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1、Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,11/7/2009,,?#?,單擊此處編輯母版標題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,,Company Logo,*,鐵皮石斛,,組織培養(yǎng),B1小組準備素材,,,第一頁，共十五頁。,鐵皮石斛的組織培養(yǎng),鐵皮石斛，為蘭科多年生附生草本植物。生于海拔達1600米的山地半陰濕的巖石上，喜溫暖濕潤氣候和半陰半陽的環(huán)境，不耐寒。一般均能耐－5℃的低

2、溫。石斛可分為黃草、金釵、馬鞭等數(shù)十種，鐵皮石斛為石斛之極品，它因表皮呈鐵綠色而得名。,,Company Logo,第二頁，共十五頁。,,鐵皮石斛的組織培養(yǎng)技術路線,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,外植體,叢生芽,培養(yǎng)基,生根發(fā)育,完整植株,,Company Logo,第三頁，共十五頁。,蔗糖：30g,,瓊脂：6.8g,,,,,初代培養(yǎng)基的設計,,,,,,,,,誘導培養(yǎng)基,,MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,+,蔗糖3%,+瓊脂6.8,%,【,pH值5.,2~5.6】,MS母液： I-V50ml,5ml,5ml,5ml 5m

3、l。,激素母液：BA10ml,NAA5ml,,,Company Logo,第四頁，共十五頁。,蔗糖：30g,瓊脂：6.8g,土豆汁150ml,,,,繼代培養(yǎng)基的設計,,,,,,,,,增殖培養(yǎng)基,,MS+BA0.5,ml,+NAA0.2+土豆汁10%~20%,【,pH值5.,2~5.6】,取MS母液： IV50ml,5ml,5ml,5ml,5ml;,激素母液：BA5ml,NAA2ml,,,Company Logo,第五頁，共十五頁。,NAA,BA,,,,,,,,,,,,IAA,增殖培養(yǎng)將建立的無菌系中的小苗轉入增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)。增殖培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，添加不

4、同濃度的生長調節(jié)劑BA、NAA、IAA、IBA及土豆汁和香蕉汁等附加物,。,,土豆汁,香蕉汁,IBA,,Company Logo,第六頁，共十五頁。,蔗糖：30g,瓊脂：6.8g,香蕉汁：200ml,活性炭：20g,,,,生根培養(yǎng)基的設計,,,,,,,,,生根培養(yǎng)基,1/2MS+NAA0.2~0.5mg/L+香蕉汁20%+活性,炭2.0%【,pH值5.,2~5.6】,取MS母液： IV25ml,5ml,5ml,5ml,5ml;,激素母液：NAA2~5ml,,,Company Logo,第七頁，共十五頁。,,Your Text here,生根培養(yǎng)將,叢生芽無菌操作切下單

5、株,放在生根培養(yǎng)基中,于適宜條件下,培養(yǎng)，,約1~2周后即生根，,以長成完整植株,。,,Company Logo,第八頁，共十五頁。,,,,優(yōu)選1,年生鐵皮石斛植株,上,生長健壯的莖段,外植體的選擇,接種小芽苗多易于在苗基部形成叢生芽,。,苗的高度為1～2cm時,叢生芽增殖倍數(shù)最高數(shù),。,生長發(fā)育健壯苗優(yōu)先,1,2,3,,Company Logo,第九頁，共十五頁。,外,植,體的處理,Text 1,Text 2,Text 3,,,,摘去葉片和膜質葉鞘，剪成約2cm長帶節(jié)的小段,。,,用洗潔劑清洗后置流水下沖20~30,,min。,在超凈工作臺上用75%的酒精消30s0.1%HgCl2滅菌5mi

6、n后，用無菌水沖洗5~6次，放入墊有干無菌濾紙的培養(yǎng)皿中，以吸去多余水分，莖段兩端各切0.2~0.3cm,。,,Company Logo,第十頁，共十五頁。,,,接種實驗,一、接種準備工作,1、超凈工作臺開紫外燈照射10-20min送風,2、外植體消毒（繼代培養(yǎng)采用已建立的無菌培養(yǎng)物作為材料）,3、工具消毒,二、接種操作,1、用消毒工具、器皿，切取鐵皮石斛幼莖段2cm,2、接種環(huán)燒紅，沾一下培養(yǎng)基,3、鑷取莖段插于培養(yǎng)基中,4、封口、標記,,Company Logo,第十一頁，共十五頁。,各時期的培養(yǎng)條件,莖段的誘導時間在5~11天之間,培養(yǎng)溫度23~25℃，光照強度2000lx，光照時間10

7、h/d,,Company Logo,第十二頁，共十五頁。,參考文獻,[,1,]鄭寬瑜,鄧君浪,趙培快繁技術體系研究[J].云南農業(yè)科技,2009,(S2):57-59,。,[,2,]周根余,謝薇,程磊.影響鐵皮石斛原球莖生長的若干因素[J].江西科學,1999,17(4):231-235.,[,3,]葉紀溝.鐵皮石斛試管苗的人工栽培研究[J].中國藥業(yè),2001,10(1):53,。,[,4,]李銘宗.鐵皮石斛的生物學特性和人工栽培[J].福建熱作科技,1999,24(1):29-31,。,[,5,]張明,夏鴻西,朱利泉,等.石斛組織培養(yǎng)研究進展[J].中國中藥雜志,2000,25(6):323-326,。,,,Company Logo,第十三頁，共十五頁。,B1小組成員展示結束,Thank You !,,,第十四頁，共十五頁。,內容總結,鐵皮石斛 組織培養(yǎng)。MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+瓊脂6.8%【pH值5.2~5.6】。MS+BA0.5ml+NAA0.2+土豆汁10%~20% 【pH值5.2~5.6】。1/2MS+NAA0.2~0.5mg/L+香蕉汁20%+活性炭2.0%【pH值5.2~5.6】。2、外植體消毒（繼代培養(yǎng)采用已建立的無菌培養(yǎng)物作為材料）。1、用消毒工具、器皿，切取鐵皮石斛幼莖段2cm,第十五頁，共十五頁。,