單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,細(xì)胞移植示蹤技術(shù),細(xì)胞移植替代療法是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中發(fā)展最為迅速的領(lǐng)域之一,移植細(xì)胞的示蹤方法,1.利用熒光染料標(biāo)記細(xì)胞,2.改變細(xì)胞基因，使其表達特異性的標(biāo)志物,3.選用雄性供體和雌性宿主，利用Y染色體作為標(biāo)記物,4.用胸腺嘧啶類似物來標(biāo)記分裂細(xì)胞,5.采用超順磁氧化鐵作為磁共振對比劑活體示蹤移植細(xì)胞,熒光染料標(biāo)記示蹤技術(shù),熒光染料標(biāo)記示蹤技術(shù)是利用熒光染料標(biāo)記細(xì)胞，通過熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀等儀器檢測，達到定位、示蹤和定量等目的,熒光色素主要有煙酸己可堿。3-四甲基-吲哚-羧花青-高氯酸鹽、二脒基苯基吲哚等,不足之處：隨著熒光衰減和細(xì)胞分裂而標(biāo)記強度下降，不適宜檢測12 個月以上的細(xì)胞，需離體狀態(tài)下進行病理學(xué)切片分析,改變細(xì)胞基因，使其表達特異性的標(biāo)志物,綠色熒光蛋白、熒光素酶、堿性磷酸酶、新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶等。,將目的基因?qū)藰?biāo)記細(xì)胞內(nèi)并維持其生物學(xué)功能。使其表達特異性的標(biāo)志物,熒光分子來作為生物體的標(biāo)記。,利用Y染色體作為標(biāo)記物,最大優(yōu)點標(biāo)記技術(shù)簡單，而標(biāo)記效率很高，利用FISH技術(shù)細(xì)胞進行觀察.,Y染色體標(biāo)記的局限性是只能在雄性供體和雌性宿主之間標(biāo)記，不能進行自體細(xì)胞的標(biāo)記示蹤研究,用胸腺嘧啶類似物來標(biāo)記分裂細(xì)胞,利用5-溴脫氧尿嘧啶核苷、氚胸腺嘧啶核苷能競爭競爭性地參與細(xì)胞DNA 合成，從而達到標(biāo)記分裂細(xì)胞的目的。,標(biāo)記物具有放射性，易造成放射污染,磁共振示蹤,目前較理想磁共振示蹤劑是超順磁性氧化鐵,磁共振示蹤突出的優(yōu)勢在于極佳的空間分辨力，能利用磁共振延遲增強掃描明確部位，實時顯像并能連續(xù)跟蹤標(biāo)記的細(xì)胞，同時能提供有關(guān)信息,問題:,1）靈敏度相對不足,2）安全性有待進一步研究(影響分化能力）,3）非特異性顯像（鐵質(zhì)代謝）,隨著細(xì)胞標(biāo)記示蹤技術(shù)的發(fā)展，可以在體外將細(xì)胞進行特異性標(biāo)記，根據(jù)特異性標(biāo)記可以追蹤到細(xì)胞，從而對細(xì)胞在體內(nèi)的遷移、增殖、分化和轉(zhuǎn)歸進行研究,選擇一個合適的標(biāo)記方法是能夠成功追蹤到種子細(xì)胞并對其研究的基礎(chǔ)。,理想的活體細(xì)胞示蹤劑應(yīng)具備以下幾個特征：,（1）安全性：不影響細(xì)胞存活、生長、分化及其他生物學(xué)作用；不影響細(xì)胞基因組成；有其清除途徑,（2）靈敏度：能準(zhǔn)確反映少量標(biāo)記細(xì)胞的行為（包括位置、移行）和標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)量等。,（3）特異性：能反映標(biāo)記細(xì)胞外移、死亡或被巨噬細(xì)胞吞噬等情況，間質(zhì)對標(biāo)記細(xì)胞或標(biāo)記物的非特異性處置不應(yīng)對靶細(xì)胞數(shù)量和生物學(xué)活動造成錯誤判斷。,（4）長久性：示蹤時間較長，標(biāo)記物不會自動衰減或隨細(xì)胞分裂而稀釋，可用非侵入性方法反復(fù)探測示蹤。,（5）空間分辨力：能對標(biāo)記細(xì)胞進行清晰的解剖學(xué)空間定位。,