成才之路 生物,路漫漫其修遠(yuǎn)兮 吾將上下而求索,人教版 選修3,細(xì)胞工程,專題二,第二節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞工程,專題二,第二課時(shí) 動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體,1掌握動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)。(重點(diǎn)) 2理解單克隆抗體技術(shù)。(重、難點(diǎn)) 3了解動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體技術(shù)的應(yīng)用。,一、動(dòng)物細(xì)胞融合 1概念：_或_動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成_的過程，也稱細(xì)胞雜交。 2結(jié)果：形成_細(xì)胞。 3意義：克服了_的不親和性，成為研究_、細(xì)胞免疫、腫瘤和_的培育等的重要手段。利用_制造單克隆抗體。,兩個(gè),多個(gè),一個(gè)細(xì)胞,雜交,遠(yuǎn)緣雜交,細(xì)胞遺傳,生物新品種,細(xì)胞融合技術(shù),二、單克隆抗體 1抗體 (1)產(chǎn)生細(xì)胞：_。 (2)成分_。 2傳統(tǒng)獲得抗體 (1)方法：a.向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種_，使動(dòng)物產(chǎn)生_；b.從動(dòng)物_中分離所需抗體。 (2)特點(diǎn)：_。,B淋巴細(xì)胞,免疫球蛋白,抗原,抗體,血清,產(chǎn)量低、純度低、制備的抗體特異性差,B淋巴,選擇性培養(yǎng)基,融合的具有同種核,融合的雜種,迅速大量繁殖,抗體檢測(cè),腹腔,細(xì)胞培養(yǎng)液,特異性強(qiáng),可大量制備,診斷試劑,放射性同位素,細(xì)胞毒素,思維激活 1誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交融合有什么不同？ 2若不采用動(dòng)物細(xì)胞融合的方法，能否生產(chǎn)出單克隆抗體？試簡(jiǎn)要說明。 答案 1動(dòng)物細(xì)胞融合能用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)。 2能。可從經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞中獲取決定所需抗體的基因(目的基因)，導(dǎo)入骨髓瘤細(xì)胞，然后培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞并從培養(yǎng)液中提取分泌物，便可得到單克隆抗體。,一、動(dòng)物細(xì)胞融合 1概念：是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程，又稱細(xì)胞雜交。 知識(shí)貼士：融合形成的雜交細(xì)胞具有兩個(gè)細(xì)胞的遺傳信息，通過動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，雜交細(xì)胞表現(xiàn)出兩個(gè)親本的特點(diǎn)。 2原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性。 3誘導(dǎo)方法：物理法離心、振動(dòng)、電激；化學(xué)法聚乙二醇；生物方法滅活的病毒。 4過程：細(xì)胞融合的過程包括細(xì)胞膜融合、細(xì)胞質(zhì)融合和細(xì)胞核融合。細(xì)胞膜融合是細(xì)胞融合的先導(dǎo)。沒有細(xì)胞膜的融合，就不會(huì)有細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的融合。,知識(shí)貼士：細(xì)胞融合的實(shí)質(zhì)是核融合。 5特點(diǎn)：克服了有性雜交方法的局限性，打破了物種界限。 6應(yīng)用：應(yīng)用于細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等，特別是利用細(xì)胞融合技術(shù)而發(fā)展起來的雜交瘤技術(shù)，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。,(2015湛江檢測(cè))下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞融合的說法，錯(cuò)誤的是( ) A動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程 B動(dòng)物細(xì)胞融合需要用纖維素酶處理 C動(dòng)物細(xì)胞融合時(shí)需人工誘導(dǎo) D常用的誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的因素有：聚乙二醇、滅活的病毒、電激等,解析 動(dòng)物細(xì)胞融合是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁，所以誘導(dǎo)融合前不需要用纖維素酶處理。動(dòng)物細(xì)胞融合需要人工誘導(dǎo)融合，誘導(dǎo)因素包括聚乙二醇、滅活的病毒、電激等。 答案 B,動(dòng)物細(xì)胞融合的目的中最重要的是( ) A克服遠(yuǎn)緣雜交不親和 B制備單克隆抗體 C培育新物種 D生產(chǎn)雜種細(xì)胞 答案 B,解析 動(dòng)物細(xì)胞融合不像植物體細(xì)胞雜交那樣，主要是為了克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，以培育新品種為目的。動(dòng)物細(xì)胞目前只見到高度分化的細(xì)胞核在去核卵細(xì)胞中表現(xiàn)全能性，還未見到融合細(xì)胞核表現(xiàn)出全能性的例子，因此動(dòng)物細(xì)胞融合不能用來培育新的物種。生產(chǎn)雜種細(xì)胞不是細(xì)胞融合的主要目的，只是細(xì)胞完成融合后所形成的結(jié)構(gòu)的名稱。目前動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)最重要的用途就是制備單克隆抗體。,二、單克隆抗體的制備過程 1概念：由單個(gè)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖形成的細(xì)胞系所產(chǎn)生出的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。 