課題3 分解纖維素的微生物的分離 1 簡(jiǎn) 述 纖 維 素 酶 的 種 類 及 作 用 2 說(shuō) 出 剛 果 紅 染 色 法 及 其 原 理 3 掌 握 從 土 壤 中 分 離 出 分 解 纖 維 素 的 微生 物 的 方 法 、 了 解 這 類 微 生 物 的 應(yīng) 用復(fù)習(xí)目標(biāo) 一 、 纖 維 素 與 纖 維 素 酶由 葡 萄 糖 組 成 的 多 聚 體 由 C1酶 、 CX酶 和 葡 萄糖 苷 酶 組 成 的 復(fù) 合 酶棉 花 、 木 材 、 作 物 秸 稈 等 微 生 物 細(xì) 胞 內(nèi)與 果 膠 構(gòu) 成 植 物 的 細(xì) 胞 壁 水 解 纖 維 素 【 即 時(shí) 訓(xùn) 練 】 下 列 關(guān) 于 纖 維 素 酶 的 敘 述 中 ， 錯(cuò) 誤 的 是 ( )A.纖 維 素 酶 只 有 一 種 ， 只 能 將 纖 維 素 分 解 為 葡 萄 糖B.纖 維 素 酶 是 一 種 復(fù) 合 酶 ， 至 少 包 括 C1酶 、 CX酶 和 葡 萄 糖 苷 酶三 種 組 分C.纖 維 素 可 被 纖 維 素 酶 水 解 成 葡 萄 糖 ， 為 微 生 物 提 供 營(yíng) 養(yǎng) 物 質(zhì)D.分 解 纖 維 素 的 細(xì) 菌 、 真 菌 和 放 線 菌 ， 都 是 通 過(guò) 產(chǎn) 生 纖 維 素 酶來(lái) 分 解 纖 維 素 的 A纖 維 素 分 解 菌 二 、 纖 維 素 分 解 菌 的 篩 選1.方 法 ： 方 法 一 和 方 法 二 各 自 的 優(yōu) 缺 點(diǎn) 2.原 理 ：方法一中NaCl溶液的作用？ 二 、 纖 維 素 分 解 菌 的 篩 選1.方 法 ： 2.原 理 ：剛 果 紅 纖 維 素 分 解 菌 剛 果 紅倒 平 板紅 色 纖 維素 分 解 菌NaCl的 作 用 ： 漂 洗 ， 洗 去 結(jié) 合 不 牢 的 剛 果 紅 顏 色 反 應(yīng) 基 本上 是 纖 維 素 分解 菌 的 作 用 操 作 繁 瑣剛 果 紅 會(huì) 使 菌 落 之 間 發(fā) 生 混 雜操 作 簡(jiǎn) 便 、 不 存在 菌 落 混 雜 問(wèn) 題 1.產(chǎn) 生 淀 粉 酶 的 微 生 物 也 產(chǎn)生 模 糊 透 明 圈2.有 些 微 生 物 能 降 解 色 素 ，形 成 明 顯 的 透 明 圈 。 R代 表 透 明 圈 的 直 徑r代 表 菌 落 的 直 徑一 般 挑 選 R/r的比 值 最 大 的 菌 落R r 透 明 圈 大 小 與纖 維 素 酶 的 量與 活 性 有 關(guān) 三 、 實(shí) 驗(yàn) 設(shè) 計(jì)土 壤 取 樣 選 擇 培 養(yǎng) 梯 度 稀 釋 將 樣 品 涂 布 在 鑒 別 纖 維 素 分 解 菌 的 培 養(yǎng) 基 上 篩 選 產(chǎn) 生 透 明 圈 的 菌 落 三 、 分 離 分 解 纖 維 素 的 微 生 物 的 實(shí) 驗(yàn) 設(shè) 計(jì) 流 程 ： 纖 維 素纖 維 素梯 度 稀 釋 鑒 別 培 養(yǎng) 基涂 布 平 板透 明 圈 纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基碳 源氮 源 、 無(wú) 機(jī) 鹽無(wú) 機(jī) 鹽碳 源 、 氮 源 、 生 長(zhǎng) 因 子氮 源 、 生 長(zhǎng) 因 子 鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基(水溶性羧甲基纖維素鈉) 碳 源碳 源 、 氮 源 、 生 長(zhǎng) 因 子無(wú) 機(jī) 鹽碳 源 、 生 長(zhǎng) 因 子凝 固 劑 固 體 培 養(yǎng) 基液 體 培 養(yǎng) 基 增 加 纖 維 素分 解 菌 的 濃度 鑒 別 微 生 物的 種 類以 纖 維 素 作 為 碳源 和 能 源 的 微 生物 可 以 正 常 生 長(zhǎng)絕 大 多 數(shù) 微 生物 都 可 以 正 常生 長(zhǎng) 判 斷 某 個(gè) 培 養(yǎng) 基 是 否 具 有 選 擇 作 用 時(shí) ， 應(yīng)設(shè) 立 基 礎(chǔ) 培 養(yǎng) 基 進(jìn) 行 對(duì) 照 。 判 斷 所 使 用 的 培 養(yǎng) 基 是 否 被 雜 菌 污 染 時(shí) ，應(yīng) 設(shè) 立 不 接 該 菌 種 的 培 養(yǎng) 基 進(jìn) 行 空 白 對(duì) 照 。 未 接 種 培 養(yǎng) 基 接 種 培 養(yǎng) 基 無(wú)菌落產(chǎn)生有菌落產(chǎn)生 課 題 延 伸 ：(1)為 確 定 透 明 圈 內(nèi) 的 菌 落 是 否 是 纖 維 素 分 解 菌 ， 需 要 進(jìn) 行 的 實(shí) 驗(yàn) ， 纖 維 素 酶 的 發(fā) 酵 方 法 有 _和_兩 種 。(2)纖 維 素 酶 的 測(cè) 定 方 法 ， 一 般 是 對(duì) 纖 維 素 酶 分 解 _等 纖 維素 后 所 產(chǎn) 生 的 _進(jìn) 行 定 量 的 測(cè) 定 。 液 體 發(fā) 酵固 體 發(fā) 酵 濾 紙葡 萄 糖發(fā) 酵 產(chǎn) 纖 維 素 酶 尿 素 纖 維 素酚 紅 指 示 劑紅 色 剛 果 紅 染 色透 明 圈脲 酶 升 高 纖 維 素 酶透 明 圈 選 擇 培 養(yǎng)剛 果 紅 染 色 課 后 作 業(yè) ： 搜 集 并 討 論 分 解 纖 維 素 的 微 生 物 的 應(yīng) 用在 農(nóng) 業(yè) 、 紡 織 、 洗 滌 、 食 品 、 生 物 能 源 、 造 紙 等 領(lǐng) 域