 蘇 木 素 和 伊 紅 著 色 的 結(jié) 構(gòu) 具 有 嗜 中 性 (Neutrophi li c)。 石 蠟 切 片 &H E染 色 其 他 染 色 法 : 硝 酸 銀 神 經(jīng) 細(xì) 胞 (黑 ), 醛 復(fù) 紅 彈 性 纖 維 (紫 ), 甲 苯 胺 藍(lán) 肥 大 細(xì) 胞 (紫 紅 色 ) PAS染 色 ： 糖 分 子 過(guò) 碘 酸 乙 二 醛 基 Schiff試 劑 紫 紅 色 蘇 木 精 4g 無(wú) 水 酒 精 25ml 10 銨 明 礬 (硫 酸 鋁 銨 )水 溶 液 400m1 配 制 時(shí) 先 將 蘇 木 精 溶 于 無(wú) 水 酒 精 ， 待 先 全 溶 解 后 加 入 10 銨 明 礬 水溶 液 ， 充 分 攪 動(dòng) 混 合 后 ， 注 入 細(xì) 口 瓶 內(nèi) ， 瓶 口 用 紗 布 封 住 。 然 后 將 瓶 置于 溫 暖 有 光 處 34天 后 過(guò) 濾 ， 濾 后 再 加 入 100m1甘 油 和 100ml甲 醇 ， 混 合均 勻 后 ， 瓶 口 仍 用 紗 布 封 口 ， 再 置 于 光 線(xiàn) 充 足 處 12月 使 之 成 熟 。 待 顏色 變 成 紫 褐 色 時(shí) 即 為 成 熟 。 成 熟 后 過(guò) 濾 ， 塞 緊 瓶 口 置 于 陰 涼 處 貯 存 ， 可長(zhǎng) 期 保 存 ， 多 年 不 壞 。 此 液 著 色 力 較 強(qiáng) ， 染 數(shù) 分 鐘 即 可 。 也 可 用 染 液 l份 加 蒸 餾 水 35份 稀 釋 后 使 用 ， 染 色 時(shí) 間 需 延 長(zhǎng) 一 至 數(shù) 小 時(shí) 。 此 液 染 細(xì)胞 核 及 嗜 堿 顆 粒 效 果 良 好 。 染 植 物 細(xì) 胞 的 纖 維 壁 比 用 其 它 任 何 染 液 著 色 更 好 。 附 ： 染 色 劑 和 染 色 液 的 配 制 步 驟 如 下 ： 二 甲 苯 二 甲 苯 1/2二 甲 苯 +1/2乙 醇 混 合 液 100%乙 醇 95%乙 醇 85%乙 醇 70%乙 醇 蘇 木 精 染 液 0.01%鹽 酸 自 來(lái) 水 70%乙 醇 85%乙 醇 伊 紅 染 液 95%乙 醇 100%乙 醇 100%乙 醇 1/2二 甲 苯 +1/2乙 醇混 合 液 二 甲 苯 二 甲 苯 封 片