2特點(diǎn)：化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備。,4制備過程中需注意的幾個(gè)問題 (1)首先要注射特定的抗原蛋白免疫小鼠，對(duì)小鼠免疫的原因：B淋巴細(xì)胞要經(jīng)過免疫過程，接觸抗原，增殖分化為有特異性免疫功能的效應(yīng)B細(xì)胞，才能產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，所以，與骨髓瘤細(xì)胞融合的B淋巴細(xì)胞實(shí)際上是效應(yīng)B淋巴細(xì)胞。 (2)融合后可以得到多種細(xì)胞，包括未融合的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞、相互融合的B淋巴細(xì)胞、相互融合的骨髓瘤細(xì)胞、各種雜交瘤細(xì)胞，而所需的細(xì)胞是專一抗體檢測(cè)呈陽性的雜交瘤細(xì)胞。,(3)整個(gè)制備過程中要經(jīng)過兩次篩選。第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞(去掉未雜交的細(xì)胞及自身融合的細(xì)胞)，第二次需先在多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，在每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始培養(yǎng)，然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。 (4)雜交瘤細(xì)胞具備雙親的遺傳物質(zhì)，不僅具有效應(yīng)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力，還具有骨髓瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下大量增殖的能力，從而可以克服單純B淋巴細(xì)胞不能無限增殖的缺點(diǎn)，而大量產(chǎn)生單克隆抗體。,5應(yīng)用 (1)診斷疾病：診斷病毒引起的疾病和用癌細(xì)胞抗原制備的單克隆抗體定位診斷。 (2)用于治療疾病和運(yùn)載藥物：運(yùn)用藥物與單克隆抗體連接在一起制成“生物導(dǎo)彈”； (3)分離和純化抗原分子。,下圖是單克隆抗體制備流程示意圖。 (1)_技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)。 (2)在圖中HAT培養(yǎng)基上，未融合的_和融合的_都會(huì)死亡，只有融合的雜種細(xì)胞才能生長(zhǎng)。動(dòng)物細(xì)胞融合除了采用植物細(xì)胞原生質(zhì)體融合常用的誘導(dǎo)手段，還可以采用_。,(3)單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最主要的優(yōu)越性是_。 (4)選出的雜交瘤細(xì)胞既具備骨髓瘤細(xì)胞的迅速_特點(diǎn)，又具備淋巴細(xì)胞的_特點(diǎn)，經(jīng)過選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞，還需進(jìn)行_和_，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。最后將雜交瘤細(xì)胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或小鼠腹腔內(nèi)增殖，從_或_中，就可以提取出大量的單克隆抗體了。 (5)淋巴細(xì)胞是由動(dòng)物體_中的_細(xì)胞分化、發(fā)育而來的。,解析 解決本題首要要對(duì)課本內(nèi)容熟練掌握，命題的主要方式是對(duì)課本內(nèi)容進(jìn)行挖空，所以立足課本是解決這類問題的關(guān)鍵。細(xì)胞融合技術(shù)最主要的應(yīng)用就是制備單克隆抗體，動(dòng)物細(xì)胞融合和植物細(xì)胞原生質(zhì)體融合的不同點(diǎn)在于動(dòng)物細(xì)胞融合可以使用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)。滅活是指使病毒失去感染能力，但是具有誘導(dǎo)細(xì)胞融合的能力。,答案 (1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) (2)親本細(xì)胞 具有同核的細(xì)胞 滅活的病毒 (3)特異性強(qiáng)，靈敏度高，并可大量制備 (4)在體外大量增殖 分泌專一抗體 克隆化培養(yǎng) 抗體檢測(cè) 細(xì)胞培養(yǎng)液 小鼠腹水 (5)骨髓 造血干,(2015濰坊檢測(cè))下列關(guān)于單克隆抗體制備過程的敘述，正確的是( ) A制備過程中不需要?jiǎng)游锛?xì)胞培養(yǎng)技術(shù) B雜交瘤細(xì)胞具有B淋巴細(xì)胞與癌細(xì)胞的所有特點(diǎn) C經(jīng)選擇性培養(yǎng)基篩選出來的雜交瘤細(xì)胞即可用于單克隆抗體的生產(chǎn) D單克隆抗體最廣泛的用途是用作體外診斷試劑 答案 D,解析 將骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞融合，得到雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)過選擇性培養(yǎng)基的篩選并經(jīng)單一抗體檢測(cè)后，培養(yǎng)能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞才可得到單克隆抗體，雜交瘤細(xì)胞能無限繁殖但不具有癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。,1植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的區(qū)別,2.動(dòng)物細(xì)胞融合與受精作用的區(qū)別 (1)受精作用是在同種生物之間進(jìn)行的，精子與卵細(xì)胞的融合不需要任何誘導(dǎo)劑，就能形成受精卵，受精卵內(nèi)具備同種生物的兩個(gè)親本的遺傳物質(zhì)。 (2)動(dòng)物細(xì)胞融合是在不同物種間進(jìn)行的細(xì)胞融合，由于物種間存在生殖隔離，所以自然條件下不能融合成雜交細(xì)胞，必須有誘導(dǎo)劑作用才能融合。