2019 最新新人教版生物選修1 課題 2多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增 DNA片段學(xué)案片段學(xué)習(xí)目標(biāo)：1、了解 PCR技術(shù)的基本操作2、理解 PCR的原理3、討論 PCR的應(yīng)用重點(diǎn)： PCR的原理和PCR的基本操作難點(diǎn)： PCR的原理基礎(chǔ)知識(shí)PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA的過(guò)程 , 與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制過(guò)程 類(lèi)似：1細(xì)胞內(nèi) DNA復(fù)制條件分析：條件組分作用模板DNA的兩條單鏈提供復(fù)制的模板原料四種脫氧核苷酸合成 DNA子鏈的原料酶解旋酶打開(kāi) DNA雙螺旋DNA聚合酶催化合成 DNA子鏈能量ATP為解螺旋和合成子鏈供能引物RNA為 DNA 聚合酶提供合成的 3端起點(diǎn)2細(xì)胞內(nèi) DNA復(fù)制過(guò)程的解析：解旋：解旋酶、 ATP,DNA兩條鏈打開(kāi) , 形成兩條 DNA單鏈。引物結(jié)合：在DNA單鏈 3端與 DNA反向配對(duì)結(jié)合。DNA聚合酶結(jié)合： DNA聚合酶與模板鏈結(jié)合, 標(biāo)志著單鏈合成開(kāi)始。子鏈合成： DNA聚合酶從引物 3端開(kāi)始 , 將配對(duì)的脫氧核苷酸連接起來(lái)。后續(xù)加工： DNA聚合酶 I 將引物切去 , 并合成空缺處的 DNA單鏈 , 再由 DNA連接酶將不連續(xù)的 DNA子鏈連接起來(lái)（半不連續(xù)合成。先導(dǎo)鏈, 滯后鏈）子鏈合成特點(diǎn)：。思考 DNA分子能準(zhǔn)確復(fù)制的原因有哪些？。3 DNA 分子復(fù)制的人工控制解開(kāi)螺旋：在時(shí) ,DNA 雙螺旋打開(kāi) , 形成兩條 DNA單鏈 , 稱(chēng)為變性。1 / 4恢復(fù)螺旋：在左右時(shí) , 兩條 DNA單鏈重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu), 稱(chēng)為復(fù)性。復(fù)制條件：反應(yīng)場(chǎng)所：（自動(dòng)溫度周期性調(diào)節(jié)）。思考緩沖液相當(dāng)細(xì)胞內(nèi)的什么成分？（核基質(zhì)）4 PCR的反應(yīng)過(guò)程變性復(fù)性延伸。變性：在時(shí) DNA解旋復(fù)性：在時(shí)引物與DNA單鏈結(jié)合延伸：在時(shí)合成DNA子鏈（兩個(gè)引物間的序列）實(shí)驗(yàn)操作（1） PCR反應(yīng)體系：緩沖液、,、兩種 RNA 引物 ,水（2） 實(shí)驗(yàn)操作步驟按照 PCR反應(yīng)體系配方配制反應(yīng)液；將 PCR反應(yīng)體系50 L 用微量移液器轉(zhuǎn)移到微量離心管（0.5mL）中；將微量離心管放到PCR儀中；設(shè)置 PCR儀的工作參數(shù)。DNA 在 PCR儀中大量擴(kuò)增。2 4 水浴法：將微型離心管依次在、的恒溫水浴鍋中循環(huán)處理相應(yīng)時(shí)間。3實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)（ 1）避免外源 DNA 污染：所用儀器、緩沖液、蒸餾水等使用前高壓滅菌。（ 2）緩沖液和酶分裝成小份 , 20 低溫保存。（ 3 ）每添加一種反應(yīng)成分 ,更換一個(gè)移液器的槍頭。（ 4）混勻后離心處理 ,使反應(yīng) 液集中在離心管底部。