第二章第二章4 基因工程受體菌或基因工程受體菌或細胞胞915第1頁，共17頁。四、基因工程受體菌或細胞四、基因工程受體菌或細胞受體細胞應具備的條件受體細胞應具備的條件各種基因工程受體及其特性各種基因工程受體及其特性實驗室常用的基因工程受體實驗室常用的基因工程受體第2頁，共17頁。受體細胞應具備的條件受體細胞應具備的條件限制性缺陷型限制性缺陷型外切酶和內切酶活性缺陷外切酶和內切酶活性缺陷 (recBrecB-、recCrecC-、hsdRhsdR-)；重組整合缺陷型重組整合缺陷型用于基因擴增或高效表達的受體細胞用于基因擴增或高效表達的受體細胞 (recArecA-)；具有較高的轉化效率具有較高的轉化效率具有與載體選擇標記互補的表型具有與載體選擇標記互補的表型感染寄生缺陷型感染寄生缺陷型防止重組細菌擴散污染，生物武器除外。防止重組細菌擴散污染，生物武器除外。第3頁，共17頁。各種基因工程受體及其特性各種基因工程受體及其特性遺傳背景清楚遺傳背景清楚載體受體系統(tǒng)完備載體受體系統(tǒng)完備 生長迅速生長迅速培養(yǎng)簡單培養(yǎng)簡單重組子穩(wěn)定重組子穩(wěn)定產結構復雜、種類繁多的內毒素產結構復雜、種類繁多的內毒素大腸桿菌：大腸桿菌：優(yōu)點：優(yōu)點：缺點：缺點：第4頁，共17頁。外源外源DNADNA克隆和擴增；克隆和擴增；原核基因高效表達；原核基因高效表達；基因文庫構建。基因文庫構建。用途：用途：是基因工程主要原核受體菌。第5頁，共17頁。遺傳背景清楚遺傳背景清楚蛋白質分泌機制健全蛋白質分泌機制健全 生長迅速生長迅速培養(yǎng)簡單培養(yǎng)簡單不產內毒素不產內毒素遺傳欠穩(wěn)定遺傳欠穩(wěn)定載體受體系統(tǒng)欠完備載體受體系統(tǒng)欠完備枯草桿菌：枯草桿菌：優(yōu)點：優(yōu)點：缺點：缺點：第6頁，共17頁。用途：用途：原核基因的克隆與表達；原核基因的克隆與表達；重組蛋白多肽的分泌。重組蛋白多肽的分泌。第7頁，共17頁。鏈霉菌：鏈霉菌：抗生素的主要生產者抗生素的主要生產者遺傳操作簡單遺傳操作簡單不產內毒素不產內毒素用途：抗生素生產菌株的改良。用途：抗生素生產菌株的改良。遺傳不穩(wěn)定遺傳不穩(wěn)定生長相對緩慢生長相對緩慢優(yōu)點：優(yōu)點：缺點：缺點：第8頁，共17頁。酵母菌：酵母菌：具有真核生物的特征具有真核生物的特征遺傳背景清楚遺傳背景清楚生長迅速生長迅速培養(yǎng)簡單培養(yǎng)簡單外源基因表達系統(tǒng)完善外源基因表達系統(tǒng)完善遺傳穩(wěn)定遺傳穩(wěn)定內源蛋白產物的內源蛋白產物的種類多、含量高種類多、含量高優(yōu)點：優(yōu)點：缺點：缺點：第9頁，共17頁。用途：用途：外源外源DNADNA擴增和克隆擴增和克隆真核基因高效表達真核基因高效表達基因文庫構建基因文庫構建真核基因表達調控研究真核基因表達調控研究是基因工程重要的真核受體菌。是基因工程重要的真核受體菌。第10頁，共17頁。昆蟲細胞（家蠶）：昆蟲細胞（家蠶）：具有真核生物的特征具有真核生物的特征外源基因表達量高外源基因表達量高繁殖較快繁殖較快培養(yǎng)成本低培養(yǎng)成本低遺傳穩(wěn)定遺傳穩(wěn)定用途：真核生物基因的高效表達。用途：真核生物基因的高效表達。DNADNA重組操作重組操作系統(tǒng)欠完善系統(tǒng)欠完善優(yōu)點：優(yōu)點：缺點：缺點：第11頁，共17頁。哺乳動物細胞（中國倉鼠卵巢細胞哺乳動物細胞（中國倉鼠卵巢細胞 CHOCHO）：）：與人的親緣關系近與人的親緣關系近分子重組表達系統(tǒng)健全分子重組表達系統(tǒng)健全具有合適的糖基化修飾系統(tǒng)具有合適的糖基化修飾系統(tǒng)細胞培養(yǎng)條件苛刻細胞培養(yǎng)條件苛刻生長緩慢生長緩慢 優(yōu)點：優(yōu)點：缺點：缺點：第12頁，共17頁。用途：用途：哺乳動物和人基因表達調控研究哺乳動物和人基因表達調控研究基因藥物生產基因藥物生產是基因工程的主要哺乳動物受體。第13頁，共17頁。植物細胞（擬南芥、煙葉植物細胞（擬南芥、煙葉）：）：轉基因植物細胞易分化轉基因植物細胞易分化細胞培養(yǎng)簡單細胞培養(yǎng)簡單成本低廉成本低廉具有光合作用具有光合作用遺傳操作繁瑣遺傳操作繁瑣 優(yōu)點：優(yōu)點：缺點：缺點：第14頁，共17頁。用途：用途：高等植物基因表達調控研究高等植物基因表達調控研究農作物品質改良農作物品質改良第15頁，共17頁。實驗室常用的基因工程受體實驗室常用的基因工程受體酵母菌：畢赤酵母、啤酒酵母酵母菌：畢赤酵母、啤酒酵母哺乳動物細胞：哺乳動物細胞：CHO CHO LE392LE392、ED8654 ED8654 C600C600、DH5DH5 、HB101HB101、JM109 JM109 大腸桿菌大腸桿菌用于接受質粒：用于接受質粒：用于接受用于接受 -DNA-DNA：第16頁，共17頁。謝謝！第17頁，共17頁。