形成的雜交細(xì)胞具備兩個(gè)親本細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，從而體現(xiàn)兩個(gè)親本的遺傳特性。,3制備單克隆抗體時(shí)，選用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合的原因 哺乳動(dòng)物感染抗原后，其體內(nèi)會(huì)形成相應(yīng)的效應(yīng)B淋巴細(xì)胞，效應(yīng)B淋巴細(xì)胞能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗原。動(dòng)物在免疫反應(yīng)的過程中，每一種效應(yīng)B淋巴細(xì)胞能分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的效應(yīng)B淋巴細(xì)胞大量增殖。效應(yīng)B淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細(xì)胞能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種效應(yīng)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，它會(huì)兼有兩個(gè)親本細(xì)胞的特性，在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時(shí)能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。,4動(dòng)物細(xì)胞融合、單克隆抗體制備與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的區(qū)別與聯(lián)系 動(dòng)物細(xì)胞融合是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程，也叫細(xì)胞雜交。雜交細(xì)胞是具有兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞。雜交細(xì)胞的形成需要人工誘導(dǎo)，常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇(PEG)、滅活的病毒、電激等。融合的細(xì)胞要繁殖就要進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，通過動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，雜交細(xì)胞表現(xiàn)出兩個(gè)親本各自的優(yōu)良特點(diǎn)。,單克隆抗體的制備，首先應(yīng)獲得雜交瘤細(xì)胞，其過程是用已免疫的效應(yīng)B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞雜交獲得三種融合細(xì)胞：BB細(xì)胞、B瘤細(xì)胞、瘤瘤細(xì)胞，然后用選擇培養(yǎng)基篩選獲得雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞要發(fā)揮其繁殖快，產(chǎn)生特異性抗體的優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)通過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)才能實(shí)現(xiàn)。所以無論是動(dòng)物細(xì)胞融合還是單克隆抗體的制備，都是以動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)為基礎(chǔ)的。,人絨毛膜促性腺激素(HCG)是女性懷孕后胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種糖蛋白，制備抗HCG單克隆抗體可用于早孕的診斷。下圖是抗HCG單克隆抗體制備流程示意圖，請(qǐng)分析回答： (1)制備單克隆抗體過程中要用到_和_技術(shù)。,(2)制備單克隆抗體過程中，給小鼠注射的HCG相當(dāng)于_，使小鼠產(chǎn)生分泌相應(yīng)_的淋巴細(xì)胞，此過程屬于特異性免疫中的_免疫。 (3)在細(xì)胞內(nèi)DNA合成一般有兩條途徑，主途徑是在細(xì)胞內(nèi)由糖和氨基酸合成核苷酸，進(jìn)而合成DNA，而氨基嘌呤可以阻斷此途徑。另一輔助途徑是在次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情況下，經(jīng)酶催化作用合成DNA，而骨髓瘤細(xì)胞的DNA合成沒有此輔助途徑。,利用DNA合成途徑不同的特點(diǎn)配制的HAT培養(yǎng)基(含有次黃嘌呤、氨基嘌呤和胸腺嘧啶核苷的細(xì)胞培養(yǎng)基)含有多種成分，其中添加的_成分具有篩選雜交瘤細(xì)胞的作用。 最終篩選獲得的雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是_ (4)此過程生產(chǎn)的單克隆抗體可以與_特異性結(jié)合，從而診斷早孕。,解析 (2)通過分泌抗體來消滅抗原的過程屬于體液免疫。(3)經(jīng)細(xì)胞融合處理過的細(xì)胞中，能在體外無限增殖的有瘤細(xì)胞、瘤瘤雜交細(xì)胞以及雜交瘤細(xì)胞。而根據(jù)題中信息可知，骨髓瘤細(xì)胞和瘤瘤雜交細(xì)胞的DNA合成沒有“次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷”的輔助途徑，只能進(jìn)行由糖和氨基酸合成核苷酸，進(jìn)而合成DNA的主途徑。因此，如果在培養(yǎng)基中加入氨基嘌呤，即可阻斷DNA合成的主途徑，使得骨髓瘤細(xì)胞和瘤瘤雜交細(xì)胞無法合成DNA，進(jìn)而無法增殖。,而骨髓瘤細(xì)胞中由于有B淋巴細(xì)胞的遺傳特點(diǎn)，有DNA合成的輔助途徑，因此即使在有氨基嘌呤的培養(yǎng)基上，只要同時(shí)存在次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷，依然能夠正常合成DNA，正常增殖，最終達(dá)到篩選出雜交瘤細(xì)胞的目的。(4)通過此過程生產(chǎn)的單克隆抗體能與最初注射的抗原特異性結(jié)合，在本題中該抗原為HCG(人絨毛膜促性腺激素)。 答案 (1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 動(dòng)物細(xì)胞融合 (2)抗原 抗體 體液 (3)氨基嘌呤 能無限增殖并分泌特異性抗體 (4)人絨毛膜促性腺激素(或“HCG”),