,,,,,,,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,,,*,抗菌藥物敏感性試驗,,南華大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)與放射衛(wèi)生實驗教學(xué)中心,,,教學(xué)對象：高等醫(yī)學(xué)院校衛(wèi)生檢驗專業(yè)學(xué)生,實驗課時：4學(xué)時,課程類型：專業(yè)實驗課,課程要求：必修,每組人數(shù)：2人,,,實驗?zāi)康暮鸵?掌握紙片擴散法（K－B法）的原理、操作方法等、結(jié)果判斷、意義及質(zhì)量控制；,熟悉肉湯稀釋法抗生素敏感性試驗的原理、操作方法、結(jié)果判斷及意義等；,了解稀釋法的質(zhì)量控制。,,,實驗內(nèi)容,常用抗菌藥物敏感性試驗與耐藥檢測方法介紹。,紙片擴散法。,肉湯稀釋法。,,,,一、常用抗菌藥物敏感性試驗與耐藥檢測方法介紹,紙片擴散法（Kirby-Bauer test）,稀釋法（dilution test）,E試驗法（E test）,聯(lián)合藥物敏感試驗,特殊耐藥菌及耐藥酶的表型檢測,耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的檢測,β,-,內(nèi)酰胺酶、超廣譜β,-,內(nèi)酰胺酶檢測等,,,二、紙片擴散法（,K-B法,）,,原理：,含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后便不斷向紙片周圍區(qū)域擴散，形成遞減的梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌生長被抑制，形成透明的抑菌圈。,抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對測試菌的最低抑制濃度（minimal inhibitory concentration,，,MIC）呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小。,,,抑菌圈,,含藥紙片,,,,方法：,菌液制備,：挑取孵育16-24h的血平板上數(shù)個菌落置于生理鹽水管中，校正濃度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)；,涂布接種,：無菌棉拭蘸取菌液，在試管壁旋轉(zhuǎn)擠去多余菌液后在MH瓊脂表面均勻涂布接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60º，最后沿平板內(nèi)緣涂抹1周；,貼含藥紙片,：平板在室溫下干燥3-5min，用無菌鑷子將含藥紙片緊貼于瓊脂表面，各紙片中心相距應(yīng)大于24mm，紙片距平板內(nèi)緣應(yīng)大于15mm；,孵育,：,35ºC 16-18h，量取抑菌圈直徑。,,,結(jié)果判讀：,用刻度尺量取抑菌圈直徑，根據(jù)CLSI（Clinical and Laboratory Standards Institute）標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果；,報告：細(xì)菌對該抗生素是,敏感（susceptible，S）；,耐藥（resistant，R）；,還是中介（intermediate，I）。,,,,,表1,金,金,黃,黃,色,色,葡,葡,萄,萄,球,球,菌,菌,抗,抗,菌,菌,藥,藥,物,物,敏,敏,感,感,性,性,試,試,驗,驗,評,評,價,價,結(jié),結(jié),果,果,,抗菌藥物,紙片含藥量,抑菌圈直徑(mm),相應(yīng)MIC值 (μg/ml),耐藥,中介,敏感,耐藥,敏感,,青霉素,10U,≤28,—,≥29,β-內(nèi)酰胺酶,≤0.12,,苯唑西林,1μg,≤10,11～12,≥13,≥4,≤2,,萬古霉素,30μg,—,—,≥15,—,≤4,,慶大霉素,10μg,≤12,13～14,≥15,≥8,≤4,,紅霉素,15μg,≤13,14～22,≥23,≥8,≤0.5,,克林霉素,2μg,≤14,15～20,≥21,≥4,≤0.5,,磺胺藥,1.25/23.75μg,≤10,11～15,≥16,≥8/152,≤2/38,,,,三,、,、,肉,肉,湯,湯,稀,稀,釋,釋,法,法,原,理,理,：,：,以,水,水,解,解,酪,酪,蛋,蛋,白,白,（,（MH,）,）,液,液,體,體,培,培,養(yǎng),養(yǎng),基,基,將,將,抗,抗,生,生,素,素,做,做,不,不,同,同,濃,濃,度,度,的,的,稀,稀,釋,釋,，,，,然,然,后,后,種,種,入,入,待,待,檢,檢,細(xì),細(xì),菌,菌,，,，,定,定,量,量,測,測,定,定,抗,抗,菌,菌,藥,藥,物,物,對,對,被,被,測,測,菌,菌,的,的,最,最,低,低,抑,抑,菌,菌,濃,濃,度,度,（,（MIC,）,）,或,或,最,最,低,低,殺,殺,菌,菌,濃,濃,度,度,（,（MBC,）,）,。,。,,,方,法,法,：,：,試,管,管,編,編,號,號：,取,取26,只,只,試,試,管,管,排,排,成,成,兩,兩,排,排,（,（,測,測,試,試,菌,菌,排,排,，,，,質(zhì),質(zhì),控,控,菌,菌,排,排,）,）,每,每,排,排13,支,支,編,編,號,號,。,。,另,另,取,取3,支,支,試,試,管,管,，,，,分,分,別,別,標(biāo),標(biāo),記,記,上,上,“,“,肉,肉,湯,湯,對,對,照,照,”,”,、,、,“,“,測,測,試,試,菌,菌,生,生,長,長,對,對,照,照,”,”,和,和,“,“,質(zhì),質(zhì),控,控,菌,菌,生,生,長,長,對,對,照,照,”,”,等,等,對,對,照,照,。,。,抗,菌,菌,藥,藥,物,物,稀,稀,釋,釋：,用,用MH,肉,肉,湯,湯,倍,倍,比,比,稀,稀,釋,釋,抗,抗,菌,菌,藥,藥,物,物,至,至13,管,管,，,，,稀,稀,釋,釋,后,后,使,使,每,每,管,管,含,含,抗,抗,菌,菌,藥,藥,物,物,稀,稀,釋,釋,液,液2ml,。,。,肉湯,對,對照,、,、測,試,試菌,生,生長,對,對照,、,、質(zhì),控,控菌,生,生長,對,對照,管,管：,分,分別,加,加入MH,肉,肉湯2ml。,,,方法,：,：,菌液,制,制備：生,理,理鹽,水,水校,正,正測,試,試菌,和,和質(zhì),控,控菌,至,至0.5,麥,麥?zhǔn)?比,比濁,標(biāo),標(biāo)準(zhǔn),，,，再,用,用MH肉,湯,湯稀,釋,釋到10,7,CFU/ml,；,；,加菌,液,液：用,微,微量,加,加樣,器,器取0.1ml稀,釋,釋菌,液,液由,低,低到,高,高加,于,于各,排,排試,管,管中,，,，其,最,最終,的,的接,種,種量,為,為5,×,×10,5,CFU/ml,。,。測,試,試菌,排,排、,測,測試,菌,菌生,長,長對,照,照管,加,加測,試,試菌,液,液；,質(zhì),質(zhì)控,菌,菌排,、,、質(zhì),控,控菌,生,生長,對,對照,管,管加,質(zhì),質(zhì)控,菌,菌液,。,。,孵育：35,º,ºC24h,觀,觀察,結(jié),結(jié)果,。,。,,,結(jié)果,：,：,測試,菌,菌（,或,或質(zhì),控,控菌,）,）不,出,出現(xiàn),肉,肉眼,可,可見,生,生長,的,的最,低,低藥,物,物濃,度,度為,該,該藥,對,對測,試,試菌,（,（質(zhì),控,控菌,）,）的MIC。,,,,,注意,事,事項,：,：,培養(yǎng),基,基、,接,接種,細(xì),細(xì)菌,的,的菌,量,量、,抗,抗菌,藥,藥物,紙,紙片,的,的質(zhì),量,量、,孵,孵育,溫,溫度,和,和觀,察,察時,間,間、,操,操作,是,是否,規(guī),規(guī)范,等,等均,能,能影,響,響本,試,試驗,的,的結(jié),果,果。,為保,證,證結(jié),果,果的,可,可靠,性,性，,需,需同,時,時采,用,用相,應(yīng),應(yīng)標(biāo),準(zhǔn),準(zhǔn)菌,株,株同,時,時進,行,行藥,敏,敏試,驗,驗作,為,為質(zhì),量,量控,制,制的,方,方式,。,。,,,,謝謝觀,看,看,/,歡迎下,載,載,BYFAITHI MEANAVISIONOFGOODONECHERISHES ANDTHEENTHUSIASMTHAT PUSHESONETOSEEKITSFULFILLMENTREGARDLESSOFOBSTACLES. BY FAITH IBYFAITH,