（三）課堂總結(jié)、點(diǎn)評(píng)多PCR原理DNA 的復(fù)制需要酶、原料、能量、引物聚DNA 的變性和復(fù)性受溫度影響酶鏈?zhǔn)絇CR過(guò)程變性復(fù)性延伸反應(yīng)擴(kuò)操作步驟配制 PCR反應(yīng)體系移入離心管增2 / 4DNADNA 擴(kuò)增設(shè)置工作參數(shù)放入 PCR片（五）鞏固練習(xí)1 DNA 分 子復(fù)制時(shí) ,解旋的兩條鏈中（）A 僅一條作為復(fù)制模板B 兩條鏈作為模板并復(fù)制出兩個(gè)不同的DNA 分子C 兩條鏈作為模板并復(fù)制出兩個(gè)相同的DNA 分子D 兩條鏈作為模板,各自合成一條子鏈 ,然后兩條母鏈重新結(jié)合為原來(lái)的雙螺旋分子,兩條新鏈結(jié)合成一個(gè)全新的DNA 分子2.下列關(guān)于 DNA 復(fù)制過(guò)程的正確順序是（）互補(bǔ)堿基對(duì)之間氫鍵斷裂互補(bǔ)堿基對(duì)之間形成氫鍵DNA 分子在解旋酶的作用下解旋以解旋后的母鏈為模板進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)子鏈與母鏈盤(pán)旋成雙螺旋狀結(jié)構(gòu)ABCD 3.下列各項(xiàng)過(guò)程中 ,遵循“堿基互補(bǔ)配對(duì)原則”的有（） DNA 復(fù)制 RNA 復(fù)制轉(zhuǎn)錄翻譯逆轉(zhuǎn)錄ABCD4.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)模擬生物體DNA 的復(fù)制必需的一組條件是（）酶 游離的脫氧核苷酸 ATP DNA 分子 mRNA tRNA 適宜的溫度 適宜的酸堿度ABCD5.利用 PCR技術(shù) ,把一個(gè)雙鏈 DNA 分子當(dāng)作第一代 ,經(jīng)過(guò) 3 次循環(huán) ,在第四代 DNA 分子中 ,有幾條第一代脫氧核苷酸的長(zhǎng)鏈？（）A 2B 4C8D16,6.關(guān)于 DNA 分子的敘述中 ,正確的是（）A .DNA 的兩條鏈?zhǔn)菢O性相同,同向平行B.DNA的兩條鏈?zhǔn)菢O性相同,反向平行C.DNA 的兩條鏈中極性不同,反向平行的D.DNA的兩條鏈?zhǔn)菢O性不同,同向平行7.假設(shè) PCR反應(yīng)中 ,只有一個(gè) DNA 的片段作為模板 ,請(qǐng)計(jì)算在 30次循環(huán)后 ,反應(yīng)物中大約有多少這樣的DNA 片段（）A 215B230C 260 D2318.DNA 的合成方向總是（）延伸。A 從 DNA 分子的左端向右端B 從 DNA 分子的右端向左端C 從子鏈的 5,端向 3,端D從子鏈的 3,端向 5,端9.要使 PCR反應(yīng)在體外的條件下順利地進(jìn)行,需要嚴(yán)格的控制（）A 氧氣的濃度B 酸堿度C 溫度D 大氣的濕度3 / 410.DNA 分子經(jīng) PCR反應(yīng)循環(huán)一次后,新合成的那條子鏈的脫氧核苷酸的序列應(yīng)與（）A 模板母鏈相同B 非模板母鏈相同C 兩條模板母鏈相同D 兩條模板母鏈都不相同11. 在（）的溫度范圍內(nèi) ,DNA 的雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)A. 10 20B. 80 100C. 20 30D. 40 6012. 關(guān)于 DNA的復(fù)制 , 下列敘述正確的是（）A.DNA聚合酶不能從頭開(kāi)始合成DNA,只能從 5端延伸DNA鏈B. DNA復(fù)制不需要引物C. 引物與 DNA母鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)進(jìn)行結(jié)合D. DNA的合成方向總是從子鏈的 3端向 5端延伸13.下列有關(guān) PCR描述 , 不正確的是（）A.是一種酶促反應(yīng)B.引物決定了擴(kuò)增的特異性C.擴(kuò)增對(duì)象是DNA序列D.擴(kuò)增對(duì)象是氨基酸序列4 / 4